柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，該方法包括以下步驟：⑴將所獲得的柴達(dá)木枸杞不定苗進(jìn)行單株分離后，轉(zhuǎn)接到一級(jí)苗生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，10~14天后即得一級(jí)苗；⑵將一級(jí)苗剪切成段后轉(zhuǎn)接到二級(jí)苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)，10~14天后即得二級(jí)苗；⑶將生長至5~7cm的二級(jí)苗剪切成帶有葉的莖段后轉(zhuǎn)接到三級(jí)苗培養(yǎng)基培養(yǎng)，10~14天后即得三級(jí)苗；⑷將生長至5~7cm的三級(jí)苗切成段后接種到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，10~14天后即得微扦插快繁苗。本發(fā)明在短期內(nèi)可以獲得大量脫毒、優(yōu)質(zhì)種苗，能夠進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)。
【專利說明】柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法。

【背景技術(shù)】
[0002]枸杞、1又。111111如/'如/'應(yīng)1111.)為爺科枸杞屬多年生落葉灌木，果實(shí)稱枸杞子，根皮稱地骨皮，均可入藥，嫩莖、葉可做蔬菜。柴達(dá)木盆地枸杞資源豐富，是枸杞的新興產(chǎn)區(qū)，所產(chǎn)的柴達(dá)木枸杞是青海著名的道地地產(chǎn)藥材的原植物之一，“柴杞”也是國內(nèi)最優(yōu)質(zhì)的枸杞之一。
[0003]在生產(chǎn)上枸杞主要靠無性扦插繁育，占地面積大，繁殖效率低。長期的無性扦插繁殖使病毒在植株母體中積累，通過扦插會(huì)感染種苗，不利于優(yōu)質(zhì)種苗繁育。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)的柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法。
[0005]為解決上述問題，本發(fā)明所述的柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，包括以下步驟:
⑴將所獲得的柴達(dá)木枸杞不定苗進(jìn)行單株分離后，按疒10株/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到一級(jí)苗生長培養(yǎng)基中，在溫度為2(^251且光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，10^14天后即得一級(jí)苗；
⑵將所述一級(jí)苗剪切成帶有廣3片葉的莖段，按『10段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到二級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為2(^251且光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，10?14天后即得二級(jí)苗；
⑶將生長至的所述二級(jí)苗剪切成2?3挪、帶有2?3片葉子的莖段，按『10段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到三級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為2(^251且光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，10^14天后即得三級(jí)苗；
⑷將生長至5?7挪的所述三級(jí)苗切成2?3段，按10?15段/瓶的接種量接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度為2(^251且光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，10?14天后即得微扦插快繁苗。
[0006]所述步驟⑴中一級(jí)苗生長培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.005?2.0呢細(xì)胞分裂素、100?30011?水解酪蛋白、廣4呢梓檬酸鈉、20.0?60.0邑鹿糖、3、8瓊脂粉，且邱值為5.0^6.5的培養(yǎng)基。
[0007]所述步驟⑵中二級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.002^1.01^細(xì)胞分裂素、100?30011?水解酪蛋白、廣4呢梓檬酸鈉、20.0?60.0?鹿糖、3、8瓊脂粉，且邱值為5.0^6.5的培養(yǎng)基。
[0008]所述步驟⑶中三級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.001^0.5呢細(xì)胞分裂素、廣4呢7(^2?8呢檸檬酸鈉、20.0?60.蔗糖、3?8 8瓊脂粉，且邱值為5.0?6.5的培養(yǎng)基。
[0009]所述步驟⑷中生根培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.00廣1.008生長素、廣4呢乂0、2?8呢檸檬酸鈉、20.0?60.蔗糖、3?徹瓊脂粉，且邱值為5.0?6.5的培養(yǎng)基；所述生長素為2，4-0、嫩八、I八八中的一種。
[0010]所述步驟⑴、所述步驟⑵、所述步驟⑶中的光照條件均是指光照強(qiáng)度為3000?100001狀，光照時(shí)間為12?16^/天。
[0011]所述步驟⑷中的光照條件是指光照強(qiáng)度為5000?10000匕^，光照時(shí)間為12?161^天。
[0012]所述細(xì)胞分裂素為6-8八、0、21中的一種。
[0013]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明將離體條件下獲得的柴達(dá)木枸杞優(yōu)良品種的不定苗單株分離后，通過一級(jí)苗培養(yǎng)、二級(jí)苗培養(yǎng)、三級(jí)苗培養(yǎng)及誘根培養(yǎng)4階段建立微扦插快繁體系，該體系下微扦插苗的生根率最聞可以達(dá)到100% (參見圖2〉。
[0014]2、由于本發(fā)明中建立的4階段微扦插技術(shù)，再生植株的增殖頻率高，達(dá)到1:(27/月(參見圖0，單株理論年增殖率最低85億株，因此在短期內(nèi)可以獲得大量脫毒、優(yōu)質(zhì)快繁苗，能夠進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)。
[0015]3、由于本發(fā)明中僅通過將快繁苗剪段、微扦插實(shí)行增殖，因此，操作簡單，易實(shí)施。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0017]圖1為本發(fā)明中枸杞再生植株生長至5?7挪時(shí)剪切為帶有廣3片葉片的莖段，扦插于培養(yǎng)基照片。
[0018]圖2為本發(fā)明中枸杞三級(jí)苗生長至?xí)r剪切為帶有廣3片葉片的莖段扦插于生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)10?14天后基部生根照片。

