本發(fā)明屬于醫(yī)藥研究領(lǐng)域，具體涉及一種Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法及其高脂飼料的制備方法。

背景技術(shù)：

現(xiàn)有技術(shù)中，在誘導(dǎo)高血糖動(dòng)物模型中，選用動(dòng)物，常用小鼠或大鼠，也可選用兔、犬及猴等，配制不同濃度或單一濃度的STZ水溶液，采用靜脈或腹腔注射方式單次或多次重復(fù)給藥。經(jīng)過(guò)不同處理時(shí)間后檢測(cè)是否成模。分別在注射STZ前，給藥后不同時(shí)間(一般2-6個(gè)月，有1年時(shí)間)進(jìn)行血糖值測(cè)定、葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)和血清胰島素或C肽檢測(cè)，頻率均有不同，并觀察記錄動(dòng)物的體重變化和臨床癥狀。

隨著我國(guó)的糖尿病發(fā)病率急劇升高，糖尿病患者的數(shù)量也隨之增加，在動(dòng)物整體水平建立真實(shí)模擬糖尿病的疾病模型，是探討糖尿病潰瘍發(fā)病機(jī)制及臨床前藥效學(xué)評(píng)價(jià)等醫(yī)學(xué)研究的必要條件，具有十分重要的科學(xué)意義和臨床意義。

目前糖尿病動(dòng)物模型多為誘發(fā)性動(dòng)物模型。文獻(xiàn)研究結(jié)果顯示，現(xiàn)有糖尿病的動(dòng)物模型多模擬糖尿病足發(fā)病的動(dòng)脈病變，神經(jīng)病變或感染，由于各類(lèi)研究目的不同，模型的建立方法多種多樣，各模型之間差別較大，與臨床上實(shí)際的表現(xiàn)差距較大。因此，糖尿病模擬臨床實(shí)際的糖尿病病因及癥狀特征的動(dòng)物模型對(duì)于促進(jìn)實(shí)驗(yàn)研究的規(guī)范化具有重要意義。

因此，根據(jù)臨床實(shí)際的發(fā)病特征及病理改變建立模擬程度較高的動(dòng)物模型對(duì)于糖尿病的發(fā)病機(jī)制的研究及相關(guān)的手術(shù)，藥物等干預(yù)的療效評(píng)價(jià)具有重要的實(shí)際意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法及其高脂飼料的制備方法。

技術(shù)方案：一種Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法，包括如下步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)老鼠的培養(yǎng)：

56只SD雄性大鼠，為SPF級(jí)，體重200-250g，8周鼠齡，所有的大鼠飼養(yǎng)在溫度22±1℃、濕度50±10％、12h晝夜交替的環(huán)境中；

(2)模型建立：

56只SD雄性大鼠在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性適應(yīng)一周后，隨機(jī)分成兩組：A組8只，B組48只；A組每天給予普通老鼠飼料，B組每天給予高脂飼料，喂養(yǎng)8周之后，空腹12h，但不斷水，稱(chēng)重，B組按照25mg/kg的劑量腹腔注射溶于檸檬酸緩沖液的STZ溶液，其pH值為4.2–4.5，A組腹腔注射等量的檸檬酸緩沖液；一周之后，空腹12h，尾靜脈取血測(cè)定大鼠的空腹血糖，B組中血糖大于11.1mmol/L的大鼠造模成功，用于后續(xù)的糖尿病相關(guān)的試驗(yàn)研究；

(3)大鼠胰島β-細(xì)胞的電鏡觀察：

在電鏡中觀察得到：A組大鼠胰島細(xì)胞中，胰島顆粒較多，均勻的分布于細(xì)胞核周?chē)?；而B(niǎo)組大鼠的胰島細(xì)胞中的胰島顆粒數(shù)量明顯減少，且大量空泡化。

一種根據(jù)所述的Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法中的高脂飼料，包括如下組分：

作為優(yōu)化：所述普通飼料中以重量比計(jì)算：玉米30％，麩皮46％，蠶蛹3％，黃豆13％，白粉3％，魚(yú)粉5％。

一種根據(jù)所述的的高脂飼料的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱(chēng)量600-700g老鼠基礎(chǔ)飼料和10-15g花生，混勻，加入黃城HC-2000粉碎機(jī)，38000rpm/min,粉碎20min；

