本申請(qǐng)要求2015年2月27日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?4/633,558的優(yōu)先權(quán)；所述美國(guó)專利申請(qǐng)是于2014年9月22日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?4/493,141的部分繼續(xù)申請(qǐng)，其要求2014年4月11日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)No.61/978,773以及于2014年5月22日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?2/002,169的優(yōu)先權(quán)；其中每一個(gè)的內(nèi)容通過引用整體并入本文。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總的來說涉及對(duì)于自閉癥譜系病癥(ASD)和其他病癥的風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)。背景自閉癥譜系病癥(ASD)是普遍的發(fā)育病癥，其特征在于互動(dòng)社交相互作用缺乏，語言困難，以及重復(fù)行為和限制性興趣，通常在生命的前3年期間表現(xiàn)。ASD的病因?qū)W知之甚少，但被認(rèn)為是多因素的，遺傳和環(huán)境因素都會(huì)導(dǎo)致該疾病的發(fā)展。數(shù)據(jù)顯示，盡管父母開始懷疑他們的孩子患有ASD的平均年齡是20個(gè)月，但是診斷的中位年齡達(dá)到54個(gè)月。從臨床角度來看，一個(gè)重要的挑戰(zhàn)是盡可能早地確定兒童是否患有ASD，是否需要專家轉(zhuǎn)診到自閉癥治療計(jì)劃中。概述ASD的診斷通常由發(fā)育兒科醫(yī)生和其他專家在使用在DiagnosticandStatisticalManualofMentalDisorders中闡述的標(biāo)準(zhǔn)仔細(xì)評(píng)估兒童之后作出。可靠的診斷通常需要由包括發(fā)育兒科醫(yī)生、神經(jīng)病學(xué)家、精神病學(xué)家、心理學(xué)家、言語和聽力專家以及職業(yè)治療師在內(nèi)的多個(gè)專家對(duì)受試者進(jìn)行認(rèn)真評(píng)估。此外，ASD診斷的中位年齡為54個(gè)月，盡管父母懷疑ASD的平均年齡早至20個(gè)月這一事實(shí)。CDC(疾病控制中心)觀察到最終確診為ASD的兒童中只有18％是在36個(gè)月前確定的。遺憾的是，患有尚未診斷的ASD的幼兒錯(cuò)過了在兒童發(fā)育的重要窗口期間進(jìn)行早期治療干預(yù)的機(jī)會(huì)。需要有可靠地確定ASD風(fēng)險(xiǎn)的醫(yī)學(xué)診斷測(cè)試，以特別地更早鑒定年幼兒童，此時(shí)治療干預(yù)可能更加有效。本發(fā)明的實(shí)施方案源于以下發(fā)現(xiàn)：對(duì)群體內(nèi)和群體之間分析物(諸如代謝物)測(cè)量值的分布曲線的分析提供了可用于建立或改進(jìn)用于預(yù)測(cè)病癥或病況諸如ASD的風(fēng)險(xiǎn)的分類器的信息。特別地，血液中代謝物水平的群體分布曲線的分析有助于預(yù)測(cè)受試者中自閉癥譜系病癥(ASD)的風(fēng)險(xiǎn)。例如，血液中代謝物水平的群體分布曲線的分析可用于區(qū)分受試者的自閉癥譜系病癥(ASD)與非ASD發(fā)育病癥(諸如非因自閉癥譜系病癥引起的發(fā)育遲緩(DD))。區(qū)分兩個(gè)組的生物標(biāo)志物的統(tǒng)計(jì)分析通常假定兩個(gè)群體的平均生物標(biāo)志物水平不同，并且圍繞該平均值的變化歸因于由高斯分布最好表征的實(shí)驗(yàn)和/或群體變化。與此基線模型相反，本文觀察到，對(duì)于一些分析物，ASD中或有時(shí)DD中的分布最好被表征為其本身由多個(gè)子分布組成，其中一個(gè)子分布與另一健康狀態(tài)無法區(qū)分(例如，其中ASD和DD分布未分化)，另一子分布在少數(shù)受試者中遠(yuǎn)遠(yuǎn)偏離平均值，例如，對(duì)于該群體，呈現(xiàn)組合分布的“尾部”。這種洞察導(dǎo)致與基線明顯不同的分析框架；已發(fā)現(xiàn)，對(duì)于某些分析物，通過例如建立不需要內(nèi)在高斯分布模型的排序，基于群體分布的頂部或底部來定義閾值，可實(shí)現(xiàn)更好的結(jié)果。因此，代謝物在本文中被描述為表現(xiàn)出“尾部富集”或“尾部”效應(yīng)，其中在該代謝物的代謝物水平的分布曲線的遠(yuǎn)端部分存在特定群體(例如，ASD或DD)的樣品的富集。由評(píng)估代謝物分布曲線中尾部效應(yīng)的存在、不存在和/或方向(上或下)得到的信息可用于預(yù)測(cè)ASD的風(fēng)險(xiǎn)。已發(fā)現(xiàn)，對(duì)于特定代謝物，代謝物水平對(duì)應(yīng)于分布曲線的頂部或底部(例如，十分位)，即在分布曲線的“尾部”內(nèi)(無論是在“右尾”還是“左尾”)，高度地提示ASD的存在或不存在。此外，發(fā)現(xiàn)當(dāng)合并具有低程度重疊、共同信息的多種代謝物時(shí)，風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)得到改善。例如，對(duì)于ASD的評(píng)估，有一些特定的代謝物組提供互補(bǔ)診斷/風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估信息。也就是說，通過分析第一代謝物的水平無法鑒定的ASD陽性個(gè)體(例如，第一代謝物的鑒定尾部?jī)?nèi)的個(gè)體)與通過分析第二代謝物可鑒定的ASD陽性個(gè)體并不相同(或者可能存在低的，非零度的重疊)。不希望受特定理論的束縛，該發(fā)現(xiàn)可能反映了ASD本身的多面性質(zhì)。因此，在某些實(shí)施方案中，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法包括鑒定受試者是否落入涉及多種代謝物的多重已鑒定的代謝物尾部的任一種中，例如，其中不同代謝物尾部的預(yù)測(cè)物是至少部分不相連的，例如，它們具有低的共同信息，因此引入具有低共同信息的多個(gè)代謝物時(shí)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)改善。分類器具有預(yù)先確定水平的可預(yù)測(cè)性，例如，以AUC的形式-即對(duì)于分類器，將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真陽性率(靈敏度)作圖的ROC曲線下面積-其中向分類器中添加表現(xiàn)尾效應(yīng)、具有低共同信息的代謝物時(shí)AUC增加。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明源自以下發(fā)現(xiàn)：血液中代謝物水平的某些閾值可用于幫助預(yù)測(cè)受試者中自閉癥譜系病癥(ASD)的風(fēng)險(xiǎn)。在某些方面，從代謝物分布曲線中尾部效應(yīng)的存在、不存在和/或方向(上或下)的評(píng)估推導(dǎo)的代謝物的這些閾值被用于預(yù)測(cè)ASD的風(fēng)險(xiǎn)。在某些方面，這些閾值可處在群體中代謝物水平分布的上端或下端。已發(fā)現(xiàn)，對(duì)于特定代謝物，代謝物水平高于上閾值和/或低于下閾值高度提示ASD的存在或不存在。在一些實(shí)施方案中，這些代謝物的水平可用于將ASD與其它形式的發(fā)育延遲(例如，非因自閉癥譜系病癥引起的發(fā)育遲緩(DD))區(qū)分開。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及區(qū)分受試者的自閉癥譜系病癥(ASD)與非ASD發(fā)育延遲(DD)的方法，所述方法包括：(i)測(cè)量獲自所述受試者的樣品中多種代謝物中的第一代謝物的水平，先前已在具有ASD的第一受試者群體中和具有非-ASD發(fā)育延遲(DD)的第二受試者群體中表征了所述第一代謝物的群體分布，其中所述第一代謝物被預(yù)先測(cè)定為表現(xiàn)出ASD尾部效應(yīng)和/或DD尾部效應(yīng)，每個(gè)尾部效應(yīng)包括在相應(yīng)(ASD或DD)群體的成員中富集的相關(guān)右尾或左尾，其中第一代謝物表現(xiàn)出具有右尾的ASD尾部效應(yīng)，當(dāng)該樣品中第一代謝物的水平高于定義在第一(ASD)群體成員中富集的右尾的預(yù)先確定上(最小)閾值時(shí)，該樣品中第一代謝物的水平在ASD尾部?jī)?nèi)，而當(dāng)?shù)谝淮x物表現(xiàn)出具有左尾的ASD尾部效應(yīng)時(shí)，當(dāng)該樣品中第一代謝物的水平低于定義在第一(ASD)群體成員中富集的左尾的預(yù)先確定下(最大)閾值時(shí)，樣品中第一代謝物的水平在ASD尾部之內(nèi)，并且，在第一代謝物表現(xiàn)出具有右尾的DD尾部效應(yīng)時(shí)，當(dāng)樣品中第一代謝物的水平高于定義在第二(DD)群體成員中富集的右尾的預(yù)先確定上(最小)閾值時(shí)，樣品中第一代謝物的水平在DD尾部?jī)?nèi)，并且在第一代謝物表現(xiàn)出具有左尾的DD尾部效應(yīng)時(shí)，當(dāng)樣品中第一代謝物的水平低于定義在第二(DD)群體成員中富集的左尾的預(yù)先確定下(最大)閾值時(shí)，樣品中第一代謝物的水平在DD尾部?jī)?nèi)；(ii)測(cè)量來自該樣品的多種代謝物中的至少一種另外的代謝物的水平，其中在第一群體和第二群體中事先表征了所述至少一種另外的代謝物中的每一種的群體分布，被預(yù)先確定為表現(xiàn)出ASD尾部效應(yīng)和DD尾部效應(yīng)中的至少一種，并且，對(duì)于所述至少一種另外的代謝物中的每一種，根據(jù)步驟(i)鑒定樣品中所述代謝物的水平是否在相應(yīng)的ASD尾部和/或DD尾部?jī)?nèi)；和(iii)基于所述樣品處于在步驟(i)和步驟(ii)中分析所述代謝物所鑒定的ASD尾部和/或所鑒定的DD尾部，以預(yù)先確定水平的可預(yù)測(cè)性確定(a)受試者具有ASD而不是DD或(b)受試者具有DD而不是ASD。在某些實(shí)施方案中，第一代謝物被預(yù)先測(cè)定為表現(xiàn)具有相關(guān)的上(最小)或下(最大)閾值的ASD尾部效應(yīng)，所述閾值被預(yù)先測(cè)定為使得滿足該標(biāo)準(zhǔn)的未知分類的樣品(先前未表征的樣品)是ASD而不是DD的幾率不小于1.6:1，p<0.3。在某些實(shí)施方案中，所述幾率不小于2:1，或不小于2.5:1，或不小于2.75:1，或不小于3:1，或不小于3.5:1，或不小于3.75:1，或不小于4:1。在任何前述內(nèi)容中，p值(統(tǒng)計(jì)顯著性值)滿足p<0.3，或p<0.25，或p<0.2，或者p<0.15，或p<0.1，或p<0.05。在某些實(shí)施方案中，第一代謝物被預(yù)先確定來顯示具有相關(guān)的上(最小)或下(最大)閾值的DD尾部效應(yīng)，所述閾值被預(yù)先確定為使得滿足該標(biāo)準(zhǔn)的未知分類的樣品(先前未表征的樣品)是DD而不是ASD的幾率不小于1.6:1，p<0.3。在某些實(shí)施方案中，所述幾率不小于2:1，或不小于2.5:1，或不小于2.75:1，或不小于3:1，或不小于3.25:1，或不小于3.5:1，或不小于3.75:1，或不小于4:1。在任何前述內(nèi)容中，p值(統(tǒng)計(jì)顯著性值)滿足p<0.3，或p<0.25，或p<0.2，或者p<0.15，或p<0.1，或p<0.05。在某些實(shí)施方案中，預(yù)先確定水平的可預(yù)測(cè)性對(duì)應(yīng)于將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真陽性率(靈敏度)繪制的接受者操作特征(ROC)曲線具有至少0.70的AUC(曲線下面積)。在某些實(shí)施方案中，一種或多種所述代謝物的預(yù)先確定上(最小)閾值是從第85位至第95位百分位的百分位數(shù)(例如，約第90百分位數(shù)，或約第85、第86、第87、第88、第89、第91、第92、第93、第94或第95百分位數(shù)，四舍五入至最接近的百分位數(shù))，并且其中一種或多種所述代謝物的預(yù)先確定的下(最大)閾值是從第10至第20百分位數(shù)的百分位數(shù)(例如，約第15位百分位數(shù)，或約第10、第11、第12、第13、第14、第16、第17、第18、第19或第20百分位數(shù)，四舍五入至最接近的百分位數(shù))。在某些實(shí)施方案中，多種代謝物包括選自以下代謝物的至少兩種代謝物：5-羥基吲哚乙酸(5-hydroxyindoleacetate,5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-anhydroglucitol；1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸(3-(3-hydroxyphenyl)propionate)、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropanoate,CMPF)、3-吲哚氧基硫酸(3-indoxylsulfate)、4-乙基苯基硫酸(4-ethylphenylsulfate)、8-羥基辛酸(8-hydroxyoctanoate)、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸(indoleacetate)、異戊酰甘氨酸、乳酸(lactate)、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚(p-cresolsulfate)、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸(pipecolate)、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯?；鈮A和3-羥基馬尿酸(3-hydroxyhippurate)。在某些實(shí)施方案中，多種代謝物包括選自以下代謝物的至少兩種代謝物：苯乙酰谷氨酰胺、黃嘌呤、辛烯?；鈮A、硫酸對(duì)甲酚、異戊酰甘氨酸、γ-CEHC、吲哚乙酸、哌可酸、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、乳酸、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-吲哚氧基硫酸、泛酸(維生素B5)和羥基百菌清。在某些實(shí)施方案中，多種代謝物包括選自以代謝物的至少3種代謝物：苯乙酰谷氨酰胺、黃嘌呤、辛烯?；鈮A、硫酸對(duì)甲酚、異戊酰甘氨酸、γ-CEHC、吲哚乙酸、哌可酸、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、乳酸、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-吲哚氧基硫酸、泛酸(維生素B5)和羥基百菌清。在某些實(shí)施方案中，多種代謝物包含選自表6中所列的對(duì)中的至少一對(duì)代謝物。在某些實(shí)施方案中，多種代謝物包含選自表7中所列的三元組中的至少一個(gè)三元組代謝物。在某些實(shí)施方案中，多種代謝物包含至少一對(duì)代謝物，其被組合在一起作為一組兩種代謝物，提供至少0.62(例如，至少約0.63、0.64或0.65)的AUC，其中AUC是針對(duì)僅基于所述兩種代謝物的組的分類器，將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真陽性率(靈敏度)繪制的ROC曲線下面積。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包含至少一個(gè)三元組代謝物，其被組合在一起作為一組三種代謝物，提供至少0.66(例如，至少約0.67或0.68)的AUC，其中AUC是針對(duì)僅基于所述三種代謝物的組的分類器，將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真陽性率(靈敏度)繪制的ROC曲線下面積。在另一方面，本發(fā)明涉及確定受試者的自閉癥譜系病癥(ASD)風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括：(i)分析來自從所述受試者獲得的樣品的多種代謝物的第一代謝物的水平，所述第一代謝物的群體分布事先在具有已知分類的參照受試者群體中進(jìn)行了表征，其中所述第一代謝物被預(yù)先確定為表現(xiàn)出包含在ASD成員中富集的相關(guān)右尾或左尾的ASD尾部效應(yīng)，以及其中第一代謝物表現(xiàn)出具有右尾的ASD尾部效應(yīng)，當(dāng)樣品中第一代謝物的水平高于限定在ASD群體成員中富集的右尾的預(yù)先確定上(最小)閾值時(shí)，樣品中第一代謝物的水平在ASD尾部?jī)?nèi)，并且其中第一代謝物表現(xiàn)出具有左尾的ASD尾部效應(yīng)，當(dāng)樣品中第一代謝物的水平低于限定在ASD群體成員中富集的左尾的預(yù)銜測(cè)定下(最大)閾值時(shí)，樣品中第一代謝物的水平在ASD尾部?jī)?nèi)；(ii)測(cè)量來自樣品的多種代謝物中的至少一種另外的代謝物的水平，所述至少一種另外的代謝物中的每一種的群體分布事先在參照群體中進(jìn)行了表征，并且被預(yù)先確定為表現(xiàn)出ASD尾部效應(yīng)，以及對(duì)于所述至少一種另外的代謝物中的每一種，根據(jù)步驟(i)鑒定樣品中所述代謝物的水平是否在相應(yīng)的ASD尾部?jī)?nèi)；和(iii)基于樣品位于針對(duì)步驟(i)和步驟(ii)中分析的代謝物所鑒定的ASD尾，以預(yù)先確定的可預(yù)測(cè)水平測(cè)定受試者具有ASD的風(fēng)險(xiǎn)。