本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang及其代謝產(chǎn)物組成的混合菌劑，尤其是一種能顯著提高胡蘿卜中總糖含量和胡蘿卜產(chǎn)量的菌劑。
背景技術(shù)：
胡蘿(Daucus carrot)，又稱甘荀，是傘形科胡蘿卜，屬于二年生草本植物。以肉質(zhì)根作蔬菜食用，栽培歷史在2000年以上。胡蘿卜中含有蛋白質(zhì)、脂肪、糖類化合物(蔗糖、葡萄糖)，粗纖維，鈣、磷、鐵，硫胺素，核黃素，尼克酰，抗壞血酸，揮發(fā)油(a-蒎烯，茨烯，月桂烯，檸檬烯)等成份。胡蘿卜中的α，β，ρ胡蘿卜素和多種類胡蘿卜素是VA的來源，細胞壁中含有極豐富的果膠酸脂。
胡蘿卜不僅是一種質(zhì)脆味美、營養(yǎng)豐富的家常蔬菜，也有很好的醫(yī)療作用：美國科學(xué)家研究證實，每天吃兩根胡蘿卜，可使血中膽固醇降低10％-20％；每天吃三根胡蘿卜，有助于預(yù)防心臟疾病和腫瘤；日本科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，胡蘿卜中的β-胡蘿卜素能有效預(yù)防花粉過敏癥、過敏性皮炎等過敏性疾病，且β-胡蘿卜素能調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的平衡，從而使身體不易出現(xiàn)過敏反應(yīng)；德國的一項研究表明，胡蘿卜含抗氧化劑胡蘿卜素，皮膚中抗氧化劑濃度高的人，皺紋明顯比皮膚中抗氧化劑濃度低的人少；中醫(yī)認為，胡蘿卜味甘、性平，無毒，入肺、脾經(jīng)，具有健脾消食，潤腸通便，殺蟲，行氣化滯，補肝明目，清熱解毒等功效；能治療食欲不振、腹脹、腹瀉、咳喘痰多、視物不明、小兒營養(yǎng)不良、麻疹、夜盲癥、便秘、高血壓、腸胃不適、飽悶氣脹等，素有“小人參”之稱。
當(dāng)前，胡蘿卜的營養(yǎng)價值已被越來越多的人認可和接受，除了傳統(tǒng)作為家常蔬菜烹飪食用之外，胡蘿卜精深加工也成為一種趨勢，如專利CN104286337A公開了一種胡蘿卜果脯的制備方法；專利CN101972018A公開了一種醫(yī)用保健用胡蘿卜濃縮汁及其制備方法；專利CN104012612A公開了一種富含胡蘿卜的學(xué)生營養(yǎng)餅干。綜上，胡蘿卜越來越多的以多種形式被人們食用或利用，提高胡蘿卜產(chǎn)量有助于提高胡蘿卜的生產(chǎn)效益，而胡蘿卜中糖分的提高有助于改善胡蘿卜口感，同時降低胡蘿卜食品加工中外源糖分的添加，提高產(chǎn)品的品質(zhì)。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于公開一種植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang組成的混合菌劑在提高胡蘿卜總糖含量和胡蘿卜產(chǎn)量中的應(yīng)用。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗研究并不懈努力，最終獲得了如下技術(shù)方案：
一種復(fù)合菌劑，該菌劑由植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang組成。
需要說明的是，本發(fā)明所采用的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)P-8，分離自內(nèi)蒙古傳統(tǒng)自然發(fā)酵酸牛奶中，具有優(yōu)異的抗胃腸道消化液耐受能力，能夠存活于動物腸道內(nèi)；該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏時間為2012年06月28日，保藏號為CGMCC No.6312。另外，本發(fā)明所采用的干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang，是從酸馬奶中分離的耐酸和耐膽汁酸的益生菌菌株；該菌株于2006年4月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心，保藏號CGMCC No.1697。
優(yōu)選地，如上所述的復(fù)合菌劑，該菌劑由植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum P-8)和干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang按1：(0.5～3)的活菌數(shù)量比組成。
本發(fā)明人在篩選抑制胡蘿卜病原菌的拮抗菌時意外發(fā)現(xiàn)，含有植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang的復(fù)合菌液對病原菌沒有明顯抑制作用，但對胡蘿卜的生長代謝有明顯的影響，尤其可以顯著提高胡蘿卜總糖含量和胡蘿卜產(chǎn)量?；诖税l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人通過接種于MRS培養(yǎng)液中培養(yǎng)發(fā)酵，將這兩種菌制備成了復(fù)合菌劑。因此，本發(fā)明提供了上述復(fù)合菌劑的應(yīng)用，即：上述的復(fù)合菌劑在提高胡蘿卜中總糖含量中的應(yīng)用；上述的復(fù)合菌劑在提高胡蘿卜產(chǎn)量中的應(yīng)用。以及，上述的復(fù)合菌劑在制備提高胡蘿卜產(chǎn)量的生長液中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及的復(fù)合菌劑可以采用如下方法制備：
