本發(fā)明涉及農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種成綠肉座菌顆粒劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
中國(guó)是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，隨著中國(guó)人口的不斷急劇增長(zhǎng)，對(duì)農(nóng)作物的需求也越來越大，但是農(nóng)作物在種植的過程中往往由于病蟲害的發(fā)生，導(dǎo)致產(chǎn)量和質(zhì)量明顯降低。種植者為了保證農(nóng)作物能夠順利上市，滿足人民的需要，長(zhǎng)期大量使用化學(xué)農(nóng)藥來防治病蟲害的發(fā)生，以保證農(nóng)作物的產(chǎn)量和質(zhì)量。但是長(zhǎng)期使用化學(xué)農(nóng)藥，不但使種植的成本大大增加，而且化學(xué)農(nóng)藥的殘留不僅危害農(nóng)作物的品質(zhì)和人類健康，還會(huì)造成病菌對(duì)化學(xué)藥物具有耐受性，同時(shí)也會(huì)造成對(duì)農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境的污染，不利于綠色環(huán)保。
植物土傳病害是造成我國(guó)糧食、蔬菜、經(jīng)濟(jì)作物減產(chǎn)的重要病害之一，對(duì)農(nóng)作物的危害很大，嚴(yán)重影響了農(nóng)作物的生長(zhǎng)，同時(shí)也給種植者造成了經(jīng)濟(jì)損失。目前對(duì)根腐病、立枯病等植物土傳病害的防治往往采用的是化學(xué)農(nóng)藥。但是化學(xué)農(nóng)藥的使用不但增加了種植成本，而且會(huì)有農(nóng)藥的殘留，同樣也會(huì)使得根腐病、立枯病等植物土傳病害對(duì)化學(xué)農(nóng)藥具有耐受性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種成綠肉座菌顆粒劑及其制備方法。
本發(fā)明具體的技術(shù)方案如下：
本發(fā)明提供了一種成綠肉座菌顆粒劑，包括以下重量份數(shù)的組分：
藥物活性組分5～15份，所述的藥物活性組分為成綠肉座菌；
輔助劑10～25份；
藥物載體50～90份；
水15～25份。
進(jìn)一步，所述成綠肉座菌選自生物保藏編號(hào)為CGMCC No.7995的菌種。
進(jìn)一步，所述的成綠肉座菌顆粒劑的含孢量為5-50億孢子/克。
進(jìn)一步，所述的成綠肉座菌顆粒劑的雜菌率≤0.1％。
進(jìn)一步，所述的成綠肉座菌顆粒劑的粒度為400μm～2200μm。
進(jìn)一步，所述的成綠肉座菌的脫落率≤3％。
進(jìn)一步，所述輔助劑包括葡萄糖和/或玉米淀粉。
進(jìn)一步，所述藥物載體包括硅藻土、滑石粉、白炭黑、硫酸鈉、陶土和高嶺土中的一種或幾種。
進(jìn)一步，所述成綠肉座菌顆粒劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)將藥物載體、藥物活性組分和輔助劑混合、粉碎，得到粉料；
2)將所述步驟1)得到的粉料與水混合、造粒，得到成綠肉座菌顆粒劑。
進(jìn)一步，所述的成綠肉座菌顆粒劑在防治植物土傳病害方面的應(yīng)用。
本發(fā)明的成綠肉座菌顆粒劑高效、低毒，殺菌效果穩(wěn)定，能有效防治植物土傳病害。且對(duì)人畜和作物安全，安全性高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，成綠肉座菌對(duì)植物土傳病害防效高于75％。
生物保藏說明
成綠肉座菌(Hypocrea virens)，于2013年8月13日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，生物保藏編號(hào)為CGMCC No.7995。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供了一種成綠肉座菌顆粒劑，包括以下重量份數(shù)的組分：藥物活性組分5～15份，所述的藥物活性組分為成綠肉座菌；輔助劑10～25份；藥物載體50～90份；水15～25份。
