本發(fā)明涉及蛋雞的養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種將氯化膽堿作為飼料添加劑用于養(yǎng)殖產(chǎn)蛋期蛋雞的方法。

背景技術(shù)：

膽堿作為一種甲基供體和親脂因子，其營養(yǎng)作用在上世紀(jì)三十年代提出，從上世紀(jì)40年代一直到80年代，國外學(xué)者陸續(xù)對膽堿預(yù)防蛋雞軟骨病和脂肪肝、影響產(chǎn)蛋率和蛋重以及其安全限量方面進(jìn)行過研究，最近十年偶有添加氯化膽堿對雞蛋卵磷脂沉積影響的研究。我國學(xué)者從上世紀(jì)九十年代開始從生產(chǎn)性能、脂肪肝、雞蛋卵磷脂沉積等角度對膽堿的作用亦進(jìn)行了評價。在分析比較各種科研文獻(xiàn)的過程中，本申請發(fā)明人發(fā)現(xiàn)雖然添加膽堿在預(yù)防雛雞軟骨病和脂肪肝方面的作用得到了證實，并且盡管關(guān)于氯化膽堿在蛋雞上使用效果的評價不少，但其效果如何一直缺乏統(tǒng)一的說法，對于其降低肝臟脂肪含量是否會帶來其他方面的負(fù)面效應(yīng)也并不清楚。有些研究表明，額外添加膽堿在提高蛋雞生產(chǎn)性能方面有積極的作用，而有些研究研究表明，額外添加膽堿沒有效果。在添加膽堿是否能引起雞蛋卵磷脂含量升高方面仍然缺乏統(tǒng)一結(jié)論。眾所周知，蛋雞產(chǎn)蛋期可以到72周齡，甚至更長到79周齡。但由于蛋雞試驗成本高，研究試驗的共同特點是試驗期較短，有的甚至只有1個月，長者未超過3個月，而且所設(shè)添加量梯度少，不能說明問題。與此同時，通過分析比較，本申請發(fā)明人發(fā)現(xiàn)我國2004年雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)和美國nrc(1994)中規(guī)定的蛋雞對膽堿的需要量不一致，我國雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)中提出蛋雞產(chǎn)蛋期(19周開始)膽堿需要量為500mg/kg。而nrc(1994)中推薦褐殼蛋雞膽堿需要量為1045mg/kg(采食量為110g時)。而且需要量的制定大多是基于有限數(shù)據(jù)，甚至是理論推導(dǎo)出來的。根據(jù)nrc(1994)中提出的玉米和豆粕中的膽堿含量分別為660mg/kg和2860mg/kg計算，按照nrc(1994)配制的產(chǎn)蛋期玉米豆粕型日糧，飼料本身膽堿含量可達(dá)到1045mg/kg，不需要額外添加膽堿。

在實際蛋雞養(yǎng)殖過程中，氯化膽堿作為一種飼料添加劑，在蛋雞飼料中的添加量為300-500mg/kg，有時高達(dá)1000mg/kg，甚至更高，而我國相關(guān)行業(yè)規(guī)定亦未對其添加量做明確規(guī)定。這樣造成對蛋雞飼料中是否添加膽堿，添加量多少缺乏統(tǒng)一客觀的認(rèn)識，加之，由于飼料原料的多樣性和飼料配方的復(fù)雜性，飼料中膽堿背景值的差異，由此導(dǎo)致蛋雞養(yǎng)殖戶對添加膽堿的作用缺乏統(tǒng)一正確的觀念，對膽堿添加或不添加都非常盲目，使用狀況呈現(xiàn)兩極化，有些養(yǎng)殖戶純粹為了節(jié)約成本，不添加氯化膽堿，而另一些養(yǎng)殖戶則認(rèn)為添加總比不添加好，在盲目添加氯化膽堿。造成膽堿的添加缺乏科學(xué)性指導(dǎo)，完全由養(yǎng)殖戶的個人喜好和經(jīng)營情況而定，如此不僅對養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖效益造成不利影響，也難以使其養(yǎng)殖效益達(dá)到最大化。

縱觀行業(yè)，目前缺乏一套完整的在蛋雞飼料中添加氯化膽堿的指導(dǎo)方法。任何產(chǎn)品在問世后，經(jīng)過實踐應(yīng)用經(jīng)驗，均需要后續(xù)的配套應(yīng)用技術(shù)來補充和完善。上世紀(jì)末到本世紀(jì)初，飼料級氯化膽堿開始商品化使用。而蛋雞在產(chǎn)蛋高峰前和高峰后生理特點差異很大，所以迫切需要針對某一飼料添加劑發(fā)明其應(yīng)用技術(shù)，而僅僅依據(jù)不到3個月的短期試驗數(shù)據(jù)是難以對其準(zhǔn)確制定的，充其量只能做出定性的判斷和是否有效的潛能判斷。而蛋雞養(yǎng)殖是微利的，獲益與否依賴于整個生產(chǎn)期的飼養(yǎng)效果。另一方面，目前雞蛋市場已經(jīng)多元化，雞蛋已經(jīng)作為生產(chǎn)和提取卵磷脂的主要原料之一，提高雞蛋中活性成分的含量也成為目前和未來蛋雞產(chǎn)業(yè)重要的研究熱點和探索目標(biāo)。目前關(guān)于如何提高雞蛋中卵磷脂含量的技術(shù)并不多見。飼料中添加氯化膽堿對雞蛋中卵磷脂含量的影響方面的報道亦很少，而且有限的報道其結(jié)果還不一致。同時鑒于經(jīng)濟(jì)成本和養(yǎng)殖條件的限制，養(yǎng)殖戶不具備系統(tǒng)比較添加與不添加氯化膽堿的利弊的可能。

鑒于上述諸多原因，迫切需要建立一套在蛋雞，尤其是在蛋雞的產(chǎn)蛋期，科學(xué)地添加氯化膽堿的養(yǎng)殖方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

