一種魁蚶不同地理群體雜交育苗方法
【專利摘要】一種魁蚶不同地理群體雜交育苗方法，屬于海洋生物【技術(shù)領(lǐng)域】，它包括群體遺傳差異分析與種貝選擇、種貝促熟、催產(chǎn)、受精和孵化、幼蟲培育、附著變態(tài)、中間育成和養(yǎng)殖；本發(fā)明將魁蚶中國群體與韓國群體進(jìn)行雜交，解決不同地理群體的性成熟不同步問題，成功聚合兩個(gè)地理群體的優(yōu)良性狀，獲得具有雜種優(yōu)勢(shì)的魁蚶新品系，用于魁蚶種質(zhì)改良和良種創(chuàng)制及利用。
【專利說明】一種魁蚶不同地理群體雜交育苗方法

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于海洋生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地涉及一種魁蚶不同地理群體雜交育苗方 法。

【背景技術(shù)】：
[0002] 魁蚶（Scapharcabroughtonii)俗稱赤貝、血貝、大毛蛤，是一種大型冷水性蚶類， 喜泥質(zhì)或泥沙質(zhì)海底，廣泛分布于太平洋西部沿岸，在我國主要分布在水深3m到60m的黃 海、渤海海區(qū)?？纻€(gè)大體肥，肉質(zhì)鮮美，屬于高蛋白、低脂肪食品，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，常 被加工為凍蝴蝶狀貝肉，是我國重要的出口創(chuàng)匯優(yōu)勢(shì)水產(chǎn)品之一，具有良好的市場(chǎng)前景和 開發(fā)利用價(jià)值。但是由于超強(qiáng)度捕撈和近海環(huán)境惡化，上世紀(jì)九十年代以來，我國魁蚶產(chǎn)業(yè) 出現(xiàn)了資源量銳減以及生長緩慢、性成熟生物學(xué)體型偏小、抗病力差等種質(zhì)質(zhì)量下降問題， 資源量下降以及種質(zhì)退化已經(jīng)嚴(yán)重阻礙了產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。目前，我國魁蚶尚未進(jìn)行種質(zhì) 改良，已無法滿足養(yǎng)殖、增殖放流等對(duì)優(yōu)質(zhì)魁蚶苗種的需求，產(chǎn)業(yè)上亟需對(duì)魁蚶進(jìn)行種質(zhì)恢 復(fù)和改良。
[0003] 雜交作為經(jīng)典的育種方法之一，是動(dòng)植物遺傳改良的重要手段，已經(jīng)在扇貝、貽 貝、牡蠣等多種貝類中得到應(yīng)用，并獲得了較好的推廣應(yīng)用效果?？离s交育種尚未見報(bào) 道，而雜交繁育是育種工作的前提和基礎(chǔ)。
[0004] 研宄發(fā)現(xiàn)韓國魁蚶具有生長快速、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)良性狀，但是其殼頂比較薄，受到 碰撞后容易破碎。而且，韓國魁蚶遺傳結(jié)構(gòu)上與中國群體有一定的遺傳分化，具有遺傳差 異，且由于地理隔絕，韓國魁蚶群體與中國魁蚶群體性成熟不同步，因此，地理隔絕是魁蚶 不同地理群體雜交育苗的主要技術(shù)難題。將魁蚶中國群體與韓國群體進(jìn)行雜交，能夠聚合 優(yōu)良性狀對(duì)我國魁蚶進(jìn)行種質(zhì)改良，是獲得新品種（系）的有效途徑。


【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明要解決得技術(shù)問題是提供一種魁蚶不同地理群體雜交育苗方法，本發(fā)明將 魁蚶中國群體與韓國群體進(jìn)行雜交，解決不同地理群體的性成熟不同步問題，成功聚合兩 個(gè)地理群體的優(yōu)良性狀，獲得具有雜種優(yōu)勢(shì)的魁蚶新品系，用于魁蚶種質(zhì)改良和良種創(chuàng)制 及利用。
[0006] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種魁蚶不同地理群體雜交育苗方法，它包括群體遺傳差異分析與種貝選擇、種 貝促熟、催產(chǎn)、受精和孵化、幼蟲培育、附著變態(tài)、中間育成和養(yǎng)殖；