在某些實(shí)施方案中，第一代謝物被預(yù)先確定為表現(xiàn)具有相關(guān)的上(最小)或下(最大)閾值的ASD尾部效應(yīng)，所述閾值被預(yù)先確定為使得滿足該標(biāo)準(zhǔn)的未知分類的樣品(先前未表征的樣品)是ASD而不是DD的幾率不小于1.6:1，p<0.3。在某些實(shí)施方案中，所述幾率不小于2:1，或不小于2.5:1，或不小于2.75:1，或不小于3:1，或不小于3.25:1，或不小于3.5:1，或不小于3.75:1，或不小于4:1。在任何前述內(nèi)容中，p值(統(tǒng)計(jì)顯著性值)滿足p<0.3，或p<0.25，或p<0.2，或者p<0.15，或p<0.1，或p<0.05。在某些實(shí)施方案中，預(yù)先確定的可預(yù)測(cè)性水平對(duì)應(yīng)于將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真陽性率(靈敏度)繪制的接受者操作特征(ROC)曲線具有至少0.70的AUC(曲線下面積)。在某些實(shí)施方案中，多種代謝物包括選自以下代謝物的至少兩種代謝物：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯?；鈮A和3-羥基馬尿酸。在另一方面，本發(fā)明涉及確定受試者的自閉癥譜系病癥(ASD)風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括：(i)分析從受試者獲得的樣品中的多種代謝物的水平，所述多種代謝包括選自以下代謝物的至少兩種代謝物：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯?；鈮A和3-羥基馬尿酸；和(ii)基于所述多種代謝物的定量水平確定所述受試者具有ASD的風(fēng)險(xiǎn)。在某些實(shí)施方案中，受試者的年齡不超過約54個(gè)月。在某些實(shí)施方案中，受試者的年齡不超過約36個(gè)月。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包括選自以下代謝物的至少兩種代謝物：苯乙酰谷氨酰胺、黃嘌呤、辛烯?；鈮A、硫酸對(duì)甲酚、異戊酰甘氨酸、γ-CEHC、吲哚乙酸、哌可酸、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、乳酸、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-吲哚氧基硫酸、泛酸(維生素B5)和羥基百菌清。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包括選自以下代謝物的至少3種代謝物：苯乙酰谷氨酰胺、黃嘌呤、辛烯?；鈮A、硫酸對(duì)甲酚、異戊酰甘氨酸、γ-CEHC、吲哚乙酸、哌可酸、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、乳酸、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-吲哚氧基硫酸、泛酸(維生素B5)和羥基百菌清。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包含選自表6中所列的對(duì)中的至少一對(duì)代謝物。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包含選自表7中所列的三元組的至少一個(gè)三元組的代謝物。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包含至少一對(duì)代謝物，其被組合在一起作為一組兩種代謝物，提供至少0.62(例如，至少約0.63、0.64或0.65)的AUC，其中AUC是僅基于這一組兩種代謝物的分類器將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真陽性率(靈敏度)繪制的ROC曲線下面積。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包含至少一種三元組的代謝物，其被組合在一起作為一組三種代謝物，提供至少0.66(例如，至少約0.67或0.68)的AUC，其中AUC是僅基于這一組三種代謝物的分類器將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真陽性率(靈敏度)繪制的ROC曲線下面積。在某些實(shí)施方案中，所述樣品是血漿樣品。在某些實(shí)施方案中，測(cè)量代謝物的水平包括進(jìn)行質(zhì)譜法。在某些實(shí)施方案中，進(jìn)行質(zhì)譜法包括進(jìn)行選自熱解質(zhì)譜法、傅立葉變換紅外光譜法、拉曼光譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、高壓液相色譜法/質(zhì)譜法(HPLC/MS)、液相色譜(LC)-電噴霧質(zhì)譜法、帽-LC-串聯(lián)電噴霧質(zhì)譜法和超高效液相色譜/電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜法。在另一方面，本發(fā)明涉及區(qū)分受試者中自閉癥的樣品譜系病癥(ASD)與非ASD發(fā)育延遲(DD)的方法，包括：(i)分析獲自受試者的樣品中的多種代謝物的水平，所述多種代謝物包含選自以下代謝物中的至少兩種代謝物：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯?；鈮A和3-羥基馬尿酸，所述多種代謝物的水平和/或群體分布已事先在參照群體上進(jìn)行了表征；和(ii)通過將來自受試者的樣品的所述多種代謝物的水平與預(yù)先確定的閾值(例如，從具有已知分類的樣品的參照群體確定的閾值)進(jìn)行比較，以預(yù)先確定水平的可預(yù)測(cè)性確定(a)受試者具有ASD而不是DD或(b)受試者具有DD而不是ASD。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過向不同代謝物分配權(quán)重以反映它們?cè)陲L(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)中的相應(yīng)功能來分析代謝物的方法。在一些實(shí)施方案中，可以從代謝物的生物學(xué)功能(例如，它們所屬的途徑)、其臨床效用或其來自統(tǒng)計(jì)學(xué)或流行病學(xué)分析的顯著性推導(dǎo)出權(quán)重分配。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了使用不同技術(shù)測(cè)量代謝物的方法，包括但不限于色譜測(cè)定、質(zhì)譜測(cè)定、熒光測(cè)定法測(cè)定、電泳測(cè)定、免疫親和測(cè)定和免疫化學(xué)測(cè)定。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于確定受試者的自閉癥譜系病癥(ASD)風(fēng)險(xiǎn)的方法，包括分析來自受試者的樣品中多種代謝物的水平；以及基于所述多種代謝物的定量水平，以預(yù)先確定的可預(yù)測(cè)水平確定所述受試者是否具有ASD而不是非ASD發(fā)育病癥。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包括選自以下代謝物中的至少一種代謝物：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯酰基肉堿、3-羥基馬尿酸及其組合。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包括選自以下代謝物中的至少兩種代謝物：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯?；鈮A、3-羥基馬尿酸及其組合。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包括選自以下的至少3種，至少4種，至少5種，至少6種，至少7種，至少8種，至少9種或至少10種代謝物：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺，硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯酰基肉堿、3-羥基馬尿酸及其組合。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包括另外的代謝物。在一些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包括多于21種代謝物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于區(qū)分受試者的自閉癥譜系病癥(ASD)與非ASD發(fā)育病癥的方法，包括以下步驟：分析來自受試者的樣品中多種代謝物的水平，將代謝物的水平與其在一個(gè)參照群體中的相應(yīng)群體分布相比較，以及通過將來自受試者的樣品的多種代謝物的水平與先前表征的參照群體中所述多種代謝物的水平和/或群體分布相比較，以預(yù)先確定的可預(yù)測(cè)性水平確定受試者是否患有ASD而不是非ASD發(fā)育病癥。例如，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了診斷標(biāo)準(zhǔn)，其包括可利用具有如下AUC的ROC曲線預(yù)測(cè)受試者的ASD風(fēng)險(xiǎn)的至少一種代謝物：至少0.60、至少0.65、至少0.70、至少0.75、至少0.80、至少0.85或至少0.90的AUC。AUC是針對(duì)分類器將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真陽性率(靈敏度)繪制的ROC曲線下的面積。在某些實(shí)施方案中，用于分析的至少一種代謝物選自5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺，硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯?；鈮A、3-羥基馬尿酸及其組合。在某些實(shí)施方案中，用于分析的所述至少一種代謝物包含選自以下成員的至少兩個(gè)或更多個(gè)(例如，1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、5個(gè)、6個(gè)、7個(gè)、8個(gè)、9個(gè)、10個(gè)、11個(gè)、12個(gè)、13個(gè)、14個(gè)、15個(gè)、16個(gè)、17個(gè)、18個(gè)、19個(gè)、20個(gè)、21個(gè))成員：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺，硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯酰基肉堿和3-羥基馬尿酸，其中建立每種代謝物(例如，顯示尾部效應(yīng)的每種所述代謝物)的非ASD人口分布曲線和ASD群體分布曲線。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物選自γ-CEHC、黃嘌呤、硫酸對(duì)甲酚、辛烯?；鈮A、苯乙酰谷氨酰胺及其組合。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物是γ-CEHC。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物是黃嘌呤。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物是硫酸對(duì)甲酚。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物是辛烯酰基肉堿。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物是苯乙酰谷氨酰胺。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物是異戊?；拾彼帷Ｔ谀承?shí)施方案中，用于分析的代謝物是哌可酸。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物是吲哚乙酸。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物是辛烯?；鈮A。在某些實(shí)施方案中，用于分析的代謝物是羥基百菌清。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包含互補(bǔ)的至少第一代謝物和第二代謝物(例如，第一和第二代謝物的ASD尾部樣品基本上不重疊)，從而由代謝物提供的預(yù)測(cè)子部分不相連，并且具有的共同信息少。在某些實(shí)施方案中，風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)因引入共同信息少的多種代謝物而改善。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包括兩種代謝物，其中被組合在一起作為一組兩種代謝物的所述兩種代謝物提供了至少0.62、0.63、0.64或0.65的AUC。在某些實(shí)施方案中，所述多種代謝物包括三種代謝物，其中被組合在一起作為一組三種代謝物的所述三種代謝物提供了至少0.66、0.67或0.68的AUC。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過分析兩組事先定義的代謝物的水平來區(qū)分受試者的自閉癥譜系病癥(ASD)與非ASD發(fā)育病癥的方法。在某些實(shí)施方案中，第一組代謝物代表與ASD密切相關(guān)的代謝物，而第二組代謝物代表與對(duì)照病況(例如，DD)相關(guān)的代謝物。通過分析來自受試者的樣品的兩組代謝物，受試者具有ASD而不是對(duì)照病況的風(fēng)險(xiǎn)可通過本公開中描述的多種方法來確定。例如，這可以通過比較第一組代謝物的聚集的ASD尾部效應(yīng)與第二組代謝物的聚集的非ASD尾部效應(yīng)來實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于區(qū)分受試者的自閉癥譜系病癥(ASD)與非ASD發(fā)育遲緩(DD)的方法，所述方法包括：(i)測(cè)量獲自受試者的樣品中的多種代謝物的水平，其中所述多種代謝物包括選自以下代謝物的至少兩種代謝物：黃嘌呤、γ-CEHC、羥基-百菌清、5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、吲哚乙酸、硫酸對(duì)甲酚、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、羥基異戊酰肉毒堿(C5)、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、3-羥基馬尿酸及其組合；和(ii)計(jì)算樣品中其水平等于或低于(a)如表9A中定義的指示ASD(ASD左尾效應(yīng))或(b)如表9B中定義的指示DD(DD左尾效應(yīng))的預(yù)先確定閾值濃度的代謝物數(shù)目；和/或(iii)計(jì)算樣品中其水平等于或高于(a)如表9A中定義的指示ASD(ASD左尾效應(yīng))或(b)如表9B中定義的指示DD(DD左尾效應(yīng))的預(yù)先確定閾值濃度的代謝物數(shù)目；和(iv)基于步驟(ii)和/或(iii)中獲得的數(shù)目，確定受試者具有ASD或DD。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于確定受試者具有發(fā)生ASD的風(fēng)險(xiǎn)或處于發(fā)生ASD的風(fēng)險(xiǎn)中的方法，所述方法包括：(i)測(cè)量獲自受試者的樣品中的多種代謝物的水平，其中所述多種代謝物包括選自以下代謝物的至少兩種代謝物：黃嘌呤、γ-CEHC、羥基-百菌清、5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、吲哚乙酸、硫酸對(duì)甲酚、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、羥基異戊酰肉堿(C5)、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、3-羥基馬尿酸及其組合；和(ii)檢測(cè)以下中的兩種或更多種：(a)黃嘌呤水平為182.7ng/ml或以上；(b)羥基-百菌清水平為20.3ng/ml或以上；(c)5-羥基吲哚乙酸水平為28.5ng/ml或以上；(d)乳酸水平為686600ng/ml或以上；(e)泛酸水平為63.3ng/ml或以上；(f)哌可酸水平為303.6ng/ml或以上；(g)γ-CEHC水平為32.0ng/ml或以下；(h)吲哚乙酸水平為141.4ng/ml或以下；(i)硫酸對(duì)甲酚水平為182.7ng/ml或以下；(j)1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)水平為11910.3ng/ml或以下；(k)3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)水平為7.98ng/ml或以下；(l)3-吲哚氧基硫酸水平為256.7ng/ml或以下；(m)4-乙基苯基硫酸水平為3.0ng/ml或以下；(n)羥基異戊酰肉堿(C5)水平為12.9ng/ml或以下；(o)N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺水平為124.82ng/ml或以下；和(p)苯乙酰谷氨酰胺水平為166.4ng/ml或以下；和(iii)基于步驟(ii)中檢測(cè)的代謝物水平，確定受試者具有ASD或處于發(fā)生ASD的風(fēng)險(xiǎn)中。