(2)將基礎(chǔ)飼料和花生粉末置于不銹鋼盆中，加入500ml蒸餾水，混勻；

(3)依次往不銹鋼盆中加入0.1-0.5g蔗糖、10-15g豬油、2-4g香油和4-8g雞蛋，混勻；

(4)定型，采用RX-120小型飼料加工顆粒機(jī)對(duì)上述混合物壓制成圓柱狀(長(zhǎng)5cm，直徑2cm)；

(5)烘干，將圓柱狀高脂飼料置于烘箱中，50-80℃，烘干10-12h。

有益效果：本發(fā)明中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：由本高脂飼料結(jié)合低劑量的STZ誘導(dǎo)的B組糖尿病大鼠相對(duì)于A空白大鼠的體重明顯下降，而空腹血糖明顯升高；A組空白大鼠胰島細(xì)胞中，胰島顆粒較多，均勻的分布于細(xì)胞核周?chē)?，而B(niǎo)組糖尿病大鼠的胰島細(xì)胞中的胰島顆粒數(shù)量明顯減少，且大量空泡化，這說(shuō)明B組糖尿病大鼠的胰島細(xì)胞受到了一定程度的損傷，胰島素分泌功能受損。本發(fā)明制作簡(jiǎn)單、成本低，造模成功率高，老鼠死亡率低，造模成功后血糖穩(wěn)定，對(duì)于Ⅱ型糖尿病的研究具有重要意義。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明中的A組大鼠的胰島β-細(xì)胞的電鏡示意圖；

圖2是本發(fā)明中的B組大鼠的胰島β-細(xì)胞的電鏡示意圖；

圖3是本發(fā)明中的A、B兩組大鼠的體重變化示意圖；

圖4是本發(fā)明中的A、B兩組大鼠的血糖變化示意圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例

一種Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法，包括如下步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)老鼠的培養(yǎng)：

56只SD雄性大鼠，為SPF級(jí)，體重200-250g，8周鼠齡，所有的大鼠飼養(yǎng)在溫度22±1℃、濕度50±10％、12h晝夜交替的環(huán)境中；

(2)模型建立：

56只SD雄性大鼠在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性適應(yīng)一周后，隨機(jī)分成兩組：A組8只，B組48只；A組每天給予普通老鼠飼料，B組每天給予高脂飼料，喂養(yǎng)8周之后，空腹12h，但不斷水，稱(chēng)重，B組按照25mg/kg的劑量腹腔注射溶于檸檬酸緩沖液的STZ溶液，其pH值為4.2–4.5，A組腹腔注射等量的檸檬酸緩沖液；一周之后，空腹12h，尾靜脈取血測(cè)定大鼠的空腹血糖，B組中血糖大于11.1mmol/L的大鼠造模成功，用于后續(xù)的糖尿病相關(guān)的試驗(yàn)研究；

(3)大鼠胰島β-細(xì)胞的電鏡觀察：

在電鏡中觀察得到：A組大鼠胰島細(xì)胞中，胰島顆粒較多，均勻的分布于細(xì)胞核周?chē)?；而B(niǎo)組大鼠的胰島細(xì)胞中的胰島顆粒數(shù)量明顯減少，且大量空泡化。

具體實(shí)施例1

一種根據(jù)所述的Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法中的高脂飼料，包括如下組分：

所述普通飼料中以重量比計(jì)算：玉米30％，麩皮46％，蠶蛹3％，黃豆13％，白粉3％，魚(yú)粉5％。

一種根據(jù)所述的的高脂飼料的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱(chēng)量600g老鼠基礎(chǔ)飼料和10g花生，混勻，加入黃城HC-2000粉碎機(jī)，38000rpm/min,粉碎20min；

(2)將基礎(chǔ)飼料和花生粉末置于不銹鋼盆中，加入500ml蒸餾水，混勻；

(3)依次往不銹鋼盆中加入0.1g蔗糖、10g豬油、2g香油和4g雞蛋，混勻；

(4)定型，采用RX-120小型飼料加工顆粒機(jī)對(duì)上述混合物壓制成圓柱狀：長(zhǎng)5cm，直徑2cm；

(5)烘干，將圓柱狀高脂飼料置于烘箱中，50℃，烘干10h。

具體實(shí)施例2

一種根據(jù)所述的Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法中的高脂飼料，包括如下組分：

所述普通飼料中以重量比計(jì)算：玉米30％，麩皮46％，蠶蛹3％，黃豆13％，白粉3％，魚(yú)粉5％。

一種根據(jù)所述的的高脂飼料的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱(chēng)量700g老鼠基礎(chǔ)飼料和15g花生，混勻，加入黃城HC-2000粉碎機(jī)，38000rpm/min,粉碎20min；

