本發(fā)明涉及一種藥材種苗繁育方法，具體地說(shuō)，涉及一種橘紅的快速繁殖及育苗方法。

背景技術(shù)：

化州橘紅系多年生灌木或小喬木。藥用部位為未成熟果實(shí)和成熟的干燥外層果皮，在產(chǎn)地加工時(shí)將橘皮用刀分成兩層，外層為橘紅，內(nèi)層則為橘白。商品名稱為毛橘紅。具有散寒，燥濕，利氣，消痰的功能，化州橘紅為常用中藥。藥用歷史相當(dāng)悠久。當(dāng)?shù)赜姓蓍偌t和副毛化州橘紅兩種，前者是正品，為常綠灌木，主干明顯，粗而短，一般高0.5～1米，樹冠高4米左右，枝梗短而粗壯，基本無(wú)刺，嫩枝梗稍扁起棱，密被絨毛，單身復(fù)葉互生，葉片厚，橢圓形，葉翼倒心形，葉片邊緣密布絨毛，嫩葉尤多，葉腋處生總狀花序或花束，花萼呈杯狀，萼片4淺裂，花瓣4片，矩圓形，白色；果實(shí)球形，多心室，幼果全身被雪白絨毛?；ㄆ?～3月，幼果期3～4月，果熟期10月。

橘紅功能理氣化痰，健胃消食，用于脾胃氣滯所致脘腹脹滿，疼痛、惡心嘔吐、不思飲食之證。因其性偏溫燥，故對(duì)寒濕阻氣者效果更佳，常配蒼術(shù)、厚樸同用，如平胃散；偏于中氣虛寒者，常配黨參、白術(shù)、炙甘草同用，如六君子湯；用于痰濕阻滯之咳喘、痰多而稀白、 胸悶不適等證，常配半夏、茯苓同用，如二陳湯。在滋補(bǔ)藥中稍佐該品，能醒脾助運(yùn)，便補(bǔ)而不滯、滋而不膩，更好發(fā)揮滋補(bǔ)藥的功用。

現(xiàn)代藥理研究已證實(shí)，它含有揮發(fā)油、肌醇、維生素B1、黃酮甙等，能促進(jìn)胃液分泌，有助于消化；能稀釋痰液，有利痰的排出；還可降低膽固醇、降低毛細(xì)血管的脆性，以防止微細(xì)血管出血。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)可以脫除多種植物病毒，避免病毒引起的品種退化和減產(chǎn)造成的損失，使原來(lái)的優(yōu)良種性得到保持；繁殖快且量大、成苗快、種苗品質(zhì)好、移栽成活率高，品種遺傳物質(zhì)變異小，開花掛果快、豐產(chǎn)期長(zhǎng)的橘紅種苗繁殖方法。

本發(fā)明人通過(guò)選定的橘紅樹芽苞和葉片作為外植體，經(jīng)消毒去掉雜質(zhì)，將芽尖組織和葉片放在分化培養(yǎng)基上進(jìn)行無(wú)菌培育成小植株，將誘導(dǎo)出的小植株切割后接入新的分化培養(yǎng)基中，多次繼代采用分化培養(yǎng)，結(jié)果叢生芽數(shù)量多，生長(zhǎng)快。再轉(zhuǎn)移到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成袋裝苗，經(jīng)過(guò)自然光照下煉苗后出袋栽培，移栽到營(yíng)養(yǎng)杯中育中苗，成活率達(dá)到98％以上。經(jīng)五年摸索篩選，由于靠本發(fā)明人利用了培養(yǎng)基上培養(yǎng)出壯苗，終于找到適合細(xì)胞分化，壯苗的培養(yǎng)基作為發(fā)明點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明。

本發(fā)明的橘紅繁殖及育苗方法，包括以下技術(shù)工藝步驟：1、一種橘紅組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于：采橘紅芽苞和葉片作為外植體，消毒，配制分化培養(yǎng)基，壯苗培養(yǎng)基，用定向聚丙烯薄膜袋作為培養(yǎng)皿器，接種，培養(yǎng)，其技術(shù)工藝步驟如下，