在一些實(shí)施方案中，步驟(ii)中檢測(cè)的代謝物水平是近似水平。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了將受試者診斷為患有自閉癥譜系病癥(ASD)或處于發(fā)生該病癥的風(fēng)險(xiǎn)中的方法，所述方法包括(i)測(cè)定獲自所述受試者的樣品中一種或多種代謝物的水平；(ii)將所測(cè)定的所述一種或多種代謝物的水平與所述一種或多種代謝物的預(yù)先確定水平進(jìn)行比較，所述預(yù)先確定水平指示了受試者具有ASD或處于發(fā)生該病癥的風(fēng)險(xiǎn)中；和(iii)基于所述一種或多種代謝物的測(cè)定水平與預(yù)先確定水平之間的差異，將所述受試者診斷為具有ASD或處于發(fā)生該病癥的風(fēng)險(xiǎn)中；其中所述一種或多種代謝物選自5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、對(duì)-苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤，羥基-百菌清、辛烯酰基肉堿和3-羥基馬尿酸。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了診斷受試者為具有自閉癥譜系病癥(ASD)或處于發(fā)生該病癥的風(fēng)險(xiǎn)中的方法，所述方法包括(i)測(cè)定獲自所述受試者的樣品中一種或多種代謝物的水平；(ii)將所測(cè)定的所述一種或多種代謝物的水平與所述一種或多種代謝物的預(yù)先確定水平進(jìn)行比較，所述預(yù)先確定水平指示了受試者具有ASD或處于發(fā)生該病癥的風(fēng)險(xiǎn)中；和(iii)基于所述一種或多種代謝物的測(cè)定水平與預(yù)先確定水平之間的差異，診斷所述受試者具有ASD或處于發(fā)生該病癥的風(fēng)險(xiǎn)中；其中所述一種或多種代謝物選自5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯?；鈮A和3-羥基馬尿酸，條件是所述代謝物不是5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯酰基肉堿或3-羥基馬尿酸。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過測(cè)量來自受試者的某些代謝物的水平和遺傳信息來確定受試者發(fā)生ASD風(fēng)險(xiǎn)的方法。在一些實(shí)施方案中，遺傳信息包括拷貝數(shù)變異(CNV)和/或脆性X(FXS)測(cè)試。在另外的實(shí)施方式中，關(guān)于本發(fā)明的某些方面所描述的限制可以應(yīng)用于本發(fā)明的其它方面。例如，在一些實(shí)施方式中，從屬于一個(gè)獨(dú)立權(quán)利要求的權(quán)利要求的限定可以應(yīng)用于另一獨(dú)立權(quán)利要求。附圖說明圖1舉例說明兩個(gè)群體(例如，ASD和DD)中的示例性代謝物的分布，以及該代謝物在這兩個(gè)群體之間的平均偏移。圖2舉例說明示例性代謝物在兩個(gè)群體(例如，ASD和DD)中的分布，以及這種代謝物在這兩個(gè)群體之間的尾部效應(yīng)(例如，ASD分布具有更密集的尾部)。圖3舉例說明代謝物5-羥基吲哚乙酸在兩個(gè)群體(例如，ASD和DD)中的分布，其在這兩個(gè)群體之間表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)上顯著的平均偏移(t檢驗(yàn)；p<0.01)和統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的右尾效應(yīng)('極限值'表示尾部效應(yīng)，F(xiàn)isher's檢驗(yàn)；p＝0.001)。圖4舉例說明代謝物γ-CEHC在兩個(gè)群體(例如，ASD和DD)中的分布，其在這兩個(gè)群體之間表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)上顯著的左尾效應(yīng)(“極限值”表示尾部效應(yīng)，F(xiàn)isher's檢驗(yàn)；p＝0.008)圖5舉例說明代謝物苯基乙酰谷氨酰胺在兩個(gè)群體(例如，ASD和DD)中的分布，其在這兩個(gè)群體之間表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)上顯著的平均偏移(t檢驗(yàn)；p＝0.001)和統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的左和右尾效應(yīng)(“極限值”表示尾效應(yīng)，F(xiàn)isher's檢驗(yàn)；p＝0.0001)。所述分布在兩個(gè)群體中表現(xiàn)為偏移的高斯曲線。圖6舉例說明兩種示例性代謝物的相關(guān)性，證明了這兩種代謝物具有不同的尾部效應(yīng)分布并且是互補(bǔ)的。圖7舉例說明12種示例性代謝物在180名受試者中的尾部效應(yīng)，以及它們對(duì)ASD和DD的預(yù)測(cè)能力。圖8A舉例說明使用示例性12種代謝物小組對(duì)180個(gè)樣品的ASD和非ASD尾部效應(yīng)的曲線圖，證明了來自ASD患者的樣品顯示出ASD尾部效應(yīng)的聚集。圖8B舉例說明使用示例性12種代謝物小組對(duì)180個(gè)樣品的ASD和非ASD尾部效應(yīng)的曲線圖，以及對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分元的示例性方法。圖8C舉例說明使用示例性21種代謝物小組對(duì)180個(gè)樣品的ASD和非ASD尾部效應(yīng)的曲線圖，證明了來自ASD患者的樣品顯示出ASD尾部效應(yīng)的聚集。圖9舉例說明示例性12種代謝物小組在所評(píng)估的代謝物數(shù)目增加時(shí)，對(duì)ASD的可預(yù)測(cè)性增加。圖10A舉例說明使用示例性12種代謝物小組的三分法對(duì)ASD的可預(yù)測(cè)性的影響。圖10B舉例說明在示例性21種代謝物小組的分析中三分法對(duì)ASD的可預(yù)測(cè)性的影響。圖11A舉例說明與用于分析示例性12種代謝物小組的非投票方法相比，使用投票方法對(duì)ASD的可預(yù)測(cè)性的改進(jìn)。圖11B舉例說明與使用示例性21種代謝物小組的非投票方法相比，使用投票方法對(duì)ASD的可預(yù)測(cè)性的改進(jìn)。圖12舉例說明使用示例性12種代謝物小組來實(shí)現(xiàn)ASD高可預(yù)測(cè)性的驗(yàn)證過程。圖13A-13U舉例說明21種示例性代謝物在ASD群體和非ASD群體中的群體分布。圖14A-B舉例說明通過從總共600種代謝物中包括和排除示例性的12種代謝物小組、示例性的21種代謝物小組和一組84種候選代謝物而產(chǎn)生的對(duì)ASD可預(yù)測(cè)性的影響，如通過尾部效應(yīng)分析和平均偏移分析評(píng)估的。(黑名單＝排除，白名單＝包括，mx_12＝示例性12種代謝物小組，mx_targeted21＝示例性21種代謝物小組，mx-all-candidates＝84種候選代謝物，所有特征＝600種代謝物的總集)圖14C-D舉例說明通過從總共600種代謝物中包括(白名單)和排除(黑名單)示例性12種代謝物小組和示例性21種代謝物中小組產(chǎn)生的對(duì)ASD可預(yù)測(cè)性的影響，如通過尾部效應(yīng)分析和平均偏移分析、以及通過比較邏輯回歸與貝葉斯分析在兩個(gè)樣品組群(即，“圣誕節(jié)”("Christmas")和復(fù)活節(jié)("Easter"))中評(píng)估的。(黑名單＝排除，白名單＝包括，mx_12＝示例性12種代謝物小組，mx_targeted21＝示例性21種代謝物小組，mx-all-candidates＝84種候選代謝物，所有特征＝600種代謝物的總集)圖15舉例說明通過使用增加數(shù)目的選自示例性21種代謝物小組的亞組的代謝物而對(duì)ASD的可預(yù)測(cè)性產(chǎn)生的影響。圖16A舉例說明使用示例性12種代謝物小組將遺傳信息添加至尾部效應(yīng)分析的效果，證明了將ASD與非ASD分開的功效提高。圖16B舉例說明使用示例性21種代謝物小組將遺傳信息添加至尾部效應(yīng)分析的效果，證明了將ASD與非ASD區(qū)分開的功效提高。圖17A-B舉例說明通過比較尾部效應(yīng)分析與平均偏移分析以及通過比較邏輯回歸與貝葉斯分析來說明通過從總數(shù)目代謝物中包含和排除示例性21種代謝物小組對(duì)ASD可預(yù)測(cè)性產(chǎn)生的影響。(黑名單＝排除，白名單＝包括，mx_12＝示例性12種代謝物組，mx_targeted21＝示例性21種代謝物小組，mx_all_candidates＝84種候選代謝物，所有特征＝600種代謝物的總集)圖18A-B通過比較尾部效應(yīng)分析與平均偏移分析，以及通過在兩個(gè)群組(即，"Christmas"和"Easter")中使用邏輯回歸來說明，通過從總數(shù)目代謝物中包含和排除示例性21種代謝物小組對(duì)ASD可預(yù)測(cè)性產(chǎn)生的影響。(黑名單＝排除，白名單＝包括，mx_12＝示例性12種代謝物組，mx_targeted21＝示例性21種代謝物小組，mx_all_candidates＝84種候選代謝物，所有特征＝600種代謝物的總集)圖19A-D舉例說明通過使用"Christmas"組群，或"Easter"組群，或組合兩者，比較尾部效應(yīng)分析與平均偏移分析，以及比較邏輯回歸與貝葉斯分析來說明，通過從總數(shù)目代謝物中包含和排除示例性的21種代謝物小組對(duì)ASD可預(yù)測(cè)性產(chǎn)生的影響。(黑名單＝排除，白名單＝包括，mx_12＝示例性12種代謝物組，mx_targeted21＝示例性21種代謝物小組，mx所有候選物＝84種候選代謝物，所有特征＝600種代謝物的總集)圖20舉例說明示例性21種代謝物小組的尾部效應(yīng)分析用于預(yù)測(cè)ASD的特異性和靈敏度的代表性曲線圖。圖21舉例說明評(píng)分系統(tǒng)，其中基于ASD和DD預(yù)測(cè)性代謝物的比值比的log2值的總和計(jì)算ASD或DD的風(fēng)險(xiǎn)得分。定義為了更容易地理解本發(fā)明，首先在下面定義某些術(shù)語。在整個(gè)說明書中闡述了以下術(shù)語和其他術(shù)語的附加定義。在本申請(qǐng)中，除非根據(jù)上下文另有說明，否則(i)術(shù)語“一個(gè)/種(a)”可被理解為是指“至少一個(gè)”；(ii)術(shù)語“或”可以理解為是指“和/或”；(iii)術(shù)語“包含”和“包括”可以被理解為包括詳細(xì)例舉的組件或步驟，無論是由它們本身還是與一個(gè)或多個(gè)附加的組件或步驟一起呈現(xiàn)；和(iv)術(shù)語“約”和“大約”可以被理解為允許如由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的標(biāo)準(zhǔn)變化；和(v)當(dāng)提供范圍時(shí)，包括端點(diǎn)。藥劑：本文所用的術(shù)語“藥劑”可以指任何化學(xué)類別的化合物或?qū)嶓w，包括例如多肽、核酸、糖類、脂質(zhì)，小分子、金屬或其組合。大約：如本文所使用的，術(shù)語“近似”、“大約”或“約”旨在涵蓋如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)相關(guān)上下文所理解的正常統(tǒng)計(jì)變化。在某些實(shí)施方案中，除非另有說明或從上下文中明顯看出(除其中這樣的數(shù)字超過可能值的100％外)，否則術(shù)語“近似”、“大約”或“約”是指以任一方向(大于或小于)落在所述參照值的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小)內(nèi)的一系列值。曲線下面積(AUC)：分類器具有將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真實(shí)陽性率(靈敏度)繪制的相關(guān)ROC曲線(受試者工作特征曲線)。ROC曲線下面積(AUC)是分類器能夠區(qū)分兩個(gè)診斷組的程度的量度。與AUC為0.5的隨機(jī)分類器相比，完美分類器具有1.0的AUC。與……相關(guān)聯(lián)：如果一個(gè)事件或?qū)嶓w的存在、水平和/或形式與另一個(gè)事件或?qū)嶓w的存在、水平和/或形式相關(guān)，則所述兩個(gè)事件或?qū)嶓w彼此“相關(guān)聯(lián)”，如該術(shù)語在本文中所使用的。例如，如果特定實(shí)體的存在、水平和/或形式與疾病、病癥或病況的發(fā)病率和/或易感性相關(guān)(例如，在整個(gè)相關(guān)群體中)，則所述特定實(shí)體被認(rèn)為與該特定疾病、病癥或病況相關(guān)。自閉癥譜系病癥：如本文所用，術(shù)語“自閉譜系病癥”被本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為是指以有關(guān)自閉癥“譜”的發(fā)育病癥，其特征在于交互社交缺陷、語言困難、重復(fù)行為和限制性興趣中的一種或多種。自閉癥譜系病癥已在DSM-V(2013年5月)中被描述為包括連續(xù)的癥狀的病癥，包括例如溝通障礙，諸如在交談中不適當(dāng)?shù)仨憫?yīng)，錯(cuò)讀非語言交互作用，難以建立適合年齡的友誼，過度依賴于常規(guī)，對(duì)他們的環(huán)境變化高度敏感，和/或強(qiáng)烈關(guān)注不適當(dāng)?shù)捻?xiàng)目。自閉癥譜系病癥另外地已例如通過DSM-IV-TR表征為包括自閉癥、阿斯伯格病癥、Rett氏病癥、兒童崩解病癥和未以其它方式說明的廣泛性發(fā)育病癥(包括非典型自閉癥)。在一些實(shí)施方案中，使用標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試儀器諸如問卷和觀察時(shí)間表來表征自閉癥譜系病癥(ASD)。例如，在一些實(shí)施方案中，ASD的特征在于(i)滿足自閉癥診斷觀察時(shí)間表(ADOS)中的關(guān)于溝通加社交互動(dòng)總計(jì)(CommunicationplusSocialInteractionTotal)的截止值的得分，以及滿足自閉癥診斷面試修訂版(AutismDiagnosticInterview-Revised)(ADI-R)中的關(guān)于≤36個(gè)月時(shí)的社交互動(dòng)、溝通、行為模式和發(fā)育異常性的截止值的得分；和/或(ii)滿足ADOS中關(guān)于溝通和社交互動(dòng)總計(jì)的ASD截止值的得分，以及滿足在ADI-R中關(guān)于≤36個(gè)月時(shí)社會(huì)互動(dòng)、溝通、行為模式和發(fā)育異常的截止值的得分，以及(ii)(a)滿足ADI-R中關(guān)于社交互動(dòng)和溝通的截止值的得分，或(ii)(b)滿足ADI-R中關(guān)于社交互動(dòng)或溝通的截止值和在關(guān)于社互動(dòng)或溝通截止值的2個(gè)點(diǎn)內(nèi)(其不滿足截止值)的得分，或(ii)(c)在ADI-R中社交互動(dòng)和溝通的截止值的1個(gè)點(diǎn)內(nèi)的得分。分類：如本文所用，“分類”是通過在已知類別內(nèi)的收集的數(shù)據(jù)點(diǎn)之間找到共同特征，然后使用數(shù)學(xué)方法或其他方法將數(shù)據(jù)點(diǎn)分配至這些不同類別之一來學(xué)習(xí)將數(shù)據(jù)點(diǎn)分成不同類別的過程。在統(tǒng)計(jì)學(xué)中，分類是基于包含其子群體已知的觀測(cè)的訓(xùn)練數(shù)據(jù)集來鑒定新觀測(cè)所屬的子群體(其中所述子群體的身份是未知的)的問題。因此，其要求是基于對(duì)一個(gè)或多個(gè)測(cè)量、性狀或特征等的定量信息，并且基于其中已經(jīng)建立先前確定的分組的訓(xùn)練組，將新的單獨(dú)項(xiàng)目歸到組中。分類有很多應(yīng)用。在一些情況下，其被用作數(shù)據(jù)挖掘過程，而在其他情況下，進(jìn)行更詳細(xì)的統(tǒng)計(jì)建模。分類器：如本文所用，“分類器”是用于執(zhí)行數(shù)據(jù)分類的方法、算法、計(jì)算機(jī)程序或系統(tǒng)。廣泛使用的分類器的實(shí)例包括但不限于神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(多層感知器)、邏輯回歸、支持向量機(jī)、k-最近鄰、高斯混合模型、高斯樸素貝葉斯、決策樹、偏最小二乘法行列式分析(partial-least-squaresdeterminantanalysis)(PSL-DA)、Fisher線性判別、邏輯回歸、樸素貝葉斯分類器、感知器、支持向量機(jī)、二次分類器、Kernet估計(jì)、Boosting、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)、貝葉斯網(wǎng)絡(luò)、隱馬爾科夫模型和學(xué)習(xí)矢量量化。確定：本文描述的許多方法包括“確定”的步驟。