本發(fā)明涉及作物遺傳育種領域，尤其涉及一種大大加快了小麥赤霉病抗性育種速度、顯著縮短赤霉病抗病育種周期的小麥赤霉病抗病育種方法。
背景技術：
小麥赤霉?。?i>Fusarium head blight，F(xiàn)HB），又名紅頭瘴、爛麥頭、麥穗枯、紅麥頭，是全球性小麥主要病害之一，由亞洲鐮刀菌（Fusarium asiaticum）和禾谷鐮刀菌（F.graminearium）引發(fā)的，主要發(fā)生于溫暖濕潤地區(qū)。中國長江中下游麥區(qū)和東北東部春麥區(qū)為該病的主要流行區(qū)，致病菌以禾谷鐮刀菌為主，占小麥赤霉病病原菌的94.5%。20世紀60年代以后陜西關中灌區(qū)赤霉病逐年加重。80年代以后，由于擴大灌溉、氣候變暖、秸稈還田等原因，小麥赤霉病逐漸向黃淮麥區(qū)、北方麥區(qū)等地區(qū)擴展。1985年全國赤霉病大流行，僅河南省發(fā)病面積就達到3.0×106hm2。2000年以來，赤霉病在中國大流行頻率不斷增加，發(fā)病面積呈明顯擴大趨勢，有9個年份赤霉病的發(fā)生面積超過3.3×106hm2，目前中國小麥受害面積約為7.00×106hm2，其中長江中下游冬麥區(qū)是小麥赤霉病的多發(fā)區(qū)和重發(fā)區(qū)。中國黃淮麥區(qū)、關中麥區(qū)以及東北東部春麥區(qū)近年來小麥赤霉病發(fā)生也日趨嚴重。
赤霉病嚴重威脅小麥安全生產(chǎn)，一般流行年份可引起5%～10%的產(chǎn)量損失，大流行年份可導致相當田塊絕收，從而嚴重影響著國內(nèi)小麥主產(chǎn)區(qū)的糧食安全和食品安全。赤霉病不僅造成小麥產(chǎn)量巨大損失，使小麥的產(chǎn)量和品質(zhì)下降，該病菌為害小麥后，可產(chǎn)生多種真菌毒素，其中以脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）毒性最強。這些毒素會污染面粉，并可在食物鏈中長期存留，產(chǎn)生致癌物質(zhì)，嚴重影響籽粒的食用、飼用和種用價值。因此，小麥赤霉病已成為世界高度關注的一類病害。
目前，小麥赤霉病的防治主要依賴于化學防治，但防治藥劑較少，抗性產(chǎn)生嚴重。20世紀80年代發(fā)現(xiàn)灰霉病菌、甜菜霜霉病菌等對多菌靈產(chǎn)生了抗藥性，給化學防治帶來嚴峻的考驗。另外，采用栽培措施和化學防治方法雖然取得了一定的防治效果，但均不能從根本上解決赤霉病的為害，尤其是抽穗期噴施農(nóng)藥后籽粒農(nóng)藥殘留和環(huán)境污染問題突出，因此選育抗赤霉病品種仍然是目前解決這一問題的最經(jīng)濟有效方法。
在初期小麥抗赤霉病育種中主要采用傳統(tǒng)的抗病育種方法進行育種，如利用引種、選擇育種、雜交育種等常規(guī)育種途徑選育出一批垂直抗性和水平抗性較好的優(yōu)良品種和品系，但是常規(guī)育種消耗時間長，需要長期大量的人工大田篩選，費時費力，效率低下，已越來越不能滿足小麥赤霉病抗病育種的需求。
與傳統(tǒng)的育種方法相比，單倍體育種可以縮短育種時間提高選擇效率。從20世紀70年代以來，單倍體育種技術已廣泛的用于小麥育種，至今已培育出許多優(yōu)良品種，是小麥育種的有效途徑之一，而且單倍體誘導可以與分子標記和遺傳操作技術相結合用于作物的遺傳改良研究。目前，小麥單倍體育種主要是通過花藥培養(yǎng)途徑來實現(xiàn)的。
