一種快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用淡水魚類浸出液快速生產(chǎn)淡水輪蟲及其休眠卵的方法。該方法是利用魚類浸出液快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵，所述魚類浸出液為淡水魚類尸體或內(nèi)臟廢棄物經(jīng)過曝氣自來水自然腐爛潰解后的濾液。采用曝氣自來水自然光照和室溫人工配制魚類浸出液、按照浸出液比例配制餌料微藻和輪蟲液體通用培養(yǎng)基、輪蟲食物為淡水小球藻。連續(xù)充氣、持續(xù)光照方法，快速生產(chǎn)淡水輪蟲和休眠卵。該方法能方便，快速，經(jīng)濟的收集到大量的淡水輪蟲及其休眠卵，用于魚類開口餌料和其他研究。適合實驗室研究和水產(chǎn)開口生物餌料生產(chǎn)。該方法簡方便，快速，經(jīng)濟，便于使用。
【專利說明】-種快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于水產(chǎn)學(xué)科生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體是涉及一種利用淡水魚類尸體或其內(nèi)臟 制備浸出液用W快速生產(chǎn)輪蟲的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 輪蟲（rotifer)是淡水生態(tài)系統(tǒng)主要功能群，95% W上魚類和郵蟹類苗種期間早 期開口生物巧料，也是環(huán)境污染風(fēng)險評價最適受試動物。目前漁業(yè)生產(chǎn)上培育輪蟲主要采 用有機服先期培服水質(zhì)的方法生產(chǎn)輪蟲作為育苗開口生物巧料，輪蟲產(chǎn)量穩(wěn)定性和輪蟲高 峰期維持時間難W控制，制約了輪蟲商品化發(fā)展。本發(fā)明利用淡水魚類尸體殘骸或其內(nèi)臟 廢棄物制備浸出液替代有機服快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵的方法。
[0004] 本發(fā)明所提供的快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵的方法，是利用魚類浸出液快速生產(chǎn)輪 蟲及其休眠卵；包括；魚類浸出液的制備、透明玻璃水族箱、淡水輪蟲克隆挑選、輪蟲巧料 微藻培養(yǎng)、輪蟲的生產(chǎn)和休眠卵的收集。魚類浸出液制備所指魚類為淡水魚類或魚類內(nèi)臟、 淡水輪蟲為彎花臂尾輪蟲、藻類為小球藻。
[0005] 本發(fā)明中所指魚類浸出液；具體如下；淡水魚類尸體50kg，在自來水中漂洗干凈 后，放入10化的自來水，放置透明玻璃水槽中，加入4ppm敵百蟲防止禍姐發(fā)生，加透明玻 璃蓋密閉，在28-35C下曝曬20-30天。每天攬動2-3次。待魚組織自然腐爛潰解后，利用 200目篩絹或篩網(wǎng)過濾，剔除有型固體，沉淀2化，取上清，在12CTC下滅菌，再靜置12h，取上 清液，常溫、密閉、避光保存。
[0006] 本發(fā)明中所指淡水輪蟲的快速生產(chǎn)。特征如下；魚類浸出液和自來水l:50(v/v) 稀釋，W升為單位，另加入過磯酸巧30g/m 3、硫酸饋lOg/m3和尿素lOg/m3。用HC1和化OH調(diào) 節(jié)抑值7. 0-7. 5左右。接入小球藻，密度為IxlO6個細胞/毫升、接種輪蟲，密度1. 0個/ ml。常溫、連續(xù)充氣、自然光照培養(yǎng)液。7化后通過200目篩絹收集輪蟲成體。
[0007] 本發(fā)明所指生產(chǎn)輪蟲休眠卵的方法。特征為；輪蟲生產(chǎn)經(jīng)過12化后，當(dāng)輪蟲培養(yǎng) 液泛黃，小球藻消耗殆盡時，通過200目篩絹，過濾收集輪蟲成體后，再將水族箱底下藻類 和休眠卵混合物殘渣經(jīng)過雙層300目篩絹過濾收集，混合物經(jīng)自來水流水反復(fù)沖洗，刮取 網(wǎng)中休眠卵。休眠卵經(jīng)自然風(fēng)干，4C下避光保存。
[0008] 本發(fā)明的原理為；魚類浸出液經(jīng)強光暴曬處理，有機物轉(zhuǎn)化為無機物，作為輪蟲巧 料微藻食物，直接生產(chǎn)輪蟲巧料微藻，保證巧料微藻的營養(yǎng)需求，達到快速生產(chǎn)輪蟲生殖所 需營養(yǎng)。快速增加的輪蟲密度達到一定密度后，誘發(fā)輪蟲有性生殖，形成休眠卵，實現(xiàn)快速 生產(chǎn)輪蟲和輪蟲休眠卵目的。該方法操作簡便，快速，經(jīng)濟，便于應(yīng)用。

【具體實施方式】
[0009] 在本發(fā)明中所使用的術(shù)語，除非有另外說明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常 理解的含義。