通過閱讀本說明書，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解，這種“確定”可以利用或通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的各種技術(shù)中的任何技術(shù)來實(shí)現(xiàn)，所述技術(shù)包括例如明確提及的特定技術(shù)。在一些實(shí)施方案中，確定涉及物理樣品的操作。在一些實(shí)施方案中，確定涉及對(duì)數(shù)據(jù)或信息的考慮和/或操作，例如利用適于執(zhí)行相關(guān)分析的計(jì)算機(jī)或其他處理單元。在一些實(shí)施方案中，確定涉及從源接收相關(guān)信息和/或材料。在一些實(shí)施方案中，確定包括將樣品或?qū)嶓w的一個(gè)或多個(gè)特性與可比較的參照進(jìn)行比較。確定風(fēng)險(xiǎn)：如本文所用，確定風(fēng)險(xiǎn)包括計(jì)算或量化給定受試者具有或不具有特定病況或病癥的概率。在一些實(shí)施方案中，可完全或部分基于確定的風(fēng)險(xiǎn)或風(fēng)險(xiǎn)得分(例如，比值比或范圍)進(jìn)行病癥或疾病(例如，自閉癥譜系病癥(ASD)或發(fā)育遲緩(DD))的陽性或陰性診斷。發(fā)育遲緩：如本文所用，短語發(fā)育遲緩(DD)是指兒童發(fā)育的一個(gè)或多個(gè)過程，包括例如身體發(fā)育、認(rèn)知發(fā)展、溝通發(fā)展、社交或情感發(fā)展或適應(yīng)性發(fā)展的持續(xù)性或大或小延遲，所述延遲不是由自閉癥譜系病癥造成的。即使具有ASD的個(gè)體可能被認(rèn)為是發(fā)育遲緩的，但本文使用的ASD的分類將被認(rèn)為勝于DD的分類，因此ASD和DD的分類是相互排斥的。換句話說，除非另有說明，否則DD的分類被視為指非ASD的發(fā)育延遲。在一些實(shí)施方案中，DD的特征在于非自閉癥(AU)和非ASD，但是(i)在Mullen量表上的得分為69或更低，在Vineland量表上得分為69或更低，以及在SCQ上的得分為14或更低，或(ii)在Mullen或Vineland上的得分為69或更低，并且在另一評(píng)估(得分77或更低)上的得分在截止值標(biāo)準(zhǔn)偏差的一半以內(nèi)。診斷信息：如本文所用，診斷性信息或用于診斷的信息是在確定患者是否患有疾病或病癥和/或?qū)⒓膊』虿“Y分類為表型類別或?qū)膊』虿r的預(yù)后，或?qū)膊』虿r的治療(一般治療或任何特定治療)的可能反應(yīng)具有重要性的任何類別中有用的任何信息。類似地，診斷是指提供任何類型的診斷信息，包括但不限于受試者是否可能患有疾病或病況(諸如，自閉癥譜系病癥)、在受試者中所表現(xiàn)的疾病或病況的狀態(tài)、分期或特征，與病癥的性質(zhì)或分類相關(guān)的信息，與預(yù)后相關(guān)的信息和/或在選擇適當(dāng)治療中有用的信息。治療的選擇可包括選擇特定的治療劑或其它治療方式，諸如行為治療、飲食改變等，關(guān)于是否放棄或進(jìn)行治療的選擇，與給藥方案相關(guān)的選擇(例如，特定治療劑或治療劑的組合的一個(gè)或多個(gè)劑量的頻率或水平)等標(biāo)志物：如本文所用，標(biāo)志物是指其存在或水平與特定疾病或病況相關(guān)或具有相關(guān)性的藥劑?？蛇x擇地或另外，在一些實(shí)施方案中，特定標(biāo)志物的存在或水平例如與特定信號(hào)傳導(dǎo)途徑的活性(或活性水平)相關(guān)，所述信號(hào)傳導(dǎo)途徑可能是特定病癥的特征。標(biāo)志物可能在或可能不在該疾病或病癥中發(fā)揮病原學(xué)作用。標(biāo)志物的存在或不存在的統(tǒng)計(jì)顯著性可以根據(jù)具體標(biāo)志物而變化。在一些實(shí)施方案中，標(biāo)志物的檢測(cè)是高度特異性的，因?yàn)槠浞从巢“Y屬于特定亞類的高概率。根據(jù)本發(fā)明，有用的標(biāo)志物不需要以100％的準(zhǔn)確度區(qū)分特定亞類的病癥。代謝物：如本文所用，術(shù)語代謝物是指在身體化學(xué)或物理過程中產(chǎn)生的物質(zhì)。術(shù)語“代謝物”包括代謝過程的任何化學(xué)或生物化學(xué)產(chǎn)物，諸如通過生物分子的加工、裂解或消耗產(chǎn)生的任何化合物。這樣的分子的實(shí)例包括但不限于：酸和相關(guān)化合物；單、二和三羧酸類(飽和、不飽和以及脂族和環(huán)狀、芳基、烷芳基)；醛酸類、酮酸類；內(nèi)酯形式；赤霉素；脫落酸；醇、多元醇、衍生物和相關(guān)化合物；乙醇、芐醇、甲醇；丙二醇、甘油、植醇；肌醇、糠醇、薄荷醇；醛、酮、醌、衍生物和相關(guān)化合物；乙醛、丁醛、苯甲醛、丙烯醛、糠醛、乙二醛；丙酮、丁酮；蒽醌；碳水化合物；單糖、二糖、三糖；生物堿、胺和其他堿；吡啶(包括煙酸、煙酰胺)；嘧啶(包括胞嘧啶、胸腺嘧啶)；嘌呤(包括鳥嘌呤、腺嘌呤、黃嘌呤/次黃嘌呤、激動(dòng)素)；吡咯；喹啉(包括異喹啉)；嗎啡喃、托烷、辛可寧類(cinchonans)、核苷酸、寡核苷酸、衍生物和相關(guān)化合物；鳥苷、胞嘧啶、腺苷、胸苷、肌苷；氨基酸、寡肽、衍生物和相關(guān)化合物；酯；酚類和相關(guān)化合物；雜環(huán)化合物和衍生物；吡咯、四吡咯(類咕啉和卟吩/卟啉、w/w/o金屬離子)；黃酮類；吲哚；脂質(zhì)(包括脂肪酸和甘油三酯)、衍生物和相關(guān)化合物；類胡蘿卜素、八氫番茄紅素和固醇、類異戊二烯類，包括萜烯；和上述分子的修飾形式。在一些實(shí)施方案中，代謝物是內(nèi)源性物質(zhì)的代謝的產(chǎn)物。在一些實(shí)施方案中，代謝物是外源物質(zhì)的代謝的產(chǎn)物。在一些實(shí)施方案中，代謝物是內(nèi)源物質(zhì)和外源物質(zhì)的代謝的產(chǎn)物。如本文所使用的，術(shù)語“代謝組”是指體液、細(xì)胞、組織、器官或生物體中代謝物的化學(xué)分布或指紋。代謝物分布曲線：如本文所用，代謝物分布曲線是由將代謝物水平針對(duì)群體密度(例如，ASD或DD)作圖的函數(shù)確定的概率分布曲線。在一些實(shí)施例中，分布曲線是數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合。在一些實(shí)施方案中，分布曲線是最小二乘多項(xiàng)式曲線擬合。在一些實(shí)施例中，分布曲線是不對(duì)稱的或非高斯的。在一些實(shí)施方案中，分布曲線僅僅是具有相關(guān)診斷類別的病例對(duì)比代謝物值的曲線圖(例如，“地塊圖”)，其中沒有曲線擬合。共同信息(mutualinformation)：如本文所用，共同信息指的是兩個(gè)變量的共同依賴性的度量(即，知道一個(gè)變量降低了關(guān)于另一個(gè)變量的不確定性的程度)。高的相互信息指示不確定性的大幅度減??；低共同信息表示小的減少；兩個(gè)隨機(jī)變量之間的零共同信息意味著變量是獨(dú)立的。非自閉癥譜系病癥(非ASD)：如本文所用，非自閉癥譜系病癥(非ASD)是指不是具有自閉癥譜系病癥的兒童或成人的分類。在一些實(shí)施方案中，“非ASD”通常是發(fā)展中的受試者。在一些實(shí)施方案中，非ASD群體由具有發(fā)育遲緩(DD)的受試者組成或包含具有發(fā)育遲緩(DD)的受試者。在一些實(shí)施方案中，“非ASD”由DD和正常發(fā)展的受試者組成或包含DD和正常發(fā)展的受試者?；颊撸喝绫疚乃?，術(shù)語“患者”或“受試者”是指例如為了實(shí)驗(yàn)、診斷、預(yù)防和/或治療目的進(jìn)行施用或可以施用測(cè)試或組合物的任何生物體。在一些實(shí)施方案中，患者罹患或易患一種或多種病癥或病況。在一些實(shí)施方案中，患者顯示障礙或病癥的一種或多種癥狀。在一些實(shí)施方案中，懷疑患者患有一種或多種障礙或病況?？深A(yù)測(cè)性：如本文所用，可預(yù)測(cè)性是指可以定性或定量地進(jìn)行受試者疾病狀態(tài)的正確預(yù)測(cè)或預(yù)報(bào)的程度。完全可預(yù)測(cè)性意味著嚴(yán)格的確定，但缺乏可預(yù)測(cè)性并不一定意味著缺乏確定。對(duì)可預(yù)測(cè)性的限制可能是由諸如缺乏信息或過度復(fù)雜等因素造成的。預(yù)后和預(yù)測(cè)信息：如本文所用，術(shù)語預(yù)后信息和預(yù)測(cè)信息可互換使用，是指可用于指示疾病或病況過程的任何方面的任何信息，無論存在還是不存在治療。這樣的信息可以包括但不限于患者的疾病被治愈的可能性，患者疾病將對(duì)特定治療反應(yīng)的可能性(其中反應(yīng)可以以多種方式中的任一種定義)。預(yù)后和預(yù)測(cè)信息包括在診斷信息的廣泛類別中。參照：術(shù)語“參照”在本文中通常用于描述針對(duì)其比較目標(biāo)試劑、個(gè)體、群體、樣品、序列或數(shù)值的標(biāo)準(zhǔn)或?qū)φ赵噭?、個(gè)體、群體、樣品、序列或數(shù)值。在一些實(shí)施方案中，與目標(biāo)試劑、個(gè)體、群體、樣品、序列或數(shù)值的測(cè)試或測(cè)定基本上同時(shí)地測(cè)試和/或測(cè)定參照試劑、個(gè)體、群體、樣品、序列或數(shù)值。在一些實(shí)施方案中，參照試劑、個(gè)體、群體、樣品、序列或數(shù)值是歷史參照，其任選地體現(xiàn)在有形介質(zhì)中。通常，如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，在與用于測(cè)定或表征目標(biāo)試劑、個(gè)體、群體、樣品、序列或數(shù)值的那些條件相當(dāng)?shù)臈l件下測(cè)定或表征參照試劑、個(gè)體、群體、樣品、序列或數(shù)值?；貧w分析：如本文所用，“回歸分析”包括用于對(duì)數(shù)個(gè)變量建模和分析的任何技術(shù)，其中焦點(diǎn)在于因變量與一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立變量之間的關(guān)系。更具體地，回歸分析有助于理解當(dāng)任何一個(gè)獨(dú)立變量變化、而其他獨(dú)立變量保持固定時(shí)，因變量的典型值是如何變化的。最常見地，回歸分析估計(jì)在獨(dú)立變量時(shí)因變量的條件性期望值-即當(dāng)獨(dú)立變量保持固定時(shí)，因變量的平均值。較不常見的是，焦點(diǎn)在于給定獨(dú)立變量時(shí)，因變量的條件性分布的分位數(shù)或其他位置參數(shù)。在所有情況下，估計(jì)目標(biāo)是獨(dú)立變量的函數(shù)，稱為回歸函數(shù)。在回歸分析中，也有興趣表征回歸函數(shù)周圍的因變量變化，其可通過概率分布來描述?；貧w分析廣泛用于預(yù)測(cè)和預(yù)報(bào)，其中回歸分析的使用與機(jī)器學(xué)習(xí)領(lǐng)域有實(shí)質(zhì)重疊。回歸分析也用于理解哪些獨(dú)立變量與因變量相關(guān)，以及探索這些關(guān)系的形式。在有限的情況下，回歸分析可用于推斷獨(dú)立變量與因變量之間的因果關(guān)系。已經(jīng)開發(fā)了用于進(jìn)行回歸分析的大量技術(shù)。熟悉的方法諸如線性回歸和普通最小二乘回歸是參數(shù)化的，因?yàn)榛貧w函數(shù)是根據(jù)從數(shù)據(jù)估計(jì)的有限數(shù)量的未知參數(shù)來定義的。非參數(shù)回歸是指允許回歸函數(shù)以指定的一組函數(shù)存在的技術(shù)，所述函數(shù)可以是無限維的。風(fēng)險(xiǎn)：如將從上下文理解的，疾病、病癥或病況的“風(fēng)險(xiǎn)”是特定個(gè)體將被診斷為患有或?qū)l(fā)展疾病、病癥或病況的可能性的程度。在一些實(shí)施方案中，風(fēng)險(xiǎn)表示為百分比。在一些實(shí)施方案中，風(fēng)險(xiǎn)為0％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％直至100％。在一些實(shí)施方案中，風(fēng)險(xiǎn)表示為相對(duì)于與參照樣品或參照樣品組相關(guān)聯(lián)的風(fēng)險(xiǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。在一些實(shí)施方案中，參照樣品或參照樣品組具有疾病、病癥或病況的已知風(fēng)險(xiǎn)。在一些實(shí)施方案中，參照樣品或參照樣品組來自與特定個(gè)體相當(dāng)?shù)膫€(gè)體。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多。在一些實(shí)施方案中，相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度可表示為相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度(RR)或比值比(OddsRatio，OR)。樣品：如本文所用，術(shù)語“樣品”通常是指如本文所述的獲自或源自目標(biāo)來源的生物樣品。在一些實(shí)施方案中，目標(biāo)來源包括生物體，諸如動(dòng)物或人。在一些實(shí)施方案中，生物樣品是或包含生物組織或流體。在一些實(shí)施方案中，生物樣品可以是或包含骨髓；血液；血漿；血清；血細(xì)胞；腹水；組織或細(xì)針活檢樣品；含細(xì)胞的體液；自由漂浮的核酸；痰液；唾液；尿；腦脊液液體、腹膜液、胸膜液、糞便、淋巴液、婦科液、皮膚拭子、陰道拭子、口腔拭子、鼻拭子；諸如導(dǎo)管灌洗液或支氣管肺泡灌洗液等洗滌或灌洗液；吸出物；刮取物；骨髓樣本；組織活檢樣本；外科樣本；糞便、其他體液、分泌物和/或排泄物；和/或來自其的細(xì)胞等。在一些實(shí)施方案中，生物樣品是或包含從個(gè)體獲得的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，獲得的細(xì)胞是或包含來自從其獲得樣品的個(gè)體的細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，樣品是通過任何適當(dāng)?shù)姆绞綇哪繕?biāo)來源直接獲得的“初級(jí)樣品”。例如，在一些實(shí)施方案中，通過選自以下的方法獲得初級(jí)生物樣品：活組織檢查(例如，細(xì)針抽吸或組織活檢)、手術(shù)、體液收集(例如，血液、淋巴、糞便等)等。在一些實(shí)施方案中，如從上下文將清楚的，術(shù)語“樣品”是指通過加工初級(jí)樣品(例如，通過除去其中的一種或多種組分和/或通過將一種或多種試劑添加至其中)獲得的制劑。例如，使用半透膜進(jìn)行過濾。這種“加工的樣品”可以包含例如從樣品提取的核酸或蛋白質(zhì)，或通過使初級(jí)樣品經(jīng)受諸如mRNA的擴(kuò)增或逆轉(zhuǎn)錄、某些組分的分離和/或純化等技術(shù)而獲得的核酸或蛋白質(zhì)。受試者：“受試者”是指哺乳動(dòng)物(例如人，在一些實(shí)施例中，包括出生前人形式)。在一些實(shí)施方案中，受試者患有相關(guān)疾病、病癥或病況。在一些實(shí)施方案中，受試者對(duì)疾病，病癥或病況敏感。在一些實(shí)施方案中，受試者顯示疾病、病癥或病況的一種或多種癥狀或特征。在一些實(shí)施方案中，受試者不顯示疾病、病癥或病況的任何癥狀或特征。在一些實(shí)施方案中，受試者是具有對(duì)疾病、病癥或病況的易感性或風(fēng)險(xiǎn)特征的一個(gè)或多個(gè)特征的人。受試者可以是患者，其是指到醫(yī)療提供者處進(jìn)行疾病的診斷或治療的人。在一些實(shí)施方案中，受試者是被施予治療的個(gè)體?；旧希喝绫疚乃褂玫模g(shù)語“基本上”是指表現(xiàn)出目標(biāo)特征或性質(zhì)的總體或接近總體程度或水平的定性條件。生物領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將理解，生物和化學(xué)現(xiàn)象很少(如果有的話)達(dá)到完全和/或進(jìn)行至完全或?qū)崿F(xiàn)或者避免絕對(duì)結(jié)果。因此，本文使用術(shù)語“基本上”來涵蓋許多生物和化學(xué)現(xiàn)象中固有的潛在缺乏完全性?；加校骸盎加小奔膊?、障礙或病況的個(gè)體已經(jīng)被診斷為患有和/或表現(xiàn)出或已表現(xiàn)出所述疾病、障礙或病況的一種或多種癥狀或特征。易感于：對(duì)疾病、病癥或病況“易感”的個(gè)體處于發(fā)展疾病、病癥或病況的風(fēng)險(xiǎn)中。在一些實(shí)施方案中，已知這樣的個(gè)體具有與相關(guān)疾病、病癥和/或病況的發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)增加統(tǒng)計(jì)上相關(guān)的一種或多種易感性因素。在一些實(shí)施方案中，易患疾病、病癥或病況的個(gè)體不顯示該疾病、病癥或病況的任何癥狀。在一些實(shí)施方案中，對(duì)疾病、病癥或病況敏感的個(gè)體未被或尚未被診斷為患有所述疾病、病癥和/或病況。在一些實(shí)施方案中，對(duì)疾病、病癥或病況敏感的個(gè)體是已經(jīng)暴露于與所述疾病、病癥或病況發(fā)展相關(guān)的條件下的個(gè)體。在一些實(shí)施方案中，發(fā)展疾病、病癥和/或病況的風(fēng)險(xiǎn)是基于群體的風(fēng)險(xiǎn)(例如，患有過敏的個(gè)體的家族成員等)尾部富集和尾部效應(yīng)：如本文所用，術(shù)語“尾部富集”或“尾部效應(yīng)”是指代謝物(或其他分析物)顯示的分類增強(qiáng)性質(zhì)，所述代謝物在代謝物水平的分布曲線的遠(yuǎn)端部分在來自特定群體的樣品中具有相對(duì)高濃度?！