(1)采外植體，選定橘紅樹的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采集，選取芽苞和嫩葉放清水沖洗，然后用飽和洗衣粉水清洗，再用流動(dòng)的清水漂洗2～5分鐘，

(2)無(wú)菌分化，把漂洗干凈的橘紅樹芽苞或嫩葉片作為外植體，在無(wú)菌接種室工作臺(tái)上用72％～75％的酒精消毒15～30秒后，用無(wú)菌水沖洗2～5次后置于0.1％～0.2％的升汞中消毒15～25分鐘，再用無(wú)菌水漂洗4～6次，去掉外表雜物。把所消毒的芽苞、葉片放到150倍以上的電子顯微鏡下，用解剖刀切割外表的雜物，清理外表雜物后取下最頂?shù)难考?.2～0.25mm組織，用接種針接種到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)15～20天得到小植株，所述的分化培養(yǎng)基每升含蔗糖15～45g，卡拉膠6～10g，肌醇50～150mg，核黃素3～8mg，甘氨酸1～3mg，煙酸0.1～0.35mg，吡哆辛鹽酸0.2～3.5mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg，Ad腺嘌呤10～30mg，分裂素6BA 0.1～0.3mg，檸檬酸100～300mg，抗壞血酸0.1～0.5mg，活性炭0.1-0.5mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和微量元素成分，

(3)快速增殖，培養(yǎng)15～20天后，將誘導(dǎo)出的小植株切割成0.3～0.5mm后接入新的分化培養(yǎng)基中，多次繼代采用分化培養(yǎng)基，在每次轉(zhuǎn)袋過(guò)程中，不斷淘汰白化苗和污染袋苗，剪除枯黃葉片，經(jīng)3～5次轉(zhuǎn)袋培養(yǎng)后，得到的小植株再進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，

(4)壯苗培養(yǎng)，將無(wú)菌分化增殖獲得的小植株接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)60～80天得到小苗，所述的壯苗培養(yǎng)基每升含蔗糖10～35g，卡拉膠6～10g，a-萘乙酸0.2～5.0mg，肌醇50～120mg，鹽酸硫胺0.5～15mg，甘氨酸1.5～6.0mg，煙酸0.5～5mg，Ad腺嘌呤10～30mg， 吲哚丁酸0.1～3mg，吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。

2、如權(quán)利要求1所述的橘紅組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于步驟(2)分化培養(yǎng)基每升含蔗糖15～45g，卡拉膠6～10g，肌醇50～150mg，核黃素3～8mg，甘氨酸1～3mg，煙酸0.1～0.35mg，吡哆辛鹽酸0.2～3.5mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg，Ad腺嘌呤10～30mg，分裂素6BA 0.1～0.3mg，檸檬酸100～300mg，抗壞血酸0.1～0.5mg，活性炭0.1-0.5mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和微量元素成分，

3、如權(quán)利要求1所述的橘紅組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于步驟(4)壯苗培養(yǎng)基每升含蔗糖10～35g，卡拉膠6～10g，a-萘乙酸0.2～5.0mg，肌醇50～120mg，鹽酸硫胺0.5～15mg，甘氨酸1.5～6.0mg，煙酸0.5～5mg，Ad腺嘌呤10～30mg，吲哚丁酸0.1～3mg，吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。

4、如權(quán)利要求1所述的橘紅組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于步驟(2)～(4)中所用的培養(yǎng)基pH為4.5～5.5，培養(yǎng)溫度18～32℃，每天光照6～16小時(shí)，光照度800～2500Lx，芽尖為芽苞生長(zhǎng)點(diǎn)0.1～0.5mm組織，葉片為頂尖葉片1/2處0.1～0.8mm組織，小植株的高度為1～3cm，小苗苗高為3～8cm，每株苗有2～5條根，無(wú)變異白化苗。

