本發(fā)明涉及一種用于細胞保存的組合物，該組合物含有作為活性成分的植物源重組人血清白蛋白和植物肽，并且使僅能短時間保存的干細胞或原代細胞在室溫或低溫下依然維持無異源性成分(xeno-free)和無動物成分(animal-free)的組合物，并涉及其用途。
背景技術：
：目前，細胞治療技術已經(jīng)發(fā)展到，利用動物組織中分離的細胞或干細胞治療各種疾病。干細胞是可以在未分化狀態(tài)下無限增殖并在提供特定環(huán)境和條件時分化成具有特定功能和形狀的細胞。人胚胎干細胞可以在合適的體外培養(yǎng)條件下進行連續(xù)自我更新，并具有分化成構成身體的所有細胞類型的多能性。因此，對人胚胎干細胞的研究結果的應用范圍正在擴展到各方面，例如：認識人體發(fā)育、分化和生長的基本知識，研制關于人體各種損傷或疾病基礎治療的細胞療法產(chǎn)品，篩選各種新型候選藥物的療效，確定病因，研制治療策略等。通常，采用含有動物血清(胎牛血清)的培養(yǎng)基培養(yǎng)人類干細胞，但是，在這種情況下，盡管細胞培養(yǎng)在被動物血清清洗過的胎牛血清中，但是依然有相當數(shù)量的胎牛血清保留在細胞中，成為強異源抗原，而且胎牛血清可能攜帶有動物源性疾病而造成感染，如狂犬病。因此，美國禁止在無法確認胎牛血清是否殘留的情況下，進行人類細胞移植。pittenger等人(science284：143-147,1997)和vanetal。(jclininvest58：699-704,1976)在公開文獻中提出，從人骨髓分離間充質(zhì)干細胞的方法和從脂肪組織分離間充質(zhì)干細胞的方法，文獻中表明，α-mem或dmem培養(yǎng)基和10-20％的胎牛血清用于細胞培養(yǎng)。然而，這些培養(yǎng)基由于使用動物血清(胎牛血清)而在人類細胞移植中引發(fā)了許多安全問題。為了克服這些問題，目前已經(jīng)嘗試在常規(guī)細胞培養(yǎng)基中使用人血清代替胎牛血清(kuznetsovsa，等人，transplantation.2000dec27；70(12)：1780-7)，但是由于干細胞的特性喪失，例如干細胞的增殖能力和分化能力的降低或促進向骨細胞的分化，因此，難以直接使用一般的人血清細胞培養(yǎng)溶液。最近，幾個無異物的培養(yǎng)基已經(jīng)被全球跨國公司商業(yè)化，并且吸引了許多研究者和投資者的注意。然而，無異種培養(yǎng)基仍然有許多亟需解決的問題，例如比使用胎牛血清的現(xiàn)有培養(yǎng)基更低的細胞生長速率，培養(yǎng)時多次傳代的數(shù)量限制，以及基礎干細胞特性(如：分化效能)的惡化等。另外，近年來，醫(yī)療官員主導的治療措施也在增多，包括原代細胞或干細胞從組織中提取并立即移植到人體中，以及細胞治療藥物的積極研制，即便如此，細胞移植前的儲存溶液也是亟待解決的問題之一。在以往的多數(shù)情況下，收集的細胞浸泡在基礎培養(yǎng)基、鹽水溶液或緩沖溶液中進行低溫儲存或運輸，但是存在細胞大量死亡或喪失特性的嚴重問題。因此，為了優(yōu)化干細胞的組織再生能力，需要開發(fā)用于在干細胞移植時增加細胞活力，優(yōu)化移植效果和激活干細胞的技術，但是該技術尚未得到充分發(fā)展。同時，由于原代細胞是未經(jīng)免疫的正常細胞，其主要由動物組織或官方部門直接培養(yǎng)并及時從活細胞提取獲得。原代細胞已經(jīng)被開發(fā)為細胞治療劑，并且由于具有與真實生物反應特性相似的優(yōu)點，而被用于生物藥物等的生產(chǎn)。為了在臨床試驗和細胞治療劑中使用此類干細胞或原代細胞，亟需開發(fā)一種不使用動物提取物的細胞保護性防腐劑，并能使組織中提取細胞和干細胞保持活力，可以使成人和人胚胎干細胞保持未分化的特性，并且在移植入活體之前具有的良好的預期保護性防腐效果。由于，用于細胞保存的組合物中所含成分的種類和組成比依據(jù)需要根據(jù)所要保存的細胞種類而確定，因此還需要對保存用組合物的組成比進行研究。由于-196℃極低溫度下的冷凍保存能夠穩(wěn)定和安全的保持細胞活力和特性，因此常被用于保存細胞?；罴毎葱枰ㄟ^快速解凍冷凍細胞就可以獲得。然而，由于冰晶的形成以及離子不平衡和滲透壓會無法避免地導致細胞損傷(其基本上伴隨冷凍和解凍)，因此細胞活力隨冷凍和解凍后的時間演變而逐漸降低。因此，實際上很難采用冷凍法進行數(shù)小時至數(shù)天，甚至長期的細胞運輸與儲存。