(2)將基礎(chǔ)飼料和花生粉末置于不銹鋼盆中，加入500ml蒸餾水，混勻；

(3)依次往不銹鋼盆中加入0.5g蔗糖、15g豬油、4g香油和8g雞蛋，混勻；

(4)定型，采用RX-120小型飼料加工顆粒機(jī)對(duì)上述混合物壓制成圓柱狀：長(zhǎng)5cm，直徑2cm；

(5)烘干，將圓柱狀高脂飼料置于烘箱中，80℃，烘干12h。

具體實(shí)施例3

一種所述的Ⅱ型糖尿病老鼠模型的建立方法中的高脂飼料，包括如下組分：

所述普通飼料中以重量比計(jì)算：玉米30％，麩皮46％，蠶蛹3％，黃豆13％，白粉3％，魚(yú)粉5％。

一種根據(jù)所述的的高脂飼料的制備方法，包括如下步驟：

(1)稱(chēng)量652g老鼠基礎(chǔ)飼料和13g花生，混勻，加入黃城HC-2000粉碎機(jī)，38000rpm/min,粉碎20min；

(2)將基礎(chǔ)飼料和花生粉末置于不銹鋼盆中，加入500ml蒸餾水，混勻；

(3)依次往不銹鋼盆中加入0.3g蔗糖、13g豬油、2.5g香油和6g雞蛋，混勻；

(4)定型，采用RX-120小型飼料加工顆粒機(jī)對(duì)上述混合物壓制成圓柱狀：長(zhǎng)5cm，直徑2cm；

(5)烘干，將圓柱狀高脂飼料置于烘箱中，60℃，烘干11h。

圖1是本發(fā)明中的A組大鼠的胰島β-細(xì)胞的電鏡示意圖。從圖中可得出如下結(jié)論：A組空白大鼠胰島細(xì)胞中，胰島顆粒較多，均勻的分布于細(xì)胞核周?chē)?/p>

圖2是本發(fā)明中的B組大鼠的胰島β-細(xì)胞的電鏡示意圖。從圖中可得出如下結(jié)論：B組糖尿病大鼠的胰島細(xì)胞中的胰島顆粒數(shù)量明顯減少，且大量空泡化。

圖3是本發(fā)明中的A、B兩組大鼠的體重變化示意圖。從圖中可得出如下結(jié)論：由高脂飼料結(jié)合低劑量STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠的體重相對(duì)于空白組的健康大鼠明顯下降。

圖4是本發(fā)明中的A、B兩組大鼠的血糖變化示意圖。從圖中可得出如下結(jié)論：由高脂飼料結(jié)合低劑量STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠的空腹血糖相對(duì)于空白組的健康大鼠明顯升高。

因此，本發(fā)明中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：由本高脂飼料結(jié)合低劑量的STZ誘導(dǎo)的B組糖尿病大鼠相對(duì)于A空白大鼠的體重明顯下降，而空腹血糖明顯升高；A組空白大鼠胰島細(xì)胞中，胰島顆粒較多，均勻的分布于細(xì)胞核周?chē)?，而B(niǎo)組糖尿病大鼠的胰島細(xì)胞中的胰島顆粒數(shù)量明顯減少，且大量空泡化，這說(shuō)明B組糖尿病大鼠的胰島細(xì)胞受到了一定程度的損傷，胰島素分泌功能受損。本發(fā)明制作簡(jiǎn)單、成本低，造模成功率高，老鼠死亡率低，造模成功后血糖穩(wěn)定，對(duì)于Ⅱ型糖尿病的研究具有重要意義。

本發(fā)明不局限于上述最佳實(shí)施方式，任何人在本發(fā)明的啟示下都可得出其他各種形式的產(chǎn)品，但不論在其形狀或結(jié)構(gòu)上作任何變化，凡是具有與本申請(qǐng)相同或相近似的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。