5、如權(quán)利要求1所述的橘紅組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，其特征在于步驟(2)～(4)中所用的培養(yǎng)基均分裝入薄膜袋中，每袋30ml， 分裝好后密封、高溫消毒15～25分鐘，取出放在無(wú)菌室降溫貯存，在無(wú)菌室的超凈工作臺(tái)上接上對(duì)應(yīng)的外植體或小植株后，用封口機(jī)把接好種的培養(yǎng)基袋封口，再放到培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)基分裝的薄膜袋，均為定向聚丙烯薄膜袋。

6、一種橘紅育苗的方法，其特征在于當(dāng)小苗形成的植株長(zhǎng)至3～8厘米時(shí)，將培養(yǎng)袋苗轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7～14天，然后將其從袋中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移至裝有營(yíng)養(yǎng)土的營(yíng)養(yǎng)杯栽培，經(jīng)2～6個(gè)月生長(zhǎng)得到中苗，成為生產(chǎn)栽培的種苗。

7、如權(quán)利要求6所述的橘紅育苗的方法，其特征在于中苗苗高為50cm以上，每株苗有分叉2～5條，有3～5條根以上，須根多，葉片厚濃綠，無(wú)病蟲，無(wú)變異苗白化苗。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有的優(yōu)點(diǎn)是：國(guó)內(nèi)外沒(méi)有關(guān)于利用組培技術(shù)生產(chǎn)橘紅種苗的專利和相關(guān)報(bào)道，只有實(shí)生苗和嫁接育苗繁殖的應(yīng)用。本發(fā)明采用獨(dú)創(chuàng)的培養(yǎng)基，使用定向聚丙烯薄膜袋作培養(yǎng)器皿，降低成本，可以脫除多種植物病毒，避免病毒引起的品種退化和減產(chǎn)造成的損失，使原來(lái)的優(yōu)良種性得到保持；繁殖快且量大、成苗快、種苗品質(zhì)好、移栽成活率高，品種遺傳物質(zhì)變異小，開花掛果快、豐產(chǎn)期長(zhǎng)。本發(fā)明具有操作性強(qiáng)，應(yīng)用價(jià)值高，環(huán)保，對(duì)環(huán)境無(wú)任何不良影響，具有獨(dú)創(chuàng)性等特點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的最佳實(shí)施例是這樣的，以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限制：

實(shí)施例1

(1)采外植體：選用橘紅老樹的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采回，選取芽苞放清水沖洗，然后用洗衣粉水清洗，再用流動(dòng)的清水漂洗。

(2)無(wú)菌分化：把漂洗干凈的橘紅芽苞作為外植體，在無(wú)菌接種室工作臺(tái)上用72％～75％的酒精消毒15～30秒后，用無(wú)菌水沖洗2～5次后置于0.1％～0.2％的升汞中消毒15～25分鐘，再用無(wú)菌水漂洗4～6次，去掉外表雜物。把所消毒的芽苞放到150倍以上的電子顯微鏡下，用解剖刀切割外表的雜物，清理外表雜物后用接種針將芽尖0.2～0.25mm組織接種到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到小植株。所述的分化培養(yǎng)基每升含蔗糖15～45g，卡拉膠6～10g，肌醇50～150mg，核黃素3～8mg，甘氨酸1～3mg，煙酸0.1～0.35mg，吡哆辛鹽酸0.2～3.5mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg，Ad腺嘌呤10～30mg，分裂素6BA 0.1～0.3mg，檸檬酸100～300mg，抗壞血酸0.1～0.5mg，活性炭0.1-0.5mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和微量元素成分，

(3)壯苗培養(yǎng)：將無(wú)菌分化增殖獲得的小植株接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)60～80天得到小苗，所述的壯苗培養(yǎng)基每升含蔗糖10～35g，卡拉膠6～10g，a-萘乙酸0.2～5.0mg，肌醇50～120mg，鹽酸硫胺0.5～15mg，甘氨酸1.5～6.0mg，煙酸0.5～5mg，Ad腺嘌呤10～30mg，吲哚丁酸0.1～3mg，吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。