本發(fā)明提供的成綠肉座菌顆粒劑優(yōu)選包括5～15份的成綠肉座菌，更優(yōu)選為8～12份，最優(yōu)選為10份。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌優(yōu)選為選自生物保藏編號(hào)為CGMCC No.7995的菌種活化培養(yǎng)得到。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌的制備方法優(yōu)選包括以下步驟：
1)將成綠肉座菌菌種活化；
2)將所述活化后的成綠肉座菌接種于成綠肉座菌一級(jí)液體培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)液體培養(yǎng)，培養(yǎng)35～50h停止培養(yǎng)，得到成綠肉座菌一級(jí)培養(yǎng)液；
3)將所述步驟2)得到的成綠肉座菌一級(jí)培養(yǎng)液接種于成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)基中進(jìn)行二級(jí)液體培養(yǎng)，培養(yǎng)50～75h停止培養(yǎng)，得到成綠肉座菌二級(jí)培養(yǎng)液；
4)將所述步驟3)得到的二級(jí)培養(yǎng)液接種于成綠肉座菌固體培養(yǎng)基中，進(jìn)行固體發(fā)酵培養(yǎng)，得到成綠肉座菌。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌菌種的活化優(yōu)選為將保藏的成綠肉座菌菌種接種于裝有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的茄型瓶中，20～35℃培養(yǎng)30～65h進(jìn)行活化培養(yǎng)。
所述活化培養(yǎng)后，本發(fā)明將所述活化后的成綠肉座菌接種于成綠肉座菌液體培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)液體培養(yǎng)。在本發(fā)明中，所述一級(jí)培養(yǎng)液的接種量?jī)?yōu)選為10～30％，更優(yōu)選為15～25％，最優(yōu)選為20％。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌二級(jí)培養(yǎng)液的接種量?jī)?yōu)選為10～30％，更優(yōu)選為15～25％，最優(yōu)選為20％。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌固體發(fā)酵培養(yǎng)的接種量?jī)?yōu)選為10～30％，更優(yōu)選為15～25％，最優(yōu)選為20％。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌一級(jí)液體培養(yǎng)基優(yōu)選包括下列質(zhì)量百分含量的組分：葡萄糖0.5％～2.0％、白砂糖0.5％～2.0％、黃豆粉0.1％～0.3％、硫酸銨0.1％～0.3％、磷酸氫二鉀0.05％～0.1％、氯化鉀0.05％～0.1％、硫酸鎂0.01％～0.04％、硫酸鐵0.00％～0.004％，余量為水；更優(yōu)選為葡萄糖0.8％～1.5％、白砂糖0.8％～1.5％、黃豆粉0.15％～0.25％、硫酸銨0.15％～0.25％、磷酸氫二鉀0.06％～0.09％、氯化鉀0.06％～0.09％、硫酸鎂0.015％～0.03％、硫酸鐵0.001％～0.003％，余量為水；最優(yōu)選為葡萄糖1％、白砂糖1％、黃豆粉0.2％、硫酸銨0.2％、磷酸氫二鉀0.08％、氯化鉀0.08％、硫酸鎂0.02％、硫酸鐵0.002％，余量為水。本發(fā)明對(duì)上述藥品的來源沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的用于制備培養(yǎng)基的藥品即可。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌液體培養(yǎng)基優(yōu)選經(jīng)120～130℃滅菌30～45min后使用。在本發(fā)明中，所述滅菌溫度更優(yōu)選為125℃；所述滅菌時(shí)間更優(yōu)選為40min。本發(fā)明對(duì)培養(yǎng)基的滅菌設(shè)備沒有特殊限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的滅菌設(shè)備即可，如高壓蒸汽滅菌鍋。
