一種球形芽胞桿菌可濕性粉劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種球形芽胞桿菌可濕性粉劑的制備方法，其步驟：A、配置母液：球形芽胞桿菌發(fā)酵原液通過碟式離心機(jī)，轉(zhuǎn)速，離心，濃縮。將濃縮發(fā)酵液與硅藻土按照一定量的比例混合，攪拌均勻，制成母液。B、板框壓濾：將配置好的母液輸入板框內(nèi)進(jìn)行過濾，操作壓力1.3－1.7兆帕，母液流經(jīng)過450目濾介質(zhì)，固體停留在濾布上，濾去多余水分后，并逐漸在濾布上堆積形成過濾泥餅。C、低溫干燥：將制得的濾餅搗碎置入恒溫干燥室中，干燥至其含水量2％以下。D、粉碎制粉：經(jīng)粉碎機(jī)粉碎過篩得到球形芽胞桿菌可濕性粉劑。生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、實(shí)用，方法易行。不需要噴霧塔等設(shè)備，減少了設(shè)備投資，顯著降低了能源消耗，降低了生產(chǎn)成本，適用于規(guī)?；a(chǎn)。
【專利說明】-種球形芽胞桿菌可濕性粉劑的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥劑型生產(chǎn)【技術(shù)領(lǐng)域】。更具體涉及一種球形芽胞桿菌可濕性粉 劑的制備方法，該制劑適用于生物防治衛(wèi)生害蟲一孑孓。

【背景技術(shù)】
[0002] 蚊子是四害之一、人類的大敵，種類多、繁殖快、分布廣。不但吸食人血，還會(huì)擾亂 人們的工作和睡眠，又是多種蚊媒疾病的載體，歷史上多次蚊媒疾病的爆發(fā)對(duì)人類的健康 帶來了極大的威脅，是重要的醫(yī)學(xué)昆蟲。防治蚊蟲是一個(gè)世界性難題，近些年來，隨著抗藥 性和污染問題的突出，該領(lǐng)域的工作者逐漸將目光轉(zhuǎn)向了生物防治。
[0003] 世界衛(wèi)生組織（WHO)經(jīng)過長(zhǎng)期的實(shí)踐，將殺蚊球形芽胞桿菌（Bacillus sphaericus，簡(jiǎn)稱B. s)確定為對(duì)蚊幼蟲有特異性毒殺作用的生防菌。1593、2362和C3-41 等B. s菌株相繼被運(yùn)用于蚊蟲防治。大規(guī)模生產(chǎn)可濕性粉劑的傳統(tǒng)方法是采用噴霧干燥技 術(shù)，但研究發(fā)現(xiàn)，B. s具有較強(qiáng)的熱敏感性，溫度高于50°C就會(huì)造成失活，采用傳統(tǒng)噴霧干 燥技術(shù)生產(chǎn)的球形芽胞桿菌可濕性粉劑的效價(jià)回收率低于10%，因球形芽胞桿菌具有獨(dú)特 的熱敏感性，噴霧干燥傳統(tǒng)方法不適用其大規(guī)模生產(chǎn)，國(guó)內(nèi)外沒有關(guān)于商品化B. s粉劑的 報(bào)道。
[0004]截至目前為止，國(guó)內(nèi)只能生產(chǎn)球形芽胞桿菌的水劑，其方法雖簡(jiǎn)便易行，但其缺點(diǎn) 是效價(jià)偏低、體積龐大、不便運(yùn)輸且保質(zhì)期較短，更難以開拓海外市場(chǎng)。因此，探索B. S粉劑 規(guī)?；a(chǎn)的有效工藝是國(guó)內(nèi)外亟待解決的重大問題。
[0005]朱昌雄、蔣細(xì)良等在中國(guó)專利申請(qǐng)20000310103513. 7中公開了"一種抗生素農(nóng)藥 可濕性粉劑及其制備方法"，提及到板框壓濾方法。抗生素是由霉菌發(fā)酵生長(zhǎng)菌絲之后產(chǎn)生 次生代謝產(chǎn)物而得到，而次生代謝產(chǎn)物存在于濾液中。它使用板框壓濾方法是為了得到濾 液，去除菌絲（濾餅）。而 申請(qǐng)人:使用板框壓濾方法是為了得到濾餅（細(xì)菌菌體），去除濾 液（發(fā)酵液中的水份）。二者目的完全不同。
[0006] 白廸的"殺蚊球形芽胞桿菌可濕性粉劑的研制"碩士論文是在實(shí)驗(yàn)室條件下，以試 劑級(jí)白炭黑或硅藻土為載體，通過真空泵抽濾方法去除發(fā)酵液中的水份，研制的球形芽胞 桿菌可濕性粉劑。而現(xiàn)在是在工業(yè)生產(chǎn)條件下，以板框壓濾方法去除發(fā)酵液中的水份，同時(shí) 也解決了以硅藻土為載體結(jié)果不穩(wěn)定的問題，因此二者有很大的差別。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供了一種球形芽胞桿菌可濕性粉劑的制備方法。生產(chǎn)工藝簡(jiǎn) 單、實(shí)用，方法易行。由于不需要噴霧塔等設(shè)備，減少了設(shè)備投資，顯著降低了能源消耗，降 低了生產(chǎn)成本，適用入規(guī)?；a(chǎn)。