吧衔膊俊被颉坝椅膊俊笔侵阜植记€的遠(yuǎn)端部分大于平均值?！跋挛膊俊被颉白笪膊俊笔侵阜植记€的遠(yuǎn)端部分低于平均值。在一些實(shí)施方案中，尾部由基于排名的預(yù)先確定閾值確定。例如，如果樣品對(duì)于某種代謝物的測(cè)量值高于對(duì)應(yīng)于群體中該代謝物的從第85至第95(例如，第90)百分位數(shù)的值，或者低于對(duì)應(yīng)于群體中該代謝物的從第10至第20(例如，第15)百分位數(shù)的值，則樣品被指定為在尾部?jī)?nèi)。治療劑：如本文所用，短語“治療劑”是指當(dāng)向受試者施用時(shí)具有治療效果和/或引起所需的生物學(xué)和/或藥理學(xué)效應(yīng)的任何試劑。在一些實(shí)施方案中，如果藥劑對(duì)于相關(guān)群體的施用與群體中期望的或有益的治療結(jié)果在統(tǒng)計(jì)上相關(guān)，則無論施用該藥劑的特定受試者是否經(jīng)歷所述期望的或有益的治療結(jié)果，所述藥劑被認(rèn)為是治療劑。訓(xùn)練集(trainingset)：如本文所用，“訓(xùn)練集”是在信息科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域中用來發(fā)現(xiàn)潛在的預(yù)測(cè)關(guān)系的一組數(shù)據(jù)。訓(xùn)練集被用于人工智能、機(jī)器學(xué)習(xí)、遺傳編程、智能系統(tǒng)和統(tǒng)計(jì)。在所有這些領(lǐng)域中，訓(xùn)練集具有相同的作用，并且通常與測(cè)試集結(jié)合使用。測(cè)試集(testset)：如本文所用，“測(cè)試集”是在信息科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域中用來評(píng)估預(yù)測(cè)關(guān)系的強(qiáng)度和效用的一組數(shù)據(jù)。測(cè)試集可用于人工智能、機(jī)器學(xué)習(xí)、遺傳編程、智能系統(tǒng)和統(tǒng)計(jì)。在所有這些領(lǐng)域中，測(cè)試集具有相同的作用。治療：如本文所用，術(shù)語“治療”(也稱為“醫(yī)療”或“醫(yī)治”)是指部分或完全緩解、改善、減輕、抑制、延遲特定疾病、病癥和/或病況的一種或多種癥狀、特征和/或原因的發(fā)作，降低其嚴(yán)重度和/或降低其頻率、發(fā)病率或嚴(yán)重度的物質(zhì)或治療(例如，行為治療)的任何施用。這樣的治療可以是對(duì)未表現(xiàn)出相關(guān)疾病、病癥和/或病況的體征的受試者和/或僅表現(xiàn)出所述疾病、病癥和/或病況的早期體征的受試者進(jìn)行的治療。可選擇地或另外，這樣的治療可以是對(duì)表現(xiàn)出相關(guān)疾病、病癥和/或病況的一種或多種確定的體征的受試者進(jìn)行的治療。在一些實(shí)施方案中，治療可以是對(duì)已被診斷為患有相關(guān)疾病、病癥和/或病況的受試者進(jìn)行的治療。在一些實(shí)施方案中，治療可以是對(duì)已知具有與相關(guān)疾病、病癥和/或病況發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)增加在統(tǒng)計(jì)上相關(guān)的一種或多種易感性因子的受試者進(jìn)行的治療。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了用于基于樣品(例如，血液樣品或血漿樣品)中代謝物水平的特異性分析來確定受試者中自閉癥譜系病癥(ASD)的風(fēng)險(xiǎn)的方法和系統(tǒng)。本發(fā)明的各個(gè)方面在以下部分中詳細(xì)描述。部分和標(biāo)題的使用并不意味著限制本發(fā)明。每個(gè)部分可應(yīng)用于本發(fā)明的任何方面。在本申請(qǐng)中，除非另有說明，否則“或”的使用意味著“和/或”。自閉癥譜系病癥自閉癥譜系病癥(ASD)的臨床診斷的標(biāo)準(zhǔn)已在DiagnosticsandStatisticalManualofMentalDisorders，第5版(DSM-V，2013年5月出版)中闡述。另外ASD已例如通過DSM-IV-TR表征為包括自閉癥、阿斯伯格病癥、Rett氏障礙、兒童崩解性障礙和未指定的廣泛性發(fā)育障礙(包括非典型性自閉癥)。在一些實(shí)施方案中，ASD的特征在于(i)滿足ADOS中的關(guān)于溝通加社交互動(dòng)總計(jì)(CommunicationplusSocialInteractionTotal)的截止值的得分，以及滿足自閉癥診斷面試修訂版(AutismDiagnosticInterview-Revised)(ADI-R)中的關(guān)于≤36個(gè)月時(shí)的社交互動(dòng)、溝通、行為模式和發(fā)育異常性的截止值的得分；和/或(ii)滿足ADOS中關(guān)于溝通和社交互動(dòng)總計(jì)的ASD截止值的得分，以及滿足在ADI-R中關(guān)于≤36個(gè)月時(shí)社會(huì)互動(dòng)、溝通、行為模式和發(fā)育異常的截止值的得分，以及(ii)(a)滿足ADI-R中關(guān)于社交互動(dòng)和溝通的截止值的得分，或(ii)(b)滿足ADI-R中關(guān)于社交互動(dòng)或溝通的截止值和在關(guān)于社互動(dòng)或溝通截止值的2個(gè)點(diǎn)內(nèi)(其不滿足截止值)的得分，或(ii)(c)在ADI-R中社交互動(dòng)和溝通的截止值的1個(gè)點(diǎn)內(nèi)的得分。發(fā)育遲緩發(fā)育遲緩是兒童發(fā)育的一個(gè)或多個(gè)過程，包括例如身體發(fā)育、認(rèn)知發(fā)展、溝通發(fā)展、社交或情感發(fā)展或適應(yīng)性發(fā)展中或大或小的延遲，所述延遲不是由ASD造成的。在一些實(shí)施方案中，DD的特征在于非自閉癥(AU)和非ASD，其(i)在Mullen量表上得分為69或更低，在Vineland量表上得分為69或更低，在SCQ上得分為14或更低，或(ii)在Mullen或Vineland上得分為69或更低，并且在另一評(píng)估上在截止值的半個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差以內(nèi)(得分77或更低)。即使具有ASD的個(gè)體可以被認(rèn)為是發(fā)育遲緩的，但本文使用的ASD的分類將被認(rèn)為優(yōu)先于DD的分類，從而ASD和DD的分類是相互排斥的。ASD的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估呈現(xiàn)受損的語言、行為或社會(huì)發(fā)展的癥狀的兒童通?？梢员慌R床醫(yī)生看到(最常見地在初級(jí)保健環(huán)境中)，但其不能確定該兒童是否患有ASD或一些其他病況、病癥或分類(例如，DD)。對(duì)兒童進(jìn)行診斷，特別是在大量語言發(fā)展之前的年齡進(jìn)行診斷是很困難的，許多初級(jí)保健醫(yī)生沒有能力或資源來對(duì)其患者進(jìn)行鑒別診斷。例如，ASD可能不容易與其他發(fā)育病癥、病況或分類(例如DD)區(qū)分開。評(píng)估受試者中ASD的風(fēng)險(xiǎn)(包括非ASD和DD的概率)以及區(qū)分ASD與DD是有用的。ASD的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估為早期干預(yù)和治療提供了機(jī)會(huì)。例如，非?？漆t(yī)生可使用ASD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估來啟動(dòng)向?qū)？漆t(yī)生的轉(zhuǎn)診。專科醫(yī)生可使用ASD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估來優(yōu)先進(jìn)行對(duì)患者的進(jìn)一步評(píng)估。ASD風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估還可用于在最終診斷之前建立臨時(shí)診斷，在該時(shí)間期間可向高風(fēng)險(xiǎn)兒童以及他或她的家人提供便利服務(wù)。本文描述了用于確定受試者中ASD的風(fēng)險(xiǎn)的方法。在一些實(shí)施方案中，確定ASD風(fēng)險(xiǎn)包括確定受試者具有ASD的機(jī)會(huì)是否大于約50％。在一些實(shí)施方案中，確定ASD風(fēng)險(xiǎn)包括確定受試者具有ASD的機(jī)會(huì)大于約60％、65％、70％、74％、80％、85％、90％、95％或98％。在一些實(shí)施方案中，確定ASD風(fēng)險(xiǎn)包括確定受試者具有ASD。在一些實(shí)施方案中，確定ASD風(fēng)險(xiǎn)包括確定受試者不具有ASD(即，非ASD)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于區(qū)分受試者的ASD與非ASD分類(例如，DD)的方法。在一些實(shí)施方案中，將ASD與非ASD分類/病況區(qū)分包括確定受試者具有ASD而不是非ASD分類的機(jī)會(huì)大于約60％、65％、70％、74％、80％、85％、90％、95％或98％(即，具有ASD而不具有非ASD分類的機(jī)會(huì))。在一些實(shí)施方案中，非ASD分類是DD。在一些實(shí)施例中，非ASD分類是“正常的”。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于確定受試者不具有ASD或DD的方法。分析方法本文描述了用于評(píng)估ASD風(fēng)險(xiǎn)或區(qū)分ASD與其它非ASD發(fā)育病癥的方法。在一些實(shí)施方案中，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是(至少部分地)基于來自受試者的樣品例如血液樣品中代謝物的測(cè)量和表征。在一些實(shí)施方案中，血漿樣品來源于血液樣品，并且分析血漿樣品。代謝物可以以多種方式檢測(cè)，包括基于色譜和/或質(zhì)譜法的測(cè)定、熒光測(cè)定、電泳、免疫親和、雜交、免疫化學(xué)、紫外光譜(UV)、熒光分析、放射化學(xué)分析、近紅外光譜(近IR)、核磁共振光譜(NMR)、光散射分析(LS)和比濁法。在一些實(shí)施方案中，通過單獨(dú)的或與質(zhì)譜聯(lián)用的液相或氣相色譜或離子遷移率(電泳)或通過單獨(dú)的質(zhì)譜法分析代謝物。這樣的方法已被用于鑒定和定量生物分子，諸如細(xì)胞代謝物。(參見，例如Li等，2000；Rowley等，2000；以及Kuster和Mann，1998)。質(zhì)譜法可基于例如四極離子阱或飛行時(shí)間質(zhì)譜法，具有單、雙或三重質(zhì)荷比掃描和/或過濾(MS、MS/MS或MS3)，并在合適的電離方法諸如電噴霧電離、大氣壓化學(xué)電離、大氣壓光電離、基質(zhì)輔助激光解吸電離(MALDI)或表面增強(qiáng)激光解吸電離(SELDI)之后進(jìn)行。(參見，例如，國(guó)際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO2004056456和WO2004088309)。在一些實(shí)施方案中，代謝物從生物樣品中的第一分離可通過使用氣相或液相色譜或離子遷移/電泳來實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，質(zhì)譜方法的電離可以通過電噴霧電離、大氣壓化學(xué)電離或大氣壓光電離來實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施例中，質(zhì)譜儀器包括四極，離子阱或飛行時(shí)間或傅里葉變換儀器。在一些實(shí)施方案中，通過非靶向的超高性能液體或氣相色譜/電噴霧或大氣壓化學(xué)電離串聯(lián)質(zhì)譜平臺(tái)(經(jīng)優(yōu)化用于生物系統(tǒng)的小分子補(bǔ)體的鑒定和相對(duì)定量)在質(zhì)量標(biāo)度上分析代謝物。(參見，例如，Evans等人，Anal.Chem。，2009,81,6656-6667)。在一些實(shí)施方案中，代謝物與生物樣品的第一分離可通過使用氣相或液相色譜或離子遷移/電泳來實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，質(zhì)譜方法的電離可通過電噴霧電離、大氣壓化學(xué)電離或大氣壓光電離來實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，質(zhì)譜儀器包括四極，離子阱或飛行時(shí)間或傅里葉變換儀器。在一些實(shí)施方案中，對(duì)含有目標(biāo)代謝物的血液樣品離心以將血漿與其他血液成份分離。在某些實(shí)施方案中，內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)是不必要的。在一些實(shí)施方案中，將規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)添加至血漿(其一部分)中，然后加入甲醇以沉淀血漿成分諸如蛋白質(zhì)。通過離心將沉淀與上清液分離，并收獲上清液。如果為了更精確的檢測(cè)而增加目標(biāo)代謝物的濃度，則蒸發(fā)上清液，并將殘余物溶解在適量的溶劑中。如果目標(biāo)代謝物的濃度不希望地高，則將上清液在合適的溶劑中稀釋。將合適量的含有代謝物的樣品加載到用流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的適當(dāng)混合物平衡的液相色譜柱上。在反相液相色譜的情況下，流動(dòng)相A通常是具有或不具有少量添加劑諸如甲酸的水，流動(dòng)相B通常為甲醇或乙腈。將適當(dāng)梯度的流動(dòng)相A和流動(dòng)相B泵送通過柱，以通過保留時(shí)間或從柱洗脫的時(shí)間來實(shí)現(xiàn)目標(biāo)代謝物的分離。當(dāng)代謝物從柱中洗脫時(shí)，它們被離子化并被帶入氣相，并且通過質(zhì)譜法檢測(cè)和定量離子。通過對(duì)特定前體離子和由前體離子產(chǎn)生的特定產(chǎn)物離子進(jìn)行雙重過濾來實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的特異性。絕對(duì)定量可以通過將來自目標(biāo)代謝物的離子計(jì)數(shù)針對(duì)給定代謝物的已知量?jī)?nèi)標(biāo)產(chǎn)生的離子計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化，以及通過將標(biāo)準(zhǔn)化離子計(jì)數(shù)與使用已知量的純代謝物和內(nèi)標(biāo)建立的校準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較來獲得。內(nèi)標(biāo)通常是純代謝物的穩(wěn)定同位素標(biāo)記形式或代謝物的結(jié)構(gòu)類似物的純形式?；蛘?，可通過針對(duì)選定的內(nèi)部參照值(例如，給定組中運(yùn)行的所有樣品的代謝物水平的中位值)標(biāo)準(zhǔn)化來計(jì)算以任意單位表示的給定代謝物的相對(duì)定量。在一些實(shí)施方案中，通過免疫測(cè)定來測(cè)量一種或多種代謝物。許多特異性免疫測(cè)定形式及其變體可用于代謝物的測(cè)量。(參見，例如，E.Maggio,Enzyme-Immunoassay,(1980)(CRCPress,Inc.,BocaRaton,Fla.)；還參見美國(guó)專利號(hào)4,727,022“MethodsforModulatingLigand-ReceptorInteractionsandtheirApplication”；美國(guó)專利號(hào)4,659,678“ImmunoassayofAntigens”；美國(guó)專利號(hào)4,376,110，“ImmunometricAssaysUsingMonoclonalAntibodies”；美國(guó)專利號(hào)4,275,149，“MacromolecularEnvironmentControlinSpecificReceptorAssays”；美國(guó)專利號(hào)4,233,402，“ReagentsandMethodEmployingChanneling”和美國(guó)專利號(hào)4,230,767，“HeterogenousSpecificBindingAssayEmployingaCoenzymeasLabel”)?？砂凑找阎夹g(shù)諸如被動(dòng)結(jié)合將抗體綴合于適合于診斷測(cè)定的固體載體(例如，珠子，諸如蛋白質(zhì)A或蛋白質(zhì)G瓊脂糖、微球體、平板、載玻片或由諸如膠乳或聚苯乙烯的材料形成的孔)。同樣，可按照已知技術(shù)將本文所述的抗體綴合于可檢測(cè)標(biāo)記或基團(tuán)，諸如放射性標(biāo)記(例如，35S、125I、131I)、酶標(biāo)記(例如，辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶)和熒光標(biāo)記(例如，熒光素、Alexa、綠色熒光蛋白)。