1.一種野外分離中華散尾鬼筆子實(shí)體的方法,其特征在于具體方法如下:
(1)采集子實(shí)體前的準(zhǔn)備工作:將自制便攜式超凈工作臺用75%的酒精擦拭消毒;配制PDA培養(yǎng)基,在121℃高壓蒸汽滅菌20min;將手術(shù)刀、火柴、鑷子、記號筆、PDA培養(yǎng)基分別用75%的酒精擦拭消毒后放入便攜式超凈工作臺,夾在C型管卡上;卡住卡扣密封。
(2)夏末秋初攜帶自制便攜式超凈工作臺進(jìn)入林場,在落葉松林下地被物上采集中華散尾鬼筆進(jìn)行分離。
(3)采集到的中華散尾鬼筆子實(shí)體在自制便攜式超凈工作臺外用浸有0.1%的升汞的棉球擦拭消毒,然后用錫紙包住,放入自制便攜式超凈工作臺,卡住卡扣密封,打開紫外燈滅菌20min。關(guān)閉紫外燈,打開日光燈。雙手從手套中伸入自制便攜式超凈工作臺,點(diǎn)燃酒精盒,將手術(shù)刀從C型管卡上取下,在酒精盒火焰中來回幾次,后橫向切開頭部與菌柄交界處的子實(shí)體,然后取下鑷子在酒精盒火焰中來回幾次,后撕取一小塊0.5cm左右的內(nèi)層網(wǎng)狀組織,在火焰附近接入PDA培養(yǎng)基,然后將試管管口和棉塞在火焰中來回幾次,塞好棉塞,用記號筆在試管外壁標(biāo)記。把用過的手術(shù)刀和鑷子在酒精盒火焰中來回幾次,同記號筆和火柴一起,夾回C型管卡上。
(4)分離完成后,熄滅酒精盒,打開自制便攜式超凈工作臺,把接種好的真菌培養(yǎng)基和殘留的中華散尾鬼筆子實(shí)體取出,用75%的酒精溶液擦拭自制便攜式超凈工作臺,卡住卡扣密封,以備下一次分離操作使用。
(5)接種好的培養(yǎng)基在25℃下避光培養(yǎng)15d至長滿培養(yǎng)皿。
2.如權(quán)利要求1所述一種野外分離中華散尾鬼筆子實(shí)體的方法,其特征在于分離時(shí)取中華散尾鬼筆子實(shí)體頭部與菌柄交界處的內(nèi)層網(wǎng)狀組織。
3.如權(quán)利要求1所述一種野外分離中華散尾鬼筆子實(shí)體的方法,其特征在于可以提高分離成功率。
4.如權(quán)利要求1所述一種野外分離中華散尾鬼筆子實(shí)體的方法,其特征在于使用自制便攜式超凈工作臺進(jìn)行子實(shí)體的組織分離:
(1)自制便攜式超凈工作臺體積小,輕便,可移動,采集中華散尾鬼筆子實(shí)體過程中可全程攜帶。
(2)自制便攜式超凈工作臺前壁,側(cè)壁和上壁的前半部分的材質(zhì)為有機(jī)玻璃,操作時(shí),視野開闊,且有機(jī)玻璃質(zhì)量輕,減輕了自制便攜式超凈工作臺的重量。
(3)自制便攜式超凈工作臺的前壁可以打開,方便放入材料和工具,也方便取出殘留材料和接種好的真菌培養(yǎng)基。
(4)自制便攜式超凈工作臺帶有卡扣和硅膠密封條,可以密封。
(5)自制便攜式超凈工作臺帶有酒精盒,使分離操作可以在火焰附近進(jìn)行,并且可以在火焰中對工具進(jìn)行滅菌,避免了交叉污染。
(6)酒精盒內(nèi)裝有固體酒精,沒有流動性,方便攜帶。
(7)自制便攜式超凈工作臺分離時(shí)雙手從手套中伸入工作臺,防止污染。
(8)手套采用硅膠材質(zhì),耐高溫,并且能提高操作靈敏度。
(9)自制便攜式超凈工作臺的內(nèi)壁有C型管卡,可以固定試管及各種工具。
(10)自制便攜式超凈工作臺帶有鋰聚合物電池,電量可供一天野外操作。
(11)自制便攜式超凈工作臺帶紫外燈,可以在進(jìn)行分離操作前對便攜式超凈工作臺內(nèi)部環(huán)境進(jìn)行滅菌。
(12)自制便攜式超凈工作臺帶有日光燈,在昏暗條件下也可以進(jìn)行組織分離操作。
5.如權(quán)利要求3所述的自制便攜式超凈工作臺,其特征在于也可以用于野外分離其他區(qū)大型真菌子實(shí)體。