(4)袋裝苗移栽：當(dāng)小苗形成的植株長(zhǎng)至4～6厘米時(shí)，將培養(yǎng)袋苗轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7～14天，然后將其從袋中取出，洗凈根部的 培養(yǎng)基，移至裝有營(yíng)養(yǎng)土的營(yíng)養(yǎng)杯栽培，得到中苗，成為生產(chǎn)栽培的種苗。

在上述(2)～(3)各步驟中所用的培養(yǎng)基均為pH5～5.8，培養(yǎng)溫度24～28℃，每天光照10～12小時(shí)，光照度1500～2000Lx。

步驟(1)所述的采外植體為當(dāng)年開花成年樹嫩枝條的芽苞。

步驟(2)所述的芽尖為芽苞生長(zhǎng)點(diǎn)。

步驟(2)所述的小植株的高度為1～2cm。

步驟(3)所述的小苗苗高為4～6cm，每株苗有3～5條根。

實(shí)施例2

(1)采外植體：選用橘紅老樹的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采回，選取嫩葉放清水沖洗，然后用洗衣粉水清洗，再用流動(dòng)的清水漂洗。

(2)無(wú)菌分化：把漂洗干凈的橘紅嫩葉片作為外植體，在無(wú)菌接種室工作臺(tái)上用72％～75％的酒精消毒10秒，用無(wú)菌水沖洗2～5次后，置于0.1％的升汞中消毒15～25分鐘，再用無(wú)菌水漂洗4～6次。把所消毒的葉片放到150倍以上的電子顯微鏡下，用解剖刀切割嫩葉葉尖下1/2處0.3～0.5mm組織，接種到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到小植株。所述的分化培養(yǎng)基每升含蔗糖20～30g、卡拉膠7～8g、肌醇100mg、甘氨酸2mg、煙酸0.25mg、Ad腺嘌呤10mg，檸檬酸100mg，抗壞血酸0.1mg，核黃素3mg，活性炭0.1mg，吡哆辛鹽酸0.4mg、生長(zhǎng)素0.9mg、分裂素6BA 0.2mg、其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和微量元素成分。

(3)壯苗培養(yǎng)：將無(wú)菌分化獲得的小植株接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到小苗。所述的壯苗培養(yǎng)基每升含蔗糖20～25g，卡拉膠8g，a-萘乙酸0.5～3.0mg，肌醇50～100mg，鹽酸硫胺4.5～12mg，甘氨酸1.5～4.0mg，煙酸1.0～2.5mg，吲哚丁酸0.2mg，吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg，其余為MS培養(yǎng)基中的大量元素和1/2微量元素成分。

(4)袋裝苗移栽：當(dāng)小苗形成的植株長(zhǎng)至4～6厘米時(shí)，將培養(yǎng)袋苗轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7～14天，然后將其從袋中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移至裝有營(yíng)養(yǎng)土的營(yíng)養(yǎng)杯栽培，得到中苗，成為生產(chǎn)栽培的種苗。

在上述(2)～(3)各步驟中所用的培養(yǎng)基均為pH5～6，培養(yǎng)溫度24～30℃，每天光照10小時(shí)，光照度1500～2000Lx。

步驟(1)所述的采外植體為當(dāng)年開花成年樹嫩枝條的葉片。

步驟(2)所述的葉片為頂尖葉片1/2處0.3～0.5mm組織。

步驟(2)所述的小植株的高度為1～2cm。

步驟(3)所述的小苗苗高為4～6cm，每株苗有3～5條根。

實(shí)施例3

(1)采外植體：選用橘紅樹的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采回，選取芽苞放清水沖洗，然后用洗衣粉水清洗，再用流動(dòng)的清水漂洗。

