本發(fā)明涉及生物防治領(lǐng)域，具體涉及動(dòng)物源農(nóng)藥，更具體的涉及一種牤提取物及其分離方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

生物農(nóng)藥相對(duì)于化學(xué)農(nóng)藥來(lái)說(shuō)一般具有綠色環(huán)境友好、低殘留和不易產(chǎn)生抗藥性等特性，因此近年來(lái)一直是國(guó)際國(guó)內(nèi)的研究熱點(diǎn)。生物農(nóng)藥主要包括植物源、動(dòng)物源農(nóng)藥和微生物源農(nóng)藥。其中動(dòng)物源農(nóng)藥的研究和應(yīng)用主要集中在動(dòng)物毒素、昆蟲(chóng)激素、昆蟲(chóng)信息素和天敵中。昆蟲(chóng)是地球上數(shù)量最多的動(dòng)物群體，已發(fā)現(xiàn)超過(guò)100萬(wàn)種，其中單鞘翅目中所含的總數(shù)就比其它所有動(dòng)物界中的總數(shù)還多。如此數(shù)量巨大的昆蟲(chóng)，蘊(yùn)藏著巨大的資源有待于開(kāi)發(fā)利用。很多昆蟲(chóng)可以生存在異常惡劣環(huán)境條件中的原因是，其體內(nèi)具有一定量的抗菌物質(zhì)，可以高效地殺死或抑制病源微生物。在醫(yī)藥領(lǐng)域昆蟲(chóng)源抗菌物質(zhì)具有一定研究，但是由于目前應(yīng)用研究發(fā)現(xiàn)的昆蟲(chóng)源昂貴且其提純過(guò)程較為復(fù)雜，在農(nóng)藥領(lǐng)域的應(yīng)用研究極少，限制了此類抗菌物質(zhì)的應(yīng)用發(fā)展。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)中的昆蟲(chóng)源昂貴且其提純過(guò)程復(fù)雜，應(yīng)用受限的問(wèn)題，提供一種應(yīng)用前景好、提純簡(jiǎn)單易實(shí)現(xiàn)且在農(nóng)藥領(lǐng)域效果優(yōu)異的牤提取物及其分離方法和應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種牤提取物的分離方法，該方法步驟包括：S1，將牤粉與乙醇在索氏提取器中回流提取3-8小時(shí)得乙醇索氏提取液；S2，將步驟S1所得乙醇索氏提取液濃縮、干燥得牤提取物。

本發(fā)明同時(shí)還提供了一種牤提取物，該牤提取物為上述分離方法制得。

本發(fā)明同時(shí)還提供了上述牤提取物在防治植物病害中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果在于：

本發(fā)明通過(guò)長(zhǎng)期的研究大量的嘗試發(fā)現(xiàn)可以從牤粉中獲得防治植物病害的物質(zhì)。牤類在昆蟲(chóng)分類學(xué)上隸屬于雙翅目、水牤科，較常見(jiàn)易于獲得，牤資源豐富，價(jià)格低廉，且牤的綜合開(kāi)發(fā)潛力巨大，牤幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)化有機(jī)垃圾的綜合效率較高，可以在減少有機(jī)垃圾(糞便、尾菜和餐余垃圾)的同時(shí)，生產(chǎn)出可以作為蛋白飼料添加劑的昆蟲(chóng)類蛋白質(zhì)，具有較廣泛的應(yīng)用前景。且本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單易實(shí)現(xiàn)，僅通過(guò)乙醇索氏提取、濃縮、干燥即可實(shí)現(xiàn)，且純度高，特別是獲得的牤提取物具有較強(qiáng)的抗菌性，經(jīng)過(guò)室內(nèi)生物活性測(cè)定發(fā)現(xiàn)其對(duì)水稻紋枯、小麥赤霉等多種植物病原菌均有抑制作用，利用本發(fā)明的牤提取物不僅能夠防治多種植物病害，而且能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)，對(duì)提高作物產(chǎn)量和提升品質(zhì)均具有積極作用。本發(fā)明的牤提取物將是一種具有較大應(yīng)用前景的生物防治新品種。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