技術實現(xiàn)要素：[技術問題]對于持續(xù)幾小時或幾天的細胞運輸與儲存，除了用于長期保存的冷凍法之外，還有一種采用保護性防腐劑作為動物細胞培養(yǎng)基的暫時保存方法。然而，大多數(shù)此類培養(yǎng)基屬于不含血清等成分的基礎培養(yǎng)基或鹽溶液或緩沖溶液中，容易導致細胞死亡、細胞活力降低和細胞變形。因此，需要研究一種可安全保存干細胞或原代細胞，并能充分確保室溫或低溫細胞儲存的存活率的細胞保護性防腐劑。因此，本發(fā)明的目的是開發(fā)一種用于細胞保存的組合物，其使用無動物成分和無異源性成分的物質(zhì)作為活性成分，并且具有室溫或低溫下可有效儲存干細胞或原代細胞的組合物構成比。[技術方案]本發(fā)明一方面提供一種用于細胞保存的組合物，其包含作為活性成為的植物源(plant-derived)重組人血清白蛋白和植物肽作為活性成分，另一方面提供一種使用所述組合物進行細胞保存方法。[有益效果]根據(jù)本發(fā)明提出的組合物和方法，在室溫或低溫短期細胞保存時，即使不采用動物提取因子，細胞活力也可以維持在高水平，并可實現(xiàn)室溫或低溫下無細胞變形的穩(wěn)定保存。因此，本發(fā)明可將要求無動物因子和無異源性成分特性的干細胞或原代細胞在相關藥物或醫(yī)藥工業(yè)領域進行有利應用。附圖說明圖1是通過細胞計數(shù)確認ucmsc在低溫儲存后的存活率的圖；圖2是通過細胞計數(shù)確認admsc在低溫儲存后的存活率的圖；圖3是通過細胞計數(shù)確認bmmsc在低溫儲存后的存活率的圖；圖4是通過細胞計數(shù)確認作為原代細胞的人二倍體成纖維細胞(hdf)在低溫儲存后的存活率的圖；圖5顯示通過顯微鏡確認ucmsc在低溫儲存并再培養(yǎng)24小時后的存活率和粘附度的圖像；圖6和圖7顯示了使用本發(fā)明實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)處理ucmsc，在低溫下儲存后，通過流式細胞儀確認ucmsc的細胞表面因子cd31在低溫保存后的儲存天的變化的結果圖；圖8和圖9顯示了使用本發(fā)明實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)處理ucmsc，在低溫下儲存后，通過流式細胞儀確認ucmsc的細胞表面因子cd73的變化的結果圖；圖10和圖11顯示使用本發(fā)明實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)處理ucmsc，在低溫下儲存后，通過流式細胞儀確認ucmsc的細胞表面因子cd105的變化的結果圖；圖12和圖13顯示使用本發(fā)明實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)處理ucmsc，在低溫下儲存后，通過流式細胞儀確認ucmsc的細胞表面因子cd146的變化的結果圖；圖14和圖9顯示使用本發(fā)明實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)處理ucmsc，在室溫下儲存后，通過流式細胞儀確認ucmsc的細胞表面因子cd31的變化的結果圖；圖15顯示使用本發(fā)明實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)處理ucmsc，在室溫下儲存后，通過流式細胞儀確認ucmsc的細胞表面因子cd73在不同儲存天數(shù)的變化的結果圖；圖16顯示使用本發(fā)明實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)處理ucmsc，在室溫下儲存后，通過流式細胞儀確認ucmsc的細胞表面因子cd105在不同儲存天數(shù)的變化的結果圖；圖17顯示使用本發(fā)明實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)處理ucmsc，在室溫下儲存后，通過流式細胞儀確認ucmsc的細胞表面因子cd146在不同儲存天數(shù)的變化的結果圖。本發(fā)明的最優(yōu)實施方式在下文中，將參考以下實施例詳細描述本發(fā)明。然而，本發(fā)明可以以各種不同的形式實現(xiàn)，因此本發(fā)明不限于本文所描述的實施例。一個方面，本發(fā)明涉及一種用于保存細胞的組合物，其包含作為活性成分的植物源(plant-derived)重組人血清白蛋白和植物肽。