一種微生物復(fù)合制劑及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種微生物復(fù)合制劑，屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。微生物復(fù)合制劑，由制劑a）菌種保藏號(hào)為CGMCCNo.5652的枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis發(fā)酵培養(yǎng)液、制劑b）菌種保藏號(hào)為ATCC11077的蠟質(zhì)芽孢桿菌Bacilluscereus發(fā)酵培養(yǎng)液、制劑c）菌種保藏號(hào)為ATCC11946的地衣芽孢桿菌Bacilluslicheniformis發(fā)酵培養(yǎng)液，復(fù)配成的復(fù)合菌劑為藥效成分，再輔以藥劑學(xué)上可接受的添加劑制成；所制成的微生物復(fù)合制劑中菌落總數(shù)比為，菌種保藏號(hào)為CGMCCNo.5652的枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis：菌種保藏號(hào)為ATCC11946的地衣芽孢桿菌Bacilluslicheniformis：菌種保藏號(hào)為ATCC11946的地衣芽孢桿菌Bacilluslicheniformis=（40-180）：（3-15）：（9-33）。本發(fā)明能夠有效防治茄科作物多種土傳病害，并具有防效突出的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】—種微生物復(fù)合制劑及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種防治茄科作物土傳病害的微生物復(fù)合制劑，屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]茄科作物常見土傳病害主要有鐮刀枯萎病、疫病、青枯病、根結(jié)線蟲病等。該類病害在田間?；旌习l(fā)生，如根結(jié)線蟲病害會(huì)大大加重鐮刀枯萎病或青枯病發(fā)生，生產(chǎn)上既缺乏抗病品種，又缺少高效低毒的農(nóng)藥，因而損失巨大。
[0003]土傳病害生物防治實(shí)施過(guò)程中，有多種微生物菌劑通過(guò)與基肥混施、灌根等措施取得了一定防效，但仍存在的突出問(wèn)題是:1、防效單一，廣譜性差；2、防效持續(xù)時(shí)間短；
3、連續(xù)使用成本高昂。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種防治茄科作物土傳病害的微生物復(fù)合制劑，該制劑能夠有效防治茄科作物多種土傳病害，具有防效好、操作簡(jiǎn)單、易于推廣的優(yōu)點(diǎn)。
[0005]本發(fā)明的上述技術(shù)目的是通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的:
微生物復(fù)合制劑，由制劑a)菌種保藏號(hào)為CGMCC N0.5652的枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis發(fā)酵培養(yǎng)液、制劑b)菌種保藏號(hào)為ATCC 11077的蠟質(zhì)芽孢桿菌Bacilluscereus發(fā)酵培養(yǎng)液、制劑c)菌種保藏號(hào)為ATCC 11946的地衣芽孢桿菌BacillusIicheniformis發(fā)酵培養(yǎng)液，復(fù)配成的復(fù)合菌劑為藥效成分，再輔以藥劑學(xué)上可接受的添加劑制成；所制成的微生物復(fù)合制劑中菌落總數(shù)比為，菌種保藏號(hào)為CGMCC N0.5652的枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis:菌種保藏號(hào)為ATCC 11946的地衣芽孢桿菌BacillusIicheniformis:菌種保藏號(hào)為 ATCC 11946 的地衣芽抱桿菌 Bacillus Iicheniformis=(40-180):(3-15):(9-33)o
[0006]作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，制劑a)濃度為α X 10lclcfu/ml、制劑b)濃度為β X109cfu/ml、制劑c)濃度為Y X109cfu/ml，且體積比制劑a:制劑b:制劑C= (1-3):(1-3):(1-3) ； α =2.0 ~ 3.0, β =1.5 ?2.5，Y =4.5 ?5.5。
[0007]作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，體積比制劑a:制劑b:制劑c=3:1:2，α =2.5，β =2.0,Y _5.0 ο
[0008]作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述藥劑學(xué)上可接受的添加劑包括作為穩(wěn)定劑的微晶纖維素、作為乳化劑的非離子型表面活性劑。
[0009]作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述微晶纖維素為羧甲基纖維素鈉，用量2.0?3.0g/L ;所述非離子表面活性劑為脂肪醇聚氧乙烯醚，用量4.0?5.0g/L。
[0010]本發(fā)明的還一個(gè)目的是提供上述微生物復(fù)合制劑在防治茄科作物土傳病害方面的應(yīng)用。
[0011]作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，微生物復(fù)合制劑在防治茄科作物青枯病病害方面的應(yīng)用。