ASD風(fēng)險(xiǎn)的確定在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法允許本領(lǐng)域技術(shù)人員至少部分地基于測(cè)量獲自受試者(其目前可能未表現(xiàn)出ASD和/或其他發(fā)育障礙的體征或癥狀，但盡管如此仍然可能處于患有或發(fā)展ASD和/或其他發(fā)育障礙的風(fēng)險(xiǎn)中)的樣品中的代謝物水平來鑒定、診斷或以其他方式評(píng)估所述受試者。在某些實(shí)施方案中，可在測(cè)試樣品中測(cè)量代謝物或其他分析物(例如，蛋白質(zhì)組或基因組信息)的水平，并將該水平與正常對(duì)照水平或與具有不是ASD的發(fā)育障礙、病癥或分類(例如，非ASD發(fā)育遲緩、DD)的受試者中的水平進(jìn)行比較。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語“正常對(duì)照水平”是指通常在未患ASD或不可能患有ASD或其他發(fā)育障礙的受試者中發(fā)現(xiàn)的一種或多種代謝物或其他分析物或指數(shù)的水平。在一些實(shí)施方案中，正常對(duì)照水平是范圍或指數(shù)。在一些實(shí)施方案中，從先前測(cè)試的受試者的數(shù)據(jù)庫確定正常對(duì)照水平。一種或多種代謝物或其他分析物的水平與正常對(duì)照水平相比的差異可以指示受試者具有ASD或處于發(fā)展ASD的風(fēng)險(xiǎn)中。相反，一種或多種代謝物的水平與一種或多種代謝物或其它分析物的正常對(duì)照水平相比缺少差異能夠指示所述受試者不具有ASD或處于發(fā)展ASD的低風(fēng)險(xiǎn)。在一些實(shí)施方案中，參照值是從已知其診斷的對(duì)照受試者或群體(即，已被診斷為患有或被鑒定為患有ASD，或者經(jīng)診斷不患有或被鑒定為不患有ASD)獲得的值。在一些實(shí)施方案中，參照值是指數(shù)值或基線值，諸如本文所述的“正常對(duì)照水平”。在一些實(shí)施方案中，參照樣品或指數(shù)值或基線值取自或來源于已暴露于ASD治療的一個(gè)或多個(gè)受試者，或者可取自或來源于處于發(fā)展ASD的低風(fēng)險(xiǎn)的一個(gè)或多個(gè)受試者，或者可取自或來源于因暴露于治療而已顯示ASD風(fēng)險(xiǎn)因子改善的受試者。在一些實(shí)施方案中，參照樣品或指數(shù)值或基線值取自或來源于尚未暴露于ASD治療的一個(gè)或多個(gè)受試者。在一些實(shí)施方案中，從已經(jīng)接受ASD的初始治療和/或ASD的后續(xù)治療以監(jiān)測(cè)治療進(jìn)展的受試者收集樣品。在一些實(shí)施方案中，參照值已從來自ASD的群體研究的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)算法或計(jì)算指數(shù)中導(dǎo)出。在一些實(shí)施方案中，參照值來自具有除ASD外的疾病或病癥(諸如另一種發(fā)育障礙，例如非ASD發(fā)育遲緩(DD))的受試者或群體。在一些實(shí)施方案中，通過本發(fā)明的方法測(cè)量的代謝物水平的差異包括代謝物水平與正常對(duì)照水平、參照值、指數(shù)值或基線值相比有升高或降低。在一些實(shí)施方案中，代謝物水平相對(duì)于來自正常對(duì)照群體、一般群體或來自具有另一種疾病的群體的參照值有升高或降低指示ASD的存在，ASD的進(jìn)展，ASD的加重或者ASD或ASD癥狀的改善。在一些實(shí)施方案中，代謝物水平相對(duì)于來自正常對(duì)照群體、一般群體或來自具有另一種疾病的群體的參照值有升高或降低指示發(fā)展ASD或與其相關(guān)的并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)增加或降低。增加或減少可以指示ASD的一種或多種治療方案的成功，或者可以指示ASD風(fēng)險(xiǎn)因子的改善或消退。增加或減少可以是例如參照值的至少5％，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少45％，或至少50％。在一些實(shí)施方案中，如本文所述的代謝物水平的差異是統(tǒng)計(jì)上顯著的差異。“統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的”是指大于預(yù)期僅僅隨機(jī)發(fā)生的差異的差異。可通過本領(lǐng)域已知的任何方法測(cè)定統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。例如，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性可以通過p值來確定。p值是實(shí)驗(yàn)期間組之間偶然發(fā)生的差異的概率度量。例如，p值為0.01意味著該結(jié)果偶然發(fā)生的概率為1/100。p值越低，組之間的測(cè)量的差異就越不可能是偶然的。如果p值等于或低于0.05，則認(rèn)為差異是統(tǒng)計(jì)上顯著的。在一些實(shí)施方案中，統(tǒng)計(jì)上顯著的p值等于或低于0.04、0.03、0.02、0.01、0.005或0.001。在一些實(shí)施方案中，統(tǒng)計(jì)上顯著的p值等于或低于0.30、0.25、0.20、0.15或0.10(例如，在鑒定單一特定代謝物在包括其它代謝物的分類器中使用時(shí)是否具有加成性的預(yù)測(cè)值的情況下)。在一些實(shí)施方案中，通過t檢驗(yàn)確定p值。在一些實(shí)施方案中，通過Fisher's檢驗(yàn)獲得p值。在一些實(shí)施方案中，統(tǒng)計(jì)顯著性通過分析組中幾種代謝物的組合并與數(shù)學(xué)算法組合以實(shí)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)上顯著的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)來實(shí)現(xiàn)。分類測(cè)試、測(cè)定或方法具有將假陽性率(1-特異性)相對(duì)于真陽性率(靈敏度)繪制的相關(guān)ROC曲線(接受者操作特征曲線)。ROC曲線下面積(AUC)是分類器能夠區(qū)分兩個(gè)診斷組的程度的量度。最大AUC是1.0(完美測(cè)試)，最小面積是0.5(例如，其中正常與疾病沒有區(qū)分的區(qū)域)。應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)AUC接近1時(shí)，測(cè)試的準(zhǔn)確度增加。在一些實(shí)施方案中，高程度的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度是其中AUC至少為0.60的測(cè)試或測(cè)定。在一些實(shí)施方案中，高程度的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度是其中AUC為至少0.65，至少0.70，至少0.75，至少0.80，至少0.85，至少0.90或至少0.95的測(cè)試或測(cè)定。通過評(píng)估尾部效應(yīng)預(yù)測(cè)ASD風(fēng)險(xiǎn)在一些實(shí)施方案中，在群體間或群體之間(例如ASD群體與DD群體之間)或與正常對(duì)照群體相比較來評(píng)估代謝物水平的平均差異。在一些實(shí)施方案中，評(píng)估來自給定群體(即，ASD)的樣品的代謝物在分布曲線的尾部的富集。也就是說，確定與第二群體(例如，DD)相比，來自指定群體(例如，ASD)的較大比例的樣品是否存在于分布曲線的尾部(即，“尾部效應(yīng)”)。在一些實(shí)施例中，鑒定和利用平均差和尾部效應(yīng)。在一些實(shí)施例中，尾部由預(yù)先確定閾值確定。例如，如果樣品對(duì)于某種代謝物的測(cè)量值高于群體中對(duì)應(yīng)于該代謝物第90位百分位數(shù)(右尾或上尾)的數(shù)值，或者低于對(duì)應(yīng)于第15位百分位數(shù)(左尾或下尾)的數(shù)值，則其被指定為位于尾部中。在一些實(shí)施方案中，給定代謝物的右(上)尾的閾值是對(duì)應(yīng)于第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98或第99百分位數(shù)的數(shù)值(例如，如果樣品對(duì)于給定代謝物的測(cè)量高于與該百分位數(shù)相關(guān)的值，則其被指定在右尾中)。在一些實(shí)施方案中，給定代謝物的左(下)尾的閾值是對(duì)應(yīng)于第25、第24、第23、第22、第21、第20、第19、第18、第17、第16、第15、第14、第13、第12、第11、第10、第9、第8、第7、第6、第5、第4、第3、第2或第1百分位數(shù)的數(shù)值(例如，如果樣品對(duì)于給定代謝物的測(cè)量低于與該百分位數(shù)相關(guān)的數(shù)值，則其被指定在左尾中)。顯示的百分位數(shù)值包括小數(shù)值。在一些實(shí)施方案中，從一個(gè)或多個(gè)群體的代謝物水平的曲線圖中產(chǎn)生分布曲線。在一些實(shí)施方案中，從單個(gè)參照群體(例如，一般群體)產(chǎn)生分布曲線。在一些實(shí)施方案中，從兩個(gè)群體，例如ASD群體和非ASD群體(諸如DD)產(chǎn)生分布曲線。在一些實(shí)施方案中，從三個(gè)或更多個(gè)群體(例如ASD群體、非ASD群體但具有另一種發(fā)育障礙/病癥/分類諸如DD，和健康例如無發(fā)育障礙的對(duì)照群體)產(chǎn)生分布曲線。來自每個(gè)群體的代謝物分布曲線可用于進(jìn)行不止一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(例如，診斷ASD，診斷DD，區(qū)分ASD與DD)。本文所述的利用尾部效應(yīng)的評(píng)估方法可應(yīng)用于兩個(gè)以上的群體。在一些實(shí)施方案中，多種代謝物及其分布被用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。在一些實(shí)施方案中，使用兩種或更多種代謝物的水平來預(yù)測(cè)ASD風(fēng)險(xiǎn)。在一些實(shí)施方案中，至少兩種代謝物選自表1中列出的代謝物。在一些實(shí)施方案中，至少三種代謝物選自表1中列出的代謝物。在一些實(shí)施方案中，4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種、11種、12種、13種、14種、15種、16種、17種、18種、19種、20種或21種選自表1中所列代謝物的代謝物被用于預(yù)測(cè)ASD風(fēng)險(xiǎn)。表1(表1A至1C)的進(jìn)一步討論參見下面的實(shí)施例部分。表1A.具有預(yù)示ASDvs.DD的尾部效應(yīng)的示例性21種代謝物小組代謝物3-(3-羥基苯基)丙酸3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)3-吲哚氧基硫酸4-乙基苯基硫酸5-羥基吲哚乙酸8-羥基辛酸γ-CEHC羥基異戊酰肉堿(C5)吲哚乙酸異戊酰甘氨酸乳酸N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺硫酸對(duì)甲酚泛酸(維生素B5)苯乙酰谷氨酰胺哌可酸黃嘌呤羥基-百菌清辛烯?；鈮A3-羥基馬尿酸1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)表1B.具有預(yù)示ASD的尾部富集的示例性代謝物表1C.具有預(yù)示DD的尾部富集的示例性代謝物在一些實(shí)施方案中，用于分析的至少兩種代謝物選自苯乙酰谷氨酰胺、黃嘌呤、辛烯酰肉堿、硫酸對(duì)甲酚、異戊酰甘氨酸、γ-CEHC、吲哚乙酸、哌可酸、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、乳酸、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-吲哚氧基硫酸、泛酸(維生素B5)、羥基-百菌清及其組合。在一些實(shí)施方案中，用于分析的至少三種代謝物選自苯乙酰谷氨酰胺、黃嘌呤、辛烯?；鈮A、硫酸對(duì)甲酚、異戊酰甘氨酸、γ-CEHC、吲哚乙酸、哌可酸、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、乳酸、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-吲哚氧基硫酸、泛酸(維生素B5)、羥基-百菌清及其組合。在一些實(shí)施方案中，關(guān)于特定組的代謝物缺乏尾部效應(yīng)的信息被用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。在一些實(shí)施方案中，確定尾部效應(yīng)的缺乏以提供無效結(jié)果(即，與負(fù)信息相反，是沒有信息)。在一些實(shí)施方案中，尾部效應(yīng)的缺乏被確定為指示一種分類優(yōu)于另一種分類(例如，相對(duì)于ASD，更多地指示DD)。在一些實(shí)施例中，分布曲線是不對(duì)稱的或非高斯的。在一些實(shí)施例中，分布曲線不遵循參數(shù)分布模式。在一些實(shí)施例中，將來自平均差異(例如，平均偏移)的信息與用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的尾部效應(yīng)信息組合。在一些實(shí)施例中，來自平均差異的信息被用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估而不使用尾部效應(yīng)信息。在一些實(shí)施方案中，將代謝物的分析與其他類型的信息例如遺傳信息、人口統(tǒng)計(jì)學(xué)信息和/或行為評(píng)估組合以確定受試者患ASD或其他疾病的風(fēng)險(xiǎn)。在一些實(shí)施方案中，至少部分地基于從受試者獲得的生物樣品(例如，血液、血漿、尿液、唾液、糞便)中某些代謝物的測(cè)量量進(jìn)行ASD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，其中某些代謝物在本文中被發(fā)現(xiàn)表現(xiàn)出“尾部效應(yīng)”。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在與尾部效應(yīng)相關(guān)的兩個(gè)群體之間不一定具有統(tǒng)計(jì)上顯著的平均偏移。因此，尾部效應(yīng)是不同于平均偏移的一個(gè)特定現(xiàn)象。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)代謝物被表征為下述時(shí)，該特定代謝物表現(xiàn)出指示ASD群體而不是非ASD群體(例如DD群體)的右尾效應(yīng)：●為非ASD群體(例如DD群體)中的該代謝物建立非ASD群體分布曲線，其中x軸表示第一代謝物的水平，y軸表示相應(yīng)群體；●為ASD群體中的該代謝物建立ASD群體分布曲線，其中x軸表示第一代謝物的水平，y軸表示相應(yīng)群體；以及●該非ASD群體分布曲線和該ASD群體分布曲線的特征在于(A)和(B)之一或兩者：○(A)(i)對(duì)于x>該代謝物的水平n的ASD群體分布曲線下面積相比于(ii)對(duì)于x>該代謝物的水平n的非ASD群體分布曲線下面積的比率大于150％(例如，>200％、>300％、>500％、>1000％等)，從而提供了用于區(qū)分具有>該代謝物水平n的樣品的ASD分類與非ASD分類的預(yù)測(cè)效用，和○(B)如果其中n'是對(duì)應(yīng)于用于產(chǎn)生分布曲線的組合非ASD和ASD群體的頂部十分位數(shù)(或從約5％至約20％的任何截止值)的最小閾值代謝物水平，那么對(duì)于代謝物水平至少為n'的未知樣品(例如選自具有相等數(shù)目的ASD和非ASD成員的群體的隨機(jī)樣品)，樣品為ASD而不是非ASD的幾率不小于1.6:1(例如，不小于2:1，不小于3:1，不小于4:1，不小于5:1，不小于6:1，不小于7:1，不小于8:1，不小于9:1或不小于10:1)(例如，其中p<0.3，p<0.2，p<0.1，p<0.05，p<0.03或p<0.01，例如，統(tǒng)計(jì)上顯著的分類)，從而提供了對(duì)該代謝物的水平>n'的樣品區(qū)分ASD分類與非ASD分類的預(yù)測(cè)效用。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)代謝物被表征為下述時(shí)，該特定代謝物表現(xiàn)出指示ASD而非非ASD群體(例如，DD群體)的左尾效應(yīng)：●為非ASD群體(例如，DD群體)中的該代謝物建立非ASD群體分布曲線，其中x軸表示第一代謝物的水平，y軸表示相應(yīng)群體；●為ASD群體中的該代謝物建立ASD群體分布曲線，其中x軸表示第一代謝物的水平，y軸表示相應(yīng)群體；以及●非ASD群體分布曲線和ASD群體分布曲線的特征在于(A)和(B)之一或兩者：○(A)(i)對(duì)于x<該代謝物的水平m的ASD群體分布曲線下面積相比于(ii)對(duì)于x<該代謝物的水平m的非ASD群體分布曲線下面積的比率大于150％(例如，>200％、>300％、>500％、>1000％等)，從而提供了用于區(qū)分具有<該代謝物水平m的樣品的ASD分類與非ASD分類的預(yù)測(cè)效用，和○(B)如果其中m'是對(duì)應(yīng)于用于產(chǎn)生分布曲線的組合非ASD和ASD群體的底部十分位數(shù)(或從約5％至約20％的任何截止值)的最大閾值代謝物水平，那么對(duì)于具有低于m'的代謝物水平的未知樣品(例如選自具有相等數(shù)目的ASD和非ASD成員的群體的隨機(jī)樣品)，樣品為ASD而不是非ASD的幾率不小于1.6:1(例如，不小于2:1，不小于3:1，不小于4:1，不小于5:1，不小于6:1，不小于7:1，不小于8:1，不小于9:1或不小于10:1)(例如，其中p<0.3，p<0.2，p<0.1，p<0.05，p<0.03或p<0.01，例如，統(tǒng)計(jì)上顯著的分類)，從而提供了對(duì)該代謝物的水平<m'的樣品進(jìn)行ASD分類與非ASD分類區(qū)分的預(yù)測(cè)效用。