已有研究表明，禾谷鐮刀菌侵染小麥后可以產(chǎn)生脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）為主的次生代謝毒素，小麥對DON毒素的敏感性與小麥赤霉病抗性呈負相關。因此，利用赤霉病病菌毒素對小麥進行篩選成為赤霉病抗病育種的重要思路。但是，普通小麥是6倍體，體細胞中含有6個染色體組，42條染色體，基因組龐大，而且小麥對赤霉病的抗性受數(shù)量性狀控制，抗性遺傳復雜，基因的補償效應導致常規(guī)的小麥組織對赤霉病的抵抗消弱了小麥組織對赤霉病毒素的敏感性，導致常規(guī)的粗毒素篩選敏感性不強。
通?；ㄋ幣囵B(yǎng)育種階段會產(chǎn)生大量的小麥單倍體植株，通?；ㄅ嗟恼T導培養(yǎng)階段和分化培養(yǎng)階段應盡量減少單倍體植株的比例，通過自然加倍或者人工誘導加倍來盡量實現(xiàn)單倍體植株恢復倍性。然而，單倍體植株由于其染色體組和染色體數(shù)量減半，單倍體植株對赤霉病毒素的敏感性大大提高，成為我們的重點研究方向。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有小麥赤霉病抗病育種育種周期長、需要大量的人工大田篩選、效率低下等缺陷，提供了一種大大加快了小麥赤霉病抗性育種速度、顯著縮短赤霉病抗病育種周期的小麥赤霉病抗病育種方法。
本發(fā)明的目的是通過以下技術方案解決的：
一種小麥赤霉病抗病育種方法，其特征在于：該育種方法的步驟如下：
（1）篩選小麥赤霉病高抗資源和育種主干親本：在小麥赤霉病重災區(qū)采用多年多點法小區(qū)種植小麥資源，調(diào)查小麥資源庫各材料赤霉病發(fā)病率，選取發(fā)病率低于0.5%且抗性穩(wěn)定的小麥品種或家系作為小麥赤霉病高抗資源；選擇小麥赤霉病抗性不足但農(nóng)藝性狀優(yōu)良的地方主栽品種作為育種主干親本；正季種植小麥赤霉病高抗資源和育種主干親本；
（2）鑒定赤霉病粗毒素篩選壓：選取步驟（1）種植的赤霉病高抗資源和育種主干的花藥分別進行花藥誘導培養(yǎng)獲得花藥愈傷，在分化培養(yǎng)基中加入梯度濃度的粗毒素提取液，然后將赤霉病高抗資源和育種主干親本的花藥愈傷轉(zhuǎn)移到該分化培養(yǎng)基中進行分化培養(yǎng)，篩選赤霉病高抗資源和育種主干親本花藥愈傷分化率均為0.75%～1.5%的分化培養(yǎng)基添加的粗毒素濃度水平，將二者的平均值的粗毒素水平確定為赤霉病粗毒素篩選壓；
（3）將赤霉病高抗資源和育種主干親本雜交，獲得F1雜交種：將步驟（1）正季種植的赤霉病高抗資源和育種主干親本雜交，獲得F1雜交種；
（4）F1雜交種花培獲得單倍體植株：F1雜交種正季播種種植，選取健壯主穗花藥進行花藥誘導培養(yǎng)，獲得花藥愈傷組織，并挑選直徑0.5～0.8cm的花藥愈傷接種于添加了赤霉病粗毒素篩選壓的分化培養(yǎng)基中分化培養(yǎng)，獲得單倍體植株；
（5）單倍體植株繼代壯根：待單倍體植株苗長至3-5cm之后轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基進行繼代壯根，15d后可觀察到單倍體植株生長出旺盛的白色根系，打開封口膜煉苗；
（6）單倍體植株浸根加倍：將壯根并煉苗后的小麥單倍體植株取出，洗凈根部培養(yǎng)基殘留，剪去部分根須，留根長度2～3cm，用添加了2%二甲基亞砜+0.5‰秋水仙堿溶液浸泡根系，25℃條件下處理24h，處理結束后再用清水將藥液沖洗干凈，然后將植株移栽到溫室中，遮陰5～7d后常規(guī)栽培管理；
（7）花培苗單株收種獲得花培家系，進一步農(nóng)藝性狀、赤霉病抗性篩選獲得小麥赤霉病抗性品系：溫室種植小麥花培苗，單株收種獲得赤霉病抗性得到改良的小麥赤霉病新家系，不同花培家系進一步大田播種，農(nóng)藝性狀、赤霉病抗性篩選獲得農(nóng)藝形狀良好且赤霉病抗性得到改良的小麥新品系。