[0010] 下面結(jié)合具體實施例，并參照數(shù)據(jù)進一步詳細地描述本發(fā)明。應(yīng)理解，該些實施例 只是為了舉例說明本發(fā)明，而非W任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0011] 在W下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。 所用試劑的來源、商品名W及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時標(biāo)明，其后所用相 同試劑如無特殊說明，均W首次標(biāo)明的內(nèi)容相同。
[0012] 實施例中所說的輪蟲是從養(yǎng)殖水體挑選的單個體，室內(nèi)"克隆"培養(yǎng)分離培養(yǎng)獲 得。
[0013] 實施例一：側(cè)魚浸出液制備快速生產(chǎn)輪蟲
[0014] 1.淡水纏魚尸體50kg，在自來水中漂洗干凈后，放入10化的自來水，放置透明玻 璃水槽中，加入4ppm敵百蟲防止禍姐發(fā)生，加透明玻璃蓋密閉，在28-35C下曝曬20-30天。 每天攬動2-3次。待魚組織自然腐爛潰解后，利用200目篩絹或篩網(wǎng)過濾，剔除有型固體， 沉淀2化，取上清，在12CTC下滅菌，再靜置12h，取上清液，常溫、密閉、避光保存。
[0015] 2.輪蟲培養(yǎng)液配制備；取魚類浸出液，按照1:100 (v/v)配制魚類浸出液稀釋液。 添加過磯酸巧30g/m3、硫酸饋lOg/m3和尿素lOg/m 3。
[001引 3.輪蟲單個體"克隆"系培養(yǎng)；96孔培養(yǎng)板，每孔加入輪蟲培養(yǎng)液1. 5ml，息浮液藻 類密度lxl06個細胞/毫升。池塘揚取輪蟲，挑選1個攜帶非混交雌體個體，轉(zhuǎn)移到微孔板 中。連續(xù)光照，25 °C培養(yǎng)36小時。
[0017] 4."克隆"系擴大培養(yǎng)：從3中挑取一個無有性生殖個體形成的克隆個體，轉(zhuǎn)移到 加有75ml培養(yǎng)基和藻類息浮液的100ml H角燒瓶中擴大培養(yǎng)。
[0018] 5.輪蟲快速培養(yǎng)：取化H角燒瓶，加入化人工配制的無機培養(yǎng)液EPA作為對照， EPA 配方每升含有 N址C〇396mg、CaS〇4. 2&0 60mg、M拆〇4. 7&0 123mg、KCl 4mg。根據(jù)需要利 用肥1和化0H調(diào)節(jié)抑值7. 5左右。另取化H角燒瓶，加入化魚類浸出液配制的輪蟲培 養(yǎng)液。接種輪蟲起始密度均為1.0個/ml。自然光照，室溫。
[001引表1 ;輪蟲種群密度（個/mU
[0020]

【權(quán)利要求】
1. 一種快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵的方法，其特征在于，利用魚類浸出液快速生產(chǎn)輪蟲 及其休眠卵，所述魚類浸出液為淡水魚類尸體或內(nèi)臟廢棄物經(jīng)過曝氣自來水自然腐爛潰解 后的濾液。
2. 根據(jù)權(quán)利1要求所說的快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵的方法，其特征在于，所述魚類浸 出液的制備方法為：淡水魚類或魚類內(nèi)臟50kg，用自來水中漂洗干凈后，放入100L曝氣過 的自來水，放置透明玻璃水槽中，加入4ppm敵百蟲防止蠅蛆發(fā)生，加透明玻璃蓋密閉；在 28-35°C下自然光照曝曬，每天攪動2-3次；20天后，剔除固體殘骸，經(jīng)300目篩絹過濾，煮 沸，常溫避光保存。
3. 根據(jù)權(quán)利1要求所說的快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵的方法，其特征在于，透明玻璃水 族箱中加入經(jīng)過稀釋的魚類浸出液和曝氣自來水1:100 (v/V)，添加過磷酸鈣30g/m3、硫 酸銨10g/m3和尿素10g/m3制備餌料微藻和輪蟲通用培養(yǎng)液；利用HC1和NaOH調(diào)節(jié)pH值 7. 0-7. 5 ;接入餌料微藻；接種輪蟲，常溫、連續(xù)充氣、自然光照培養(yǎng)。
4. 根據(jù)權(quán)利2要求所說的快速生產(chǎn)輪蟲及其休眠卵的方法，其特征在于，輪蟲休眠卵 快速生產(chǎn)特征為：餌料微藻和輪蟲同容器培養(yǎng)120h，當(dāng)培養(yǎng)液顏色泛黃，小球藻消耗殆盡 時，通過200目篩絹，過濾收集輪蟲成體，獲得活體輪蟲；將水族箱底下藻類和休眠卵混合 物殘渣移出，放在雙層300目篩絹網(wǎng)中，自來水流水反復(fù)沖洗，刮取網(wǎng)中休眠卵；休眠卵經(jīng) 自然風(fēng)干，4°C下避光保存。
【文檔編號】A01K67/033GK104396896SQ201410750964
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月9日
【發(fā)明者】楊家新 申請人:南京師范大學(xué)