本發(fā)明提供了一種牤提取物的分離方法，其步驟包括：S1，將牤粉與乙醇在索氏提取器中回流提取3-8小時(shí)得乙醇索氏提取液；S2，將步驟S1所得乙醇索氏提取液濃縮、干燥得牤提取物，能提供一種具有較大應(yīng)用前景的生物防治新品種，不僅能夠防治多種植物病害，而且能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)，對(duì)提高作物產(chǎn)量和提升品質(zhì)均具有積極作用。

優(yōu)選，步驟S1中牤粉與乙醇的質(zhì)量比為1:5-1:10；進(jìn)一步優(yōu)選，步驟S1中牤粉與乙醇的質(zhì)量比為1:8，使索氏提取更充分。

優(yōu)選，回流的溫度為70-78℃，進(jìn)一步優(yōu)選為74℃，進(jìn)一步保證提取所得生物成分，不會(huì)因高溫變質(zhì)影響性能。

優(yōu)選，回流提取的時(shí)間為4-7小時(shí)，進(jìn)一步優(yōu)選為5小時(shí)。

牤粉本發(fā)明優(yōu)選可以為黑水牤粉或黑尾斑牤粉。水牤屬中的牤類，資 源豐富。

為增加固液接觸的面積，提取前一般先將固體物質(zhì)研碎，本發(fā)明可以先將牤研碎，采用牤粉來(lái)進(jìn)行乙醇索氏提取。優(yōu)選，牤粉通過(guò)將牤干加入液氮急速冷卻后，粉碎制得。

其中，濃縮本發(fā)明沒(méi)有限制，可以采用常用的濃縮方法，本發(fā)明可以優(yōu)選濃縮包括對(duì)步驟S1所得乙醇索氏提取液進(jìn)行減壓蒸餾，濃縮至溶液呈粘稠狀得濃縮物。干燥本發(fā)明沒(méi)有限制，可以采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種干燥方式，例如常溫烘干。

本發(fā)明的分離方法還可包括對(duì)所得牤提取物的保存，優(yōu)選，將所得牤提取物于丙酮中保存，保存簡(jiǎn)單。優(yōu)選，牤提取物與丙酮的質(zhì)量比為2:1-1:3，進(jìn)一步優(yōu)選為2:1-1:2，只需少量丙酮即可。保存的溫度為-25℃至6℃，進(jìn)一步優(yōu)選為4℃，保存條件要求較低，保存方便。

本發(fā)明的步驟具體可以為：

A，牤干的粉碎：將牤干轉(zhuǎn)移至研缽中，加入液氮對(duì)其進(jìn)行急速冷卻，然后將牤干研碎得牤粉；

B，使用乙醇索氏提取步驟A所得牤粉：稱取牤粉，加入質(zhì)量為牤粉8倍的乙醇，使用索氏提取器74℃回流提取5小時(shí)得乙醇索氏提取液；

C，對(duì)步驟B所得乙醇索氏提取液進(jìn)行濃縮及干燥：對(duì)乙醇索氏提取液進(jìn)行減壓蒸餾，濃縮至溶液呈粘稠狀；后對(duì)濃縮物進(jìn)行常溫烘干，得到粘稠深褐色固體干燥物；

D，牤提取物的保存：對(duì)干燥物用丙酮溶解，然后轉(zhuǎn)入離心管中于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

本發(fā)明同時(shí)提供了上述分離方法制得的牤提取物及上述牤提取物的應(yīng)用，該牤提取物用于防治植物病害，可以防治多種植物病害，例如水稻紋枯、白瓜腐霉、番茄灰霉、小麥赤霉或番茄早疫中的一種或幾種。