所述步驟（2）和步驟（4）中小麥花藥誘導培養(yǎng)的過程如下：
（a）花藥取材與低溫預處理：花培材料常規(guī)大田種植，4月中下旬小麥孕穗期時于每日9點～11點取材小孢子發(fā)育處于單核晚期的主莖穗的中部小穗，剝掉旗葉外其他葉子，75%酒精擦拭表面后插入盛少許純凈水的燒杯中，用黑色塑料袋套住杯子，放入4℃冰箱低溫預處理3～5d；
（b）花藥接種：預處理后取出材料，用75%酒精消毒幼穗表面，然后放進超凈工作臺，從旗葉中撥出麥穗放入滅菌過的消毒盒中，倒入1‰升汞溶液至幼穗浸沒，期間不時晃動瓶子，保證幼穗與消毒液浸泡均勻，消毒10min后，將幼穗用無菌水沖洗3～4次，用消毒后的鑷子夾取幼穗中部小穗兩邊的花藥，最后用消毒過的剪刀剪開花藥上部，抖藥法接種花藥于小麥花藥誘導培養(yǎng)基上；
（c）誘導培養(yǎng)：將小麥花藥誘導培養(yǎng)基置于24～26℃的黑暗環(huán)境中誘導愈傷組織，30～40天后在花藥的邊緣出現(xiàn)白-淡黃色的無定型細胞團，即小麥花藥愈傷組織。
所述步驟（a）中的取材小孢子發(fā)育處于單核晚期的麥穗的形態(tài)學標準為：幼穗頂部位于旗葉的葉耳與旗葉葉耳1/3～2/3處的小麥植株，用剪刀沿著莖部剪斷所獲得的部分。
所述步驟（b）和（c）中的小麥花藥誘導培養(yǎng)基為改良癸培養(yǎng)基，其配方為：NH4NO3200mg/L，KNO3 1400mg/L，KH2PO4 500mg/L，CaCl2 150mg/L，MgSO4?7H2O 100mg/L，Na2-EDTA 37.25mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.85mg/L，MnSO4?4H2O 4.0mg/L，ZnSO4?7H2O 2.0mg/L，生物素 2.0mg/L，H3BO3 1.5mg/L，KI 1.0mg/L，CaSO4?5H2O 0.1mg/L，CoCl2?6H2O 0.2mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，維生素B1 1.0mg/L，維生素B6 0.5mg/L，煙酸 0.5mg/L，肌醇 100mg/L，KT 1.5mg/L，IAA 0.5mg/L，絲氨酸 0.25mg/L，谷氨酰胺 5.0mg/L，水解酪蛋白 0.4g/L，植物血凝素 3.5mg/L，AgNO3 5.0mg/L，幼穗提取液 25mg/L，瓊脂 7g/L，麥芽糖 90g/L，pH值為5.8。
所述幼穗提取液的獲取方法為：將小麥幼穗洗凈后稱取30g，切成碎片，加入100ml蒸餾水，煮沸20min，用4～6層紗布過濾靜置，待沉淀后取上清液。
所述步驟（2）和（4）中粗毒素的制備方法為：大田剪取赤霉病發(fā)病麥穗，帶回實驗室-20℃下保存，提取時取出麥穗，攪碎器打碎，稱取10g樣品于150mL錐形瓶中，加入50mL84%乙腈水溶液，均質(zhì)器混勻3分鐘后過濾，濾液過MycoSep 226多功能凈化柱，取4mL凈化液于50℃水浴中氮吹至近干，以甲醇-10mmol/L乙酸銨溶液（1:1，v:v）溶解，混勻并定容至1mL，過0.22μm MICRO PES聚醚砜膜后，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
所述步驟（2）和（4）中的分化培養(yǎng)基的配方為：C17+蔗糖30g/L+瓊脂5.5g/L+AgNO31.5mg/L+山梨醇80mol/L+NAA 0.15mg/L+KT 1.5mg/L+ABA 0.1mg/L，pH值為5.8。