(1)將所述干酪乳桿菌菌株(Lactobacillus casei)Zhang和植物乳桿菌菌株(Lactobacillus plantarum)P-8接種于MRS培養(yǎng)液，在37℃條件下培養(yǎng)12-24小時，經(jīng)離心洗滌后，在菌體沉淀上加入8％-12％滅菌脫脂牛乳液，并調(diào)整其菌數(shù)為2.0×1010cfu/mL，混勻后傾注培養(yǎng)；
(2)將步驟(1)得到的菌株培養(yǎng)物接種于MRS培養(yǎng)液，在37℃條件下培養(yǎng)12-24小時，再接種8％-12％的滅菌脫脂牛乳液，在37℃條件下培養(yǎng)6-10小時，調(diào)整其菌數(shù)為3×109cfu/mL，pH值為4.4～4.6。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明涉及的復(fù)合菌劑由植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang組成，這兩種菌對胡蘿卜的生長代謝有明顯的影響，尤其可以提高胡蘿卜總糖含量和胡蘿卜產(chǎn)量，從而為胡蘿卜食品的制備提供了較為理想的原料，最終改善了胡蘿卜食品的口感，降低了胡蘿卜食品加工中外源糖分的添加，提高了產(chǎn)品的品質(zhì)。
附圖說明
圖1為標準曲線，橫坐標為蔗糖濃度(μg/ml)，縱坐標為吸光值。
具體實施方式
以下通過實施例形式對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。另外，下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。
實施例1：植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum P-8)和干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang在提高胡蘿卜中總糖含量和胡蘿卜產(chǎn)量的試驗
實驗地點：萊西店埠后屯(植物乳桿菌組、干酪乳桿菌組、復(fù)合菌組和空白對照組各1.7畝)
種植管理：棚規(guī)格長115m，寬10m，每棚起壟13壟，每壟上種植蘿卜2行，株距5-6cm，每棚施基肥：硫酸鉀復(fù)合肥(N:P:K為15:15:15)300斤，有機肥600-700斤，后期不追肥。
實驗時間：2016.04.26-2016.6.23
實驗作物：胡蘿卜(品種為：孟德爾808)
使用量及方法：胡蘿卜播種結(jié)束之后，立即隨水滴灌微生物菌劑(實驗組采用的菌劑中活菌總數(shù)含量大于109cfu/mL，復(fù)合菌組中兩種菌的數(shù)量比為1:1)2升/棚，后期不在滴灌含菌水，而根據(jù)作物長勢灌溉不含菌水，保證各處理灌溉量相同。
測定方法：
1)標準曲線的制作
取6支試管按表加入試劑，再按順序加入1.0ml 90g/L苯酚溶液，搖勻，然后再加入5.0ml濃硫酸，搖勻，室溫下靜止30min。然后以空白為參比，在波長485nm處測吸光值。
2)總糖提取
從不同胡蘿卜的不同部位稱取胡蘿卜組織1.0g置于研缽中，研磨成漿，加入少量蒸餾水轉(zhuǎn)入到刻度試管中，重復(fù)洗滌3-5遍，用塑料膜封口于沸水中煮沸提取30min，待冷卻后，將濾液過濾到100ml的容量瓶中，再將殘渣回收到試管中再次煮沸10min，冷卻過濾然后定容。
3)測定
取0.5ml樣品加入1.5ml蒸餾水，然后步驟與制作標曲相同。測定時如果讀數(shù)過高，可將樣品稀釋后再進行測定。注意切記對反應(yīng)后的混合液進行稀釋
計算公式：
M0---從標曲查得的蔗糖質(zhì)量，μg；
V--樣品提取液總體積，ml；100
N--樣品提取液稀釋倍數(shù)；10倍
Vs--測定時所取樣品提取液體積，ml；0.5
M--樣品質(zhì)量.1.0
表1各處理胡蘿卜總糖含量及總產(chǎn)量
與空白對照組比較，▲P＜0.01；與植物乳桿菌組比較，P＜0.01；與干酪乳桿菌組比較，■P＜0.01。
實施例2：植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum P-8)和干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang在提高胡蘿卜中總糖含量和胡蘿卜產(chǎn)量的試驗
實驗地點：萊西店埠后屯
實驗時間：2016.04.26-2016.6.23
實驗作物：胡蘿卜(品種為：諾利紅)
使用量及方法：胡蘿卜播種之后，隨水滴灌微生物菌劑(兩種菌的數(shù)量比為1:1，活菌總數(shù)含量大于109cfu/mL)2升/棚，后期不再滴灌含菌水，而根據(jù)作物長勢灌溉不含菌水，保證各處理灌溉量相同。
種植管理方式、總糖含量測定方法(高效液相法)：同實施例1
表2各處理胡蘿卜總糖含量及總產(chǎn)量
與空白對照組比較，▲P＜0.05；與植物乳桿菌組比較，P＜0.05；與干酪乳桿菌組比較，■P＜0.05。
由表1中檢測結(jié)果可知，在胡蘿卜品種“孟德爾808”上，與空白對照組相比，復(fù)合菌組可顯著提高胡蘿卜中總糖的含量及胡蘿卜產(chǎn)量(p<0.05)；相對于空白對照，復(fù)合菌組總糖含量提高了16.70％，胡蘿卜產(chǎn)量提高了10.40％；表2中檢測結(jié)果可知，在胡蘿卜品種“諾利紅”上，與空白對照組相比，復(fù)合菌組也顯著提高了胡蘿卜中總糖的含量及胡蘿卜產(chǎn)量(p<0.05)；相對于空白對照，實驗組總糖含量提高了15.24％，胡蘿卜產(chǎn)量提高了13.79％。值得注意的是，無論是在胡蘿卜品種“諾利紅”上還是在胡蘿卜品種“孟德爾808”上，復(fù)合菌組對總糖含量的提高程度相比各單菌組均有顯著性差異(p<0.05)。