一種枯草芽孢桿菌及其在植物病害防治中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明為一種枯草芽孢桿菌及其在植物病害防治中的應(yīng)用，涉及微生物篩選【技術(shù)領(lǐng)域】，具體提供了一株從蔬菜大棚的土壤中篩選到的枯草芽孢桿菌FX1，保藏編號CCTCC NO：M2014563。所述菌株具有很強的抑菌效果，可廣泛應(yīng)用于植物病害的防治。所述菌株對黃瓜白粉病的防治效率高達(dá)95.5%，對草莓白粉病的防治效率高達(dá)94.8%，對葡萄褐斑病的防治效率高達(dá)83.2%。除了植物白粉病和褐斑病外，所述枯草芽孢桿菌FX1還對由鐮刀菌和立枯絲核菌引起的植物黃腐病和果腐病均有明顯的拮抗作用，防治效率能達(dá)到80%以上，前景廣闊。CCTCC NO:M201456320141112
【專利說明】一種枯草芽孢桿菌及其在植物病害防治中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物篩選【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種枯草芽孢桿菌及其在植物病害防 治中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著植物種類的不斷增多，植物栽培方式的不斷多樣化，植物病害日趨嚴(yán)重，而傳 統(tǒng)的化學(xué)防治方法存在著許多弊端，比如：化學(xué)農(nóng)藥的大量使用引起了嚴(yán)重的環(huán)境污染，農(nóng) 產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留也越來越嚴(yán)重，病菌抗藥性產(chǎn)生速度也越來越快等一系列對人民生活有害 的影響。在當(dāng)今倡導(dǎo)低碳經(jīng)濟、環(huán)保節(jié)約型社會中，尋求能保護人類生活又可增產(chǎn)的新技術(shù) 十分適應(yīng)當(dāng)今社會的發(fā)展。
[0003] 生物防治是利用一種生物或其產(chǎn)物對付另外一種生物的方法，分為以蟲治蟲、以 菌治蟲、以菌治菌三大類。它利用了生物物種間的相互關(guān)系，以一種或一類生物或其產(chǎn)物抑 制另一種或另一類生物。生物防治的方法有很多，微生物防治就是其中一種。微生物防治 主要是利用有益的微生物，通過生物間的競爭作用、抗生作用、寄生作用、溶菌作用及誘導(dǎo) 抗性等，來抑制某些病原物的存活和活動，其優(yōu)越性在于資源豐富、選擇性強、無殘留、無污 染、成本低，兼防兼治、增產(chǎn)增收、保持生態(tài)平衡，起到長效的作用。
[0004] 用于生物防治的微生物主要包括真菌、細(xì)菌、放線菌和酵母菌等很多生物種群，其 中真菌主要包括木霉、毛殼菌、青霉菌、菌根真菌等，細(xì)菌主要包括芽孢桿菌、假單胞菌、土 壤放射桿菌等。其中，芽孢菌的抑菌范圍很廣，包括根部病害、枝干病害、葉華部病害和和收 獲后果品病害，如棉花枯萎病、黃萎病、立枯病等。由于其具有內(nèi)生芽孢，抗逆性強，營養(yǎng)需 求簡單，繁殖速度快，并在植物根圈易于定殖，所以被廣泛應(yīng)用于植物病害的生物防治中。 目前應(yīng)用于生防的芽孢桿菌種類主要有枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、多粘 芽孢桿菌和短小芽孢桿菌等。
[0005] 利用拮抗微生物防治植物病害是當(dāng)今植物病理學(xué)界十分活躍的研究領(lǐng)域之一。實 踐證明，引進(jìn)對病原菌有拮抗作用的細(xì)菌防治植物病害，是一種經(jīng)濟有效且無副作用的防 治途徑。在植物的生長環(huán)境中有豐富的微生物種類，開發(fā)有益芽孢桿菌潛力很大，但生防芽 孢桿菌防病效果有時不穩(wěn)定，不同區(qū)域篩選到的芽孢桿菌其防病效果差異很大，所以開發(fā) 更多有益的芽孢桿菌是研制生防菌劑的重點之一。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)問題，提供了一種枯草芽孢桿菌及其應(yīng)用。所述枯草芽孢 桿菌是從蔬菜大棚的土壤中篩選分離到的，具有很強的抑菌效果，能有效防治植物病害。
[0007] 本發(fā)明一方面涉及一種枯草芽抱桿菌FXl (Bacillus subtilis FX1)，已于2014年 11月12日保藏于中國武漢武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO: M2014563。
[0008] 本發(fā)明一方面涉及一種生防制劑，包含上述枯草芽孢桿菌FX1。
[0009] 本發(fā)明還涉及上述生防制劑在植物病害防治中的應(yīng)用。
[0010] 所述植物病害為黃瓜白粉病、草莓白粉病、葡萄褐斑病、植物黃腐病和果腐病中的 任意一種。
[0011] 所述生防制劑在植物病害防治中的應(yīng)用，具體方法為將生防制劑稀釋0-700倍， 優(yōu)選500-700倍。
[0012] 本發(fā)明從蔬菜大棚的土壤中篩選到了一株新型枯草芽孢桿菌FX1。所述菌株具有 很強的抑菌效果，可廣泛應(yīng)用于植物病害的防治。所述菌株對黃瓜白粉病的防治效率高達(dá) 95. 5%，對草莓白粉病的防治效率高達(dá)94. 8%，對葡萄褐斑病的防治效率高達(dá)83. 2%。除 了植物白粉病和褐斑病外，所述枯草芽孢桿菌FXl還對由鐮刀菌和立枯絲核菌引起的植物 黃腐病和果腐病均有明顯的拮抗作用，防治效率能達(dá)到80%以上，前景廣闊。