因此，針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，為了在蛋雞的產(chǎn)蛋期飼料中正確合理、有針對性地使用氯化膽堿，提高蛋雞的生產(chǎn)性能，例如產(chǎn)蛋率、料蛋比、蛋重、產(chǎn)蛋量，改善所產(chǎn)雞蛋的品質(zhì)，例如雞蛋的蛋黃顏色、蛋白高度、哈夫單位、蛋殼厚度、蛋殼強度或者雞蛋卵磷脂等，并且經(jīng)濟(jì)有效地利用氯化膽堿。

本發(fā)明提供了一種產(chǎn)蛋期蛋雞的養(yǎng)殖方法，該方法包括：

1)向19-58周齡的蛋雞喂食的飼料中添加氯化膽堿500～16000mg/kg；

2)向等于或大于59周齡的蛋雞喂食的飼料中添加氯化膽堿500～16000mg/kg；

其中，所述19-58周齡的蛋雞喂食的飼料包括：玉米63.0wt％、豆粕25.4wt％、豆油0.5wt％、石粉8.5wt％、磷酸氫鈣1.2wt％、食鹽0.3wt％、dl-蛋氨酸0.1wt％、預(yù)混料1.0wt％；優(yōu)選地所述19-58周齡的蛋雞喂食的飼料中固有膽堿含量為450mg/kg～700mg/kg；

所述等于或大于59周齡的蛋雞喂食的飼料包括：玉米66.1wt％、豆粕22.78wt％、石粉8.5wt％、磷酸氫鈣1.2wt％、食鹽0.35wt％、dl-蛋氨酸0.07wt％、預(yù)混料1.0wt％；優(yōu)選地，所述等于或大于59周齡的蛋雞喂食的飼料中固有膽堿含量為450mg/kg～700mg/kg。

發(fā)明人通過研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)蛋期蛋雞飼料的氯化膽堿添加量對產(chǎn)蛋期蛋雞的生產(chǎn)性能和所產(chǎn)雞蛋的品質(zhì)有著顯著的影響。根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)容，養(yǎng)殖者可以根據(jù)對蛋雞生產(chǎn)性能或者雞蛋的品質(zhì)的需求來調(diào)整氯化膽堿的添加量。由于在飼料中另行添加氯化膽堿會影響蛋雞的生產(chǎn)性能，降低蛋雞的產(chǎn)蛋率和產(chǎn)蛋量，并且提高雞蛋的蛋黃總脂含量，因此，當(dāng)所產(chǎn)雞蛋用于食用用途時，不需要另行在產(chǎn)蛋期飼料中添加氯化膽堿，以降低養(yǎng)殖的成本，提高養(yǎng)殖效益，并且使雞蛋的蛋黃總脂含量保持較低水平。

在19～58周齡的蛋雞喂食的飼料和等于或大于59周齡的蛋雞喂食的飼料中分別添加氯化膽堿500～8000mg/kg，可以顯著提高雞蛋中卵磷脂含量和蛋黃重，可以實現(xiàn)雞蛋中卵磷脂含量高和/或蛋黃重的特色養(yǎng)殖的需求。

在所述19～58周齡的蛋雞喂食的飼料和等于或大于59周齡的蛋雞喂食的飼料中分別添加氯化膽堿2000～4000mg/kg時，可以實現(xiàn)降低蛋雞肝臟的脂肪含量，有效地防治雞脂肪肝綜合征。

在19～58周齡的蛋雞喂食的飼料中添加的氯化膽堿高于2000mg/kg時會對蛋雞的產(chǎn)蛋量造成顯著影響，而當(dāng)氯化膽堿的添加量高于1000mg/kg時，會對蛋雞的產(chǎn)蛋率造成顯著影響，因此，可以選擇在19～58周齡的蛋雞喂食的飼料中添加氯化膽堿500～2000mg/kg，不僅可以實現(xiàn)提高雞蛋中卵磷脂含量和蛋黃重的效果，還可以實現(xiàn)較低料蛋比、保持蛋雞的產(chǎn)蛋量的效果；也可以進(jìn)一步選擇添加500～1000mg/kg氯化膽堿，在實現(xiàn)提高雞蛋中卵磷脂含量和蛋黃重、較低料蛋比、保持蛋雞的產(chǎn)蛋量的效果的同時，還可以保持蛋雞的產(chǎn)蛋率，并且使雞蛋的蛋白高度得到提高。

進(jìn)一步地，還可以選擇在19～58周齡的蛋雞喂食的飼料中添加氯化膽堿500～1000mg/kg，在所述等于或大于59周齡的蛋雞喂食的飼料中添加氯化膽堿500mg/kg，以進(jìn)一步實現(xiàn)提高所產(chǎn)雞蛋的蛋黃顏色。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，可以選擇在19～58周齡的蛋雞喂食的飼料和等于或大于59周齡的蛋雞喂食的飼料中分別添加氯化膽堿1000～8000mg/kg以提高雞蛋蛋黃中的總脂含量，尤其是提高蛋黃中卵磷脂的含量，從而滿足在單個雞蛋中提取到更多的卵磷脂需求；優(yōu)先地，在19～58周齡的蛋雞喂食的飼料中添加氯化膽堿4000～8000mg/kg。

更進(jìn)一步地，在19～58周齡的蛋雞喂食的飼料中添加氯化膽堿1000～2000mg/kg以保證蛋雞的產(chǎn)蛋量；優(yōu)選為在19～58周齡的蛋雞喂食的飼料中添加氯化膽堿1000mg/kg優(yōu)化蛋雞所產(chǎn)雞蛋的綜合品質(zhì)。

上述方法中19～58周的蛋雞喂食的飼料和等于或大于59周的蛋雞喂食的飼料中的預(yù)混料成分相當(dāng)于折合成每千克日糧添加：維生素a8000iu、維生素d32200iu、維生素e20iu、維生素k2.0mg、硫胺素1.5mg、核黃素2.5mg、吡哆醇2.5mg、維生素b120.02mg、煙酸20mg、泛酸5.0mg、葉酸0.3mg、生物素0.1mg、錳80mg、鋅65mg、鐵60mg、銅8.0mg、碘0.8mg、硒0.3mg。