所述步驟（2）和（4）中的分化培養(yǎng)的條件為：將分化培養(yǎng)基置于溫度為25～27℃，光照強度為1500～2000Lx，光周期為光14h/暗10h的培養(yǎng)室條件下進行分化培養(yǎng)。
所述步驟（5）中的生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS基本培養(yǎng)基+多效唑3.0g/L，pH值為5.8；所述的生根培養(yǎng)的條件為：將生根培養(yǎng)基置于溫度為27～29℃，光照強度為2500～3000Lx，光周期為光14h/暗10h的培養(yǎng)室條件下生根壯苗。
所述步驟（5）中的煉苗方法為：將生根培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶封口膜打開，在培養(yǎng)室內(nèi)進行開瓶練苗4～6天，然后轉(zhuǎn)移到光照強度為3000～6000Lx，溫度為10～30℃，濕度為70～85%，利用自然光煉苗7～10天。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術有如下優(yōu)點：
本發(fā)明的育種方法與常規(guī)育種方法相比，通過調(diào)控小麥花藥培養(yǎng)過程，大大提高了小麥單倍體植株的誘導比例，利用小麥單倍體植株對赤霉病病菌粗毒素敏感度高的優(yōu)點進行粗毒素篩選，極大地提高了篩選效率，進而利用單倍體加倍手段獲得倍性恢復的正常六倍體小麥植株，從而大大加快了小麥赤霉病抗病育種速度，顯著縮短赤霉病抗病育種周期，3年即可實現(xiàn)赤霉病抗性育種，具有重要的產(chǎn)業(yè)價值。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
一種小麥赤霉病抗病育種方法，該育種方法的步驟如下：
（1）篩選小麥赤霉病高抗資源和育種主干親本：在小麥赤霉病重災區(qū)采用多年多點法小區(qū)種植小麥資源，調(diào)查小麥資源庫各材料赤霉病發(fā)病率，選取平均發(fā)病率低于0.5%且抗性穩(wěn)定的小麥品種或家系作為小麥赤霉病高抗資源；選擇小麥赤霉病抗性不足但農(nóng)藝性狀優(yōu)良的地方主栽品種作為育種主干親本；正季種植小麥赤霉病高抗資源和育種主干親本；
（2）鑒定赤霉病粗毒素篩選壓：選取步驟（1）種植的赤霉病高抗資源和育種主干的花藥分別進行花藥誘導培養(yǎng)，誘導培養(yǎng)的過程如下：
（a）花藥取材與低溫預處理：花培材料常規(guī)大田種植，4月中下旬小麥孕穗期時于每日9點～11點取材小孢子發(fā)育處于單核晚期的主莖穗的中部小穗，小孢子發(fā)育處于單核晚期的形態(tài)學標準為：幼穗頂部位于旗葉的葉耳與旗葉葉耳1/3～2/3處的小麥植株，用剪刀沿著莖部剪斷所獲得的部分；剝掉旗葉外其他葉子，75%酒精擦拭表面后插入盛少許純凈水的燒杯中，用黑色塑料袋套住杯子，放入4℃冰箱低溫預處理3～5d；