【具體實施方式】
[0013] 下面結(jié)合具體實施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。對于實施例中所用到的具體方法或材 料，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在本發(fā)明技術(shù)思路的基礎(chǔ)上，根據(jù)已有的技術(shù)進(jìn)行常規(guī)的替換選 擇，而不僅限于本發(fā)明實施例的具體記載。
[0014] 實施例1菌株篩選與分離
[0015] 1、土樣稀釋液的制備：
[0016] 從海陽北城陽村蔬菜大棚取回土壤，稱取0. 5g 土壤樣品溶于4. 5ml無菌水中制成 1 :10的土壤溶液，然后從中吸取0. 5ml 土壤溶液置于4. 5ml無菌水中，制成1 :100的土壤 溶液，以此方法類推，制備I =IO6-IO7的土壤稀釋溶液。
[0017] 2、菌株分離與純化：
[0018] 取3-4個適宜濃度的稀釋液0. Iml均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上；37°C培養(yǎng)2d后 取出，挑取單個菌落繼續(xù)分離純化，直至每個平板上長出的菌落形態(tài)顏色一致，即為單一菌 株。
[0019] 采用上述方法， 申請人:共篩選出12株菌，分別命名為FX1、FX2、FX3、……FX12。
[0020] 3、病原菌對峙實驗：
[0021] 在PDA平板中心處接種直徑約為5mm的單絲殼白粉菌（該菌為黃瓜白粉病的主要 病原菌之一，是由發(fā)明人苑偉偉于2013年6月篩選自青島市城陽區(qū)惜福鎮(zhèn)黃瓜種植大棚 中）菌餅；在PDA平板的四個角上分別接種等量的菌株FX1、FX2、FX3、……FX12,30°C培養(yǎng) 3天后，觀察對峙效果。根據(jù)抑制圈的大小進(jìn)行篩選， 申請人:共得到四株對單絲殼白粉菌具 有較強抑制作用的菌株，分別為FX1、FX4、FX6和FX10。
[0022] 實施例2黃瓜白粉病防治效果驗證實驗
[0023] 1、菌液制備
[0024] 將篩選到的四株菌FX1、FX4、FX6、FX10分別接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)2-3 天，得到活菌含量為l〇 8_l〇9cfu/ml的菌液。
[0025] 2、實驗過程
[0026] 1)實驗組：分別使用相同用量的FX1、FX4、FX6、FX10四株菌噴灑黃瓜葉片；每株菌 設(shè)三個處理組，每個處理組為隨機選擇的兩壟黃瓜，共100棵，各處理組之間設(shè)置保護行。
[0027] 在黃瓜的生長中期，將上述菌液分別加水稀釋500倍后，均勻噴灑在各處理組的 黃瓜葉片上；每次噴灑間隔7天，連用三次；最后一次噴灑完菌液10天后，檢查各處理組黃 瓜白粉病的發(fā)病情況。
[0028] 2)對照組：使用不含菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基噴灑黃瓜葉片，其他操作與實驗組均相 同。
[0029] 3、結(jié)果分析
[0030] 病害分級標(biāo)準(zhǔn)：0級無病斑；1級：病斑面積占葉面積的1/4以下；2級：病斑面積 占葉面積的1/4-2/4 ;3 :病斑面積占葉面積的2/4-3/4 ;4級：病斑面積占葉面積的3/4以 上。
[0031] 病情指數(shù)=[Σ (病級值X該級發(fā)病葉數(shù)V(調(diào)查總?cè)~數(shù)X最高病級 值）]X100%
[0032] 防治效率的計算公式=[1_(處理的病情指數(shù)/對照的病情指數(shù)）]X 100%。
[0033] 以SPSS統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果如表1所示：
[0034] 表1黃瓜白粉病防治試驗
[0035]

【權(quán)利要求】
1. 一種枯草芽孢桿菌，其特征在于，保藏編號為CCTCC N0:M2014563。
2. -種生防制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的枯草芽孢桿菌。
3. 權(quán)利要求2所述的生防制劑在植物病害防治中的應(yīng)用。
4. 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的植物病害為白粉病、褐斑病、黃腐病 和果腐病中的任意一種。
5. 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的應(yīng)用是將生防制劑稀釋0-700倍。
6. 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的應(yīng)用是將生防制劑稀釋500-700倍。
【文檔編號】A01N63/00GK104403970SQ201410699358
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】苑偉偉, 王鵬, 唐波, 朱彩彩, 甄麗, 劉魯民 申請人:青島蔚藍(lán)生物集團有限公司