在本發(fā)明的實施例中，本發(fā)明的用于細胞保存的組合物是指在進行某些實驗，手術操作或細胞治療之前能夠對所使用的細胞進行數(shù)小時至數(shù)天的保護和儲存的組合物。本發(fā)明提供的組合物不同于普通的動物細胞培養(yǎng)基，普通的動物細胞培養(yǎng)基是根據(jù)其組成成分、含量和使用目的而最佳地用于特定細胞的培養(yǎng)和增殖。換句話說，普通的動物細胞培養(yǎng)基是針對每種特定類型的細胞進行優(yōu)化而用于該特定細胞的培養(yǎng)基，而本發(fā)明提供的組合物僅適合用于細胞在室溫和低溫下存儲時用于增加細胞活力、防止細胞變形的保護性防腐液，而不適用于作為細胞培養(yǎng)基。在一個實施例中，本發(fā)明的細胞保存用組合物可以是基于總計100重量份的組合物，包含0.1-20重量份的植物源重組人血清白蛋白。當以植物源重組人血清白蛋白和植物肽作為活性成分時，本發(fā)明的細胞保存用組合物可以是基于總計100重量份的組合物，含有0.1-10重量份的植物源重組人血清白蛋白和0.1-10重量份的植物肽。更優(yōu)選地，本發(fā)明的細胞保存用組合物可以含有0.5-5重量份的植物源重組人血清白蛋白和1-5重量份的植物肽。最優(yōu)選地，本發(fā)明的細胞保存用組合物可以包含1重量份的植物源重組人血清白蛋白和5重量份的植物肽。在一個實施例中，細胞可以是干細胞或原代細胞，并且干細胞可以是臍帶間充質(zhì)干細胞(ucmsc)，脂肪來源的間充質(zhì)干細胞(admsc)或骨髓來源的間充質(zhì)干細胞(bmmsc)。在本發(fā)明的一個實施方案中，本發(fā)明的細胞保存用組合物可以是無異源的和無動物成分的，因為其不含動物來源的成分。本發(fā)明提供的用于細胞保存的組合物可以用于保存動物細胞。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物用于干細胞的保存，更優(yōu)選的，本發(fā)明的組合物用于成體干細胞的保存。由于本發(fā)明的提供的用于細胞保存的組合物中不含有動物因子，而是含有植物源重組人血清白蛋白和植物肽，可以保持該組合物的無異物性，使干細胞或原代細胞保存中感染朊病毒的風險降低，因此，本發(fā)明的組合物可以安全的使用。在本發(fā)明的一個實施方案中，植物源重組人血清白蛋白可以來源于水稻，植物肽來源于大豆。本發(fā)明的組合物還可以含有無機鹽，維生素和核酸，其中，礦物質(zhì)和維生素可以起到去除細胞產(chǎn)生有毒物質(zhì)功能的作用(例如，抗氧化作用)，從而增加細胞活力。本文中使用的術語“植物源重組人血清白蛋白”是指根據(jù)人血清白蛋白的全部或部分具有生物活性的氨基酸序列，由植物細胞轉化而獲得的蛋白質(zhì)。在保存干細胞或原代細胞時，本發(fā)明的提供的人血清白蛋白等同于或優(yōu)于血清的無動物因子替代品使用，并且可以加入到用于保存干細胞或原代細胞的組合物中，從而使細胞穩(wěn)定。由于本發(fā)明提供的由植物(例如水稻)中產(chǎn)生的重組人血清白蛋白具有使細胞保存過程中動物或病毒感染風險最小化的優(yōu)點，因此本發(fā)明的組合物可用于干細胞或原代細胞的保存，特別是可以用作治療劑。另外，由于本發(fā)明的組合物中所含的重組人血清白蛋白由植物轉化獲得，因而相對于來源于動物細胞或血清的人血清白蛋白，其具有變異率極低的優(yōu)點。本文中使用的術語“植物肽”是指從植物提取的肽。為實現(xiàn)本發(fā)明的技術目的，本發(fā)明所提供的植物肽沒有特別限制，只要其含有能夠減少細胞保存過程中的細胞損傷的氨基酸即可。在本發(fā)明的一個實施例中，所述植物肽可以使用從大豆提取的植物肽。由于植物肽無動物性質(zhì)，而且感染朊病毒蛋白的風險低，可以是細胞保持無異物性，此外，由于其含有必需氨基酸和/或非必需氨基酸，因此還可用作基本能源。因此，使用本發(fā)明提供的含有植物肽的組合物在進行細胞保存時，可以向干細胞或原代細胞提供營養(yǎng)物并增強細胞的活性，有助于增加細胞活力。本文中使用的術語“干細胞”是指具有自我更新和分化能力的未分化細胞。根據(jù)其分化潛能，干細胞包括全能性干細胞，多能性干細胞和單能性干細胞。全能性(pluripotent)干細胞是指具有分化為構成活生物體的所有組織或細胞的能力的細胞，多能性(multipotent)干細胞是指不具有分化為所有種類，而是分化為多種組織或細胞的能力的細胞。單能干細胞是指具有分化成特定組織或細胞的能力的細胞。