[0008]為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：
[0009]-種球形芽胞桿菌可濕性粉劑的制備方法，其步驟是：
[0010] 1?配置母液：球形芽胞桿菌發(fā)酵原液通過碟式離心機(jī)，轉(zhuǎn)速16000r/min，離心力 18000g，濃縮2倍。將濃縮發(fā)酵液與硅藻土按照一定量（質(zhì)量比3:1)的比例混合，攪拌均 勻，制成母液。
[0011] 2.板框壓濾：將配置好的母液輸入板框內(nèi)進(jìn)行過濾，操作壓力1. 3 - 1. 7兆帕，母 液流經(jīng)過500目濾介質(zhì)（濾布），固體停留在濾布上，濾去多余水分后，并逐漸在濾布上堆積 形成過濾泥餅。
[0012] 3.低溫干燥：將制得的濾餅搗碎置入恒溫干燥室中，溫度設(shè)定為42-45°C，干燥至 其含水量2%以下。
[0013] 4.粉碎制粉：經(jīng)粉碎機(jī)粉碎過篩（200目）即可得到球形芽胞桿菌可濕性粉劑。說 明：
[0014] a.本發(fā)明采用世界衛(wèi)生組織提供的標(biāo)準(zhǔn)方法（WHO (World Health Organization). Informal consultation on the development of Bacillus sphaericus as microbial larvicide.TDR/BCVSPHAERICUS/85. 3. WHO, Geneva, Switzerlan d. 1985, 1-24.)檢驗(yàn)球形芽胞桿菌產(chǎn)品的效價(jià)，步驟如下所示：
[0015] 在總體積為150ml的一次性塑料杯中放入100ml的過夜自來水（去氯），每個(gè) 杯子中放入20頭3-4齡幼蟲，加入少許飼料，每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)，每次生測(cè)設(shè)定5-6個(gè) 濃度梯度和一組空白對(duì)照。在26±1°C室溫下處理48小時(shí)，檢查幼蟲死亡率，同一生 測(cè)在不同時(shí)間重復(fù)2-3次。用SPSS 13.0軟件計(jì)算蚊幼蟲的LC5Q和LC9Q，單位以mg/ L 表不(D. J. Finney (Eds.).Probit analysis:a statistical treatment of the sigmoid response curve,3rd edn[M]. Cambridge, United Kingdom:Cambridge Univ. Press, 1971, 333)
[0016] b?效價(jià)計(jì)算方法如下所示：
[0017] 計(jì)算待測(cè)品效價(jià)時(shí)，須使用法國(guó)巴斯德研究所生產(chǎn)的球形芽胞桿菌標(biāo)準(zhǔn)品 SPH-88(SPH-88效價(jià)為1500ITU/mg)作為對(duì)照，生測(cè)結(jié)束后，使用SPSS13.0軟件計(jì)算出發(fā) 酵液與標(biāo)準(zhǔn)品的LC5(I，并根據(jù)公式計(jì)算出發(fā)酵液效價(jià)，單位：ITU/mg

【權(quán)利要求】
1. 一種球形芽胞桿菌可濕性粉劑的制備方法，其步驟是： A、 配置母液：球形芽胞桿菌發(fā)酵原液通過碟式離心機(jī)，轉(zhuǎn)速16000r/min，離心力 18000g，濃縮2倍，將濃縮發(fā)酵液與硅藻土按照質(zhì)量比3 :1的比例混合，攪拌均勻，制成母 液； B、 板框壓濾：將配置好的母液輸入板框內(nèi)進(jìn)行過濾，操作壓力1. 3 - 1. 7兆帕，母液流 經(jīng)過500目濾介質(zhì)，固體停留在濾布上，濾去多余水分后，在濾布上堆積形成過濾泥餅； C、 低溫干燥：將制得的濾餅搗碎置入恒溫干燥室中，溫度設(shè)定為42-45°C，干燥至其含 水量2%以下； D、 粉碎制粉：經(jīng)粉碎機(jī)粉碎過篩200目得到球形芽胞桿菌可濕性粉劑。
【文檔編號(hào)】A01N63/02GK104430542SQ201410628805
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月10日
【發(fā)明者】閆建平, 蔡全信, 白迪, 袁志明 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所