[0012]作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，微生物復(fù)合制劑在防治茄科作物辣椒、番茄、茄子青枯病病害方面的應(yīng)用。
[0013]本發(fā)明具有以下有益效果:
本發(fā)明能夠有效防治茄科作物多種土傳病害，并具有防效突出的優(yōu)點(diǎn)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014]圖1是發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)表。

【具體實(shí)施方式】
[0015]本具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的解釋，其并不是對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀完本說(shuō)明書后可以根據(jù)需要對(duì)本實(shí)施例做出沒(méi)有創(chuàng)造性貢獻(xiàn)的修改，但只要在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)都受到專利法的保護(hù)。
[0016]實(shí)施例一
1、微生物復(fù)合制劑，它是通過(guò)以下方法制備的:
(1)菌種活化
將枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis (菌種保藏號(hào)CGMCCN0.5652 )、蠟質(zhì)芽孢桿菌Bacillus cerews 菌種保藏號(hào)(ATCC 11077)、地衣芽抱桿菌Iicheniformis {鬼種保藏號(hào)ATCC 11946)菌株自_80°C超低溫冰箱取出后，經(jīng)3次轉(zhuǎn)接活化培養(yǎng)，培養(yǎng)基為L(zhǎng)B固體培養(yǎng)基；
(2)種子菌液制備
分別挑取單菌落，在新的液體種子培養(yǎng)基LB中，28°C，180rpm，培養(yǎng)15小時(shí)；
(3)按0.5%的接種量，接種到發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基中；
所述液體培養(yǎng)基配方為:以重量百分比計(jì)，麥芽糖0.2% ;玉米粉，0.5% ;黃豆粉，0.4% ；胰蛋白胨，0.5% ；CaCl2,0.02% ；MnSO4,0.05% ;Κ2ΗΡ04，0.1% ;余下為水；所述液體培養(yǎng)基的pH為 7.0 ;
(4)200rpm，20°C培養(yǎng) 3 天；
(5)將枯草芽孢桿菌、蠟質(zhì)芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌發(fā)酵液按3:1:2比例(體積比)混合；
(6)在混合菌液中添加穩(wěn)定劑羧甲基纖維素鈉(CMCNa2.2g/L)與表面活性劑(脂肪醇聚氧乙烯醚)4.5g/L制成微生物復(fù)合制劑。
[0017]2、復(fù)合微生物菌劑施用方式
(I)茄科作物(辣椒、番茄、茄子)種子處理:穴盤育苗前，選取顆粒飽滿的種子在微生物復(fù)合制劑100倍稀釋液浸泡30分鐘，避光陰干。
[0018](2)穴盤育苗:浸種處理后，在裝有育苗基質(zhì)的穴盤播種，覆土后噴灌微生物復(fù)合制劑100倍液至基質(zhì)濕透，育苗棚溫度為18?33°C，每天光照時(shí)間為8?15h。所用基質(zhì)中含有泥炭土、珍珠巖、蛭石及食用菌廢料中的一種或多種。
[0019](3)壯苗移栽:3-5片真葉的壯苗、帶基質(zhì)從穴盤中取出，移栽至常年發(fā)生嚴(yán)重青枯病的田塊中，每株苗澆微生物復(fù)合制劑250倍稀釋液200-250ml。
[0020](4)盛果期每株澆微生物復(fù)合制劑250倍稀釋液200_250ml。
[0021](5)每30個(gè)植株作為一個(gè)處理單元。
[0022]實(shí)施例二
1、微生物復(fù)合制劑，它是通過(guò)以下方法制備的:
(1)菌種活化
將枯草芽孢桿菌Bacillus sub tilis (菌種保藏號(hào)CGMCCN0.5652 )、蠟質(zhì)芽孢桿菌Bacillus cerews 菌種保藏號(hào)(ATCC 11077)、地衣芽抱桿菌Iicheniformis {鬼種保藏號(hào)ATCC 11946)菌株自_80°C超低溫冰箱取出后，經(jīng)3次轉(zhuǎn)接活化培養(yǎng)，培養(yǎng)基為L(zhǎng)B固體培養(yǎng)基；
(2)種子菌液制備
分別挑取單菌落，在新的液體種子培養(yǎng)基LB中，37°C，200rpm，培養(yǎng)15小時(shí)；
(3)按0.5%的接種量，接種到發(fā)酵罐液體培養(yǎng)基中；
所述液體培養(yǎng)基配方為:以重量百分比計(jì)，麥芽糖0.5% ;玉米粉，0.7% ;黃豆粉，1% ;胰蛋白胨，0.5% ；CaCl2,0.02% ；MnSO4,0.05% ;Κ2ΗΡ04，0.1% ;余下為水；所述液體培養(yǎng)基的pH為7.0 ；
(4)200rpm，37°C培養(yǎng) 2 天；
(5)將枯草芽孢桿菌、蠟質(zhì)芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌發(fā)酵液按3:1:2比例(體積比)混合；
(6)在混合菌液中添加穩(wěn)定劑羧甲基纖維素鈉(CMCNa2.2g/L)與表面活性劑(脂肪醇聚氧乙烯醚)4.5g/L制成微生物復(fù)合制劑。
[0023]2、復(fù)合微生物菌劑施用方式