[0008] 所述的群體遺傳差異分析與種貝選擇：利用分子標(biāo)記技術(shù)分析選擇韓國群體和中 國不同地理群體的遺傳距離，選擇與韓國群體遺傳距離大于0. 1且性狀優(yōu)良的魁蚶中國群 體；選擇殼長8cm以上的三齡健康魁蚶作為親貝；
[0009] 所述的種貝促熟：4月份，引入韓國魁蚶種貝并在當(dāng)?shù)貎?nèi)海海區(qū)以籠養(yǎng)方式在海 面以下至少3m處暫養(yǎng)一個(gè)月以上，使其適應(yīng)當(dāng)?shù)氐纳鷳B(tài)環(huán)境恢復(fù)機(jī)體的正常生理機(jī)能，待 其生理狀態(tài)穩(wěn)定后，與中國群體同時(shí)移入室內(nèi)置于網(wǎng)箱中進(jìn)行升溫促熟，培育密度為40-50 個(gè)/立方水體；促熟期間，培育海水溫度每天升溫0. 5°C，連續(xù)升溫5-6天后暫停3天，直至 升溫至20°C恒溫培育至性腺成熟；升溫期間，投喂密度為200萬個(gè)/毫升左右的單胞藻，每 天總投喂量不超過養(yǎng)殖水體的10% ;每天早上為種貝倒池一次，晚上換水1/2,池水保持持 續(xù)充氣；
[0010] 所述的催產(chǎn)、受精和孵化：用22°C的海水進(jìn)行催產(chǎn)，得到精子和卵子；混合兩群體 精卵，使每個(gè)卵子周圍有4-6個(gè)精子，獲得兩群體正反交子代；孵化密度控制在30個(gè)/毫升 左右，持續(xù)充氣孵化至D形幼蟲，期間每半小時(shí)攪池一次。
[0011] 所述的幼蟲培育：幼蟲發(fā)育至D形幼蟲，殼長大于80 μπι時(shí)，立即用篩絹進(jìn)行選優(yōu)， 將選出的幼蟲置于22°C海水中進(jìn)行培養(yǎng)，布池密度約為10-12個(gè)/毫升，隨幼蟲的生長相應(yīng) 減少其培育密度，后期投附著基時(shí)控制在6-8個(gè)/毫升；幼蟲發(fā)育前期投喂金藻，后期以金 藻為主配合小球藻進(jìn)行投喂，投喂量根據(jù)幼蟲攝食情況調(diào)整，保持水體單胞藻的密度為3-5 萬個(gè)/毫升，每日換水兩次，日換水量100%以上，每隔7天倒池一次；
[0012] 所述的附著變態(tài)：幼蟲殼長達(dá)到220-240 μπι，30%以上幼蟲出現(xiàn)眼點(diǎn)時(shí)，調(diào)整幼 蟲密度至5-8個(gè)/毫升并開始投放附著基便于幼蟲附著變態(tài)，至出庫前，每日換水兩次，換 水量為150%以上，投喂金藻、小球藻、扁藻；
[0013] 所述的中間育成和養(yǎng)殖：投放附著基后幼蟲平均殼長達(dá)到800 μπι以上便可以裝 袋出庫，每個(gè)網(wǎng)片裝入一個(gè)保苗袋，將保苗袋串起，懸掛于風(fēng)浪小，海流緩慢舒暢，浮泥少的 海區(qū)進(jìn)行保苗，稚貝殼長達(dá)到Icm以上，進(jìn)行吊籠或者底播養(yǎng)殖。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的有益效果：
[0015] 1、利用分子生物學(xué)技術(shù)分析獲得了韓國魁蚶與中國魁蚶不用地理群體的遺傳學(xué) 參數(shù)，為親本選擇提供了科學(xué)依據(jù)；2、引入韓國魁蚶后通過生態(tài)馴養(yǎng)，完成韓國魁蚶對(duì)當(dāng)?shù)?海區(qū)環(huán)境的適應(yīng)，對(duì)兩群體進(jìn)行同步的統(tǒng)一促熟，解決了地理隔離造成的雜交親本在性腺 發(fā)育、繁殖等方面不同步的問題；3、該方法簡便易行，可操作性強(qiáng)；4、所獲得的雜交子代， 聚合了雙親的優(yōu)良性狀，表現(xiàn)出生長快速、成活率高等優(yōu)點(diǎn)，可以在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用，為魁 蚶良種創(chuàng)制和利用奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