本發(fā)明對(duì)所述發(fā)酵的設(shè)備沒有特殊的限定，采用本技術(shù)領(lǐng)域熟知的發(fā)酵設(shè)備即可，如發(fā)酵罐。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌一級(jí)液體培養(yǎng)的溫度優(yōu)選為20～32℃，更優(yōu)選的為25～30℃，最優(yōu)選為28℃；所述成綠肉座菌一級(jí)液體培養(yǎng)的初始pH值優(yōu)選為5.5～6.5，更優(yōu)選的為5.8～6.2，最優(yōu)選為6.0；
本發(fā)明在所述一級(jí)液體培養(yǎng)過程中持續(xù)通入無菌空氣，優(yōu)選為接種后進(jìn)入24h內(nèi)，通氣量為5～25m3/h，培養(yǎng)24h后，通氣量為20～30m3/h；更優(yōu)選為接種后進(jìn)入24h內(nèi)，通氣量為10～20m3/h，培養(yǎng)24h后，通氣量為22～28m3/h；最優(yōu)選為接種后進(jìn)入24h內(nèi)，通氣量為15m3/h，培養(yǎng)24h后，通氣量為25m3/h。本發(fā)明對(duì)所述通入無菌空氣的設(shè)備沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的通氣設(shè)備即可，如空壓機(jī)。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌一級(jí)液體培養(yǎng)的時(shí)間優(yōu)選為35～50h，更優(yōu)選為40～48h，更優(yōu)選為45h。
得到成綠肉座菌一級(jí)液體培養(yǎng)液后，本發(fā)明將得到的成綠肉座菌一級(jí)液體培養(yǎng)液接種于成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行二級(jí)液體培養(yǎng)，得到成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)液。在本發(fā)明中，所述二級(jí)液體培養(yǎng)的接種量?jī)?yōu)選為10～30％，更優(yōu)選為15～25％，最優(yōu)選為20％。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)基優(yōu)選包括以下組分：葡萄糖1％～3％、白砂糖1％～3％、馬鈴薯粉0.5％～1.5％、黃豆粉0.5％～1.5％、玉米粉0.3％～1.0％、磷酸氫二鉀0.01％～0.02％，余量為水；更優(yōu)選為葡萄糖1.5％～2.5％、白砂糖1.5％～2.5％、馬鈴薯粉0.8％～1.2％、黃豆粉0.8％～1.2％、玉米粉0.4％～0.7％、磷酸氫二鉀0.012％～0.018％，余量為水；最優(yōu)選為葡萄糖2％、白砂糖2％、馬鈴薯粉1％、黃豆粉1％、玉米粉0.5％、磷酸氫二鉀0.015％，余量為水。本發(fā)明對(duì)上述藥品的來源沒有特殊限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的用于制備培養(yǎng)基的藥品即可。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)基優(yōu)選經(jīng)120～130℃滅菌30～45min后使用。在本發(fā)明中，所述滅菌溫度更優(yōu)選為125℃；所述滅菌時(shí)間更優(yōu)選為40min。本發(fā)明對(duì)培養(yǎng)基的滅菌設(shè)備沒有特殊限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的滅菌設(shè)備即可，如高壓蒸汽滅菌鍋。