（b）花藥接種：預處理后取出材料，用75%酒精消毒幼穗表面，然后放進超凈工作臺，從旗葉中撥出麥穗放入滅菌過的消毒盒中，倒入1‰升汞溶液至幼穗浸沒，期間不時晃動瓶子，保證幼穗與消毒液浸泡均勻，消毒10min后，將幼穗用無菌水沖洗3～4次，用消毒后的鑷子夾取幼穗中部小穗兩邊的花藥，最后用消毒過的剪刀剪開花藥上部，抖藥法接種花藥于小麥花藥誘導培養(yǎng)基上，小麥花藥誘導培養(yǎng)基為改良癸培養(yǎng)基，其配方為：NH4NO3 200mg/L，KNO3 1400mg/L，KH2PO4 500mg/L，CaCl2 150mg/L，MgSO4?7H2O 100mg/L，Na2-EDTA 37.25mg/L，F(xiàn)eSO4?7H2O 27.85mg/L，MnSO4?4H2O 4.0mg/L，ZnSO4?7H2O 2.0mg/L，生物素 2.0mg/L，H3BO3 1.5mg/L，KI 1.0mg/L，CaSO4?5H2O 0.1mg/L，CoCl2?6H2O 0.2mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，維生素B1 1.0mg/L，維生素B6 0.5mg/L，煙酸 0.5mg/L，肌醇 100mg/L，KT 1.5mg/L，IAA 0.5mg/L，絲氨酸 0.25mg/L，谷氨酰胺 5.0mg/L，水解酪蛋白 0.4g/L，植物血凝素 3.5mg/L，AgNO3 5.0mg/L，幼穗提取液 25mg/L（幼穗提取液的獲取方法為：將小麥幼穗洗凈后稱取30g，切成碎片，加入100ml蒸餾水，煮沸20min，用4～6層紗布過濾靜置，待沉淀后將取上清液），瓊脂 7g/L，麥芽糖 90g/L，pH值為5.8；
（c）誘導培養(yǎng)：將小麥花藥誘導培養(yǎng)基置于24～26℃的黑暗環(huán)境中誘導愈傷組織，30～40天后在花藥的邊緣出現(xiàn)白-淡黃色的無定型細胞團，即小麥花藥愈傷組織；
獲得花藥愈傷后，在分化培養(yǎng)基中加入梯度濃度的粗毒素提取液，粗毒素的制備方法為：大田剪取赤霉病發(fā)病麥穗，帶回實驗室-20℃下保存，提取時取出保存的麥穗，攪碎器打碎，稱取10g樣品于150mL錐形瓶中，加入50mL84%乙腈水溶液，均質(zhì)器混勻3分鐘后過濾，濾液過MycoSep 226多功能凈化柱，取4mL凈化液于50℃水浴中氮吹至近干，以甲醇-10mmol/L乙酸銨溶液（1:1，v:v）溶解，混勻并定容至1mL，過0.22μm MICRO PES聚醚砜膜后，-20℃保存?zhèn)溆?；然后將赤霉病高抗資源和育種主干親本的花藥愈傷轉(zhuǎn)移到該分化培養(yǎng)基（分化培養(yǎng)基的配方為：C17+蔗糖30g/L+瓊脂5.5g/L+AgNO31.5mg/L+山梨醇80mol/L+NAA 0.15mg/L+KT 1.5mg/L+ABA 0.1mg/L，pH值為5.8）中，將分化培養(yǎng)基置于溫度為25～27℃，光照強度為1500～2000Lx，光周期為光14h/暗10h的培養(yǎng)室條件下分化培養(yǎng)；篩選赤霉病高抗資源和育種主干親本花藥愈傷分化率均為0.75%～1.5%的分化培養(yǎng)基添加的粗毒素濃度水平，將二者的平均值的粗毒素水平確定為赤霉病粗毒素篩選壓；
（3）將赤霉病高抗資源和育種主干親本雜交，獲得F1雜交種：將步驟（1）正季種植的赤霉病高抗資源和育種主干親本雜交，獲得F1雜交種；
（4）F1雜交種花培獲得單倍體植株：F1雜交種正季播種種植，選取健壯主穗花藥進行花藥誘導培養(yǎng)，花藥誘導培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)條件和過程同步驟（2），獲得花藥愈傷組織；并挑選直徑0.5～0.8cm的花藥愈傷接種于添加了赤霉病粗毒素篩選壓的分化培養(yǎng)基中分化培養(yǎng)，獲得單倍體植株，分化培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)條件、赤霉病粗毒素獲取方法和過程均同步驟（2）；
