一株適合代料栽培的樺褐孔菌及代料栽培培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】一株適合代料栽培的樺褐孔菌及代料栽培培養(yǎng)基，涉及一株樺褐孔菌及栽培培養(yǎng)基。本發(fā)明通過篩選和馴化提供一株適合雜木屑-玉米芯人工代料栽培的樺褐孔菌菌株。該菌株保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2014年12月25日，保藏編號為CGMCC No.10297。代料栽培培養(yǎng)基為雜木屑-玉米芯培養(yǎng)基是按質(zhì)量百分比將45％～50％雜木屑、38％～42％玉米芯、8％～12％麥麩、1％～4％豆粉、0.5％～2％白糖、0.5％～2％石膏混合，然后加水至培養(yǎng)基中水的質(zhì)量百分含量為60％制成，其pH自然。本發(fā)明可加速樺褐孔菌大規(guī)模人工栽培推廣，解決資源不足與日益增長的需求之間的矛盾，為樺褐孔菌進(jìn)一步開發(fā)利用提供前提條件。本發(fā)明用于樺褐孔菌大規(guī)模人工栽培。
CGMCC No.10297
20141225
【專利說明】一株適合代料栽培的樺褐孔菌及代料栽培培養(yǎng)基

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一株樺褐孔菌及栽培培養(yǎng)基。

【背景技術(shù)】
[0002]樺褐孔菌(Inonotus obliquus (Fr.) Pilat)為多孔菌科褐臥孔菌屬藥用真菌，子實體呈瘤狀，一般生于樺樹上，可引起樹木的白腐病。樺褐孔菌主要分布于東歐、俄羅斯、波蘭等地，我國主要分布于黑龍江省的大小興安嶺、吉林省的長白山地區(qū)。樺褐孔菌屬于純中藥，是21世紀(jì)的保健功能性食品，長期的動物實驗及臨床實驗表明使用樺褐孔菌無任何毒副作用。樺褐孔菌的藥效已被證明具有治療各種癌癥(胃癌、肝癌、腸癌、各種消化器官的癌癥)、心臟病、糖尿病，同時還可用來防治艾滋病，具有抗衰老和有效抑制傳染性病毒的作用。樺褐孔菌的神奇功效，無論從經(jīng)濟(jì)價值還是社會價值，都有必要去研宄、開發(fā)。隨著人類對菌類藥物的重新認(rèn)識，樺褐孔菌在全球范圍內(nèi)將會有廣闊的開發(fā)前景。我國對樺褐孔菌的研宄處于初級階段，無論是在種質(zhì)資源收集鑒定上，還是在人工馴化栽培技術(shù)上的研宄仍處于研宄實驗階段，尤其是在代用原料選擇和菌株馴化栽培上開展研宄很少，大規(guī)模人工栽培尚未見報道，也沒有使用雜木肩成功栽培的報道。目前野生資源日益枯竭，品種現(xiàn)存較少，市場需求量的增加與供給不足間的矛盾日益激化，產(chǎn)品價格年年攀高，人工培育未能取得突破性進(jìn)展，國內(nèi)還未實現(xiàn)樺褐孔菌的野生資源替代開發(fā)和大規(guī)模人工栽培應(yīng)用開發(fā)。
[0003]野生樺褐孔菌價格昂貴，為桑黃的2?3倍，是靈芝的7?8倍，且子實體野生資源有限，很難滿足人們的需求。人工栽培技術(shù)由于受現(xiàn)階段菌株出實困難、栽培原料受限和配方不適宜的制約，人工栽培產(chǎn)量偏低，不能滿足目前保健和藥用需求。馴化篩選適宜人工栽培的菌株和栽培配方及進(jìn)行人工高產(chǎn)栽培尤為重要，近年來對菌株馴化及栽培的研宄均采用樺木肩為主要代用料對人工栽培進(jìn)行初探，已成功培養(yǎng)獲得栽培菌核，但野生菌株馴化困難，栽培配方及優(yōu)化栽培條件不適宜，使現(xiàn)存樺褐孔菌出核生物學(xué)效率極低；而栽培原料(樺木肩)的局限性更制約了樺褐孔菌大規(guī)模人工栽培推廣。未涉及使用其他廣泛樹種木肩為培養(yǎng)基配方出核，未涉及菌株與配套培養(yǎng)基高產(chǎn)出核技術(shù)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明通過篩選和馴化提供一株適合雜木肩-玉米芯人工代料栽培的樺褐孔菌菌株。
[0005]本發(fā)明適合代料栽培的樺褐孔菌為樺褐孔菌1號，屬于褐臥孔菌屬(Poriahypobrunnea Petch)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2014年12月25日，保藏編號為CGMCCN0.10297。
[0006]本發(fā)明的樺褐孔菌(Inonotus obliquus) 1號適合在雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基代料栽培，出菌核快，一般菌絲滿袋后7?10天出核，菌核為圓形或長橢圓型，子實體堅實致密、褐色，子實體生長期為30?40天，生物學(xué)效率20%?30%。最適生長溫度是25?28°C，最適pH值是6.5?7.0。
[0007]該菌對培養(yǎng)基原料要求廣泛，普通雜木肩(除松樹、杉樹、樟樹等樹種外，榆樹、柞樹、椴樹、柳、楓、檀、櫟樹、色樹等)及玉米芯配料栽培中，對基質(zhì)利用率高，生物轉(zhuǎn)化率高，適宜雜木肩和玉米芯代料栽培。
[0008]本發(fā)明適合代料栽培的樺褐孔菌所用代料栽培培養(yǎng)基為雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基，雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基是按質(zhì)量百分比將45%?50%雜木肩、38%?42%玉米芯、8%?