本發(fā)明的蛋雞產(chǎn)蛋期的養(yǎng)殖方法具有但不限于以下有益效果：

1)本發(fā)明提供的蛋雞產(chǎn)蛋期的養(yǎng)殖方法，通過控制產(chǎn)蛋期飼料中的氯化膽堿的添加量實現(xiàn)了對蛋雞生產(chǎn)性能和所產(chǎn)雞蛋的品質(zhì)的按需調(diào)控，飼養(yǎng)者可以根據(jù)其需求，例如養(yǎng)殖目的(普通養(yǎng)殖和特色養(yǎng)殖)、產(chǎn)蛋分期(高峰前、高峰后)、銷售方式(以個銷售或以重量銷售)，或者對雞蛋品質(zhì)的需求(蛋黃顏色、蛋白高度、哈夫單位、蛋殼厚度、蛋殼強度或者雞蛋卵磷脂等)，或者所產(chǎn)雞蛋的用途(用于提取卵磷脂或用于直接食用等)、或者蛋雞脂肪肝出血綜合征預(yù)防等有目的的調(diào)整氯化膽堿的添加量，從而提高蛋雞養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益，保障雞蛋品質(zhì)和蛋雞健康；

2)本發(fā)明提供了氯化膽堿在蛋雞中的科學(xué)高效利用的技術(shù)方案，針對蛋雞不同的生長階段配合不同的基礎(chǔ)飼料，不僅避免了背景膽堿值的劇烈波動，同時有益于規(guī)范、引導(dǎo)和提高飼料中添加氯化膽堿的應(yīng)用效果，具有良好的實用價值和應(yīng)用前景。

3)本發(fā)明提供的19～58周的蛋雞喂食的飼料和等于或大于59周的蛋雞喂食的飼料滿足了產(chǎn)蛋期蛋雞的各種基本營養(yǎng)需求，為蛋雞的生產(chǎn)性能及其所產(chǎn)雞蛋的品質(zhì)提供了基礎(chǔ)保障。

附圖說明

圖1是顯示喂食了添加不同劑量的氯化膽堿的飼料組的雞所產(chǎn)的雞蛋中卵磷脂含量的變化趨勢。

具體實施方式

下面通過具體的實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但是，應(yīng)當(dāng)理解為，這些實施例僅僅是用于更詳細(xì)具體地說明之用，而不應(yīng)理解為用于以任何形式限制本發(fā)明。

本文所使用的術(shù)語“料蛋比”，指的是產(chǎn)一公斤雞蛋需多少公斤飼料；

本文所使用的術(shù)語“產(chǎn)蛋率”，指的是每天蛋數(shù)/母雞數(shù)；

本文所使用的術(shù)語“固有膽堿”，指的是玉米和豆粕等飼料原料中含有的膽堿，并不包括另外添加到飼料中的氯化膽堿等；

本文所使用的術(shù)語“膽堿”，指的是化學(xué)意義上的膽堿，是卵磷脂的組成成分，分子式：c5h15no2，分子量：121.18，不同于氯化膽堿、磷脂酰膽堿等衍生化合物

本發(fā)明的實施例1中提供了為期6個月，分設(shè)6個氯化膽堿添加梯度(0、1000、2000、4000、8000、16000mg/kg)的蛋雞飼養(yǎng)試驗。分別從蛋雞生產(chǎn)性能(產(chǎn)蛋率、料蛋比、蛋重、產(chǎn)蛋量)、雞蛋常規(guī)品質(zhì)(蛋黃顏色、蛋白高度、哈夫單位、蛋殼厚度、蛋殼強度)和雞蛋卵磷脂等方面進(jìn)行了試驗研究。

本發(fā)明在實施例1的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步提供了實施例2，實施例2分設(shè)6個氯化膽堿添加梯度(0、500、1000、2000、4000、8000mg/kg)，分別從蛋雞生產(chǎn)性能(產(chǎn)蛋率、料蛋比、蛋重、產(chǎn)蛋量)、雞蛋常規(guī)品質(zhì)(蛋黃顏色、蛋白高度、哈夫單位、蛋殼厚度、蛋殼強度)、蛋雞肝臟(脂肪含量)、雞蛋營養(yǎng)成分(總脂、甘油三酯、膽固醇、卵磷脂)等4個層面進(jìn)行了為期1年的試驗研究，以系統(tǒng)、全面地研究獲取數(shù)據(jù)。

在上述研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明根據(jù)飼養(yǎng)周期、養(yǎng)殖目的、銷售途徑、雞蛋目標(biāo)市場等方面分析了蛋雞飼料中添加氯化膽堿的應(yīng)用效果，并且進(jìn)一步建立了一套在蛋雞科學(xué)高效應(yīng)用氯化膽堿的技術(shù)方案，提高蛋雞養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益、保障雞蛋品質(zhì)和蛋雞健康。

實施例1氯化膽堿在蛋雞飼料中應(yīng)用的試驗效果研究(22周齡-46周齡，24周)

(一)研究方案

1.試驗材料

氯化膽堿白色晶體，由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司提供。純度≥98.0％。

2.飼料配方

基礎(chǔ)日糧參照nrc(1994)蛋雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制。其它日糧按劑量在基礎(chǔ)日糧中添加氯化膽堿。日糧組成和營養(yǎng)成分見表1。

表1日糧組成及營養(yǎng)水平

注：每千克預(yù)混料中含有：va149.5mg；vd334.5mg；ve287.5mg；vk311.5mg；vb192mg；vb2163.8mg；vb6172.5mg；vb120.4mg；泛酸鈣287.5mg；煙酰胺805mg；葉酸46mg；生物素3.45mg；硫酸錳1741.1mg；鋅680.5mg；鐵418.8mg；銅151.2mg；鈷4.5mg；碘10.7mg；硒2.7mg.