本發(fā)明對(duì)所述發(fā)酵的設(shè)備沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的發(fā)酵設(shè)備即可，如發(fā)酵罐。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)的溫度優(yōu)選為25～35℃，更優(yōu)選的為28～32℃，最優(yōu)選為30℃；所述成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)的初始pH值優(yōu)選為5.5～6.5，更優(yōu)選的為5.8～6.2，最優(yōu)選為6.0。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)優(yōu)選在持續(xù)通入無菌空氣條件下進(jìn)行，所述通入無菌空氣的程序具體優(yōu)選為：接種到二級(jí)液體培養(yǎng)基后的24h之內(nèi)，通氣量為100～180m3/h，更優(yōu)選為120～160m3/h，最優(yōu)選為150m3/h；培養(yǎng)24h后，通氣量為200～260m3/h，更優(yōu)選為220～250m3/h，最優(yōu)選為240m3/h。本發(fā)明對(duì)所述通入無菌空氣的設(shè)備沒有特殊的 限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的通氣設(shè)備即可，如空壓機(jī)。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)的時(shí)間優(yōu)選為50～75h，更優(yōu)選為60～70h，更優(yōu)選為65h。
得到成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)液后，本發(fā)明將得到的成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)液接種于成綠肉座菌固體培養(yǎng)基中，進(jìn)行固體發(fā)酵，得到成綠肉座菌。在本發(fā)明中，所述固體發(fā)酵的接種量?jī)?yōu)選為10～30％，更優(yōu)選為15～25％，最優(yōu)選為20％。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌固體培養(yǎng)基優(yōu)選包括以下重量份的組分：麥麩64％～76％、豆粕8％～13％、玉米粉7.6％～13.5％、谷殼7.8％～13.4％，更優(yōu)選為68％～74％、豆粕9％～11％、玉米粉8.4％～11.4％、谷殼8.6％～11.2％；最優(yōu)選為麥麩70％、豆粕10％、玉米粉10％、谷殼10％。本發(fā)明優(yōu)選在所述成綠肉座菌固體培養(yǎng)基中添加蒸餾水，使固體培養(yǎng)基含水量?jī)?yōu)選為45％～55％，更優(yōu)選為47％～52％，最優(yōu)選為50％，然后進(jìn)行固體發(fā)酵。
本發(fā)明對(duì)所述固體培養(yǎng)過程的環(huán)境溫度、菌料溫度和環(huán)境濕度控制。在本發(fā)明中，所述溫度和濕度的控制程序具體優(yōu)選為：在進(jìn)入固體培養(yǎng)1～3d之內(nèi)控制環(huán)境濕度優(yōu)選為85～90％，更優(yōu)選為88％，環(huán)境溫度優(yōu)選為25～35℃，菌料溫度控制為28～30℃；在進(jìn)入固體培養(yǎng)4～5d之內(nèi)控制環(huán)境濕度為40～60％，環(huán)境溫度為30℃；6～7d之內(nèi)環(huán)境溫度優(yōu)選為30～35℃；所述固體培養(yǎng)32～36h時(shí)優(yōu)選翻盤散熱；所述固體培養(yǎng)48～55h時(shí)優(yōu)選將營(yíng)養(yǎng)液噴灑到菌料上。
在本發(fā)明中，所述營(yíng)養(yǎng)液優(yōu)選包括質(zhì)量濃度為2～7％葡萄糖和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.0005～0.002％的ZnCl2，更優(yōu)選為5％葡萄糖和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.001％的ZnCl2。本發(fā)明對(duì)所述葡萄糖和ZnCl2的來源沒有特殊限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知常規(guī)藥品即可。
在本發(fā)明中，所述營(yíng)養(yǎng)液的噴灑體積優(yōu)選為菌料體積的5～10％，更優(yōu)選為6～9，最優(yōu)選為7％。