12%麥麩、1 %?4 %豆粉、0.5 %?2 %白糖、0.5 %?2 %石膏混合(干料組分之和為百分之百)，然后加水至培養(yǎng)基中水的質(zhì)量百分含量為60%制成，其pH自然。
[0009]本發(fā)明利用雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基馴化野生菌株，篩選出一株適合廣泛培養(yǎng)基人工栽培的野生樺褐孔菌菌株；利用東北廣泛存在的廉價易得的雜木肩原料(榆樹、柞樹、椴樹、柳、楓、檀、櫟樹、色樹等)和玉米芯，通過合理配方復(fù)配，使用廣泛低廉的原材料下腳料，獲得高生物轉(zhuǎn)化率的人工培養(yǎng)菌核，實現(xiàn)了配方經(jīng)濟(jì)、合理、高效，方法可控、簡單易行。本發(fā)明的菌株及栽培配方突破了以往樺褐孔菌栽培原材料受僅可使用樺木肩限制的局限性，可加速樺褐孔菌大規(guī)模人工栽培推廣，解決資源不足與日益增長的需求之間的矛盾，為樺褐孔菌進(jìn)一步開發(fā)利用提供前提條件。該項研宄將有助于開展藥用真菌的大力開發(fā)利用，提高人們生活質(zhì)量，改善人類身體健康，為進(jìn)一步新型保健食品和抗癌藥劑藥用真菌的藥品開發(fā)奠定基礎(chǔ)，積極開發(fā)國內(nèi)市場和進(jìn)行深入的科技研宄具有重大意義。
[0010]本發(fā)明樺褐孔菌1號，屬于褐臥孔菌屬(Poria hypobrunnea Petch)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2014年12月25日，保藏編號為CGMCC N0.10297。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1為樺褐孔菌菌株ISSR擴(kuò)增圖譜的結(jié)果。

【具體實施方式】
[0012]本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉【具體實施方式】，還包括各【具體實施方式】間的任意組合。
[0013]【具體實施方式】一:本實施方式適合代料栽培的樺褐孔菌為樺褐孔菌1號，屬于褐臥孔菌屬(Poria hypobrunnea Petch)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2014年12月25日，保藏編號為 CGMCC N0.10297。
[0014]本實施方式樺褐孔菌1號的菌種來源:是由樺褐孔菌野生子實體分離純化得到純培養(yǎng)物，子實體采自吉林省樺甸市二道甸子鎮(zhèn)。
[0015]本實施方式樺褐孔菌1號是根據(jù)《真菌鑒定手冊》和《中國真菌志》判定為褐臥孔菌屬(Poria hypobrunnea Petch)。
[0016]【具體實施方式】二:本實施方式適合代料栽培的樺褐孔菌菌株ISSR指紋鑒定，按以下步驟實現(xiàn):
[0017]選用5株野生分離的樺褐孔菌菌株為材料，對其進(jìn)行DNA指紋多態(tài)性(ISSR)分析，比較菌株差異性。
[0018]菌株分別接種于cH)培養(yǎng)基中，25°C搖瓶140r/min培養(yǎng)7d，收集菌絲體，植物基因組DNA提取試劑盒(DP305-03，天根生化)提取總DNA。紫外分光光度計檢測總DNA濃度，-20°C保存?zhèn)溆谩SSR-PCR分析:以供試栽培菌株的DNA作為模板，在菌株中選出能夠擴(kuò)增出清晰條帶且多態(tài)性和重復(fù)性高的引物進(jìn)行ISSR分析。實驗從10個被選引物中篩選出的ISSR引物為:AGAGAGAGAGAGAGAGT (上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成)。25 μ L PCR反應(yīng)體系:1XPCR 緩沖液，0.2mmol/L dNTP，0.5 μmol/L 的引物，1.5U Taq DNA Polymerase,50ng DNA模板，無菌雙蒸水補(bǔ)齊至25 μ L，無菌雙蒸水代替模板為陰性對照。PCR儀中擴(kuò)增程序:94°C預(yù)變性5min ;94°C變性30s，42°C復(fù)性30s，72°C延伸2min，35個循環(huán)；72°C延伸7min，4°C保存。PCR產(chǎn)物電泳:取擴(kuò)增產(chǎn)物20 μ L與2 μ L溴酚藍(lán)指試劑混合后，點樣于含GelRed染色劑的1.0%瓊脂糖凝膠上，電壓5V/cm，電泳結(jié)束后用凝膠成像系統(tǒng)分析。結(jié)果見圖1所示，第1泳道為樺褐孔菌1號，帶型與其他供試菌株差異顯著。