以下是本發(fā)明提供的具體實(shí)施例，用以說(shuō)明上述方案及其各種條件的選取。本發(fā)明實(shí)施例中所用試劑均采用市購(gòu)分析純。

實(shí)施例1

牤提取物的分離

1、牤干的粉碎：

將50g黑水牤干轉(zhuǎn)移至研缽中，加入約40ml液氮對(duì)其進(jìn)行急速冷卻，然后將黑水牤干研碎。

2、使用乙醇索氏提取上述所得牤粉：稱取35.00g上述黑水牤粉，加入300ml乙醇，使用索氏提取器74℃回流提取5小時(shí)。

3、對(duì)上述所得乙醇索氏提取液進(jìn)行濃縮及蒸干：

a、對(duì)牤粉的乙醇索氏提取液進(jìn)行減壓蒸餾，濃縮至溶液呈粘稠狀；

b、將上述所得粘稠狀濃縮物轉(zhuǎn)移至已稱重容器，

c、對(duì)濃縮物進(jìn)行常溫烘干，得到粘稠深褐色固體；

d、稱容器與所得干燥物總重量；

4、計(jì)算牤粉乙醇提取率，計(jì)算方法：

5、牤提取物的保存

對(duì)干燥物用1:1量的丙酮溶解，然后轉(zhuǎn)入離心管中于4℃保存?zhèn)溆脴悠稴1。

實(shí)施例2

采用與實(shí)施例1相同的方法步驟分離牤提取物S2，不同的是牤干為黑尾斑牤干。

性能測(cè)試

牤提取物樣品S1和S2對(duì)病原真菌離體活性測(cè)試

采用菌絲生長(zhǎng)速率法，在土豆培養(yǎng)基(本實(shí)施例的土豆培養(yǎng)基的制備及滅菌：1L蒸餾水中加入200g土豆，20g蔗糖，20g瓊脂,小火沸騰30分鐘,過(guò)濾掉土豆渣即得到病原菌培養(yǎng)基，120℃滅菌20分鐘。)中加入用無(wú)菌水稀釋5倍的牤提取物丙酮溶液成1ml溶液，用涂布棒涂抹均勻，直至吸干。加入相同濃度丙酮(200μl丙酮和800μl無(wú)菌水)的土豆培養(yǎng)基作為對(duì)照。供試真菌在土豆培養(yǎng)基平板活化培養(yǎng)形成菌落，用打孔器(5mm)制取菌餅，將菌絲面朝下接菌于土豆培養(yǎng)基平板中央。將接種好的平板置于24℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1-4天后調(diào)查(不同真菌生長(zhǎng)速度不同)，采用十字交叉法測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑，并計(jì)算抑菌率。

牤提取物對(duì)供試病原真菌的抑制作用結(jié)果如表1所示。

表1

從離體測(cè)試防治結(jié)果可以看出，本發(fā)明的牤提取物對(duì)水稻紋枯、小麥赤霉等病具有一定的防治效果，是一種具有較大應(yīng)用前景的生物防治菌新品種。

在本說(shuō)明書(shū)的描述中，參考術(shù)語(yǔ)“一個(gè)實(shí)施例”、“一些實(shí)施例”、“示例”、“具體示例”、或“一些示例”等的描述意指結(jié)合該實(shí)施例或示例描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)包含于本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施例或示例中。在本說(shuō)明書(shū)中，對(duì)上述術(shù)語(yǔ)的示意性表述不必須針對(duì)的是相同的實(shí)施例或示例。而且，描述的具體特征、結(jié)構(gòu)、材料或者特點(diǎn)可以在任一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例或示例中以合適的方式結(jié)合。此外，在不相互矛盾的情況下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以將本說(shuō)明書(shū)中描述的不同實(shí)施例或示例以及不同實(shí)施例或示例的特征進(jìn)行結(jié)合和組合。

盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。