3.試驗動物、分組及飼養(yǎng)管理

3.1試驗動物與分組

選體重1600g左右的18周齡京紅蛋雞990只，預(yù)試驗4周，22周齡時按單因素隨機試驗設(shè)計將試驗雞分成6組，對照組6個重復(fù)，試驗組12個重復(fù)，每個重復(fù)15只雞。1組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；2-5組為試驗組，日糧中分別添加0.10％(1000mg/kg)、0.20％(2000mg/kg)、0.40％(4000mg/kg)、0.80％(8000mg/kg)、1.60％(16000mg/kg)的氯化膽堿，保證各組營養(yǎng)水平基本一致，具體試驗分組見表2。

表2試驗雞分組與處理

3.2飼養(yǎng)管理

試驗雞采用3層階梯式籠養(yǎng)，由專人喂養(yǎng)，每天定時飼喂2次。自由采食、飲水，自然通風(fēng)，采用14h光照(早6:00至晚8:00)，用干濕球溫度計記錄雞舍內(nèi)溫度和濕度，保持雞舍內(nèi)溫度在20～25℃，相對濕度在60％～70％，每天清糞一次。各組飼養(yǎng)管理條件完全相同。

4.試驗日期

預(yù)試期1個月(此間飼料中不添加氯化膽堿)，正式試驗期6個月。

5.測定指標(biāo)與方法

5.1生產(chǎn)性能指標(biāo)

每天15:30定時撿蛋一次，以重復(fù)為單位每日統(tǒng)計產(chǎn)蛋量(率)和蛋重。采用清掃料槽、稱剩余料的方法，以重復(fù)為單位每周統(tǒng)計一次飼料消耗，試驗結(jié)束時統(tǒng)計各階段的產(chǎn)蛋率、平均蛋重、每日產(chǎn)蛋量和料蛋比。

5.2蛋品質(zhì)指標(biāo)

測定每枚蛋蛋重、蛋殼厚度、蛋殼強度、哈氏單位、蛋白高度、蛋黃顏色。具體采樣方案見表3。

5.3全蛋液和蛋黃、蛋白液中磷脂酰膽堿含量的測定

測定了全蛋液和蛋黃、蛋白液中磷脂酰膽堿(卵磷脂的含量)，具體采樣方案見表3。

表3采樣方案

6.數(shù)據(jù)處理

采用sas軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析和多重比較，結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

(二)結(jié)果與分析

1.6種試驗飼料中膽堿含量檢測結(jié)果

表4飼料中膽堿含量的檢測結(jié)果

2.添加不同劑量氯化膽堿對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.1對產(chǎn)蛋率的影響

如表5所示。從全期來看，產(chǎn)蛋率呈先升高后降低的趨勢。在試驗前期(1-5周)，5組(8000mg/kg)產(chǎn)蛋率明顯低于1組(0對照組)和2組(1000mg/kg)(p<0.05)。到試驗中期7、8、9周4組產(chǎn)蛋率顯著低于2組；10-12周，4組(4000mg/kg)產(chǎn)蛋率顯著低于1組和2組(p<0.05)，13-18周，2、3、4、5組產(chǎn)蛋率顯著低于對照組(p<0.05)。試驗后期，19-21周，6組產(chǎn)蛋率顯著低于對照組(p<0.05)；22-24周，6組產(chǎn)蛋率顯著低于對照組(p<0.05)。1-24周，3組、4組、5組、6組產(chǎn)蛋率顯著低于對照組(p<0.05)，2組和對照組無顯著差異；5組、6組顯著低于2組(p<0.05)。表明添加氯化膽堿對產(chǎn)蛋率有不利影響，尤其是劑量達(dá)4000mg/kg以上對產(chǎn)蛋率有顯著不利影響。

2.2對蛋重的影響

如表6所示。從全期來看，平均蛋重呈整體升高趨勢。1～24周，6組(16000mg/kg)平均蛋重顯著低于其它各組(p<0.05)，而其它各組間差異不顯著(p>0.05)。1-24周，6組平均蛋重顯著低于其他各組(p<0.05)。表明當(dāng)添加量達(dá)到16000mg/kg時，氯化膽堿可顯著降低每枚蛋的蛋重。

2.3對產(chǎn)蛋量的影響

如表7所示。對于每日產(chǎn)蛋重量，試驗前期(1-5周)，對照組和2組(1000mg/kg)每日每個重復(fù)產(chǎn)蛋量顯著高于5組(8000mg/kg)(p<0.05)；試驗中期(7-12周)，2組每日產(chǎn)蛋量顯著高于3組(2000mg/kg)、4組(4000mg/kg)和6組(16000mg/kg)(p<0.05)，其中6組每日產(chǎn)蛋量最低。試驗后期，13-18周，2組、5組產(chǎn)蛋量顯著低于對照組(p<0.05)。19-24周，5組、6組顯著低于對照組。1-24周，3、4、5、6組顯著低于對照組(p<0.05)。5，6組顯著低于2組(p<0.05)。表明過量添加氯化膽堿對平均每日產(chǎn)蛋量有不利影響。添加劑量達(dá)到2000mg/kg以上，對產(chǎn)蛋量有顯著不利影響。

2.4對采食量、料蛋比的影響

對采食量的影響如表8、表9所示。1-6周，各組之間采食量差異不顯著(p>0.05)。7周時，4組(4000mg/kg)和6組(16000mg/kg)采食量顯著低于2組(1000mg/kg)(p<0.05)。8周時，6組采食量顯著低于2組(p<0.05)。10-12周時，4組采食量顯著低于對照組(p<0.05)，6組采食量顯著高于2組和4組(p<0.05)。試驗后期，13-15周，2、3、4和5組采食量顯著低于對照組(p<0.05)；16-18周，4組采食量顯著高于對照組、5組以及6組(p<0.05)。19-21周，6組采食量顯著低于對照組(p<0.05)，22-24周，5和6組采食量顯著低于對照組(p<0.05)。1～24周，組間采食量沒有顯著差異。