圖1中Μ為DL2000Marker, 1號為樺褐孔菌1號，2號為樺褐孔菌2號，3號為樺褐孔菌3號，4號為樺褐孔菌4號，5號為樺褐孔菌5號，黑龍江省科學(xué)院微生物研宄所菌種保藏室保存。其中樺褐孔菌2號已在6個樺褐孔菌菌株栽培比較試驗(《食用菌》，2010年4期，20-21頁)中公開，引自吉林延邊州特產(chǎn)研宄所；樺褐孔菌3號已在代料栽培樺褐孔菌比較試驗(《食用菌學(xué)報》，2010年2期，32-34頁)中公開，由黑龍江省科學(xué)院微生物研宄所提供；樺褐孔菌4號已在樺褐孔菌發(fā)酵產(chǎn)物的抑菌活性(《東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報》，2012年11期，123-126頁)中公開，樺褐孔菌5號已在樺褐孔菌菌株遺傳多樣性的ISSR分析(《食用菌學(xué)報》，2012年2期，26-30頁)中公開，樺褐孔菌4號和樺褐孔菌5號均引自東北林業(yè)大學(xué)。
[0019]【具體實施方式】三:本實施方式適合代料栽培的樺褐孔菌樺褐孔菌的代料栽培方法按以下步驟實現(xiàn):
[0020]一、取直徑1.5cm的母種3塊接種于原種培養(yǎng)基上，制作原種；二、選用規(guī)格為16.5 X 33cm聚乙稀折角袋，每袋裝入雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基約750g (濕重)，接入原種30g制作栽培種；各級菌種均按常規(guī)滅菌、接種，并于25°C下恒溫培養(yǎng)至滿袋；三、取長滿菌絲的栽培袋直接放于出菇室內(nèi)，出核條件:①光照:散射光；?酸堿度:自然；③通風(fēng):早、晚室內(nèi)通風(fēng)各15min ;④濕度:50?60% ;⑤溫度:20?25°C，不高于28V。本菌株在雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基中出菌核快，菌絲滿袋后7?10天出核，菌核圓形至長橢圓型，子實體堅實、褐色，子實體生長期30?40天，生物學(xué)效率20%?30%。
[0021]雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基是按質(zhì)量百分比將46%雜木肩、40%玉米芯、10%麥麩、2豆粉、1%白糖、1%石膏混合，然后加水至培養(yǎng)基中水的質(zhì)量百分含量為60%制成，其pH自然。
[0022]cro培養(yǎng)基配方(/L):馬鈴薯200.0g(煮汁)，葡萄糖20.0g，蛋白胨0.5g，ΚΗ2Ρ043.0g，MgS04.7H20 1.5g，VBJOmg, pH 自然。
[0023]原種培養(yǎng)基配方:雜木肩78g，麥麩20g，石膏l(xiāng)g，白糖lg，含水量為60% (質(zhì)量百分比)。
【權(quán)利要求】
1.一株適合代料栽培的樺褐孔菌，其特征在于該菌株保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2014年12月25日，保藏編號為CGMCC N0.10297。
2.權(quán)利要求1所述樺褐孔菌的代料栽培培養(yǎng)基為雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基，雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基是按質(zhì)量百分比將45%?50%雜木肩、38%?42%玉米芯、8%?12%麥麩、1%?4%豆粉、0.5%?2%白糖、0.5%?2%石膏混合，然后加水至培養(yǎng)基中水的質(zhì)量百分含量為60%制成，其pH自然。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樺褐孔菌的代料栽培培養(yǎng)基，其特征在于雜木肩-玉米芯培養(yǎng)基是按質(zhì)量百分比將46%雜木肩、40%玉米芯、10%麥麩、2豆粉、1%白糖、1%石膏混合，然后加水至培養(yǎng)基中水的質(zhì)量百分含量為60%制成，其pH自然。
【文檔編號】C05G1/00GK104498373SQ201510027945
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2015年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2015年1月20日
【發(fā)明者】韓增華, 張丕奇, 張介馳, 高娃, 戴肖東, 劉佳寧, 馬銀鵬, 孔祥輝, 馬慶芳, 陳賀 申請人:黑龍江省科學(xué)院微生物研究所