（5）單倍體植株繼代壯根：待單倍體植株苗長至3-5cm之后轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基（生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS基本培養(yǎng)基+多效唑3.0g/L，pH值為5.8），將生根培養(yǎng)基置于溫度為27～29℃，光照強度為2500～3000Lx，光周期為光14h/暗10h的培養(yǎng)室條件下生根壯苗；15d后可觀察到單倍體植株生長出旺盛的白色根系，將生根培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶封口膜打開，在培養(yǎng)室內(nèi)進行開瓶練苗4～6天，然后轉(zhuǎn)移到光照強度為3000～6000Lx，溫度在10～30℃，濕度為70～85%，利用自然光煉苗7～10天；
（6）單倍體植株浸根加倍：將壯根并煉苗后的小麥單倍體植株取出，洗凈根部培養(yǎng)基殘留，剪去部分根須，留根長度2～3cm，用添加了2%二甲基亞砜+0.5‰秋水仙堿溶液浸泡根系，25℃條件下處理24h，處理結束后再用清水將藥液沖洗干凈，然后將植株移栽到溫室中，遮陰5～7d后常規(guī)栽培管理；
（7）花培苗單株收種獲得花培家系，進一步農(nóng)藝性狀、赤霉病抗性篩選獲得小麥赤霉病抗性品系：溫室種植小麥花培苗，單株收種獲得赤霉病抗性得到改良的小麥赤霉病新家系，不同花培家系進一步大田播種，農(nóng)藝性狀、赤霉病抗性篩選獲得農(nóng)藝形狀良好且赤霉病抗性得到改良的小麥新品系。
實施例
2012年開始，采用本發(fā)明的赤霉病抗病育種方法進行強筋優(yōu)質(zhì)小麥新品種鄭麥9023的赤霉病抗性改良工作，其育種步驟如下。
（1）分別篩選三抗6號和鄭麥9023作為小麥赤霉病高抗資源和育種主干親本：
鄭麥9023為河南省農(nóng)科院選育的強筋類型早熟優(yōu)質(zhì)小麥品種，屬弱春性、強筋、優(yōu)質(zhì)、早熟品種，幼苗半直立，分蘗力中等，春季生長迅速，株高82厘米左右，株型緊湊直立，穗層整齊，落黃較好，穗紡錘形，長芒，白殼，硬質(zhì)白粒，畝穗數(shù)40萬左右，穗粒數(shù)32粒左右，千粒重42克以上，產(chǎn)量水平550公斤/畝左右，農(nóng)藝性狀非常好，種植面積位居我國當前優(yōu)質(zhì)小麥品種種植面積第一位，然而，鄭麥9023赤霉病抗性不高，因此，急需進行赤霉病抗病性改良。三抗6號是朝暉種業(yè)選育的半冬性早熟型小麥新品種小麥品種，該品種葉功能突出、千粒重高、穗頭大、高抗赤霉病，2012年赤霉病高發(fā)年，我們在多個試驗點小區(qū)種植小麥資源，調(diào)查小麥資源庫各材料赤霉病發(fā)病率，結果發(fā)現(xiàn)大多數(shù)小麥品種資源減產(chǎn)超過70%，而三抗6號經(jīng)受住了考驗，感病率不超過千分之一，抗病表現(xiàn)極佳，我們推斷三抗6號具有高抗赤霉病基因，因此，選用三抗6號作為小麥赤霉病高抗資源，進行鄭麥9023的赤霉病抗性改良的親本。
（2）鑒定赤霉病粗毒素篩選壓：
2013年正季種植三抗6號和鄭麥9023，選取單核晚期的花藥分別進行花藥誘導培養(yǎng)，分別獲得花藥愈傷，在分化培養(yǎng)基中加入梯度濃度的粗毒素提取液，然后分別將三抗6號和鄭麥9023的花藥愈傷轉(zhuǎn)移到該分化培養(yǎng)基中進行分化培養(yǎng)，結果如下表1、表2：