在本發(fā)明中，所述固體培養(yǎng)基的厚度優(yōu)選為2～5cm，更優(yōu)選為2.5～3.5cm，最優(yōu)選為3cm。
完成所述成綠肉座菌固體發(fā)酵后，本發(fā)明優(yōu)選對(duì)得到孢子粉的進(jìn)行收集，得到成綠肉座菌。在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌孢子的收集具體采用微生物固態(tài)發(fā)酵真菌孢子分離設(shè)備的儀器進(jìn)行。所述微生物固態(tài)發(fā)酵真菌孢子分離設(shè)備的儀器購(gòu)自江西天人生態(tài)股份有限公司。
在本發(fā)明中，所述固體發(fā)酵得到的成綠肉座菌的有效孢子量為300億/克以上。
本發(fā)明提供的成綠肉座菌顆粒劑優(yōu)選包括10～25份輔助劑，更優(yōu)選為12～20份，最優(yōu)選為15份。本發(fā)明對(duì)所述的輔助劑的種類和來源沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的農(nóng)藥顆粒劑的輔助劑的市售商品即可。具體的可優(yōu)選葡萄糖和玉米淀粉中的一種或兩種。 在本發(fā)明中，所述輔助劑具體的可優(yōu)選7～15份葡萄糖和3～10份玉米淀粉，更優(yōu)選為8～12份葡萄糖和4～8份玉米淀粉，最優(yōu)選為10份葡萄糖和5份玉米淀粉。在本發(fā)明中，所述的輔助劑使藥物性狀穩(wěn)定，提高藥效。
本發(fā)明提供的成綠肉座菌顆粒劑優(yōu)選包括50～90份藥物載體，更優(yōu)選為65～80份，最優(yōu)選為75份。在本發(fā)明中，所述藥物載體優(yōu)選為硅藻土、滑石粉、白炭黑、硫酸鈉、陶土和高嶺土中的一種或幾種。本發(fā)明對(duì)所述的藥物載體的來源沒有特殊的限定，采用市售商品即可。在本發(fā)明中，所述藥物載體具體的可優(yōu)選為上述物質(zhì)中的任意幾種，可任意比例混合。在本發(fā)明中，所述藥物載體具體的更優(yōu)選為上述物質(zhì)中的滑石粉和高嶺土，具體的可優(yōu)選為5～15份滑石粉和45～75份高嶺土，更優(yōu)選為8～12份滑石粉和60～68份高嶺土，最優(yōu)選為10份滑石粉和65份高嶺土。本發(fā)明所述的藥物載體具有良好的藥物穩(wěn)定性，亦可提高藥物的藥效。
在本發(fā)明中，所述成綠肉座菌顆粒劑優(yōu)選包括15～25份水，更優(yōu)選為19～23份，最優(yōu)選為22份。
本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述成綠肉座菌顆粒劑的制備方法，包括以下步驟：
1)將藥物載體、藥物活性組分和輔助劑混合、粉碎，得到粉料；
2)將所述步驟1)得到的粉料與水混合、造粒，得到成綠肉座菌顆粒劑。
在本發(fā)明中，所述藥物載體、藥物活性組分和輔助劑的混合優(yōu)選為將藥物載體、藥物活性組分和輔助劑分別平均分成3～5份，更優(yōu)選為4份，將第1份藥物載體與第1份藥物活性組分混合后，再與第1份輔助劑混合，然后再與第2份藥物載體混合，再與第2份藥物活性組分混合，再與第2份輔助劑混合，以此類推，直到添加完所有的原料，再繼續(xù)優(yōu)選混合40～80min，更優(yōu)選為50～70min，最優(yōu)選為60min。本發(fā)明對(duì)所述混合的設(shè)備沒有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的混合設(shè)備即可，比如混合灌。
在本發(fā)明中，對(duì)所述粉料的粒度優(yōu)選為10～25μm，更優(yōu)選為12～20μm，最優(yōu)選為15μm。本發(fā)明對(duì)所述粉碎的條件沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的粉碎條件即可。在本發(fā)明中，所述粉碎具體的可優(yōu)選為氣流式粉碎，氣流式粉碎的軸密封壓力優(yōu)選為0.05～0.20MPa，更優(yōu)選為0.1～0.15MPa，最優(yōu)選為0.13MPa；氣流式粉碎的出料氣封壓力優(yōu)選為0.1～0.2MPa，更優(yōu)選為0.15MPa；氣流式粉碎的脈沖壓力優(yōu)選為0.3～0.7MPa，更優(yōu)選為0.4～0.6MPa，最優(yōu)選為0.5MPa；氣流式的進(jìn)料壓力優(yōu)選為0.7～0.9MPa，更優(yōu)選為 0.75～0.85MPa，最優(yōu)選為0.8MPa。本發(fā)明對(duì)所述粉碎的設(shè)備沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的粉碎設(shè)備即可。