【具體實(shí)施方式】：
[0016] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0017] -種魁蚶不同地理群體雜交育苗方法，它包括群體遺傳差異分析與種貝選擇、種 貝促熟、催產(chǎn)、受精和孵化、幼蟲培育、附著變態(tài)、中間育成和養(yǎng)殖；
[0018] 群體遺傳差異分析：取韓國統(tǒng)營、中國山東蓬萊、山東黃島、江蘇前三島等不同海 區(qū)的野生魁蚶群體各30只，運(yùn)用篩選得到的10對(duì)微衛(wèi)星（SSR)(見表1)引物對(duì)這4個(gè) 群體進(jìn)行遺傳學(xué)分析，計(jì)算得到韓國魁蚶與中國三個(gè)群體之間的遺傳距離分別為〇. 1468、 0·1086、0· 1227。
[0019] 種貝選擇：選擇遺傳距離最大的山東蓬萊群體和韓國群體進(jìn)行雜交，選用殼長 8cm以上、活力好、外殼無破的三齡魁蚶個(gè)體作為雜交親本。
[0020] 種貝促熟：2011年4月，引進(jìn)韓國統(tǒng)營海區(qū)野生三齡魁蚶4000只，以4只/層的 密度籠養(yǎng)在長島海區(qū)海面以下至少3m處暫養(yǎng)40天至其機(jī)體生理狀態(tài)穩(wěn)定。5月中旬，選擇 韓國群體和蓬萊群體魁蚶各500只同時(shí)移入室內(nèi)，以40個(gè)/立方水體的密度置于網(wǎng)箱中進(jìn) 行升溫促熟。促熟期間，培育海水從自然溫度每天升溫〇. 5°C，每連續(xù)升溫5天后暫停3天， 直至升溫至20°C恒溫培育至性腺成熟。升溫期間，投喂密度為200萬個(gè)/毫升左右的單胞 藻（硅藻，金藻、小球藻等），每天總投喂量不超過養(yǎng)殖水體的10%。每天早上為種貝倒池 一次，晚上換水1/2,池水保持持續(xù)充氣。
[0021] 催產(chǎn)、受精和孵化：用22°C的海水對(duì)親貝進(jìn)行催產(chǎn)，得到精子和卵子。向產(chǎn)有卵子 的孵化池中潑灑精液，顯微鏡檢測(cè)以每個(gè)卵子周圍4-6個(gè)精子為宜。建立韓國群體（J) X 蓬萊群體（早）、韓國群體（早）X蓬萊群體（3 )組合，同時(shí)建立韓國群體和蓬萊群體自 交組，作為比較生長及存活性能的對(duì)照，孵化密度控制在30個(gè)/毫升左右，連續(xù)充氣孵化至 D形幼蟲，期間每半小時(shí)攪池一次。
[0022] 幼蟲培育：幼蟲發(fā)育至D形幼蟲，殼長大于80 μ m時(shí)，用300目的篩絹進(jìn)行選優(yōu)。 將選出的幼蟲置于22°C海水中進(jìn)行培養(yǎng)，布池密度約為10-12個(gè)/毫升，隨幼蟲的生長相應(yīng) 減少其培育密度，后期投附著基時(shí)控制在6個(gè)/毫升左右；幼蟲發(fā)育前期主要投喂金藻，后 期以金藻為主配合小球藻進(jìn)行投喂，投喂量根據(jù)幼蟲攝食情況調(diào)整，水體中單胞藻密度保 持3-5萬個(gè)/毫升。每日換水兩次，日換水量100%以上，每隔7天倒池一次。
[0023] 附著變態(tài)：培育18天后，幼蟲殼長達(dá)到230 μ m以上，30% -40%幼蟲出現(xiàn)眼點(diǎn)，通 過倒池將幼蟲轉(zhuǎn)移至新池中并調(diào)整幼蟲密度至6個(gè)/毫升左右，以30片/立方水體的密度 分兩次投放附著基。至出庫前，每日換水兩次，換水量150%以上，投喂金藻、小球藻、扁藻。
[0024] 中間育成和養(yǎng)殖：投放附著基后培育12天，幼蟲平均殼長達(dá)到800 μ m以上，裝袋 出庫。每個(gè)網(wǎng)片裝入一個(gè)保苗袋，用長2米的繩將保苗袋串起，每串20個(gè)保苗袋，在風(fēng)浪小， 海流緩慢舒暢，浮泥少的長島海區(qū)進(jìn)行保苗，平日嚴(yán)格管理，勤洗刷網(wǎng)袋防止淤泥將網(wǎng)袋堵 塞并及時(shí)分苗。稚貝殼長至I. Ocm以上底播于沙泥底質(zhì)的海區(qū)進(jìn)行養(yǎng)殖。