由上表1和2我們可以發(fā)現(xiàn)，三抗6號的花藥愈傷分化率為1%的分化培養(yǎng)基添加的粗毒素濃度水平約為4%，鄭麥9023的花藥愈傷分化率為1%的分化培養(yǎng)基添加的粗毒素濃度水平約為9%，取二者的平均值6.5%的粗毒素濃度添加水平確定為赤霉病粗毒素篩選壓。
同時，我們選擇不加粗毒素的分化培養(yǎng)基分化出的花培植株進行倍性鑒定，發(fā)現(xiàn)花培植株中單倍體植株的比例高達90.3%，遠遠高于常規(guī)花藥培養(yǎng)中單倍體植株的比例，進一步統(tǒng)計添加了粗毒素的分化培養(yǎng)基中分化苗的單倍體植株比例，發(fā)現(xiàn)二者并無顯著差異，因此，本發(fā)明提供的分化培養(yǎng)基可以提高愈傷組織分化階段分化出的單倍體植株的比例，減少了單倍體植株自然加倍的出現(xiàn)。
（3）將三抗6號和鄭麥9023雜交，獲得F1雜交種，F(xiàn)1雜交種花培獲得單倍體植株：
將2013年正季種植的三抗6號和鄭麥9023雜交，獲得F1雜交種，F(xiàn)1雜交種2014年正季種植，選取健壯主穗花藥進行花藥誘導培養(yǎng)，獲得花藥愈傷組織，并挑選直徑0.5～0.8cm的花藥愈傷接種于添加了6.5%粗毒素的分化培養(yǎng)基中分化培養(yǎng)，獲得單倍體植株102棵。
（4）單倍體植株繼代壯根：
待單倍體植株苗長至3-5cm之后轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基進行繼代壯根，15d后可觀察到單倍體植株生長出旺盛的白色根系，將生根培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶封口膜打開，在培養(yǎng)室內(nèi)進行開瓶練苗4～6天，然后轉(zhuǎn)移到光照強度為3000～6000Lx，溫度為10～30℃，濕度為70～85%的條件下，利用自然光煉苗7～10天。
（5）單倍體植株浸根加倍：
將壯根并煉苗后的小麥單倍體植株取出，洗凈根部培養(yǎng)基殘留，剪去部分根須，留根長度2～3cm，用添加了2%二甲基亞砜+0.5‰秋水仙堿溶液浸泡根系，25℃條件下處理24h，處理結束后再用清水將藥液沖洗干凈，然后將植株移栽到溫室中，遮陰5～7d后常規(guī)栽培管理。
（6）花培苗單株收種獲得花培家系，進一步農(nóng)藝性狀、赤霉病抗性篩選獲得小麥赤霉病抗性品系：
2015年溫室種植小麥花培苗，單株收種獲得99個花培家系，2015年正季大田播種，2016年春季進行農(nóng)藝性狀和赤霉病抗性鑒定篩選到了農(nóng)藝形狀良好且赤霉病抗性得到改良的小麥新品系2個。
由此可見，本發(fā)明的育種方法與常規(guī)育種方法相比，通過調(diào)控小麥花藥培養(yǎng)過程，大大提高了小麥單倍體植株的誘導比例，利用小麥單倍體植株對赤霉病病菌粗毒素敏感度高的優(yōu)點進行粗毒素篩選，極大地提高了篩選效率，利用單倍體加倍手段獲得倍性恢復的正常六倍體小麥植株，從而大大加快了小麥赤霉病抗病育種速度，顯著縮短赤霉病抗病育種周期，3年即可實現(xiàn)小麥赤霉病抗性育種，具有重要的產(chǎn)業(yè)價值。
以上實施例僅為說明本發(fā)明的技術思想，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍，凡是按照本發(fā)明提出的技術思想，在技術方案基礎上所做的任何改動，均落入本發(fā)明保護范圍之內(nèi)；本發(fā)明未涉及的技術均可通過現(xiàn)有技術加以實現(xiàn)。