對于料蛋比的影響如表9所示。4、6、7周，2組(1000mg/kg)料蛋比顯著高于對照組(p<0.05)，10-12周間，4組料蛋比顯著低于1、3組(p<0.05)。13～15周，2、3、4、5組料蛋比顯著低于對照組和6組(p<0.05)。試驗后期，22-24周時，6組料蛋比顯著低于對照組(p<0.05)。1-24周，各組料蛋比沒有顯著差異。

表5氯化膽堿對蛋雞產(chǎn)蛋率的影響(％)

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05)，肩標(biāo)相同字母或無肩標(biāo)表示差異不顯著(p>0.05)，下同。

表6氯化膽堿對平均每枚蛋重的影響

表7氯化膽堿對每個重復(fù)每日產(chǎn)蛋量的影響(％)

表8氯化膽堿對蛋雞采食量的影響

表9氯化膽堿對料蛋比的影響

3.添加不同劑量氯化膽堿對雞蛋品質(zhì)的影響

3.1對蛋殼厚度的影響

如表10所示，隨著試驗的進(jìn)行，蛋殼厚度先增高后降低。具體從各階段來看，試驗前期，試驗第2周各試驗組蛋殼厚度均顯著高于對照組(p<0.05)，試驗第3周2,4,6組蛋殼厚度顯著高于對照組(p<0.05)，試驗第4周3,4,5，6組蛋殼厚度顯著高于對照組(p<0.05)，4組和5組顯著高于2組(p<0.05)，第5周時5組和6組蛋殼厚度顯著低于3組(p<0.05),第6周時2,3,4和5組蛋殼厚度顯著高于1組(p<0.05),5組顯著低于3組(p<0.05)，第7周時2組和4組蛋殼厚度顯著高于對照組(p<0.05),5組和6組顯著低于2組(p<0.05)。試驗中期，第9周時5組蛋殼厚度顯著高于4組(p<0.05)，第12周時各組間蛋殼厚度沒有顯著差異。試驗后期，第20周時，各組間蛋殼厚度沒有顯著差異。表明在產(chǎn)蛋前期添加氯化膽堿可以增加蛋殼厚度，添加1000mg/kg即可。

3.2對蛋殼強度的影響

如表11所示，蛋殼強度從全期來看呈不斷下降趨勢。試驗前期，第1周5組和6組蛋殼強度顯著低于4組(p<0.05)，第2周4組蛋殼強度顯著高于對照組(p<0.05)，第4周5組蛋殼強度顯著低于1，2，3，4組(p<0.05)，第7周2，4，5組蛋殼強度顯著高于對照組(p<0.05)。試驗中期，第12周2組和4組蛋殼強度顯著低于對照組(p<0.05)。試驗后期，20周時，4組，6組蛋殼強度顯著低于對照組(p<0.05)。

3.3對蛋白高度的影響

如表12所示，蛋白高度呈先增高后降低的趨勢。試驗前期，第5周2組蛋白高度顯著高于1組，第8周6組蛋白高度顯著低于1組和2組。試驗中期，第9周4和6組蛋白高度顯著低于2組，第12周2，3，4，5和6組蛋白高度顯著高于1組。試驗后期，20周時各組蛋白高度沒有顯著差異。表明試驗前期添加氯化膽堿可降低蛋白高度，試驗后期可提高蛋白高度。

3.4對哈夫單位的影響

如表13所示，哈夫單位均呈先增高后降低的趨勢。試驗前期，第2周時6組哈夫單位顯著高于3組(p<0.05)，4周時5組和6組顯著高于對照組(p<0.05)，8周時對照組和2組顯著高于6組。試驗中期，12周時，2組，3組和6組顯著高于對照組。試驗后期，20周時各組哈氏單位i沒有顯著差異。

3.5對蛋黃顏色的影響

如表14所示，試驗前期，2，3，4，5，6周其他各組蛋黃顏色顯著高于對照組(p<0.05)；第7周4組和6組顯著低于3組，第8周2，4，5，6組顯著低于對照組。試驗中期，第9周其他各組蛋黃顏色顯著低于對照組，第12周4組顯著低于對照組，6組顯著高于對照組。試驗后期，20周時2組，3組，4組蛋黃顏色顯著高于對照組。

表10氯化膽堿對蛋殼厚度的影響

表11氯化膽堿對蛋殼強度的影響

表12氯化膽堿對蛋白高度的影響

表13氯化膽堿對雞蛋哈氏單位的影響

表14氯化膽堿對蛋黃顏色的影響

4.添加不同劑量氯化膽堿對雞蛋磷脂酰膽堿(卵磷脂)含量的影響

4.1對全蛋中磷脂酰膽堿(卵磷脂)含量的影響

如表15所示，隨著日齡的增加，雞蛋中卵磷脂含量呈逐漸升高的趨勢，且隨著飼料中添加氯化膽堿含量的增加，雞蛋中卵磷脂含量增加。

表15氯化膽堿對全蛋中磷脂酰膽堿含量的影響

注：表中上標(biāo)*表示與對照組相比，差異顯著(p<0.05)。上標(biāo)**表示與對照組相比，差異極顯著(p<0.01)。

4.2對蛋黃、蛋白磷脂酰膽堿(卵磷脂)含量的影響

如表16所示，在添加氯化膽堿20周后，添加16000mg/kg氯化膽堿組蛋黃中卵磷脂含量極顯著高于未添加組(p<0.01)，比未添加組升高26.5％；添加1000mg/kg氯化膽堿和未添加組沒有顯著差異。所有各組蛋白中均未檢出卵磷脂。

表16氯化膽堿對蛋黃、蛋白中磷脂酰膽堿(卵磷脂)含量的影響

注：表中上標(biāo)**表示與對照組相比，差異極顯著(p<0.01)。

三、結(jié)論

通過綜合分析生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)數(shù)據(jù)，得出如下結(jié)論：

3.1飼料中添加氯化膽堿高于1000mg/kg即對蛋雞生產(chǎn)性能有不利影響。其中，添加劑量達(dá)1000mg/kg時即對產(chǎn)蛋率有不利影響，尤其是達(dá)4000mg/kg時對產(chǎn)蛋率有顯著不利影響；添加劑量達(dá)2000mg/kg時對產(chǎn)蛋量有顯著不利影響；添加劑量達(dá)16000mg/kg時可顯著降低每枚蛋的蛋重。