【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，包括以下步驟:
⑴將所獲得的柴達(dá)木枸杞不定苗進(jìn)行單株分離后，按7株/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到一級(jí)苗生長培養(yǎng)基中，在溫度為201且在光照強(qiáng)度為30001狀、光照時(shí)間為16“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，10天后即得一級(jí)苗。
[0020]其中:一級(jí)苗生長培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有2.0呢6-8八、100^水解酪蛋白、1呢％、2呢檸檬酸鈉、20.蔗糖、徹瓊脂粉，且邱值為5.0的培養(yǎng)基。
[0021]⑵將一級(jí)苗剪切成帶有廣3片葉的21(^1莖段，按8段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到二級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為201且在光照強(qiáng)度為30001狀、光照時(shí)間為16“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，10天后即得二級(jí)苗。
[0022]其中:二級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有1.0呢6-8八、100^水解酪蛋白、1呢2呢檸檬酸鈉、20.蔗糖、8 8瓊脂粉，且邱值為5.0的培養(yǎng)基。
[0023]⑶將生長至5?7挪的二級(jí)苗剪切成帶有2?3片葉子的莖段，按8段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到三級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為201且在光照強(qiáng)度為30001狀、光照時(shí)間為16“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，10天后即得三級(jí)苗。
[0024]其中:三級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.5呢6-8八、1呢檸檬酸鈉、20.08蔗糖、8 8瓊脂粉，且邱值為5.0的培養(yǎng)基。
[0025]⑷將生長至的三級(jí)苗切成2?3段，按10段/瓶的接種量接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度為201且在光照強(qiáng)度為50001狀、光照時(shí)間為16“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，10天后即得微扦插快繁苗。
[0026]其中:生根培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有1.0呢2，4-0、1呢檸檬酸鈉、20.蔗糖、8 8瓊脂粉，且邱值為5.0的培養(yǎng)基。
[0027]實(shí)施例2柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，包括以下步驟:
⑴將所獲得的柴達(dá)木枸杞不定苗進(jìn)行單株分離后，按10株/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到一級(jí)苗生長培養(yǎng)基中，在溫度為251且在光照強(qiáng)度為100001狀、光照時(shí)間為12“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，14天后即得一級(jí)苗。
[0028]其中:一級(jí)苗生長培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.005呢0、3001118水解酪蛋白、4呢梓檬酸鈉、40.0?鹿糖、4.5 8瓊脂粉，且邱值為6的培養(yǎng)基。
[0029]⑵將一級(jí)苗剪切成帶有廣3片葉的莖段，按10段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到二級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為251且在光照強(qiáng)度為100001狀、光照時(shí)間為12“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，14天后即得二級(jí)苗。
[0030]其中:二級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.002呢1(1、30(^水解酪蛋白、4呢V。、81118梓檬酸鈉、40.08鹿糖、4.5 8瓊脂粉，且邱值為6的培養(yǎng)基。
[0031]⑶將生長至5?70111的二級(jí)苗剪切成2?30111、帶有2?3片葉子的莖段，按10段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到三級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為251且在光照強(qiáng)度為100001狀、光照時(shí)間為12“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，14天后即得三級(jí)苗。
[0032]其中:三級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.001呢0、4呢檸檬酸鈉、40.08蔗糖、4.5 8瓊脂粉，且邱值為6的培養(yǎng)基。
[0033]⑷將生長至5?70111的三級(jí)苗切成2?3段，按15段/瓶的接種量接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度為251且在光照強(qiáng)度為100001狀、光照時(shí)間為12“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，14天后即得微扦插快繁苗。
[0034]其中:生根培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.001呢購\、4呢檸檬酸鈉、40.08蔗糖、4.5 8瓊脂粉，且邱值為6的培養(yǎng)基。
[0035]實(shí)施例3柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，包括以下步驟:
⑴將所獲得的柴達(dá)木枸杞不定苗進(jìn)行單株分離后，按8株/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到一級(jí)苗生長培養(yǎng)基中，在溫度為231且在光照強(qiáng)度為6000匕^、光照時(shí)間為14“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，12天后即得一級(jí)苗。
[0036]其中:一級(jí)苗生長培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有1.0呢21、2001^水解酪蛋白、21118 %、51118梓檬酸鈉、60.0?鹿糖、3 8瓊脂粉，且邱值為6.5的培養(yǎng)基。
