本發(fā)明涉及石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽在農(nóng)藥上的應(yīng)用，特別涉及抗植物病毒的應(yīng)用，殺菌抑菌的應(yīng)用，殺蟲的應(yīng)用，屬于農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

世界人口劇增，糧食問題一直是全球亟待解決的重要課題。農(nóng)藥的應(yīng)用帶來了糧食的增產(chǎn)，但隨著社會的進步，人們的環(huán)保及健康意識逐漸提高，從而對傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥所帶來的環(huán)境問題和社會問題進行了重新評估。高效、高選擇性和環(huán)境友好的新型綠色農(nóng)藥的創(chuàng)制逐漸受到關(guān)注，并將成為未來農(nóng)藥發(fā)展的必然趨勢(農(nóng)藥，1999，38(10)，9～10.)。天然產(chǎn)物是生物活性化合物的寶庫，能為化學(xué)農(nóng)藥的創(chuàng)制提供先導(dǎo)結(jié)構(gòu)。石蒜堿是石蒜科植物中分離得到的第一個生物堿，也是該科植物中最普遍的生物堿，具有多種生理活性(有機化學(xué)，2015，35，1009～1021)。cn105193806a公開了石蒜堿作為hmgb1蛋白抑制劑的新用途。cn105079776a公開了一種以石蒜堿和硼替佐米組合物用于制備治療多發(fā)性骨髓瘤的藥物制劑。cn104800217a公開了一種中草藥小分子單體化合物石蒜堿(lycorine)在制備用作前列腺腫瘤相關(guān)疾病治療的潛在藥物中的應(yīng)用。cn1562022公開了治療白血病和多發(fā)性骨髓瘤的化合物單體——石蒜堿。cn1557313公開了治療白血病和多發(fā)性骨髓瘤的植物提取物及其天然化合物單體。天然化合物單體包括石蒜堿、高石蒜堿、水仙克拉辛、多花水仙堿、前多花水仙堿、石蒜倫堿、偽石蒜堿，主要用于治療白血病和多發(fā)性骨髓瘤。cn102626095b授權(quán)了含有石蒜堿7-17％，增效成分3-12％，農(nóng)藥助劑2-9％，竹醋液70-88％地下害蟲驅(qū)避劑及用途。cn103749487a授權(quán)了含有生物堿2.7-4.6％的防治黃瓜霜霉病的農(nóng)藥組合物，其中生物堿為苦參堿、藥根堿、槐果堿、石蒜堿中的兩種以上混合物2.7-4.6％。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供石蒜堿及石蒜堿鹽酸鹽在農(nóng)藥上的應(yīng)用，特別涉及抗植物病毒，殺菌，殺蟲的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的石蒜堿(lycorine)和石蒜堿鹽酸鹽的結(jié)構(gòu)式如下：

本發(fā)明提供的石蒜堿(lycorine)和石蒜堿鹽酸鹽有很好的抗植物病毒活性和很好的殺菌活性以及很好的殺蟲活性。

本發(fā)明提供的石蒜堿在500mg/l和100mg/l濃度下的抗煙草花葉病毒活性比市售抗病 毒劑病毒唑活性好，石蒜堿鹽酸鹽在500mg/l條件下的抗煙草花葉病毒活性和病毒唑活性相當。

本發(fā)明提供的石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對番茄早疫、小麥赤霉、馬鈴薯晚疫、辣椒疫霉、油菜菌核、黃瓜灰霉、水稻紋枯都有抑制作用，尤其對辣椒疫霉具有很強的抑制活性，在50mg/l的濃度下對辣椒疫霉的抑制率為100％。

本發(fā)明提供的石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對粘蟲、蚊幼蟲、棉鈴蟲、玉米螟、蚜蟲和小菜蛾有毒殺活性，尤其石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對蚊幼蟲和小菜蛾有很強的毒殺作用，石蒜堿在10ppm濃度下對小菜蛾毒殺率達45％，石蒜堿鹽酸鹽在1ppm濃度下對小菜蛾毒殺率達30％，石蒜堿鹽酸鹽在0.5ppm濃度下對蚊幼蟲的毒殺作用達60％。