全能性干細胞可以包括胚胎干細胞(es細胞)，胚胎生殖細胞(eg細胞)，誘導多能干細胞(ips細胞)等。多能性干細胞可以包括成體干細胞，例如間充質(zhì)干細胞(來源于脂肪，骨髓，臍帶血或臍帶等)，造血干細胞(來源于骨髓或外周血)，神經(jīng)干細胞細胞，生殖干細胞等。單能干細胞可包括用于肝細胞的定向干細胞，其通常是具有較低的自我更新能力的靜止狀態(tài)，但在激活后可有力地分化成肝細胞。在本發(fā)明的實施例中，證實了本發(fā)明的組合物可以安全且穩(wěn)定地用于保存在室溫或低溫條件下的骨髓來源間充質(zhì)干細胞，脂肪來源干細胞和臍帶來源干細胞。本文中使用的術語“原代細胞”是指從人體的組織中分離出的沒有進行任何遺傳操作等處理的細胞，其代表活生物體的器官/組織的功能。原代細胞從皮膚，血管內(nèi)皮，骨髓，脂肪，軟骨等中分離，并用于研究相應的組織和細胞的功能或用作重建缺損組織的細胞治療劑。干細胞或原代細胞的來源沒有特別限制，只要在室溫或低溫下能夠通過本發(fā)明的組合物穩(wěn)定地保存細胞即可。其實例可包括來自人，猴，豬，馬，牛，綿羊，狗，貓，小鼠或兔的細胞。干細胞或原代細胞優(yōu)選為人干細胞或原代細胞，但不限于此。另一方面，本發(fā)明涉及一種用于保存細胞的方法，所述方法包括用本發(fā)明提供的用于細胞保存的組合物對細胞進行處理。在一個實施方案中，用本發(fā)明的細胞保存組合物處理的細胞可以在30℃或更低溫度下保存，優(yōu)選在室溫或0℃至10℃的低溫下保存，最優(yōu)選在4℃下保存。本文中使用的術語“室溫”是指18℃至27℃。本發(fā)明通過以下實施例更詳細地描述本發(fā)明。然而，所提供的以下實施例僅用于說明本發(fā)明而不限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的實施方式實施例制備用于細胞保存的無動物因子和無異源性成分的組合物為了制備在室溫或低溫下保存細胞的組合物，所述組合物能夠以無異源的方式穩(wěn)定保存干細胞或原代細胞，從水稻提取的人重組白蛋白(ralbuminacf，sheffieldbio-science，usa)和從作為活性成分的大豆(ultrapeptmsoy，sheffieldbio-science，usa)提取的植物肽與不含酚紅的基礎培養(yǎng)基混合，制備用于細胞保存的組合物，稱為cefo-vive。在制備的用于細胞保存的組合物中，使用1wt％的人重組白蛋白和5wt％的植物肽。植物肽具有如表1所示的氨基酸組成。此外，將用于細胞保存的組合物cefo-vivo的無機鹽，氨基酸，維生素，核酸成分和其它成分的具體含量列于表中2，3，4，5和6。表1表2無機鹽mg/lcacl2(anhyd.)200.0kcl400.0mgso4(anhyd.)98.0nacl15，300.0nah2po4h2o140.0表3氨基酸(植物a.a)mg/ll-alanine1，390.0l-arginine·hcl877.0l-asparagine·h2o2，645.0l-asparticacid1，360.0l-cysteine·hcl31.0l-cysteine·hcl·h2o100.0l-glutamicacid1，863.0l-glutamine292.0glycine1，350.0l-histidine·hcl·h2o292.0l-isoleucine652.0l-leucine52.0l-lysine·hcl1，073.0l-methionine215.0l-phenylalanine657.0l-proline1，715.0l-serine1，800.0l-tryptophan610.0l-tyrosine(disodiumsalt)452.0l-valine1，846.0表4維生素(vitamin)mg/ll-ascorbicacid100.0biotin0.1d-capantothenate101.0cholinechloride101.0folicacid101.0i-inositol202.0niacinamide101.0pyridoxalhcl101.0riboflavin10.1thiaminehcl101.0vitaminb121.4表5核苷(nucleoside)mg/ladenosine10.0cytidine10.0guanosine10.0uridine10.02′deoxyadenosine10.02′deoxycytidine·hcl11.02′deoxyguanosine10.0thymidine10.0表6其它成分(otheringredients)mg/lhumanrecombinantalbumin(plant-derived)10，000.0d-glucose1，000.0lipoicacid0.2sodiumpyruvate110.0試驗例1用于細胞保存的組合物的細胞活力的驗證干細胞或原代細胞的制備分別從患者捐贈的臍帶，脂肪和骨髓中直接提取臍帶間充質(zhì)干細胞(ucmsc)，脂肪來源的間充質(zhì)干細胞(admscs)和骨髓來源的間充質(zhì)干細胞(bmmsc)。