[0025] 根據(jù)上述方法培育出的雜交子代聚合了韓國魁蚶和中國魁蚶的優(yōu)良性狀，尤其是 蓬萊群體（3) X韓國群體（早）組合雜種優(yōu)勢(shì)更加明顯，具有生長快速、抗逆能力強(qiáng)等優(yōu) 點(diǎn)，而且雜交子代殼頂部厚度比韓國魁蚶明顯增厚。本發(fā)明為進(jìn)一步開展魁蚶種質(zhì)改良，創(chuàng) 制并利用魁蚶良種（系）提供了數(shù)據(jù)參考和技術(shù)基礎(chǔ)。雜交魁蚶詳細(xì)生長、存活數(shù)據(jù)如表 2所示。
[0026] 表1所用的六對(duì)微衛(wèi)星引物信息
[0027]

【權(quán)利要求】
1. 一種魁蚶不同地理群體雜交育苗方法，其特征在于它包括群體遺傳差異分析與種貝 選擇、種貝促熟、催產(chǎn)、受精和孵化、幼蟲培育、附著變態(tài)、中間育成和養(yǎng)殖； 所述的群體遺傳差異分析與種貝選擇：利用分子標(biāo)記技術(shù)分析選擇韓國群體和中國不 同地理群體的遺傳距離，選擇與韓國群體遺傳距離大于0. 1且性狀優(yōu)良的魁蚶中國群體； 選擇殼長8cm以上的三齡健康魁蚶作為親貝； 所述的種貝促熟：4月份，引入韓國魁蚶種貝并在當(dāng)?shù)貎?nèi)海海區(qū)以籠養(yǎng)方式在海面以 下至少3m處暫養(yǎng)一個(gè)月以上，使其適應(yīng)當(dāng)?shù)氐纳鷳B(tài)環(huán)境恢復(fù)機(jī)體的正常生理機(jī)能，待其生 理狀態(tài)穩(wěn)定后，與中國群體同時(shí)移入室內(nèi)置于網(wǎng)箱中進(jìn)行升溫促熟，培育密度為40-50個(gè)/ 立方水體；促熟期間，培育海水溫度每天升溫〇. 5°C，連續(xù)升溫5-6天后暫停3天，直至升溫 至20°C恒溫培育至性腺成熟；升溫期間，投喂密度為200萬個(gè)/毫升左右的單胞藻，每天總 投喂量不超過養(yǎng)殖水體的10% ;每天早上為種貝倒池一次，晚上換水1/2,池水保持持續(xù)充 氣； 所述的催產(chǎn)、受精和孵化：用22°C的海水進(jìn)行催產(chǎn)，得到精子和卵子；混合兩群體精 卵，使每個(gè)卵子周圍有4-6個(gè)精子，獲得兩群體正反交子代；孵化密度控制在30個(gè)/毫升左 右，持續(xù)充氣孵化至D形幼蟲，期間每半小時(shí)攪池一次。 所述的幼蟲培育：幼蟲發(fā)育至D形幼蟲，殼長大于80 y m時(shí)，立即用篩絹進(jìn)行選優(yōu)，將 選出的幼蟲置于22°C海水中進(jìn)行培養(yǎng)，布池密度約為10-12個(gè)/毫升，隨幼蟲的生長相應(yīng) 減少其培育密度，后期投附著基時(shí)控制在6-8個(gè)/毫升；幼蟲發(fā)育前期投喂金藻，后期以金 藻為主配合小球藻進(jìn)行投喂，投喂量根據(jù)幼蟲攝食情況調(diào)整，保持水體單胞藻的密度為3-5 萬個(gè)/毫升，每日換水兩次，日換水量100%以上，每隔7天倒池一次； 所述的附著變態(tài)：幼蟲殼長達(dá)到220-240 ym，30%以上幼蟲出現(xiàn)眼點(diǎn)時(shí)，調(diào)整幼蟲密 度至5-8個(gè)/毫升并開始投放附著基便于幼蟲附著變態(tài)，至出庫前，每日換水兩次，換水量 為150%以上，投喂金藻、小球藻、扁藻； 所述的中間育成和養(yǎng)殖：投放附著基后幼蟲平均殼長達(dá)到800 ym以上便可以裝袋出 庫，每個(gè)網(wǎng)片裝入一個(gè)保苗袋，將保苗袋串起，懸掛于風(fēng)浪小，海流緩慢舒暢，浮泥少的海區(qū) 進(jìn)行保苗，稚貝殼長達(dá)到lcm以上，進(jìn)行吊籠或者底播養(yǎng)殖。
【文檔編號(hào)】A01K61/00GK104488762SQ201410699434
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】吳彪, 楊愛國, 于濤, 劉志鴻, 周麗青, 孫秀俊 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所