得到粉料后，本發(fā)明將所述粉料與水混合造粒，得到成綠肉座菌顆粒。在本發(fā)明中，所述造粒的溫度優(yōu)選為50～70℃，更優(yōu)選為55～65℃，最優(yōu)選為60℃。所述成綠肉座菌顆粒的粒度優(yōu)選為400μm～2200μm，更優(yōu)選為500μm～2100μm，最優(yōu)選為600μm～2000μm。本發(fā)明對(duì)所述造粒的設(shè)備沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的造粒設(shè)備即可。
在本發(fā)明中，所述的成綠肉座菌顆粒劑的含孢量?jī)?yōu)選為5～50億孢子/克，更優(yōu)選為8～15億孢子/克，最優(yōu)選為10億孢子/克。
在本發(fā)明中，所述的成綠肉座菌顆粒劑的雜菌率≤0.1％；所述的成綠肉座菌的脫落率≤3％。
本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述的成綠肉座菌顆粒劑或上述技術(shù)方案所述方法制備得到的成綠肉座菌顆粒劑在植物土傳病害方面的應(yīng)用。具體的，可應(yīng)用的農(nóng)作物種類包括糧食作物、經(jīng)濟(jì)作物、蔬菜作物、果類作物、飼料作物等。本發(fā)明所述的成綠肉座菌顆粒劑可防治各類植物土傳病害，如灰霉病、疫病、白粉病、根腐病、枯萎病、菌核病、蔓枯病、苗期猝倒病、立枯病等。
本發(fā)明對(duì)所述的成綠肉座菌顆粒劑的施藥方法沒有特殊限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的施藥方法即可。
下面將結(jié)合本發(fā)明中的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1
成綠肉座菌的制備：將保藏的成綠肉座菌菌種接種于裝有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的茄型瓶中，30℃培養(yǎng)35h進(jìn)行活化培養(yǎng)；活化培養(yǎng)后的成綠肉座菌以20％的接種量接種于121℃滅菌35min后的一級(jí)液體培養(yǎng)基中，具體的培養(yǎng)條件為：溫度為28℃；pH值為6.0；接種后進(jìn)入24h內(nèi)，通氣量為15m3/h，培養(yǎng)24h后，通氣量為25m3/h；培養(yǎng)45h后停止培養(yǎng)，得到成綠肉座菌一級(jí)液體培養(yǎng)液；將得到的一級(jí)培養(yǎng)液以20％的接種量接種于成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)液中，具體的培養(yǎng)條件為：溫度為30℃；pH值為6.0；接種后進(jìn)入24h內(nèi)，通氣量為150m3/h，培養(yǎng)24h后，通氣量為240m3/h；培養(yǎng)65h后停止培養(yǎng)，得到成綠肉座菌二級(jí)液體培養(yǎng)液；將 得到的成綠肉座菌二級(jí)培養(yǎng)液以20％的接種量接種于固體培養(yǎng)基中，在固體培養(yǎng)基中加入蒸餾水，使固體培養(yǎng)基含水量為50％，然后進(jìn)行固體發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)條件為：在進(jìn)入固體培養(yǎng)1～3d之內(nèi)控制環(huán)境濕度優(yōu)選為90％，環(huán)境溫度優(yōu)選為25℃，菌料溫度控制為30℃；在進(jìn)入固體培養(yǎng)4～5d之內(nèi)控制環(huán)境濕度為60％，環(huán)境溫度為30℃；6～7d之內(nèi)環(huán)境溫度優(yōu)選為35℃；所述固體培養(yǎng)36h時(shí)優(yōu)選翻盤散熱，在固體培養(yǎng)50h時(shí)將營(yíng)養(yǎng)液噴灑到菌料上；將固體發(fā)酵后的菌料采用微生物固態(tài)發(fā)酵真菌孢子分離設(shè)備收集成綠肉座菌孢子，經(jīng)檢測(cè)，成綠肉座菌的有效孢子量為300億孢子/克以上。