使用cefogrotmucmsc，cefogrotmadmsc和cefogrotmbmmsc培養(yǎng)基(基礎培養(yǎng)基)作為干細胞的培養(yǎng)基。人二倍體成纖維細胞(hdf)用作原代細胞，并在cefogrotmhf培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將這些細胞在37℃和5％co2的條件下在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，并且每3天更換培養(yǎng)基。本發(fā)明的所有測試由cefo有限公司的生物倫理機構審查委員會(institutionalbioethicsreviewboard)核準，符合并通過了生物倫理學和安全法案(bioethicsandsafetyact)的程序和方法。低溫保存后細胞計數(shù)將干細胞ucmsc，admsc和bmmsc在其各自的基礎培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后用胰蛋白酶處理，然后單獨收集細胞。將單獨收集的細胞分別放入上述實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)，基礎培養(yǎng)基和鹽水溶液中，并儲存在冰箱(4℃)中。然后，通過每天三個小瓶來監(jiān)測細胞活力，并進行活細胞計數(shù)直到儲存的第6天。結果證實，與基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液不同，cefo產(chǎn)品甚至在儲存的第6天顯示出70％或更高的平均細胞活力(圖1,2和3)。此外，作為原代細胞的人二倍體成纖維細胞(hdf)在cefogrotmhf培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后用胰蛋白酶處理，然后收集。將收集的細胞分別放入上述實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)，基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液中，并儲存在冰箱(4℃)中。然后，通過每天三個小瓶來監(jiān)測細胞活力，并進行活細胞計數(shù)，直到儲存的第6天。結果證實，即使在儲存第5天，cefo-vive顯示90％或更高的平均細胞活力，但是在基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液中儲存后第2天，細胞活力快速降低(圖4)。低溫保存后細胞計數(shù)將干細胞ucmsc，admsc和bmmsc在其各自的基礎培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后用胰蛋白酶處理，然后單獨收集細胞。將單獨收集的細胞分別放入上述實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)，基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液中，并儲存在冰箱(4℃)中。然后，通過每天三個小瓶來監(jiān)測細胞活力，并進行活細胞計數(shù)，直到儲存的第6天。結果證實，與基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液不同，cefo產(chǎn)品甚至在儲存的第6天依然顯示出70％或更高的平均細胞活力(圖1,2和3)。此外，作為原代細胞的人二倍體成纖維細胞(hdf)在cefogrotmhf培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后用胰蛋白酶處理，然后收集。