3.2過量氯化膽堿可以增加蛋殼厚度,4000mg/kg效果最好，大于8000mg/kg反而會降低蛋殼厚度。添加氯化膽堿(1000mg/kg)可提高蛋白高度，過量添加氯化膽堿可降低蛋白高度。

3.3添加氯化膽堿可提高雞蛋中卵磷脂含量，添加量與卵磷脂含量呈線性正相關(guān)。添加16000mg/kg氯化膽堿，雞蛋卵磷脂含量比未添加組提高26.5％。

3.4蛋雞飼料中添加氯化膽堿2000mg/kg時既不影響蛋雞的產(chǎn)蛋量，又可以有效地降低蛋雞所產(chǎn)雞蛋的蛋重，并且添加氯化膽堿的量為0～1000mg/kg時不影響蛋雞的產(chǎn)蛋率。

本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)一步設(shè)計以如實施例2所示的實驗以評價1000mg/kg以下劑量的有效性和安全性。

實施例2氯化膽堿在蛋雞飼料中應(yīng)用的試驗效果研究(19周齡-68周齡，49周)

(一)材料與方法

1.試驗設(shè)計

選取540只19周齡體重相近健康海蘭褐蛋雞隨機分為6組，氯化膽堿添加水平分別為0(對照組)、500、1000、2000、4000和8000mg/kg。每組設(shè)6個重復(fù)，每個重復(fù)15只雞。飼養(yǎng)周期分2階段：試驗第一階段(19～58周齡)，試驗第二階段(59～68周齡)。

2.試驗日糧

試驗基礎(chǔ)日糧參考nrc(1994)配制，日糧組成及營養(yǎng)成分見表18和19。氯化膽堿(ar，純度≥98.0％)由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

3.飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗在動物營養(yǎng)國家重點實驗室昌平基地代謝室進(jìn)行，采用3層梯形式籠養(yǎng)，每籠(長×寬×高：40cm×38cm×38cm)3只雞，相鄰的5個籠為一個重復(fù)。每天定時喂料2次(2×60g)，自由采食和飲水。采用光照程序控制器控制光照，試驗開始時每天光照14h，以后每周增加光照時間30min直到16h(6：00至22：00)，試驗期雞舍溫度保持22±3℃，相對濕度45％～65％。

4.樣品采集及指標(biāo)測定

4.1飼料固有膽堿含量測定

試驗飼料配制前，采集飼料原料玉米和豆粕，測定其固有膽堿含量。飼料每4周配一次，各試驗組取樣250g于-20℃保存待測。采用離子色譜法(ics-2500，美國dionex公司)測定飼料中固有膽堿含量。飼料樣通過0.42mm孔篩，準(zhǔn)確稱取2g(精確至0.0001g)樣品于50ml離心管中，加入25ml超純水高速漩渦1min，70℃超聲波萃取30min，萃取過程中搖晃混勻3次。隨后在往復(fù)振蕩器上振蕩10min。室溫3000g離心10min后轉(zhuǎn)入到50ml離心管中，重復(fù)上述操作，超純水定容至50ml，搖勻。取0.5ml濾液，加4.5ml超純水過0.45μm濾膜，上機測定。

4.2生產(chǎn)性能

試驗期間，每天以重復(fù)為單位記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重以及死淘數(shù)，根據(jù)死淘數(shù)調(diào)整每天加料量；每周末進(jìn)行結(jié)料，并記錄耗料量，計算20～58周齡、59～68周齡的采食量、產(chǎn)蛋率、蛋重、料蛋比以及產(chǎn)蛋量。

4.3蛋品質(zhì)

試驗期間，每4周末以重復(fù)為單位采集所有雞蛋12h內(nèi)進(jìn)行蛋品質(zhì)測定。1)蛋殼強度測定：蛋殼強度測試儀(model-iii,robotmationco.ltd.,tokyo,japan)；2)蛋殼厚度測定：蛋殼厚度檢測器(modelp-1,ozakimfg.co.ltd.,tokyo,japan)；3)蛋白高度、哈氏單位及蛋黃顏色測定：蛋品質(zhì)分析儀(emt-5200,robotmationco.ltd.,tokyo,japan)。

58和68周末，絕食12h后每重復(fù)分別隨機選取4、6只雞稱重屠宰，屠宰前選取1只雞，分別使用抗凝與不抗凝的一次性真空采血管采取頸靜脈血樣各5ml。血液室溫放置30min，3000轉(zhuǎn)/min離心10min，血清、血漿樣分裝于-70℃保存。雞只屠宰前稱重，開膛，迅速取整個肝臟稱重，取部分左側(cè)肝樣于-70℃保存待測。26、38、58和68周末，以重復(fù)為單位收集當(dāng)天所有雞蛋，分離蛋黃和蛋清并稱重，采集蛋黃樣于-20℃保存待測。

4.4肝臟、蛋黃總脂含量測定

肝臟和蛋黃總脂測定方法參照folch等(1957)和trampel等(2005)。測定步驟：稱取樣品2g于50ml離心管中，加入50μl丁基羥基甲苯(7.2％溶與乙醇)和30mlfolchⅰ溶液(氯仿：甲醇＝2:1，v/v)冰浴下高速勻漿30s(ultra-turraxt10，ikaworksinc，usa)。蓋上離心管，室溫靜置12h后過濾到100ml量筒中，濾紙用10mlfolchⅰ溶液沖洗兩次。量筒中加入8ml的0.88％的nacl溶液，小心搖勻。然后用5mlfolchⅱ溶液(氯仿：甲醇：水＝3:47:48，v/v/v)沖洗量筒內(nèi)壁兩次。靜置5h后記錄脂層體積，小心移除上層溶液(甲醇和水)，吸取20ml脂層于玻璃閃爍瓶中，液氮流下50℃干燥5h，恒重。脂質(zhì)含量(％)＝脂質(zhì)重量(g)/肝臟重(g)×100。