本發(fā)明提供的石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽作為農(nóng)藥可以直接使用，可加上農(nóng)業(yè)上接受的載體使用，也可以復(fù)配使用。

具體實施方式

下述的實施例和生物測試結(jié)果可以用來進一步說明本發(fā)明，但不意味著限制本發(fā)明。

實施例1：抗煙草花葉病毒：

測定程序如下

病毒提純及濃度測定：病毒提純及濃度測定參照南開大學(xué)元素所生測室編制煙草花葉病毒sop規(guī)范執(zhí)行。病毒粗提液經(jīng)2次聚乙二醇離心處理后，測定濃度，4℃冷藏備用。

化合物溶液配制：稱量后，原藥加入dmf溶解，制得1×10^-5μg/ml母液，后用含1‰吐溫80水溶液稀釋至所需濃度；

離體作用：摩擦接種珊西煙適齡葉片，用流水沖洗，病毒濃度10μg/ml。甩干后剪下，沿葉中脈對剖，左右半葉分別浸于1‰吐溫水及藥劑中，30min后取出，于適宜光照溫度下保濕培養(yǎng)，每3片葉為1次重復(fù)，重復(fù)3次。3天后記錄病斑數(shù)，計算防效。

活體保護作用：選長勢均勻一致的3-5葉期珊西煙，全株噴霧施藥，每處理3次重復(fù)，并設(shè)吐溫80水溶液對照。24h后，葉面撒布金剛砂(500目)，用毛筆蘸取病毒液，在全葉面沿支脈方向輕擦2次，葉片下方用手掌支撐，病毒濃度10μg/ml，接種后用流水沖洗。3天后記錄病斑數(shù)，計算防效。

活體治療作用：選長勢均勻一致的3-5葉期珊西煙，用毛筆全葉接種病毒，病毒濃度為10μg/ml，接種后用流水沖洗。葉面收干后，全株噴霧施藥，每處理3次重復(fù)，并設(shè)1‰吐溫80水溶液對照。3天后，記錄病斑數(shù)，計算防效。

活體鈍化作用：選長勢均勻一致的3-5葉期珊西煙，將藥劑與等體積的病毒汁液混合鈍化30min后，摩擦接種，病毒濃度20μg/ml，接種后即用流水沖洗，重復(fù)3次，設(shè)1‰吐溫80水溶液對照。3天后數(shù)病斑數(shù)，計算結(jié)果。抑制率(％)＝[(對照枯斑數(shù)-處理枯斑數(shù))/對照枯斑數(shù)]×100％

石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽的抗煙草花葉病毒活性測試結(jié)果如下：

表1石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽抗煙草花葉病毒(tmv)活性

從表1可以看出天然產(chǎn)物石蒜堿在500mg/l和100mg/l濃度下的抗煙草花葉病毒活性比市售抗病毒劑病毒唑活性好，石蒜堿鹽酸鹽在500mg/l條件下的抗煙草花葉病毒活性和病毒唑活性相當。

實施例2：殺菌活性：

測定程序如下

以番茄早疫病菌為例，可以換成其他菌。

離體測試方法：將番茄早疫病菌接到pda培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天，用打孔器在菌落邊緣制取直徑4cm的菌碟接種到含有50μg/ml和不含藥劑的pda培養(yǎng)基上培養(yǎng)4天，量取菌落直徑，與對照比較計算出藥劑的抑制百分率。

石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽的殺菌活性測試結(jié)果如下：

表2石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽的殺菌活性

從表2可以看出石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽在50mg/l對番茄早疫、小麥赤霉、馬鈴薯晚疫、辣椒疫霉、油菜菌核、黃瓜灰霉、水稻紋枯都有抑制作用，其中對辣椒疫霉的抑制率達到100％。

實施例3：殺蟲活性

蚊幼蟲的活性測試

蚊幼蟲的實驗方法：尖音庫蚊淡色亞種，室內(nèi)詞養(yǎng)的正常群體。稱取供試化合物約5mg于盤尼西林藥瓶中，加5ml丙酮(或適宜溶劑)，振蕩溶解，即為1000ppm母液。移取0.5ml母液，加入盛有89.9ml水的100ml燒杯中，選取10頭4齡初蚊子幼蟲，連同10ml飼養(yǎng)液一并倒入燒杯中，其藥液的濃度即為5ppm。放入標準處理室內(nèi)，24h檢查結(jié)果。以含有0.5ml實驗溶劑的水溶液為空白對照。

