本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種提高福橘果皮中川陳皮素含量的方法。

背景技術(shù)：

柑橘是世界上最重要的水果之一。隨著人民生活水平的提高，對(duì)柑橘品質(zhì)的要求越來(lái)越高。福橘原產(chǎn)于福州，是福州市市果和傳統(tǒng)名果，有1000多年栽培歷史，主要分布于閩江兩岸，福州閩侯及長(zhǎng)樂(lè)、連江、福清等縣市。福橘由于色澤艷紅，酸甜適度，掛果快、產(chǎn)量高、且有吉祥之意，在廣東和北方城市聲譽(yù)很倍受群眾喜愛。然而，近年來(lái)在管理粗放和品種退化等原因作用下，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力下降，因此將種植、保鮮、加工、運(yùn)輸、銷售等環(huán)節(jié)連接起來(lái)，提高福橘的經(jīng)濟(jì)效益。柑橘生產(chǎn)加工伴隨大約30％-50％的皮渣副產(chǎn)物的生成。世界上許多國(guó)家對(duì)柑橘副產(chǎn)物的加工和利用途徑都進(jìn)行了大量探索和研究。據(jù)分析這些皮渣中除了含有水分、纖維素、木質(zhì)素以及豐富的微量元素外，還含有大量的香精油、色素、果膠和橘皮苷等物質(zhì)回。特別是橘皮苷是柑橘中主要的類黃酮，多甲氧基黃酮?jiǎng)t是近年來(lái)柑橘中發(fā)現(xiàn)的具有最強(qiáng)抗氧化活性的黃酮類化合物，使得柑橘皮渣作為功能食品基料和藥品原料具有廣闊的應(yīng)用和開發(fā)前景，需求也將會(huì)日益增加。川陳皮素是陳皮的重要活性物質(zhì)，同時(shí)也是福橘果皮中主要的多甲氧基類黃酮，有抗血細(xì)胞凝集、抗血栓形成、抗癌、抗真菌、抗炎、抗過(guò)敏、抗膽堿酯酶和抗癲癇作用，是碳水化合物代謝促進(jìn)劑，作為柑橘重要的保健成分之一，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和食品科學(xué)中，具有良好的應(yīng)用前景，受到大家的廣泛關(guān)注。提高福橘果實(shí)中川陳皮素含量，將為福橘果實(shí)開發(fā)利用提供新途徑，提高果品附加值，促進(jìn)福橘產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。

提高多甲氧基黃酮類化合物含量一般通過(guò)儲(chǔ)藏、栽培管理和環(huán)境調(diào)節(jié)等措施進(jìn)行。在栽培上提高黃酮類化合物成分含量的措施主要有配方施肥、水肥管理、控制光照和溫度。研究認(rèn)為紫外輻射、高光強(qiáng)、低溫、干旱、營(yíng)養(yǎng)缺乏、高濃度CO2等因素均可能促進(jìn)黃酮的合成。其中光照和溫度影響最大，可直接影響到合成途徑中的關(guān)鍵酶的活性，對(duì)植株中黃酮含量有明顯調(diào)節(jié)作用。適宜的營(yíng)養(yǎng)和水分脅迫等都能誘導(dǎo)植物黃酮類活性成分的增加。在實(shí)踐中，通過(guò)遮陰來(lái)調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度(或通過(guò)人工補(bǔ)光來(lái)增強(qiáng)紫外線照射)來(lái)實(shí)現(xiàn)植物定向栽培的光照調(diào)控技術(shù)；對(duì)于在大棚中栽培的植物，通過(guò)溫度控制來(lái)提高植物黃酮的含量；對(duì)多數(shù)植物栽培過(guò)程中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)進(jìn)行水分控制，針對(duì)性地摸索有利于特定成分提高的水分管理方案；同樣，針對(duì)植物開展配方施肥研究，摸索制定特定植物某一或某類活性成分提高的配方施肥方案。以上方法具有條件要求嚴(yán)格、耗費(fèi)人力物力較多、成本較高、提高黃酮類化合物效果不穩(wěn)定等問(wèn)題。在現(xiàn)有的報(bào)道中并未有通過(guò)授粉的方法來(lái)提高柑橘的黃酮類化合物。

茂谷橘橙原產(chǎn)美國(guó)，由佛羅里達(dá)邁阿密農(nóng)業(yè)試驗(yàn)所育成，系寬皮橘與甜橙的雜交種，是佛羅里達(dá)州的主栽品種之一?，F(xiàn)在在福建、廣西、四川等省均有種植。茂谷橘橙果實(shí)中含有豐富的川陳皮素，可溶性固形物含量高，酸甜可口，是育種的重要種質(zhì)資源。利用HPLC技術(shù)研究茂谷橘橙的黃酮類成分，主要含有橙皮苷、柚皮苷、川陳皮素、橘皮素等黃酮類化合物。Yuan-chuen Wang對(duì)臺(tái)灣栽培8個(gè)柑橘可食部分的生物活性物質(zhì)水平進(jìn)行了研究表明，在8個(gè)品種中，茂谷橘橙黃酮醇含量最高。其中川陳皮素是茂谷橘橙果皮中主要的多甲氧基類黃酮。發(fā)明人在偶然的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)了與茂谷橘橙混種的福橘果皮中川陳皮素含量高于對(duì)照福橘，并進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)以茂谷橘橙為父本的同時(shí)以福橘材料為母本可以顯著提高母本果皮中川陳皮素含量，從而進(jìn)一步提高果實(shí)的品質(zhì)性狀。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)技術(shù)不足，提供一種提高福橘果皮中川陳皮素含量的方法。本發(fā)明顯著提高了福橘果皮中的川陳皮素的含量，含量高達(dá)1710.0±27.25~1998.18±36.48μg/g，是對(duì)照福橘果皮含量的2.8倍，從而進(jìn)一步提高果實(shí)的品質(zhì)性狀。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種提高福橘果皮中川陳皮素含量的方法,以茂谷橘橙為父本，以福橘為母本，通過(guò)授粉的方法提高福橘果皮中川陳皮素含量；所述的授粉的方法為人工授粉或自然授粉。