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)代謝物被表征為下述時(shí)，該特定代謝物表現(xiàn)出指示非ASD群體(例如DD群體)而不是ASD群體的右尾效應(yīng)：●為非ASD群體(例如DD群體)中的該代謝物建立非ASD群體分布曲線，其中x軸表示第一代謝物的水平，y軸表示相應(yīng)群體；●為ASD群體中的該代謝物建立ASD群體分布曲線，其中x軸表示第一代謝物的水平，y軸表示相應(yīng)群體；以及●該非ASD群體分布曲線和該ASD群體分布曲線的特征在于(A)和(B)之一或兩者：○(A)(i)對(duì)于x>該代謝物的水平n的非ASD群體分布曲線下面積相比于(ii)對(duì)于x>該代謝物的水平n的ASD群體分布曲線下面積的比率大于150％(例如，>200％、>300％、>500％、>1000％等)，從而提供了用于區(qū)分具有>該代謝物水平n的樣品的非ASD分類與ASD分類的預(yù)測(cè)效用，和○(B)如果其中n'是對(duì)應(yīng)于用于產(chǎn)生分布曲線的組合非ASD和ASD群體的頂部十分位數(shù)(或從約5％至約20％的任何截止值)的最小閾值代謝物水平，那么對(duì)于代謝物水平至少為n'的未知樣品(例如選自具有相等數(shù)目的ASD和非ASD成員的群體的隨機(jī)樣品)，樣品為非ASD而不是ASD的幾率不小于1.6:1(例如，不小于2:1，不小于3:1，不小于4:1，不小于5:1，不小于6:1，不小于7:1，不小于8:1，不小于9:1或不小于10:1)(例如，其中p<0.3，p<0.2，p<0.1，p<0.05，p<0.03或p<0.01，例如，統(tǒng)計(jì)上顯著的分類)，從而提供了對(duì)該代謝物的水平>n'的樣品區(qū)分非ASD分類與ASD分類的預(yù)測(cè)效用。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)代謝物被表征為下述時(shí)，該特定代謝物表現(xiàn)出指示非ASD群體(例如，DD群體)而非ASD的左尾效應(yīng)：●為非ASD群體(例如，DD群體)中的該代謝物建立非ASD群體分布曲線，其中x軸表示第一代謝物的水平，y軸表示相應(yīng)群體；●為ASD群體中的該代謝物建立ASD群體分布曲線，其中x軸表示第一代謝物的水平，y軸表示相應(yīng)群體；以及●非ASD群體分布曲線和ASD群體分布曲線的特征在于(A)和(B)之一或兩者：○(A)(i)對(duì)于x<該代謝物的水平m的非ASD群體分布曲線下面積相比于(ii)對(duì)于x<該代謝物的水平m的ASD群體分布曲線下面積的比率大于150％(例如，>200％、>300％、>500％、>1000％等)，從而提供了用于區(qū)分具有該代謝物<水平m的樣品的非ASD分類與ASD分類的預(yù)測(cè)效用，和○(B)如果其中m'是對(duì)應(yīng)于用于產(chǎn)生分布曲線的組合非ASD和ASD群體的底部十分位數(shù)(或從約5％至約20％的任何截止值)的最大閾值代謝物水平，那么對(duì)于具有低于m'的代謝物水平的未知樣品(例如選自具有相等數(shù)目的ASD和非ASD成員的群體的隨機(jī)樣品)，樣品為非ASD而不是ASD的幾率不小于1.6:1(例如，不小于2:1，不小于3:1，不小于4:1，不小于5:1，不小于6:1，不小于7:1，不小于8:1，不小于9:1或不小于10:1)(例如，其中p<0.3，p<0.2，p<0.1，p<0.05，p<0.03或p<0.01，例如，統(tǒng)計(jì)上顯著的分類)，從而提供了對(duì)所述代謝物的水平<m'的樣品進(jìn)行非ASD分類與ASD分類區(qū)分的預(yù)測(cè)效用。在某些實(shí)施方案中，使用展示尾部效應(yīng)的多種代謝物進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。已觀察到，為了評(píng)估ASD，有一些特定的代謝物組(例如，兩種或更多種代謝物)可以提供互補(bǔ)診斷/風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估信息。例如，可通過分析第一代謝物(例如，在第一代謝物的已鑒定尾部?jī)?nèi)的個(gè)體)的水平而鑒定的ASD陽性個(gè)體與可通過分析第二代謝物而鑒定的ASD陽性個(gè)體不同(或者可能存在低的、非零度的重疊)。第一代謝物的尾部預(yù)測(cè)某些ASD個(gè)體，而第二代謝物的尾部預(yù)測(cè)另一些ASD個(gè)體。不希望受特定理論的束縛，該發(fā)現(xiàn)可能反映了ASD本身的多面性質(zhì)。因此，在某些實(shí)施方案中，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法包括鑒定受試者是否落入涉及多種代謝物的多種已鑒定代謝物尾部中的任一種中，例如，當(dāng)不同代謝物尾部的預(yù)測(cè)物至少部分不相連時(shí)，例如，它們具有低的相互信息，因此，當(dāng)引入相互信息少的多個(gè)代謝物時(shí)，風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)得到改善。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于確定/診斷患有ASD或處于ASD風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的方法中的一種或多種結(jié)合成員，每種結(jié)合成員能夠特異性結(jié)合選自以下代謝物中的代謝物：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸酯、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯酰肉堿和3-羥基馬尿酸。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種或多種結(jié)合成員用于診斷/測(cè)定患有ASD或處于患有ASD的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的用途，所述結(jié)合成員能夠特異性結(jié)合選自以下代謝物中的代謝物：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯酰基肉堿和3-羥基馬尿酸。結(jié)合成員可選自核酸分子、蛋白質(zhì)、肽、抗體或其片段，其全部能夠結(jié)合特定代謝物。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合成員可被標(biāo)記以幫助檢測(cè)和測(cè)定結(jié)合的代謝物的水平。本發(fā)明還提供被固定于固體載體的多個(gè)結(jié)合成員，其中所述多個(gè)結(jié)合成員選自5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊酰肉堿(C5)、吲哚乙酸、異戊酰甘氨酸、乳酸、N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺、硫酸對(duì)甲酚、泛酸(維生素B5)、苯乙酰谷氨酰胺、哌可酸、黃嘌呤、羥基-百菌清、辛烯酰肉堿和3-羥基馬尿酸，其中所述多個(gè)結(jié)合成員占所述固體載體上結(jié)合成員群體的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于實(shí)施本文所述方法的試劑盒，特別是用于確定/診斷受試者患有ASD或處于患有ASD的風(fēng)險(xiǎn)中的試劑盒。試劑盒允許使用者確定選自以下代謝物的一種或多種代謝物在處于測(cè)試的樣品中的存在情況、水平(升高或下降)：5-羥基吲哚乙酸(5-HIAA)、1,5-脫水葡糖醇(1,5-AG)、3-(3-羥基苯基)丙酸、3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(CMPF)、3-吲哚氧基硫酸、4-乙基苯基硫酸、8-羥基辛酸、γ-CEHC、羥基異戊?；鈮A(5)、吲哚乙酸，異戊酰甘氨酸，乳酸，N1-甲基-2-吡啶酮-5-甲酰胺，硫酸對(duì)甲酚，泛酸(維生素B5)，苯乙酰谷氨酰胺，哌可酸，黃嘌呤，羥基-百菌清，辛烯酰肉堿和3-羥基馬尿酸；所述試劑盒包含(a)具有多個(gè)結(jié)合成員的固體載體，其中每個(gè)所述結(jié)合成員獨(dú)立地特異于固定在其上的所述一種或多種代謝物中的一種；(b)包含標(biāo)記的顯影劑；和任選地(c)一種或多種選自洗滌溶液、稀釋劑和緩沖劑中的組分。實(shí)施例受試者從18個(gè)月至60個(gè)月的受試者收集血液樣品，所述受試者被轉(zhuǎn)到19個(gè)發(fā)育評(píng)價(jià)中心用于評(píng)價(jià)除了孤立活動(dòng)問題外的可能的發(fā)育障礙。對(duì)所有受試者獲得知情同意。從研究中排除了事先在專門進(jìn)行兒科發(fā)育評(píng)估的診所診斷為ASD或者不能或不愿意完成研究程序的受試者。受試者是登記在SynapDx自閉癥譜系病癥基因表達(dá)分析(STORY)研究中的那些受試者。按照當(dāng)前關(guān)于良好臨床實(shí)踐(GCP)的ICH指南和適用的監(jiān)管要求來進(jìn)行STORY研究。GCP是用于設(shè)計(jì)、進(jìn)行、記錄和報(bào)告涉及人受試者參與的研究的國(guó)際倫理和科學(xué)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。遵守本標(biāo)準(zhǔn)提供了公共保證：根據(jù)源于赫爾辛基宣言的原則，保護(hù)研究對(duì)象的權(quán)利、安全和健康，并且臨床研究數(shù)據(jù)是可信的。圖1至12中所示的結(jié)果基于來自STORY研究中的男性的180份血液樣品。樣本集包括122個(gè)ASD樣品和58個(gè)DD(非ASD)樣品。ASD診斷遵循DSM-V診斷標(biāo)準(zhǔn)。其他結(jié)果基于來自STORY研究中男性受試者的299個(gè)血液樣品的更廣泛集合。較寬的樣品組包括198個(gè)ASD樣品和101個(gè)DD樣品。對(duì)于所有測(cè)試，在EDTA管中收集約3mL血液樣品，并通過離心管來制備血漿。然后將血漿冷凍并運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析。在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣品的甲醇提取，并通過優(yōu)化的超高效液相或氣相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜(UHPLC/MS/MS或GC/MS/MS)法分析提取物(參見，例如，Anal.Chem.,2009,81,6656-6667)。數(shù)據(jù)分析對(duì)男性和女性受試者定量其血液樣品中的代謝物。分析樣品的代謝物水平，并定量為針對(duì)在給定日對(duì)所有樣品測(cè)量的中值濃度標(biāo)準(zhǔn)化的任意單位的濃度。例如，大于1的單位是指大于該日樣品中值的代謝物的量，小于1的單位是指小于該中值的量。然后進(jìn)行交叉驗(yàn)證，其中樣品被隨機(jī)分成非重疊的訓(xùn)練/測(cè)試集，針對(duì)其評(píng)估機(jī)器學(xué)習(xí)分類器的無偏性能。已經(jīng)鑒定了21種代謝物，所述代謝物單獨(dú)地和共同地高度信息化預(yù)測(cè)ASD，特別是在男性受試者中。實(shí)施例1：辨別代謝物水平信息該實(shí)施例顯示，可從樣品分布中的尾部效應(yīng)的鑒定和分析中辨別用于ASD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的有價(jià)值的信息，否則所述信息將被常規(guī)分析(例如，基于平均偏移的分析)所遺漏。一旦確定了代謝物水平，就有多種方式來實(shí)現(xiàn)用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的信息，包括平均偏移和尾部效應(yīng)。令人驚奇的是，發(fā)現(xiàn)平均偏移提供一些但不是最優(yōu)的預(yù)測(cè)信息。在圖1中顯示了示例性平均偏移。在該圖中，ASD分布偏移至非ASD分布(DD)的右側(cè)。除了常規(guī)均值偏移分析(meanshiftanalysis)以外，本發(fā)明人還從樣品中辨別出附加信息。對(duì)ASD和非ASD(此處為DD)樣品繪制代謝物分布曲線，并且發(fā)現(xiàn)對(duì)于測(cè)量的代謝物的亞組，來自ASD或DD群體的樣品富集在右(上)或左(低)尾部(即，尾部效應(yīng))。代表性尾部效應(yīng)示于圖2中。值得注意的是，兩個(gè)分布共享幾乎相同的平均值(即，平均偏移或均值偏移最小或沒有)。因此，不能從平均偏移的常規(guī)分析中辨別出代謝物的預(yù)測(cè)值。代謝物可能表現(xiàn)出右(上)尾部效應(yīng)或左(下)尾部效應(yīng)，或兩者。代表性代謝物5-HIAA的ASD和非ASD(這里是DD)分布曲線顯示在圖3中。觀察到清楚的右尾效應(yīng)，例如ASD分布在右尾部具有更大的AUC。因此，證明了具有高水平的該代謝物的樣品高度富集在ASD群體成員中。使用該代謝物，平均偏移(由t檢驗(yàn)值指示)和右尾(由“極限值”Fisher檢驗(yàn)值指示)都是統(tǒng)計(jì)上顯著的。另一種說明性代謝物γ-CEHC的ASD和非ASD(此處為DD)分布曲線示于圖4中。觀察到清楚的左尾效應(yīng)，例如ASD分布在左尾中具有更大的AUC。因此，證明了具有低水平的該代謝物的樣品高度富集在ASD群體成員中。對(duì)于該代謝物來說，平均偏移(由t檢驗(yàn)值指示)不是統(tǒng)計(jì)上顯著的，而左尾是統(tǒng)計(jì)上顯著的。這些數(shù)據(jù)說明了尾部效應(yīng)的鑒定和分析提供了通過常規(guī)平均偏移分析不能獲得的用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的附加信息。實(shí)施例2：顯示尾部效應(yīng)的選定代謝物強(qiáng)烈預(yù)測(cè)ASD本實(shí)施例說明了尾部效應(yīng)用于預(yù)測(cè)ASD的評(píng)估。本發(fā)明人在從男性受試者獲得的樣品中鑒定了許多代謝物的統(tǒng)計(jì)上顯著的尾部效應(yīng)。尾部效應(yīng)單獨(dú)和總體地提供關(guān)于受試者屬于哪個(gè)群體(即，ASD群體或DD群體)的信息。表1顯示了表現(xiàn)出具有高預(yù)測(cè)能力的ASD對(duì)比DD尾部效應(yīng)的21種代謝物的示例性小組。表1B顯示具有預(yù)測(cè)ASD的尾部效應(yīng)的21種代謝物小組的代謝物。指示了每個(gè)尾部效應(yīng)的統(tǒng)計(jì)顯著性(p值)以及其在分布曲線上的位置(即，左尾效應(yīng)或右尾效應(yīng))。大于1的比值比指示對(duì)于ASD的預(yù)測(cè)能力。例如，5HIAA具有右尾，比值比為4.91，表明在STORY研究數(shù)據(jù)集(其中ASD與DD樣品的比率為2:1)中，對(duì)于每個(gè)DD樣品有約10個(gè)ASD樣品在右尾中。通過bootstrap法估計(jì)置信區(qū)間。通過替換進(jìn)行重采樣，從STORY數(shù)據(jù)生成了1000個(gè)單獨(dú)的bootstrap。對(duì)于每個(gè)bootstrap，確定尾部的位置和相應(yīng)的比值比。從觀察到的比值比的分布計(jì)算90％置信區(qū)間?；谶@些標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)21種代謝物小組中的19種代謝物對(duì)于ASD有預(yù)測(cè)性。表1C顯示具有預(yù)測(cè)DD的尾部效應(yīng)的代謝物。指示了每個(gè)尾部效應(yīng)的統(tǒng)計(jì)顯著性(p值)以及其在分布曲線上的位置(即，左尾效應(yīng)或右尾效應(yīng))。小于1的比值比指示DD的預(yù)測(cè)能力。基于這些標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)21種代謝物小組中的8種代謝物預(yù)測(cè)DD。對(duì)于ASD，考慮到STORY研究中DD與ASD樣品的比率為1:2，類似地測(cè)定比值比和90％的置信區(qū)間。值得注意的是，某些代謝物表現(xiàn)出對(duì)ASD或DD有預(yù)測(cè)能力的單尾效應(yīng)(或左或右)，而其它代謝物表現(xiàn)出左和右尾效應(yīng)二者，它們一起提供了針對(duì)ASD和DD的預(yù)測(cè)能力。例如，苯乙酰谷氨酰胺和對(duì)甲酚硫酸顯示左尾和右尾兩種效應(yīng)。表1中所列的21種代謝物的尾部效應(yīng)在圖13A至13U的圖中單個(gè)地顯示。對(duì)于每個(gè)圖，顯示了一種代謝物在ASD和DD兩個(gè)群體中的分布。每個(gè)圖頂部的圖例顯示該代謝物的左尾和右尾的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(通過Fisher's檢驗(yàn)產(chǎn)生的p值)。一些代謝物，例如苯乙酰谷氨酰胺，顯示平均變化和尾部效應(yīng)。