本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)研究領域，具體涉及一種蜈蚣蘭組培快繁方法。

背景技術：
蜈蚣蘭（Cleiso-stamascolopendrifolium(Makino)Garay）屬蘭科隔距蘭屬，是國家Ⅱ級保護植物，主要分布于我國中東部的河南、浙江、福建、重慶等13個省、直轄市，附生于海拔1000米的山澗兩側(cè)的巖石或樹皮上。蜈蚣蘭全株可入藥，有清熱解毒、潤肺止咳和利水通淋等功效，具有廣泛的藥用價值，主要用于治療氣管炎、膽囊炎、咽喉炎、急性扁桃體炎、慢性副鼻竇炎、小兒驚風等癥，在湖北武當山地區(qū)被民間作為還陽草入藥，認為對某些疾病患者有起死回生的作用。因其分布區(qū)域較窄、生境獨特、種群較小，易受人類活動影響等原因，影響了該物種資源的開發(fā)和利用，組織培養(yǎng)技術為蜈蚣蘭種質(zhì)資源的保存和開發(fā)開辟了新途徑。由于蜈蚣蘭植株內(nèi)具有內(nèi)生真菌，在組織培養(yǎng)初代培養(yǎng)時內(nèi)生菌絲迅速蔓延，嚴重影響組培快繁體系的建立，至今沒有蜈蚣蘭組培快繁方法的研究報道。

技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種蜈蚣蘭組培快繁方法，目的在于解決現(xiàn)有技術存在的問題，降低內(nèi)生菌的污染率，其特征在于包括以下步驟：（1）外植體采集及消毒：春季剪取長2～3cm帶莖尖的蜈蚣蘭莖段，剝?nèi)ト~片，用清水沖洗1～2h，在超凈工作臺上用75%乙醇溶液消毒40S，用0.1%升汞溶液消毒8min，用無菌水沖洗5～6次；（2）芽誘導培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（1）消毒后的莖段切下莖尖，接種至芽誘導培養(yǎng)基，進行叢生芽誘導培養(yǎng)，培養(yǎng)25～35d得到叢生芽，培養(yǎng)條件為：光照10～12h/d，光照強度1500～2000Lx，溫度25±2℃；（3）增殖培養(yǎng)：將步驟（2）芽誘導培養(yǎng)得到的叢生芽切取單芽，接種至增殖培養(yǎng)基進行增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)30～40d后切取生長健壯的單芽，備用，培養(yǎng)條件為：光照12～16h/d，光照強度2000～2500Lx，溫度25±2℃；（4）壯苗培養(yǎng)：將步驟（3）增殖培養(yǎng)中獲得的單芽接種至壯苗培養(yǎng)基進行壯苗培養(yǎng)，培養(yǎng)15～20d后得到無根苗，培養(yǎng)條件為：光照12～16h/d，光照強度2000～2500Lx，溫度25±2℃；（5）生根培養(yǎng)：將步驟（4）壯苗培養(yǎng)中獲得的無根苗接種至生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)25～35d得到生根的試管苗，培養(yǎng)條件為：光照10～12h/d，光照強度1500～2000Lx，溫度25±2℃；（6）煉苗移栽：將步驟（5）生根培養(yǎng)得到的試管苗，挑選苗高6～8cm的壯苗帶瓶移至溫度25±2℃、空氣相對濕度75～80%、光強2000～2500Lx的環(huán)境下，逐漸打開瓶蓋，煉苗2～3天，然后取出組培苗，洗凈培養(yǎng)基，栽至溫度16～26℃，空氣相對濕度80％～85％，光強2000～2500Lx環(huán)境下的苗床中，苗床基質(zhì)由泥炭土、珍珠巖、松樹皮按體積比3：1：1混合而成。前述的一種蜈蚣蘭組培快繁方法，其中步驟（2）所述的芽誘導培養(yǎng)基成分為：MS+6-BA3.0～5.0mg/L+IAA0.5～0.8mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉膠8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌靈1～1.5g/L+CM10%，pH為5.5～6.5。前述的一種蜈蚣蘭組培快繁方法，其中步驟（3）所述的增殖培養(yǎng)基成分為MS+6-BA4.0～6.0mg/L+NAA0.6～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉膠8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌靈1～1.5g/L+CM10%，pH5.5～6.5。前述的一種蜈蚣蘭組培快繁方法，其中步驟（4）所述的壯苗培養(yǎng)基成分為MS+GA31.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉膠8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌靈1～1.5g/L+椰汁15%，pH5.5～6.5。前述的一種蜈蚣蘭組培快繁方法，其中步驟（5）所述的生根培養(yǎng)基成分為：MS+IBA1.0～3.0mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉膠8.0～10.0g/L+50%多菌靈1～1.5g/L+香蕉泥10%，pH5.5～6.5。本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：提供了蜈蚣蘭的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術，通過培養(yǎng)基中添加多菌靈可有效抑制蜈蚣蘭內(nèi)生菌及其他雜菌的污染，本方法重復性良好，培養(yǎng)周期短，有效增殖率高，生根苗生長健壯、整齊，生根率為85%～90%，移栽成活率為94%～98%，可進行大規(guī)模商品化育苗生產(chǎn)，對于保護蜈蚣蘭種質(zhì)資源及其開發(fā)利用具有重要意義。具體實施方式實施例1（1）外植體采集及消毒：春季剪取長2～3cm帶莖尖的蜈蚣蘭莖段，剝?nèi)ト~片，用清水沖洗1～2h，在超凈工作臺上用75%乙醇溶液消毒40S，用0.1%升汞溶液消毒8min，用無菌水沖洗5～6次；（2）芽誘導培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（1）消毒后的莖段切下莖尖，接種至芽誘導培養(yǎng)基，進行叢生芽誘導培養(yǎng)，芽誘導培養(yǎng)基成分為：MS+6-BA3.0mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉膠8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌靈1～1.5g/L+CM10%，pH為5.5～6.5，光照培養(yǎng)25～35d得到叢生芽，光照培養(yǎng)條件為：光照10～12h/d，光照強度1500～2000Lx，溫度25±2℃；（3）增殖培養(yǎng)：將步驟（2）芽誘導培養(yǎng)得到的叢生芽切取單芽，接種至增殖培養(yǎng)基進行增殖培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基成分為MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.6mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉膠8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌靈1～1.5g/L+CM10%，pH5.5～6.5，光照培養(yǎng)30～40d后切取生長健壯的單芽，備用，光照培養(yǎng)條件為：光照12～16h/d，光照強度2000～2500Lx，溫度25±2℃；（4）壯苗培養(yǎng)：將步驟（3）增殖培養(yǎng)中獲得的單芽接種至壯苗培養(yǎng)基進行壯苗培養(yǎng)，壯苗培養(yǎng)基成分為MS+GA31.0mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉膠8.0～10.0g/L+AC1.0～1.5g/L+50%多菌靈1～1.5g/L+椰汁15%，pH5.5～6.5，光照培養(yǎng)15～20d后得到無根苗，光照培養(yǎng)條件為：光照12～16h/d，光照強度2000～2500Lx，溫度25±2℃；（5）生根培養(yǎng)：將步驟（4）壯苗培養(yǎng)中獲得的無根苗接種至生根培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基成分為：MS+IBA1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+卡拉膠8.0～10.0g/L+50%多菌靈1～1.5g/L+香蕉泥10%，pH5....