所述人工受粉具體包括以下步驟：

（1）采集成熟的茂谷橘橙花粉，將茂谷橘橙花粉剝離、烘干、分裝和保存，備用；

（2）在福橘的花期，去掉其雄蕊，隨后將步驟（1）準(zhǔn)備好的茂谷橘橙花粉蘸到去除雄蕊的福橘雌花的柱頭上，完成人工授粉；

（3）將步驟（2）授粉后的福橘進(jìn)行套袋，1-2天摘除套袋。

所述授粉的過(guò)程中選擇晴朗天氣進(jìn)行，避免陰雨或大風(fēng)天氣進(jìn)行，提高授粉的成功率。

步驟（1）中，烘干條件為30℃烘干2天，保證茂谷橘橙花粉干燥易于儲(chǔ)存；茂谷橘橙花粉分裝后連包裝一起置于變色硅膠中，一起保存，變色硅膠，作為一種高效的吸附劑，使茂谷橘橙花粉保持干燥的條件，從而保持茂谷橘橙花粉的活力；保存溫度為4℃。

步驟（3）中1-2天摘除套袋的目的在于：一般情況下，1-2天授粉就已經(jīng)完成了，其他的花粉再落在柱頭上也不會(huì)對(duì)柑橘材料的授粉產(chǎn)生影響，所以就可以摘袋。如果套袋時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)影響座果率，所以摘除套袋的時(shí)間最好控制在1-2天。

所述自然授粉，通過(guò)在福橘主干上高接茂谷橘橙枝條，高接量占所有枝條的20%的量；或是在福橘園中間混種5株以上茂谷橘橙，在福橘園放置蜂箱養(yǎng)蜂，免除人工授粉的程序。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明以茂谷橘橙為父本，以福橘為母本，通過(guò)授粉的方法顯著提高了福橘果皮中的川陳皮素的含量，含量高達(dá)1710.0±27.25~1998.18±36.48μg/g，是對(duì)照福橘果皮含量的2.8倍，從而進(jìn)一步提高果實(shí)的品質(zhì)性狀。此外，本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，實(shí)施方便，成本低，可改變柑桔的現(xiàn)狀，并且可迅速推廣。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明不僅僅限于這些實(shí)施例。

實(shí)施例1

連續(xù)3年，在始花期到來(lái)的前1~2日，將茂谷橘橙花蕾采下帶入室內(nèi)，用鑷子或小剪刀撥開花瓣或剪去花冠，取出成熟而未開裂的花藥，平鋪于培養(yǎng)皿內(nèi)的光滑紙上，放入30℃的定溫箱內(nèi)烘干2天，催促花藥開裂，散出花粉；然后除去花藥壁和花絲等雜質(zhì)，將收集的花粉裝入小玻璃瓶中，封口，表明花粉品種名稱和采集期，然后將花粉瓶與變色硅膠置于干燥器內(nèi)，保存溫度為4℃；在福橘的花期，天氣晴朗時(shí)上午8時(shí)前去掉福橘材料的雄蕊；將準(zhǔn)備好的茂谷橘橙花粉蘸到去除雄蕊的福橘雌花的柱頭上，完成人工授粉；將完成授粉后的福橘進(jìn)行套袋，1-2天摘除套袋，隨后進(jìn)行培養(yǎng)，并在培養(yǎng)的過(guò)程中噴施?；ū９乃幬?。

實(shí)施例2

自然授粉時(shí)，通過(guò)在福橘主干上高接總枝條量的20%茂谷橘橙枝條，或是在福橘園中間混種5株以上茂谷橘橙，在福橘園放置蜂箱養(yǎng)蜂，免除人工授粉的程序。

酚類物質(zhì)的成分的測(cè)定

標(biāo)樣：沒食子酸、兒茶素、表兒茶素、綠原酸、咖啡酸、丁香酸、香豆酸、蘆丁、阿魏酸、苯甲酸、橙皮苷、柚皮苷、水楊酸、槲皮素、白藜蘆醇、川陳皮素、桔皮素購(gòu)自sigma公司。

樣品前處理

先將樣品果肉與果皮分離冷凍干燥過(guò)60目備用；0.1g樣品用1mL甲醇-DMSO(V/V.50:50)混合10min室溫，9000rpm，15min 4℃離心，重復(fù)3次，合并上清液于容量瓶中，用甲醇定容；用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾備用。

色譜條件

色譜柱Merck LiChrospher_100RP18e (250mm×4.0mm)；檢測(cè)波長(zhǎng)：0-20min:230nm；20-35min:280nm；35-42min:309nm；42-60min：280nm；柱溫：30℃；梯度洗脫：流動(dòng)相A為水﹕乙酸=98﹕2；流動(dòng)相B為乙腈。洗脫程序：0min→100min，乙腈：16%→70%，2%醋酸水混合液：84%→30%；流速：0.8ml/min。

表1 授粉福橘果實(shí)、果皮中酚類物質(zhì)的含量（μg/g）

在表1中，對(duì)照福橘和對(duì)照茂谷橘橙為普通福橘和普通茂谷橘橙，即沒有特殊授粉處理的，從表1中可以看出，本發(fā)明中的授粉福橘果皮中川陳皮素的含量為1710.0±27.25~1998.18±36.48μg/g，其值要顯著高于對(duì)照福橘茂谷橘橙中的川陳皮素含量。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。