(2)無(wú)菌分化：把漂洗干凈的橘紅芽苞作為外植體，在無(wú)菌接種室工作臺(tái)上用71％～76％的酒精消毒20秒后，用無(wú)菌水沖洗2～5次后 置于0.2％的升汞中消毒15～25分鐘，再用無(wú)菌水漂洗4～6次，去掉外表雜物。把所消毒的芽苞放到150倍以上的電子顯微鏡下，用解剖刀切割外表的雜物，清理外表雜物后用接種針將芽尖0.3mm組織接種到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到小植株。所述的分化培養(yǎng)基每升含蔗糖25～30g、卡拉膠8g、肌醇100mg、甘氨酸2mg、煙酸0.25mg、吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg、生長(zhǎng)素0.9～2.5mg、檸檬酸100mg，抗壞血酸0.1mg，核黃素3mg，活性炭0.1mg，分裂素6BA 0.1mg、Ad腺嘌呤25mg、其余為MS培養(yǎng)基中的大量元素和微量元素成分。

(3)壯苗培養(yǎng)：將無(wú)菌分化獲得的小植株接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到小苗。所述的壯苗培養(yǎng)基每升含蔗糖20～25g，卡拉膠8g，a-萘乙酸0.5～3.0mg，肌醇50～120mg，鹽酸硫胺4.5～12mg，甘氨酸1.5～5.0mg，煙酸1.0～2.5mg，吲哚丁酸0.6mg，吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。

(4)袋裝苗移栽：當(dāng)小苗形成的植株長(zhǎng)至4～6厘米時(shí)，將培養(yǎng)袋苗轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7～14天，然后將其從袋中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移至裝有營(yíng)養(yǎng)土的營(yíng)養(yǎng)杯栽培，得到中苗，成為生產(chǎn)栽培的種苗。

在上述(2)～(3)各步驟中所用的培養(yǎng)基均為pH5～6.0，培養(yǎng)溫度23～29℃，每天光照12小時(shí)，光照度1500～2000Lx。

步驟(1)所述的采外植體為當(dāng)年開花成年樹嫩枝條的芽苞。

步驟(2)所述的芽尖為芽苞生長(zhǎng)點(diǎn)。

步驟(2)所述的小植株的高度為1～3cm。

步驟(3)所述的小苗苗高為4～8cm，每株苗有3～5條根。

實(shí)施例4

(1)采外植體：選用橘紅樹的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采回，選取芽苞放清水沖洗，然后用洗衣粉水清洗，再用流動(dòng)的清水漂洗。

(2)無(wú)菌分化：把漂洗干凈的橘紅芽苞作為外植體，在無(wú)菌接種室工作臺(tái)上用72％～75％的酒精消毒20～25秒后，用無(wú)菌水沖洗2～5次后置于0.1％～0.2％的升汞中消毒15～25分鐘，再用無(wú)菌水漂洗4～6次，去掉外表雜物。把所用消毒的芽苞、葉片放到150倍以上的電子顯微鏡下，用解剖刀切割外表的雜物，清理外表雜物后用接種針將芽尖0.2～0.25mm組織接種到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到小植株。所述的分化培養(yǎng)基每升含蔗糖25～30g、卡拉膠8g、肌醇100mg、甘氨酸2mg、煙酸0.25mg、吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg、生長(zhǎng)素0.9～2.5mg、分裂素6BA 0.1mg、檸檬酸100mg，抗壞血酸0.1mg，核黃素3mg，活性炭0.1mg，Ad腺嘌呤20mg、其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和微量元素成分。

(3)壯苗培養(yǎng)：將無(wú)菌分化獲得的小植株接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到小苗。所述的壯苗培養(yǎng)基每升含蔗糖20～25g，卡拉膠8g，a-萘乙酸0.5～3.0mg，肌醇50～120mg，鹽酸硫胺4～12mg，甘氨酸2.5～5mg，煙酸2.0～3.5mg，吲哚丁酸0.5mg，吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg，生長(zhǎng)素0.1～0.35mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。

(4)袋裝苗移栽：當(dāng)小苗形成的植株長(zhǎng)至4～6厘米時(shí)，將培養(yǎng)袋苗轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7～14天，然后將其從袋中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移至裝有營(yíng)養(yǎng)土的營(yíng)養(yǎng)杯栽培，得到中苗，成為生產(chǎn)栽培的種苗。