(I)茄科作物(辣椒、番茄、茄子)種子處理:穴盤育苗前，選取顆粒飽滿的種子在微生物復(fù)合制劑100倍稀釋液浸泡30分鐘，避光陰干。
[0024](2)穴盤育苗:浸種處理后，在裝有育苗基質(zhì)的穴盤播種，覆土后噴灌微生物復(fù)合制劑100倍液至基質(zhì)濕透，育苗棚溫度為18?33°C，每天光照時(shí)間為8?15h。所用基質(zhì)中含有泥炭土、珍珠巖、蛭石及食用菌廢料中的一種或多種。
[0025](3)壯苗移栽:3-5片真葉的壯苗、帶基質(zhì)從穴盤中取出，移栽至常年發(fā)生嚴(yán)重青枯病的田塊中，每株苗澆微生物復(fù)合制劑250倍稀釋液200-250ml。
[0026](4)盛果期每株澆微生物復(fù)合制劑250倍稀釋液200_250ml。
[0027]在該測(cè)試系統(tǒng)中，以水作為空白對(duì)照；以72%農(nóng)用鏈霉素可溶性粉劑，稀釋3000倍作為陽(yáng)性對(duì)照。
[0028](5)每30個(gè)植株作為一個(gè)處理單元。
[0029]進(jìn)入盛果期后開始統(tǒng)計(jì)發(fā)病植株的數(shù)量，采收后期進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。
[0030]病情統(tǒng)計(jì):青枯病發(fā)病一般不分級(jí)，病株調(diào)查記錄為發(fā)病或不發(fā)病兩種結(jié)果。
[0031]發(fā)病率=(發(fā)病株數(shù)/30) X 100%
相對(duì)防效={ (CK單元發(fā)病率一用藥單元發(fā)病率)/CK單元發(fā)病率} X 100%
發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)如圖1所示:
由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，該微生物復(fù)合制劑作為一種生物制劑防治青枯病效果顯著，而單獨(dú)施用任何一種微生物菌劑的防治效果較差。
【權(quán)利要求】
1.微生物復(fù)合制劑，其特征在于:由制劑a)菌種保藏號(hào)為CGMCCN0.5652的枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis發(fā)酵培養(yǎng)液、制劑b)菌種保藏號(hào)為ATCC 11077的蠟質(zhì)芽孢桿菌Bacillus cereus發(fā)酵培養(yǎng)液、制劑c)菌種保藏號(hào)為ATCC 11946的地衣芽孢桿菌BaciIIusIicheniformis發(fā)酵培養(yǎng)液，復(fù)配成的復(fù)合菌劑為藥效成分，再輔以藥劑學(xué)上可接受的添加劑制成；所制成的微生物復(fù)合制劑中菌落總數(shù)比為，菌種保藏號(hào)為CGMCC N0.5652的枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis:菌種保藏號(hào)為ATCC 11946的地衣芽孢桿菌BacillusIicheniformis:菌種保藏號(hào)為 ATCC 11946 的地衣芽抱桿菌 Bacillus Iicheniformis=(40-180):(3-15):(9-33)o
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微生物復(fù)合制劑，其特征在于:制劑a)濃度為α X 101Qcfu/ml、制劑b)濃度為β X 109cfu/ml、制劑c)濃度為y X 109cfu/ml,且體積比制劑 a:制劑 b:制劑 C= (1-3):(1-3):(1-3) ;α =2.0 ?3.0，β =1.5 ?2.5，Y =4.5 ?5.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種微生物復(fù)合制劑，其特征在于:體積比制劑a:制劑b:制劑 c=3:1:2, α =2.5，β =2.0, Y =5.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微生物復(fù)合制劑，其特征在于:所述藥劑學(xué)上可接受的添加劑包括作為穩(wěn)定劑的微晶纖維素、作為乳化劑的非離子型表面活性劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種微生物復(fù)合制劑，其特征在于:所述微晶纖維素為羧甲基纖維素鈉，用量2.0?3.0g/L ;所述非離子表面活性劑為脂肪醇聚氧乙烯醚，用量4.0?5.0g/L。
6.權(quán)利要求1-5所述的微生物復(fù)合制劑在防治爺科作物土傳病害方面的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1-5所述的微生物復(fù)合制劑在防治茄科作物青枯病病害方面的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1-5所述的微生物復(fù)合制劑在防治茄科作物辣椒、番茄、茄子青枯病病害方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01N63/02GK104365677SQ201410685038
【公開日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月25日
【發(fā)明者】高丙利, 王成樹, 李師默, 張鵬 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院湖州現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新中心