本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)生物防治方法，特別涉及一種以生物法預(yù)防和治療刺激隱核蟲病的方法。

背景技術(shù)：

刺激隱核蟲病是海水魚寄生蟲病中危害尤為嚴(yán)重的一種。目前，對刺激隱核蟲的防治措施可以分為物理學(xué)方法和化學(xué)方法。物理學(xué)的方法主要包括淡水浸泡、溫度控制、干燥、輪換養(yǎng)殖、長時(shí)間沉淀或使用紫外線和臭氧處理養(yǎng)殖水體等，化學(xué)法主要使用福爾馬林、亞甲基南藍(lán)、高錳酸鉀、次氯酸鈉、磺胺咪唑、硫酸銅、青霉素等單獨(dú)或聯(lián)合治療刺激隱核蟲病。這些方法可在一定程度上減緩刺激隱核蟲發(fā)病的進(jìn)程，起到了一定的防治作用。但是這些方法在實(shí)際生產(chǎn)中，療效往往大打折扣。其一，實(shí)際生產(chǎn)中，開放式大水域用藥操作有局限。其二，同一種寄生蟲的生物學(xué)特性會(huì)隨著宿主和地域的不同而變化，對同一化學(xué)藥物的敏感性也會(huì)不同，而且隨著藥物長時(shí)間的應(yīng)用，蟲體必定會(huì)對其產(chǎn)生耐藥。雖然，對刺激隱核蟲免疫防治的研究取得了一定進(jìn)展，但是免疫效果并不穩(wěn)定，而且疫苗的量產(chǎn)仍然存在諸多困難。此外，免疫方式也極大的限制了該方法的應(yīng)用。

刺激隱核蟲的生活史可以劃分為滋養(yǎng)體(trophont)、包囊前體(protomont)、胞囊(tomont)和纖毛幼蟲(theront)。滋養(yǎng)體寄生在宿主上，以宿主的體液、組織碎片及細(xì)胞為食，生長3-7d后，脫離宿主，形成自由活動(dòng)的包囊前體。包囊前體下沉到水底運(yùn)動(dòng)8-12h后粘附于水底壁上。經(jīng)過一系列不對二分裂，形成很多子代纖毛幼蟲，最后纖毛幼蟲從包囊中釋放出來。纖毛幼蟲在水中快速游動(dòng)尋找感染宿主，是生活史中唯一具有感染宿主能力的階段，纖毛幼蟲感染能力在脫囊6-8h內(nèi)最強(qiáng)，18h后完全喪失感染能力。魚體上寄生的滋養(yǎng)體較少時(shí)，一般不會(huì)引起魚的死亡。如果魚感染4周后不死亡，會(huì)產(chǎn)生獲得性免疫，可以在數(shù)月內(nèi)不再感染刺激隱核蟲。滋養(yǎng)體和包囊難以殺死。纖毛幼蟲是其最脆弱的階段。消滅了纖毛幼蟲就能阻斷基本的發(fā)生和發(fā)展。

海綿、雙殼類、苔蘚蟲、藤壺、海鞘等濾食性動(dòng)物，利用鰓絲或觸手纖毛的擺動(dòng)激起水流，從而濾食或捕獲水流中的食物顆粒(主要為微藻、原生動(dòng)物等)。這些濾食性動(dòng)物具有強(qiáng)大的過濾能力，能夠過濾大量的海水，清除其中微藻和原生動(dòng)物等。利用動(dòng)物之間的攝食關(guān)系來控制被攝食者的數(shù)量，是一種非常環(huán)保高效的策略。利用濾食性動(dòng)物的濾食能力來清除養(yǎng)殖水體中刺激隱核蟲纖毛幼蟲，控制纖毛幼蟲密度，從而實(shí)現(xiàn)對刺激隱核蟲病的防治。