石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對蚊幼蟲毒殺活性測試結(jié)果如下：

表3石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對蚊幼蟲的毒殺活性

(注：-表示未測定)

從表3可以看出石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對蚊幼蟲有很強的毒殺作用，特別是石蒜堿鹽酸鹽在0.5ppm濃度下的毒殺作用達60％。

小菜蛾幼蟲活性測試

采用國際抗性行動委員會(irac)提出的浸葉法。在分析天平上稱取2mg藥樣于10ml小燒杯中，加50μl二甲基甲酰胺(分析純)溶解，加10ml水制成200ppm藥液。用直頭眼科鑷子浸漬甘藍葉片，時間2～3秒，甩掉余液。每次1片，每個樣品共3片。按樣品標記順序依次放在處理紙上。待藥液干后，放入具有標記的10cm長的直型管內(nèi)，接入2齡小菜蛾幼蟲，用紗布蓋好管口。將實驗處理置于標準處理室內(nèi)，96h后檢查結(jié)果。每個化合物重復(fù)3次。對照只向蒸管水中加入乳化劑和溶劑，搜拌均勻。

石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對小菜蛾毒殺的活性測試結(jié)果如下：

表4石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對小菜蛾毒殺的活性

(注：-表示未測定)

從表4可以看出石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對小菜蛾有很強的毒殺作用，石蒜堿在10ppm濃度下毒殺率達45％，石蒜堿鹽酸鹽在1ppm濃度下毒殺率達30％。

棉鈴蟲和玉米螟活性測試

棉鈴蟲的實驗方法：飼料混藥法，從配置好的溶液中移取3ml加入約27g的剛配置好的飼料中，從而得到稀釋十倍的所需濃度。藥劑混勻后均勻地倒入干凈的24孔板中，晾涼后接入24頭三齡棉鈴蟲，觀察3-4天后檢查結(jié)果。

玉米螟的試驗方法：浸葉法，配置后所需濃度后，把直徑約為5-6cm的葉片浸入藥液中5-6秒，取出，放在吸水紙上晾干，放在指定的培養(yǎng)皿中，接入10頭3齡幼蟲，放入27±1℃的養(yǎng)蟲室中觀察3-4天后檢查結(jié)果。

石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對棉鈴蟲和玉米螟毒殺的活性測試結(jié)果如下：

表5石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對棉鈴蟲和玉米螟的毒殺活性

粘蟲和朱砂葉螨活性測試

粘蟲的實驗方法：浸葉法，配置后所需濃度后，把直徑約為5-6cm的葉片浸入藥液中5-6秒，取出，放在吸水紙上晾干，放在指定的培養(yǎng)皿中，接入10頭3齡幼蟲，放入27±1℃的養(yǎng)蟲室中觀察3-4天后檢查結(jié)果。

朱砂葉螨的實驗方法：對幼螨的選擇，首先要獲得產(chǎn)卵期一致的卵，可用24小時內(nèi)產(chǎn)的卵，在卵孵化前(25℃條件下產(chǎn)卵后的第5天)取下有卵葉片，剪成小塊放在具兩片真葉的葉片上面，在溫室中日光照射下，一天后新孵化的幼螨可轉(zhuǎn)移到新葉上。可根據(jù)試驗要求，選擇幼螨發(fā)育階段進行藥劑處理，每個被測植株的蟲量應(yīng)不少于60頭。用直頭眼科鑷子將接種過朱砂葉螨幼螨的豌豆苗葉片放入配好的藥液中，確保全部浸染，時間2-3秒，甩掉余液。每次一株，每株2個葉片。待藥液干后，放入具有標記的直徑10cm長的培養(yǎng)皿中，96小時檢查結(jié)果每個化合物重復(fù)3次。對照只向蒸餾水中加入乳化劑和溶劑，攪拌均勻。

石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對粘蟲和朱砂葉螨毒殺的活性測試結(jié)果如下：

表6石蒜堿和石蒜堿鹽酸鹽對粘蟲和朱砂葉螨的毒殺活性