將收集的細胞分別放入上述實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)，基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液中，并儲存在冰箱(4℃)中。然后，通過每天三個小瓶來監(jiān)測細胞活力，并進行活細胞計數(shù)，直到儲存的第6天。結果證實，即使在儲存第5天，cefo-vive顯示90％或更高的平均細胞活力，但是在基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液中儲存后第2天，細胞活力快速降低(圖4)。觀察低溫細胞保存后培養(yǎng)的細胞將ucmsc在cefogrotmucmsc中培養(yǎng)，然后用胰蛋白酶處理，隨后單獨收集。將收集的細胞分別放入上述實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)，基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液中，并儲存在冰箱(4℃)中。然后，通過每天三個小瓶來監(jiān)測細胞活力，并將細胞接種在培養(yǎng)皿中并在cefogrotmucmsc培養(yǎng)基中培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)24小時后，使用顯微鏡觀察細胞。結果證實，放入到cefo-vive中的細胞，即便儲存在冰箱的第5天進行再培養(yǎng)，依然可以順利的接種在培養(yǎng)皿上，但是對于基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液的細胞很難適應培養(yǎng)皿，而且在冰箱儲存的第2天就死亡(圖5)。低溫保存后細胞表面因子的驗證ucmsc在cefogrotmucmsc中培養(yǎng)，然后用胰蛋白酶處理，隨后單獨收集。將收集的細胞分別放入上述實施例的細胞保存用組合物(cefo-vive)，基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液中，并儲存在冰箱(4℃)中。然后，每天取三個小瓶，將細胞接種在培養(yǎng)皿中并在cefogrotmucmsc培養(yǎng)基中培養(yǎng)4天。然后，收集各細胞，使用流式細胞儀研究已知為間充質(zhì)干細胞的細胞表面因子的cd標記(cd31，cd73，cd105和cd146)的變化。然而，除了在cefo-vive中保存的細胞之外，使用基礎培養(yǎng)基或鹽溶液的細胞，培養(yǎng)4天后均不能產(chǎn)生與可用于分析的細胞一樣多的細胞。因此，僅對保留在cefo-vive中的細胞組進行流式細胞術。結果為，第1天，第2天，第3天，第4天和第5天依次顯示為cd31(-)，cd73(+)，cd105(+)和cd146(+)，并且這些結果表明存在在cefo-vive中的干細胞在冷藏儲存中，細胞形態(tài)或細胞表面蛋白表達沒有變化(如圖6和7,8和9,10和11以及12和13所示)。室溫保存后細胞表面因子的驗證ucmsc在cefogrotmucmsc中培養(yǎng)，然后用胰蛋白酶處理，隨后單獨收集。將收集的細胞分別置于上述實施例的cefo-vive，基礎培養(yǎng)基或鹽水溶液中，并在室溫(25℃)下儲存。然后，在第1或3天取三個小瓶，將細胞接種在培養(yǎng)皿中并在cefogrotmucmsc培養(yǎng)基中培養(yǎng)4天。然后，收集各細胞，使用流式細胞儀研究已知為間充質(zhì)干細胞的細胞表面因子的cd標記(cd31，cd73，cd105和cd146)的變化。然而，除了在cefo-vive中保存的細胞之外，在使用基礎培養(yǎng)基或鹽溶液的細胞的情況下，4天的培養(yǎng)均不能給出與可用于分析的細胞一樣多的細胞，盡管是室溫保存。因此，僅使保留在cefo-vive中的細胞組進行流式細胞術。結果顯示，在第1天和第3天分別顯示為cd31(-)，cd73(+)，cd105(+)和cd146(+)，這些結果表明在cefo-vive中的干細胞在室溫的冷藏儲存條件下，細胞形態(tài)或細胞表面蛋白表達沒有變化，(圖14,15,16和17)。從上述結果可以看出，將本發(fā)明提供的無動物和無異源性成分的，包含作為活性成分的植物源重組人血清白蛋白和植物肽的組合物，用于細胞保存，確保了細胞存活并使細胞在室溫或低溫下進行保存時，其細胞形態(tài)或表面表達因子依然不發(fā)生改變。當前第1頁12