如圖5所示，苯乙酰谷氨酰胺顯示統(tǒng)計(jì)上顯著的平均偏移(t檢驗(yàn)；p＝0.001)，并且在兩個(gè)群體之間具有統(tǒng)計(jì)上顯著的左和右尾效應(yīng)(“極限值”表示尾部效應(yīng)，F(xiàn)isher檢驗(yàn)；p＝0.0001)。分布在ASD與DD群體之間表現(xiàn)為偏移的高斯曲線。表2顯示了用于基于ASD和非ASD群體中每種代謝物的潛在群體分布而確定21種代謝物小組的尾部效應(yīng)的閾值。示例性地，上閾值對(duì)應(yīng)于第90百分位數(shù)分布，而下閾值對(duì)應(yīng)于第15百分位數(shù)分布?？赏ㄟ^使用表2中的值與群體中代謝物的平均濃度來計(jì)算閾值的絕對(duì)測(cè)量值(例如，ng/ml，nM等)。表2.代謝物分布曲線的左尾(等于或低于第15位百分位數(shù))和右尾(等于或高于第90位百分位數(shù))的閾值水平實(shí)施例3：用多種代謝物預(yù)測(cè)ASD可將由多種代謝物(例如，表1中列出的那些)提供的信息單獨(dú)地或作為一組用于輔助疾病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)。特別信息性的代謝物組包括彼此不相關(guān)且具有低共線性(即低相互性)的成員。例如，圖6顯示了與γ-CEHC水平相比較的5HIAA水平，表明兩種代謝物的信息性水平之間缺乏相關(guān)性。例如，在5HIAA的尾部中鑒定的ASD個(gè)體(圖3)通常與在γ-CEHC的尾部中鑒定的ASD個(gè)體不相同。因此，代謝物5HIAA和γ-CEHC被認(rèn)為提供互補(bǔ)信息。富集了具有低共同性的代謝物的尾部提供了互補(bǔ)性分類信息。圖7是一個(gè)圖表，指示對(duì)于180個(gè)樣品中的每一個(gè)，樣品是否在12種代謝物小組的每種代謝物的尾部?jī)?nèi)。在該示例性小組中，兩種代謝物(黃嘌呤和硫酸對(duì)甲酚)的尾部對(duì)于非ASD(例如DD)是預(yù)測(cè)性的，而其他10種代謝物的尾部預(yù)測(cè)ASD。當(dāng)評(píng)估多種代謝物時(shí)，尾部效應(yīng)加總計(jì)數(shù)的組合數(shù)量增加，并且潛在的尾部效應(yīng)加總計(jì)數(shù)增加。當(dāng)測(cè)量未知樣品時(shí)，可以繪制來自ASD和來自非ASD群體的尾部效應(yīng)加總計(jì)數(shù)的分布圖，將所得分布用于確定ASD與非ASD之間的合適分離。如圖8A所示，可通過使用投票(例如，分箱)方案進(jìn)一步分析ASD和非ASD(此處為DD)樣品，以進(jìn)一步利用由針對(duì)其觀察到尾部效應(yīng)的代謝物提供的互補(bǔ)信息。顯示了總共12種代謝物的數(shù)據(jù)。在一個(gè)具體方案中，對(duì)于給定樣品，對(duì)樣品落入ASD預(yù)測(cè)性尾部?jī)?nèi)的代謝物數(shù)目進(jìn)行求和，對(duì)樣品落入非ASD(此處為DD)的預(yù)測(cè)性尾部?jī)?nèi)的代謝物數(shù)目也求和。這兩個(gè)值被作為x和y坐標(biāo)繪圖(圖8A)。值得注意的是，隨著ASD富集代謝物的數(shù)量增加(在y軸上較高)和隨著非ASD富集代謝物的數(shù)量減少(在x軸上較低)，在ASD點(diǎn)中非ASD點(diǎn)的混合似乎更少，例如，這暗示ASD的假陽性診斷的可能性較低。另一方面，隨著ASD富集代謝物的數(shù)量減少(在y軸上較低)和隨著非ASD富集的代謝物的數(shù)量增加(在x軸上較高)，在非ASD點(diǎn)中ASD點(diǎn)的混合較少，例如這表明對(duì)DD的假陽性診斷的可能性較低。將樣品分成四個(gè)不同的箱，如圖8B所示。頂部和右下方的箱子特別顯示清楚的分離，有利于ASD或DD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。在圖8所示的四個(gè)箱中，對(duì)ASD最強(qiáng)烈預(yù)測(cè)的箱包括具有2個(gè)或更多個(gè)ASD富集的特征以及0或1個(gè)非ASD富集的特征的樣品。具有1個(gè)ASD富集的特征和0或1個(gè)非ASD富集的特征的箱也預(yù)測(cè)ASD，盡管不如上述箱強(qiáng)烈。具有1個(gè)或多個(gè)非ASD富集的特征和0個(gè)ASD富集的特征的箱強(qiáng)烈預(yù)測(cè)非ASD。在一些情況下，沒有ASD富集的特征也沒有非ASD富集的特征的樣品箱也可以提供預(yù)測(cè)信息。在一個(gè)示例性投票方案中，對(duì)于給定的樣品進(jìn)行投票，例如，ASD富集的代謝物獲得點(diǎn)評(píng)分，非ASD富集的代謝物減去點(diǎn)評(píng)分。具有陽性結(jié)果(例如，等于或大于1)的樣品可以被認(rèn)為是ASD(或具有顯著的ASD風(fēng)險(xiǎn))，具有陰性結(jié)果(等于或小于-1)的樣品可以被認(rèn)為是非ASD(或具有顯著的非ASD可能性)。具有零結(jié)果的樣品可以被認(rèn)為可能是非ASD或ASD，這取決于樣品中ASD相比于非ASD的分布，或者可作為不確定或“無分類結(jié)果”樣品返回。類似地，圖8C顯示了表1中描述的21種代謝物小組的投票結(jié)果。在另一個(gè)示例性評(píng)分系統(tǒng)(圖21所示)中，針對(duì)每種代謝物，將ASD和DD特征的比值比(theoddsratio)的log2值(log2OR)求和以計(jì)算ASD或DD的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。尾部效應(yīng)信息可用于區(qū)分具有ASD或非ASD狀況的受試者。同樣，尾部效應(yīng)信息可用于預(yù)測(cè)受試者患另一疾病或病癥(例如，DD)的風(fēng)險(xiǎn)。例如，如圖8A和8C所示的非ASD群體(例如，DD)的尾部效應(yīng)分布可用于建立該群體中給定數(shù)量的代謝物的平均尾部效應(yīng)總和的參照值。該平均值可用作參照而與來自未知受試者的樣品的平均尾部效應(yīng)的總和進(jìn)行比較，并且可用于評(píng)估受試者患ASD的風(fēng)險(xiǎn)，而不必獲得ASD和非ASD人群中代謝物的群體分布曲線。還可將尾部效應(yīng)信息，例如，如在上面的示例性投票方案或類似方案中所描述的，與常規(guī)平均偏移信息和/或其他分類信息組合用于改進(jìn)的分類結(jié)果。本文證明，ASD風(fēng)險(xiǎn)的可預(yù)測(cè)性可通過分析某些代謝物的組合來提高。例如，圖9-11和圖13-14A-D說明了如何使用投票方案可增加分類器的AUC并且改善預(yù)測(cè)能力。使用12種代謝物小組的亞組時(shí)，隨著亞組中代謝物的數(shù)目增加(從1到12)，ASD預(yù)測(cè)能力增加(y軸)(圖9)。使用不同的分類器(即，邏輯回歸、樸素貝葉斯或支持向量機(jī)(supportvectormachine，SVM))和不同特征的選擇也影響AUC(圖9)。圖10A顯示使用12種代謝物小組對(duì)相同群體使用不同特征和分類器的ASD風(fēng)險(xiǎn)三分法預(yù)測(cè)，而圖10B顯示使用21種代謝物小組的結(jié)果。圖11A和11B顯示使用12種代謝物小組(圖11A)和21種代謝物小組(圖11B)的投票方案中ASD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的改善。這些分析表明，通過選擇目標(biāo)代謝物并使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)工具，可以實(shí)現(xiàn)ASD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的高度可信度。例如，如圖12所示，使用12種代謝物，按照上述方法獲得至少0.74的AUC。實(shí)施例4：從代謝組學(xué)數(shù)據(jù)選擇高影響代謝物篩選來自ASD和DD受試者的樣品用于檢測(cè)約600種已知代謝物(示于表3中)。從初始600種代謝物的組，鑒定出84種候選代謝物表現(xiàn)出尾部效應(yīng)。闡明樣品中檢測(cè)到的84種代謝物的亞組，在表4中列出了其名稱?；诟叩膫€(gè)別代謝物AUC，從84種候選代謝物的組中選擇代謝物組(例如12和21種代謝物小組)?；谥T如與藥物或年齡相關(guān)性的因素，將某些候選代謝物從小組中排除。表3：測(cè)定的600種代謝物的初始組中四百六十五(465)種闡明的代謝物表4：鑒定的顯示尾部效應(yīng)的候選代謝物測(cè)試兩組代謝物(由圖7的代謝物組成的12種代謝物小組和由表1的代謝物組成的21種代謝物小組)進(jìn)行ASD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)。結(jié)果顯示所述12種和21種代謝物小組強(qiáng)烈有助于ASD的預(yù)測(cè)。包括和排除該12種或21種代謝物小組的代謝物對(duì)ASD預(yù)測(cè)的影響的概述示于圖14A-D中。白名單表示使用僅來自12種或21種代謝物小組的數(shù)據(jù)的分類器的AUC值，而黑名單表示不包括12種或21種代謝物組但是使用來自84種候選代謝物的組或完全組的600種代謝物(所有候選物＝84種候選代謝物；所有特征＝600種代謝物)的分類器的AUC值。進(jìn)行平均偏移(上圖)和尾部分析(下圖)。這些數(shù)據(jù)顯示，ASD的預(yù)測(cè)性信息歸因于所述12種或21種代謝物小組中的代謝物，無論是通過平均偏移還是通過尾分析評(píng)估的。因此，觀察到顯示強(qiáng)尾部效應(yīng)的代謝物(12種和21種代謝物小組中的代謝物)預(yù)測(cè)ASD優(yōu)先于DD的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于來自600種代謝物小組的其它代謝物(其不顯示強(qiáng)尾部效應(yīng))。圖14C-D擴(kuò)展了來自圖14A-B的結(jié)果，并且除了邏輯回歸之外還包括使用樸素貝葉斯分析的附加分析。另外，圖14B還顯示了分解成不同樣品組群(即，"Christmas"和"Easter")的結(jié)果。最左邊的小組顯示AUC結(jié)果，其中分類器在192個(gè)樣品上訓(xùn)練并且僅在Christmas組群中交叉驗(yàn)證；中間左小組顯示AUC結(jié)果，其中分類器在299個(gè)樣品上訓(xùn)練并在Christmas和Easter組群上交叉驗(yàn)證；中間右小組顯示了AUC結(jié)果，其中分類器僅在來自Easter組群的樣品上進(jìn)行訓(xùn)練并且僅在Easter組群中交叉驗(yàn)證；最右邊的小組顯示AUC結(jié)果，其中分類器在來自Christmas和Easter組群的樣品上訓(xùn)練并且在Easter組群上交叉驗(yàn)證。使用12種或21種代謝物小組中的代謝物(例如，表現(xiàn)出尾部效應(yīng)的代謝物)獲得最高AUC。根據(jù)添加到統(tǒng)計(jì)分析中的特征的數(shù)目，通過包括12種或21種代謝物小組(白名單)以及過排除它們(黑名單)而顯示AUC預(yù)測(cè)，圖17A-B、18A-B和19A-D進(jìn)一步擴(kuò)展了圖14A-D的結(jié)果。頂部小組顯示了平均偏移分析的結(jié)果，而底部的那些小組顯示尾部效應(yīng)分析。在每個(gè)單獨(dú)的小組中，條塊代表不同的代謝物小板，如下面的符號(hào)和圖例中所示。描述了當(dāng)評(píng)估總共21種代謝物的亞組時(shí)用于ASD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的累積AUC的示例性曲線圖示于圖15中。在該圖中，x軸顯示來自選自21種代謝物的組的亞組中的代謝物的數(shù)量。y軸顯示ASD的預(yù)測(cè)能力。對(duì)于x軸上的每個(gè)數(shù)字，分析許多隨機(jī)代謝物組合并繪制它們的AUC值(點(diǎn))。該曲線顯示了由所使用的代謝物(選自21種代謝物的組)的數(shù)量增加引起的AUC的增加。另一方面，該圖證明甚至具有少量代謝物(例如，3或5種)的亞組也顯示高AUC。因此，某些代謝物似乎具有特別重要的預(yù)測(cè)性尾部。描述來自表1的21種代謝物中包含產(chǎn)生高AUC值的3、4、5、6和7種代謝物的代表性亞組的示例性表格示于表5中。對(duì)于每個(gè)亞組大小(3、4、5、6或7種)，分析代謝物組的50個(gè)隨機(jī)選擇。例如，對(duì)于來自21種代謝物小組的3種代謝物亞組，評(píng)估了3種代謝物亞組的50個(gè)隨機(jī)組合(總共1330個(gè)可能的排列中的組合)。顯示了來自具有最高AUC的50個(gè)隨機(jī)組的組合。因此，含有少于21種代謝物的某些代謝物組合產(chǎn)生高AUC值。代謝物諸如γ-CEHC、硫酸對(duì)甲酚、黃嘌呤、苯乙酰谷氨酰胺、異戊酰甘氨酸、辛烯酰肉堿和羥基-百菌清出現(xiàn)在產(chǎn)生高AUC值的多個(gè)亞組中，表明這些代謝物可能與患者的ASD狀態(tài)密切相關(guān)。因此，這些代謝物(單獨(dú)地或彼此組合地)或其它代謝物一起似乎特別可用于預(yù)測(cè)患者的ASD風(fēng)險(xiǎn)。表5：代謝物的示例性亞組和ASD的預(yù)測(cè)以成對(duì)組合方式評(píng)估來自表1的21種代謝物的雙代謝物亞組對(duì)于ASD的可預(yù)測(cè)性。具有robustAUC的代表性成對(duì)組合示于表6中。類似地，以三元組合方式評(píng)估來自表1的21種代謝物的三種代謝物亞組的對(duì)于ASD的可預(yù)測(cè)性。具有robustAUC的代表性三元組合示于表7中。表6.提供robustAUC的示例性代謝物對(duì)表7.提供robustAUC的示例性代謝物三元組實(shí)施例5：12種代謝物小組分類器的驗(yàn)證基于圖7所示的12種高信息性代謝物，將來自所測(cè)試的180個(gè)樣品(其中約三分之二是ASD)的數(shù)據(jù)用于產(chǎn)生分類器。在130個(gè)樣品的第二群組中測(cè)試該分類器區(qū)分ASD與非ASD區(qū)(此處，DD)的能力。該方法提供了真實(shí)預(yù)測(cè)性能的無偏估計(jì)，對(duì)應(yīng)于0.74的AUC。該過程的示意圖如圖12所示。實(shí)施例6：將遺傳信息加入代謝物可以改善ASD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)將遺傳信息添加至代謝物信息中改善了某些組的ASD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)。例如，將拷貝數(shù)變異(CNV)數(shù)據(jù)與代謝物信息組合顯著降低了ASD風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的置信區(qū)間，如圖16A和16B所示。如圖16A所示，添加遺傳信息進(jìn)一步增強(qiáng)了ASD與非ASD組之間的分離。除了CNV以外，包括但不限于脆性X(FXS)狀態(tài)的其他遺傳信息也可進(jìn)一步有助于診斷測(cè)試，其可以以提高的準(zhǔn)確度和減少I型和/或II型錯(cuò)誤來預(yù)測(cè)ASD風(fēng)險(xiǎn)。如圖16B所示，包括這樣的附加信息(例如，“PathoCV”)增加了ASD與DD組之間的分離，因此有助于區(qū)分這兩種病癥。實(shí)施例7：從代謝物分析中出現(xiàn)的顯著的生物學(xué)途徑代謝物信息的進(jìn)一步分析揭示了表1中呈現(xiàn)的代謝物簇，其在不同的生物學(xué)途徑中起著顯著的作用。例如，21種代謝物中的7種與腸道微生物活性相關(guān)(33％)，示于表8中。所有7種都是氨基酸代謝物。7種中的6種是芳香族氨基酸的代謝物，并且具有苯環(huán)。表8：涉及腸微生物活性的七種代謝物如表1所示的與ASD強(qiáng)烈相關(guān)的代謝物的分析揭示了與某些生物學(xué)途徑的聯(lián)系。例如，提供ASD的預(yù)測(cè)信息的特定代謝物提示II期生物轉(zhuǎn)化的削弱，削弱的代謝苯環(huán)的能力，腎臟的再吸收失調(diào)，肉堿代謝的失調(diào)和大的中性氨基酸向腦中的轉(zhuǎn)運(yùn)的不平衡。生物途徑信息可被進(jìn)一步用于改善ASD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和/或探索ASD的病因和病理生理學(xué)。此類信息也可用于開發(fā)治療ASD的藥物治療劑。實(shí)施例8：血液中代謝物濃度的闡明對(duì)實(shí)施例2中描述的21種代謝物中的19種，通過質(zhì)譜法測(cè)定血漿樣品中的絕對(duì)代謝物濃度。使用從含有已知量的代謝物的標(biāo)準(zhǔn)樣品產(chǎn)生的校準(zhǔn)曲線計(jì)算血漿中的絕對(duì)代謝物濃度(ng/ml)。表9A顯示了預(yù)測(cè)ASD的17種代謝物。提供了尾部效應(yīng)的方向(左或右)，用于確定尾部效應(yīng)的存在的閾值(即，左尾效應(yīng)為第15百分位數(shù)，右尾效應(yīng)為第90百分位數(shù))和比值比(log2)。正的比值比表明代謝物的尾部效應(yīng)預(yù)測(cè)ASD。表9B顯示預(yù)測(cè)DD的7種代謝物。提供了尾部效應(yīng)的方向(左或右)，用于確定尾部效應(yīng)的存在的閾值(即，左尾效應(yīng)為第15百分位數(shù)，右尾效應(yīng)為第90百分位數(shù))和比值比(log2)。負(fù)的比值比表明代謝物的尾部效應(yīng)預(yù)測(cè)DD。表9A.具有預(yù)測(cè)ASD的尾部富集的示例性代謝物表9B.具有預(yù)示DD的尾部富集的示例性代謝物當(dāng)前第1頁1 2 3