在上述(2)～(3)各步驟中所用的培養(yǎng)基均為pH5～6.0，培養(yǎng)溫度24～30℃，每天光照12小時(shí)，光照度1500～2200Lx。

步驟(1)所述的采外植體為當(dāng)年開花成年樹嫩枝條的芽苞。

步驟(2)所述的芽尖為芽苞生長(zhǎng)點(diǎn)。

步驟(2)所述的小植株的高度為1～2cm。

步驟(3)所述的小苗苗高為4～6cm，每株苗有3～5條根。

實(shí)施例5

(1)采外植體：選用橘紅老樹的嫩枝條剪下，連芽和葉片保濕保鮮采回，選取芽苞放清水沖洗，然后用洗衣粉水清洗，再用流動(dòng)的清水漂洗。

(2)無(wú)菌分化：把漂洗干凈的橘紅芽苞作為外植體，在無(wú)菌接種室工作臺(tái)上用72％～75％的酒精消毒10～15秒后，用無(wú)菌水沖洗2～5次后置于0.1％～0.2％的升汞中消毒15～25分鐘，再用無(wú)菌水漂洗4～6次，去掉外表雜物。把所用消毒的芽苞、葉片放到150倍以上的電子顯微鏡下，用解剖刀切割外表的雜物，清理外表雜物后用接種針將芽尖0.2～0.25mm組織接種到分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到小植株。所述的分化培養(yǎng)基每升含蔗糖25～30g、卡拉膠8g、肌醇100mg、甘氨酸2mg、煙酸0.25mg、、吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg、檸檬酸100mg，抗壞血酸0. 1mg，核黃素3mg，活性炭0.1mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg、分裂素6BA 0.1mg、Ad腺嘌呤20mg、其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和微量元素成分。

(3)快速增殖：培養(yǎng)15～20天后，將誘導(dǎo)出的小植株切割后接入新的分化培養(yǎng)基中，結(jié)果叢生芽數(shù)量多，生長(zhǎng)快。多次繼代采用分化培養(yǎng)基。在每次轉(zhuǎn)袋過(guò)程中，應(yīng)切除頂端優(yōu)勢(shì)，且叢生芽塊不能切得太小，以免影響增殖速度。同時(shí)，應(yīng)不斷淘汰白化苗和污染袋苗，剪除枯黃葉片，經(jīng)幾次轉(zhuǎn)袋后，增殖速度可達(dá)2.5～3倍。

(4)壯苗培養(yǎng)：將培養(yǎng)增殖獲得的小植株接種到壯苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到小苗。所述的壯苗培養(yǎng)基每升含蔗糖20～25g，卡拉膠8g，a-萘乙酸0.5～3.0mg，肌醇50～100mg，鹽酸硫胺4～12mg，甘氨酸1.5～4.0mg，煙酸1.0～2.5mg，吲哚丁酸0.3mg，吡哆辛鹽酸0.4～1.5mg，生長(zhǎng)素0.9～2.5mg，其余為MS培養(yǎng)基中的1/2大量元素和1/2微量元素成分。

(5)袋裝苗移栽：當(dāng)小苗形成的植株長(zhǎng)至4～6厘米時(shí)，將培養(yǎng)袋苗轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7～14天，然后將其從袋中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移至裝有營(yíng)養(yǎng)土的營(yíng)養(yǎng)杯栽培，經(jīng)2～6個(gè)月得到中苗，成為生產(chǎn)栽培的種苗。

在上述(2)～(3)各步驟中所用的培養(yǎng)基均為pH5～5.8，培養(yǎng)溫度24～28℃，每天光照10～12小時(shí)，光照度1500～2000Lx。

步驟(1)所述的采外植體為當(dāng)年開花成年樹嫩枝條的芽苞。

步驟(2)所述的芽尖為芽苞生長(zhǎng)點(diǎn)。

步驟(2)所述的小植株的高度為1～2cm。

步驟(3)～(4)所述的小苗苗高為4～6cm，每株苗有3～5條根。

步驟(5)所述的中苗苗高為50cm以上，每株苗有3～5條根以上，須根多。