實(shí)施例2
成綠肉座菌顆粒劑的制備：以重量份數(shù)計(jì)，將10份滑石粉、65份高嶺土、10份實(shí)施例1制備的成綠肉座菌、10份葡萄糖和5份玉米淀粉分別平均分成4堆，將第1堆滑石粉與第1堆高嶺土混合后，再與第1堆成綠肉座菌混合，再與第1堆葡萄糖混合，再與第1堆玉米淀粉混合，再與第2堆滑石粉混合，以此類推，直到所有原料全部混合完，再繼續(xù)混合60min，得到混合料；混合料經(jīng)氣流式粉碎，得到15μm的粉料；粉料再添加22份的水，在溫度60℃條件下，制造成1200μm的顆粒，得到成綠肉座菌顆粒劑。
表1實(shí)施例2制備的成綠肉座菌顆粒劑的質(zhì)量控制指標(biāo)
實(shí)施例3
成綠肉座菌顆粒劑的制備：以重量份數(shù)計(jì)，將75份高嶺土、10份實(shí)施例1制備的成綠肉座菌、15份葡萄糖分別平均分成4堆，將第1堆高嶺土與第1堆成綠肉座菌混合后，再與 第1堆葡萄糖混合，再與第2堆高嶺土混合，以此類推，直到所有原料全部混合完，再繼續(xù)混合50min，得到混合料；混合料經(jīng)氣流式粉碎，得到10μm的粉料；粉料再添加25份的水，在溫度60℃條件下，制造成1600μm的顆粒，得到成綠肉座菌顆粒劑。
實(shí)施例4
成綠肉座菌顆粒劑的制備：以重量份數(shù)計(jì)，將65份高嶺土、10份硅藻土、15份實(shí)施例1制備的成綠肉座菌、7份葡萄糖和3份玉米淀粉分別平均分成4堆，將第1堆高嶺土與第一堆硅藻土混合后，再與第1堆成綠肉座菌混合，再與第1堆葡萄糖混合，再與第一堆玉米淀粉混合，再與第2堆高嶺土混合，以此類推，直到所有原料全部混合完，再繼續(xù)混合40min，得到混合料；混合料在經(jīng)氣流式粉碎，得到12μm的粉料；粉料再添加20份的水，在溫度50℃條件下，制造成1000μm的顆粒，得到成綠肉座菌顆粒劑。
實(shí)施例5
藥效試驗(yàn)：本次試驗(yàn)在張家港進(jìn)行，防治水稻紋枯病。本次試驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)田均分為四個(gè)區(qū)域，區(qū)域1為對(duì)照組，只順壟噴施清水；區(qū)域2順壟噴施實(shí)施例2中制備的成綠肉座菌顆粒劑1000倍稀釋液；區(qū)域3順壟噴施5％井岡霉素水劑，藥物活性組分的濃度與區(qū)域2相同；區(qū)域4順壟噴施24％噻呋酰胺懸浮劑1000倍稀釋液；四個(gè)區(qū)域的用藥量相同，施藥后7天，15天，20天，30天各調(diào)查一次。采用雙行直線取樣法，每處理取5點(diǎn)，每點(diǎn)查5穴。調(diào)查各處理的總株數(shù)、病株數(shù)、病情嚴(yán)重度，計(jì)算病株率。病情指數(shù)和防效。具體結(jié)果如表3所示，由表3的數(shù)據(jù)可以得出，施藥25天區(qū)域2的防效最高，表明本發(fā)明制備的成綠肉座菌顆粒劑對(duì)水稻紋枯病效果最好，其藥效均高于井岡霉素和噻呋酰胺。
表2成綠肉座菌顆粒劑的對(duì)植物土傳病害(水稻紋枯病)的效果
從表2的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得出，本發(fā)明制備的成綠肉座菌顆粒劑25天的防效可高達(dá)75.8％，隨著施藥后時(shí)間的延長(zhǎng)，防效逐漸升高，持效期長(zhǎng)。
上述實(shí)施方式旨在舉例說明本發(fā)明可為本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員實(shí)現(xiàn)或使用，對(duì)上述實(shí)施方式進(jìn)行修改對(duì)本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，故本發(fā)明包括但不限于上述實(shí)施方式，任何符合本權(quán)利要求書或說明書描述，符合與本文所公開的原理和新穎性、創(chuàng)造性特點(diǎn)的方法、工藝、產(chǎn)品，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。