4.5肝臟、蛋黃甘油三酯(tg)含量測定

肝臟甘油三酯測定參照slama(2007)，稱取1g肝臟，加入12mlfolchⅰ溶液冰浴條件下高速勻漿30s，室溫抽提5h，過濾，folchⅰ溶液定容至50ml。根據(jù)甘油三酯測定試劑盒進(jìn)行測定(中生北控生物科技股份有限公司，北京)。蛋黃甘油三酯測定前處理參照(elkin和rogler，1990)，1g蛋黃樣品加入15mlfolchⅰ溶液，冰浴下勻漿30s，蓋上蓋子，搖勻。靜置30min后重新?lián)u晃混勻，超聲波萃取后過濾，靜置分層。根據(jù)甘油三酯測定試劑盒進(jìn)行測定(中生北控生物科技股份有限公司，北京)。

4.6蛋黃總膽固醇(tc)、卵磷脂(pc)含量測定

蛋黃總膽固醇含量參照pasin等(1998)采用酶比色法測定。稱取3g蛋黃液，加入27ml2％(w/v，0.32m)的nacl溶液，在室溫下?lián)u床震蕩2h(蓋上蓋子，防止揮發(fā))。然后取上述混合液1ml，加入9ml2％(w/v)的nacl溶液制備成待測樣，采用總膽固醇試劑盒測定(中生北控生物科技股份有限公司，北京)。測定樣包括0.1ml的2％(w/v)nacl溶液，1ml的工作液，0.01ml的待測混合液。

蛋黃卵磷脂測定參照陳艷輝(2011)，采用分光光度法測定。取5g蛋黃液于50ml離心管中，加入90ml(3×30ml)95％的乙醇，冰浴條件下勻漿，40℃超聲波10min，3000轉(zhuǎn)/min離心10min，將上清液溶液轉(zhuǎn)移到容量瓶，用無水乙醇定容至100ml。取10ml蛋黃乙醇溶液于消化管中蒸干乙醇。消化管冷卻后，加入3ml硫酸和3ml高氯酸－硝酸混合液，置于電爐上消化。待溶液變?yōu)闊o色液體時，即消化完全。溶液冷卻后，向消化管中加入20ml的超純水，轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，用超純水多次洗滌消化管并轉(zhuǎn)入到容量瓶中，定容，待測。

4.7血清總膽固醇、甘油三酯含量測定

血清總膽固醇、甘油三酯含量測定分別采用總膽固醇測定試劑盒(北京北化康泰臨床試劑有限公司，北京)和甘油三酯測定試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，北京)。測定方法(gpo-pap法)按試劑盒說明書進(jìn)行。

4.8肝臟病理學(xué)檢測

取各試驗組蛋雞肝臟，于10％中性福爾馬林溶液中預(yù)固定24h，組織修整后重新固定于10％中性福爾馬林溶液中。常規(guī)法石蠟包埋，5μm連續(xù)切片，h..e.染色，自然晾干后光鏡下觀察并拍照。

5.數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)采用sas統(tǒng)計軟件glm模型進(jìn)行anova分析，組間差異以duncan法進(jìn)行多重比較(duncan，1955)；利用正交多項式進(jìn)行趨勢分析(kuehl，1994)。產(chǎn)蛋率經(jīng)反正弦轉(zhuǎn)換后進(jìn)行統(tǒng)計分析，以p<0.05為顯著水平。

表1719-58周齡試驗日糧組成及營養(yǎng)水平

每千克日糧添加：va8000iu，vd32200iu，ve20iu，vk2mg，硫胺素1.5mg，核黃素2.5mg，吡哆醇2.5mg，vb120.02mg，煙酸20mg，泛酸5mg，葉酸0.3mg，生物素0.1mg，錳80mg，鋅65mg，鐵60mg，銅8mg，碘0.8mg，硒0.3mg。

表1859-68周齡試驗日糧組成及營養(yǎng)水平

每千克日糧添加：va8000iu，vd32200iu，ve20iu，vk2mg，硫胺素1.5mg，核黃素2.5mg，吡哆醇2.5mg，vb120.02mg，煙酸20mg，泛酸5mg，葉酸0.3mg，生物素0.1mg，錳80mg，鋅65mg，鐵60mg，銅8mg，碘0.8mg，硒0.3mg。

(二)試驗結(jié)果

1.飼料膽堿含量

如表17和18所示，基礎(chǔ)日糧中固有膽堿含量分別為700和653mg/kg；由表19可見，玉米和豆粕中固有膽堿含量分別為324和2045mg/kg。

表19玉米、豆粕中固有膽堿含量(mg/kg)

2.氯化膽堿對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

試驗記錄和統(tǒng)計了各處理20～58周齡和59～68周齡的生產(chǎn)性能，見表20。20～58周齡和59～68周齡蛋雞平均采食量分別為113.6和116.6g。各處理組間采食量無顯著差異(p>0.05)。氯化膽堿對蛋雞產(chǎn)蛋率、蛋重、產(chǎn)蛋量和料蛋比均無顯著影響，但20～58周齡蛋雞產(chǎn)蛋率隨膽堿含量增加呈線性降低(p<0.05)，蛋重隨飼料中膽堿含量增加呈二次曲線增加趨勢(p＝0.052)。添加8000mg/kg氯化膽堿組產(chǎn)蛋率和產(chǎn)蛋量最低，料蛋比最高。

3.氯化膽堿對蛋雞體重和死淘率的影響

如表21所示，與對照組相比，添加2000、4000和8000mg/kg的氯化膽堿顯著降低(p<0.05)58周齡的蛋雞體重與體增重。并且58周齡蛋雞體重與體增重隨氯化膽堿添加量增加呈線性、二次曲線降低(p<0.01和p<0.05)。補充氯化膽堿對68周齡的蛋雞體重?zé)o顯著影響(p>0.05)，但顯著增加59～68周齡蛋雞體增重(p<0.01)。整個試驗期，蛋雞死淘率無顯著差異(p>0.05)，20～58周齡和59～68周齡蛋雞死淘率分別為3.34％和2.07％。

