本發(fā)明屬于植物的栽培技術領域,具體涉及一種高效快速繁殖三葉青試管苗的方法。
背景技術:
三葉青,學名:三葉崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDielsetGilg),又名金線吊葫蘆、蛇附子、石老鼠,屬鼠李目,葡萄科,崖爬藤屬草質(zhì)藤本。為我國特有藥用植物,廣泛分布于長江以南各省份,主要有浙江、江西、福建、湖南、湖北、廣東、廣西、貴州、重慶、四川、西藏、云南、海南和臺灣等地區(qū),常生于山坡林下的灌叢中或山谷溪邊林下的巖石縫中,生長海拔300~1300m三葉青全草均可入藥,以地下塊根和果實的藥用效果最好。其性平、味微苦,具有清熱解毒、祛風化痰、活血止痛等功效,主治毒蛇咬傷、扁桃體炎、淋巴結結核、跌打損傷、小兒高熱驚厥等疾病。目前臨床上還應用于抗癌、抗艾滋病毒,治療血液病、心腦血管疾病、肝炎、病毒性腦膜炎等疾病。目前三葉青主要依賴于野生挖掘,近年來,由于過度采挖和生境破壞,致使鐵三葉青野生資源已瀕臨滅絕,人工栽培已刻不容緩,但人工栽培存在種苗供應不足,通過組培的方法快速繁殖種苗有很大的市場價值。
技術實現(xiàn)要素:
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種高效快速繁殖三葉青試管苗的方法,以解決現(xiàn)有技術存在的栽培效率不高的問題。為解決上述技術問題,本發(fā)明采用的技術方案如下:一種高效快速繁殖三葉青試管苗的方法,它包括如下步驟:(1)選取三葉青的枝條,去除葉片后剪成5~10cm的莖段,用去污劑清洗10min后,再用流水沖洗10min;將剪切沖洗后的三葉青莖段于體積分數(shù)為75%的乙醇水溶液中浸泡30~60s,再于氯化汞水溶液中浸泡5~8min;最后用無菌水沖洗3~5次后備用;(2)將經(jīng)步驟(1)處理后的三葉青莖段剪成帶1~2個腋芽的小段,接種于固體培養(yǎng)基中;培養(yǎng)40~50天后腋芽萌發(fā),摘取芽長1~2cm的腋芽備用;(3)將步驟(2)中所得的腋芽置于增殖繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)50~60d;培養(yǎng)完成后,三葉青腋芽生長成無根小苗且在莖節(jié)處產(chǎn)生腋芽;(4)將步驟(3)中所得三葉青無根小苗剪成帶1個腋芽的小段(或腋芽)并移至壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)50~60天,得到三葉青成苗;(5)選取步驟(4)中得到的4~5cm高,有2~3條根的三葉青成苗移到溫室中,馴化培養(yǎng)10~15天后,用水沖洗去除培養(yǎng)基后,將三葉青成苗移栽到鋪有營養(yǎng)土的苗床上,并遮陰保濕;待三葉青成苗的苗高達到15cm后,即可進行大田移栽。其中,為了繁殖出足夠多的可以進行步驟(4)中操作的三葉青無根小苗,可選取步驟(3)中所得的側芽長度大于1cm的三葉青無根小苗重新剪成帶1個腋芽的小段(或腋芽)接種于新的增殖繼代培養(yǎng)基中,重復步驟(3)中的培養(yǎng)過程。每轉(zhuǎn)接1次,增殖系數(shù)達3~4。當繁殖出足夠數(shù)量的小苗時,將所得的三葉青無根小苗進行步驟(4)中操作。其中,對于上述步驟中是選擇帶腋芽的小段還是腋芽接種于新的增殖繼代培養(yǎng)基中,重復步驟(3)中的培養(yǎng)過程,根據(jù)三葉青無根小苗的實際生長情況而定。若無根小苗的基部腋芽較長,則剪取腋芽,若頂部腋芽較短,則剪取帶1個腋芽的小段步驟(1)中,所述的三葉青枝條為當年生半木質(zhì)化莖段。步驟(1)中,所述的去污劑為家用洗衣粉。步驟(1)中,所述的氯化汞水溶液中,氯化汞的質(zhì)量分數(shù)為0.1%~0.15%。步驟(2)中,培養(yǎng)條件為22~25℃,光照強度為300~1000勒克斯,光照時間為11~13h/d;其中,所述的固體培養(yǎng)基的配方包括:6-芐氨基嘌呤0~1.0mg/L+蔗糖25~30g/L+瓊脂4.5~6g/L+土豆汁60~80...