[0037]⑵將一級(jí)苗剪切成帶有廣3片葉的2?30111莖段，按9段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到二級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為231且在光照強(qiáng)度為6000匕^、光照時(shí)間為14“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，12天后即得二級(jí)苗。
[0038]其中:二級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.5呢21、2001^水解酪蛋白、2呢V。、51118梓檬酸鈉、60.08鹿糖、3 8瓊脂粉，且邱值為6.5的培養(yǎng)基。
[0039]⑶將生長至5?7挪的二級(jí)苗剪切成2?3挪、帶有2?3片葉子的莖段，按9段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到三級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為231且在光照強(qiáng)度為6000匕^、光照時(shí)間為14“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，12天后即得三級(jí)苗。
[0040]其中:三級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.25^ 21、2呢檸檬酸鈉、60.蔗糖、3 8瓊脂粉，且邱值為6.5的培養(yǎng)基。
[0041]⑷將生長至5?70111的三級(jí)苗切成2?3段，按13段/瓶的接種量接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度為231且在光照強(qiáng)度為80001狀、光照時(shí)間為14“天的光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，12天后即得微扦插快繁苗。
[0042]其中:生根培養(yǎng)基是指每升13基本培養(yǎng)基中添加有0.5呢1八八、2呢^匕5呢檸檬酸鈉、60.蔗糖、3 8瓊脂粉，且邱值為6.5的培養(yǎng)基。
【權(quán)利要求】
1.柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，包括以下步驟: (I)將所獲得的柴達(dá)木枸杞不定苗進(jìn)行單株分離后，按疒10株/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到一級(jí)苗生長培養(yǎng)基中，在溫度為2(T25°C且光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，1(Γ14天后即得一級(jí)苗； ⑵將所述一級(jí)苗剪切成帶有廣3片葉的2?3cm莖段，按8?10段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到二級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為2(T25°C且光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，1(Γ14天后即得二級(jí)苗； ⑶將生長至5?7cm的所述二級(jí)苗剪切成2?3cm、帶有2?3片葉子的莖段，按8?10段/瓶的接種量轉(zhuǎn)接到三級(jí)苗培養(yǎng)基中，在溫度為2(T25°C且光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，1(Γ14天后即得三級(jí)苗； ⑷將生長至5?7cm的所述三級(jí)苗切成2?3段，按1(Γ?5段/瓶的接種量接種到生根培養(yǎng)基中，在溫度為2(T25°C且光照條件下進(jìn)行培養(yǎng)，1(Γ14天后即得微扦插快繁苗。
2.如權(quán)利要求1所述的柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟⑴中一級(jí)苗生長培養(yǎng)基是指每升MS基本培養(yǎng)基中添加有0.005^2.0mg細(xì)胞分裂素、100?300mg水解酪蛋白、I?4mg Vc、2?8mg朽1檬酸鈉、20.0?60.0g鹿糖、3?8 g瓊脂粉,且pH值為5.(Γ6.5的培養(yǎng)基。
3.如權(quán)利要求1所述的柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟⑵中二級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升MS基本培養(yǎng)基中添加有0.002^1.0mg細(xì)胞分裂素、10lOOmg水解酪蛋白、I?4mg Vc、2?8mg檸檬酸鈉、20.0^60.0g蔗糖、3?8 g瓊脂粉，且pH值為5.0?6.5的培養(yǎng)基。
4.如權(quán)利要求1所述的柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟⑶中三級(jí)苗培養(yǎng)基是指每升MS基本培養(yǎng)基中添加有0.00Γ0.5mg細(xì)胞分裂素、I?4mg Vc、2?8mg檸檬酸鈉、20.0?60.0g蔗糖、3?8 g瓊脂粉，且pH值為5.0?6.5的培養(yǎng)基。
5.如權(quán)利要求1所述的柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟⑷中生根培養(yǎng)基是指每升MS基本培養(yǎng)基中添加有0.00Γ1.0mg生長素、廣4mgVc、2?8mg檸檬酸鈉、20.(Γ60.0g蔗糖、3?8g瓊脂粉，且pH值為5.(Γ6.5的培養(yǎng)基；所述生長素為2，4-D、NAA、IAA中的一種。
6.如權(quán)利要求1所述的柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟⑴、所述步驟⑵、所述步驟⑶中的光照條件均是指光照強(qiáng)度為300(Tl0000LuX，光照時(shí)間為12?16h/天。
7.如權(quán)利要求1所述的柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，其特征在于:所述步驟⑷中的光照條件是指光照強(qiáng)度為500(Tl0000LuX，光照時(shí)間為12?16h/天。
8.如權(quán)利要求2、3或4所述的柴達(dá)木枸杞優(yōu)質(zhì)種苗離體微扦插快速繁殖方法，其特征在于:所述細(xì)胞分裂素為6-BA、KT、ZT中的一種。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104335901SQ201410641213
【公開日】2015年2月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月14日
【發(fā)明者】王莉, 李毅, 任剛, 胡延萍, 石琳, 王溪, 王建科, 馮承彬, 唐楠 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院西北高原生物研究所