4.氯化膽堿對蛋品質(zhì)的影響

氯化膽堿對蛋品質(zhì)的影響如表22所示。58周齡蛋雞蛋黃重與氯化膽堿添加量呈二次曲線增加(p<0.05)。68周齡，添加氯化膽堿組蛋黃重均高于對照組，但數(shù)據(jù)統(tǒng)計上無顯著差異。59～68周齡蛋雞蛋白高度和哈氏單位隨氯化膽堿添加量增加呈線性升高(p<0.01和p<0.05)。與對照組相比，添加500和1000mg/kg的氯化膽堿顯著提高(p<0.01)20～58周齡蛋雞蛋黃顏色。整個試驗期，添加氯化膽堿對蛋殼厚度和蛋殼強度無顯著影響(p>0.05)

表20氯化膽堿對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

同一行肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(p<0.05)。下同

表21氯化膽堿對蛋雞體重和死亡率的影響

表22氯化膽堿對蛋品質(zhì)的影響

5.氯化膽堿對蛋雞肝臟重、肝臟總脂及甘油三酯(tg)的影響

氯化膽堿對蛋雞相對肝重、肝臟總脂及tg的影響如表23所示。日糧中添加氯化膽堿對58和68周齡蛋雞相對肝重?zé)o影響。添加氯化膽堿降低蛋雞肝臟脂肪含量，其中，添加2000和4000mg/kg氯化膽堿顯著降低肝臟脂肪含量(p<0.05)。添加2000mg/kg氯化膽堿組蛋雞肝臟脂肪含量最低，與對照組相比，58和68周齡肝臟脂肪含量分別降低了9.69％和9.90％。添加氯化膽堿降低肝臟甘油三酯含量，其中，添加2000和4000mg/kg氯化膽堿顯著降低肝臟甘油三酯含量(p<0.05和p<0.001)。58和68周齡，添加2000和4000mg/kg氯化膽堿組肝臟甘油三酯含量最低，與對照組相比分別下降了36.01％和38.48％。

表23.氯化膽堿對產(chǎn)蛋雞相對肝臟重、肝臟總脂及甘油三酯含量的影響

6.氯化膽堿對蛋雞血清總膽固醇、甘油三酯含量的影響

膽堿對蛋雞血清總膽固醇和甘油三酯含量的影響如表24所示，日糧中添加氯化膽堿對58和68周齡蛋雞血清中總膽固醇和甘油三酯含量無顯著影響(p>0.05)。

表24氯化膽堿對產(chǎn)蛋雞血清總膽固醇和甘油三酯含量的影響

7.氯化膽堿對蛋黃總脂、甘油三酯含量的影響

膽堿對蛋黃總脂和tg的影響如表25所示，日糧中添加氯化膽堿增加蛋黃總脂含量。58和68周齡對照組蛋雞蛋黃總脂含量(mg/g)分別為330和322。添加1000～8000mg/kg氯化膽堿顯著增加58和68周齡蛋雞蛋黃中總脂含量(mg/g)；添加4000和8000mg/kg氯化膽堿顯著增加(p＝0.001)58周齡蛋雞蛋黃中總脂含量(mg/蛋黃)。其中，添加4000mg/kg氯化膽堿組蛋黃總脂含量最高，分別為341和330(mg/g)。添加氯化膽堿提高58和68周齡蛋雞蛋黃中甘油三酯含量(mg/g)，但差異不顯著(p>0.05)。58周齡，添加1000～4000mg/kg氯化膽堿顯著增加(p<0.05)蛋黃甘油三酯含量(mg/蛋黃)；68周齡，添加氯化膽堿組蛋黃甘油三酯含量(mg/蛋黃)均高于對照組，但差異不顯著(p>0.05)。

表25氯化膽堿對蛋黃總脂、甘油三酯含量的影響

8.氯化膽堿對蛋黃總膽固醇和卵磷脂含量的影響

氯化膽堿對蛋黃總膽固醇和卵磷脂的影響如表26所示，26、38、58和68周齡對照組蛋雞蛋黃中總膽固醇含量(mg/g)分別為11.80、12.54、12.75和12.48，添加氯化膽堿對蛋黃總膽固醇含量無顯著影響(p>0.05)。26周齡時，添加氯化膽堿(500～8000mg/kg)顯著增加蛋黃卵磷脂含量(p<0.001)；添加1000～8000mg/kg氯化膽堿顯著增加38、58和68周齡蛋雞蛋黃卵磷脂含量(p<0.001和p<0.05)。

表26氯化膽堿對蛋黃總膽固醇和卵磷脂含量的影響

三、結(jié)論

1.本試驗所用未添加氯化膽堿的玉米豆粕型飼料，固有膽堿含量達(dá)700mg/kg，能滿足蛋雞對膽堿的需要。

2.玉米豆粕型日糧中，添加500～1000mg/kg的氯化膽堿增加開產(chǎn)和產(chǎn)蛋高峰期(19-58周齡)蛋黃顏色；添加氯化膽堿提高產(chǎn)蛋后期(59-68周齡)蛋白高度和哈氏單位。

3.日糧中添加2000～4000mg/kg氯化膽堿降低蛋雞肝臟脂肪和甘油三酯含量，添加2000氯化膽堿組肝臟脂肪含量最低。

4.日糧中添加氯化膽堿提高蛋雞蛋黃總脂含量，其中，添加4000mg/kg氯化膽堿組雞蛋的蛋黃總脂含量最高。添加氯化膽堿對蛋黃總膽固醇無影響，增加蛋黃甘油三酯和卵磷脂含量。

盡管本發(fā)明已進(jìn)行了一定程度的描述，明顯地，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的條件下，可進(jìn)行各個條件的適當(dāng)變化?？梢岳斫猓景l(fā)明不限于所述實施方案，而歸于權(quán)利要求的范圍，其包括所述每個因素的等同替換。