在自然條件下，很少出現(xiàn)刺激隱核蟲病大量爆發(fā)的情況。因?yàn)樵谧匀粭l件下，宿主聚集密度低，刺激隱核蟲不能大量繁殖。但是，水族箱等封閉水體或高密度養(yǎng)殖的網(wǎng)箱中，蟲體能在短時(shí)間內(nèi)在魚體上大量繁殖而致病。因此控制蟲體密度是刺激隱核蟲病防治的有效手段。在2009年嚴(yán)重爆發(fā)刺激隱核蟲病時(shí)，養(yǎng)殖區(qū)邊上少數(shù)漁排向深海區(qū)及時(shí)遷移，得以幸免。近幾年，在刺激隱核蟲發(fā)病期間，遠(yuǎn)離養(yǎng)殖密集區(qū)已成為防治刺激隱核蟲病非常有效的手段。這證明了減少蟲體密度，降低蟲體和宿主魚間的接觸機(jī)會(huì)是防止刺激隱核蟲病有效的措施之一。但是拖動(dòng)網(wǎng)箱費(fèi)時(shí)費(fèi)力費(fèi)用高，難以大規(guī)模在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用。然而，通過濾食性動(dòng)物降低纖毛幼蟲密度同樣可以減少蟲體和宿主魚間的接觸機(jī)會(huì)，降低發(fā)病幾率。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種可操作性強(qiáng)，成本低，安全無毒，可廣泛應(yīng)用于海水養(yǎng)殖，對刺激隱核蟲病防治結(jié)合，有效期長且沒有蟲株和血清型差異的生物防治方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

所述一種刺激隱核蟲病的生物防治方法，包括以下步驟：

(1)選用海綿、雙殼類、苔蘚蟲、藤壺、海鞘中的一種或幾種作為生物防治刺激隱核蟲病的濾食性動(dòng)物；

確定濾食性動(dòng)物的投放量：

(2)治療時(shí)濾食動(dòng)物的投放量為Q_t＝2V_s/1000CR，其中：Q_t為治療時(shí)濾食動(dòng)物的投放量(kg)，V_s為水體體積(L)，CR為清濾率L/(g﹒h)；

所述清濾率為CR＝[(lnC0-lnCt)-(lnC’0-lnC’t)]×V/(t×W)，

其中：

CR為清濾率L/(g﹒h)，C0為實(shí)驗(yàn)組開始的微藻密度(mg/L)，

Ct為實(shí)驗(yàn)組結(jié)束時(shí)微藻密度(mg/L)；C’0為相應(yīng)對照組開始的微藻密度(mg/L)，

C’t為相應(yīng)對照組結(jié)束時(shí)微藻密度(mg/L)，V為水體體積(L)，t為實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的時(shí)間(h)，

W為濾食動(dòng)物體重干重(g)；

預(yù)防時(shí)濾食動(dòng)物的投放量為Q_p＝Q_t/10，其中：Q_p為預(yù)防時(shí)濾食動(dòng)物的投放量(kg)；

(3)防治前，先將濾食性動(dòng)物暫養(yǎng)一周，每天檢查并挑除死亡個(gè)體，防治時(shí)，采用吊籠的方式將濾食性動(dòng)物均勻放置到防治水體中，每周檢查挑除死亡個(gè)體并補(bǔ)充數(shù)量。

在上述方案的基礎(chǔ)上，在防治前，先將濾食性動(dòng)物暫養(yǎng)一周，每天檢查并挑除死亡個(gè)體，防治時(shí)，采用吊籠的方式將濾食性動(dòng)物均勻放置到防治水體中，每周檢查挑除死亡個(gè)體并補(bǔ)充數(shù)量。

在上述方案的基礎(chǔ)上，所述濾食性動(dòng)物為：濕重為20-50g的濾食性動(dòng)物在6h內(nèi)將20L水體中的刺激隱核蟲纖毛幼蟲密度由100個(gè)/mL降至30個(gè)/mL以下。

在上述方案的基礎(chǔ)上，所述濾食性動(dòng)物為海綿、雙殼類、苔蘚蟲、藤壺和海鞘中的一種或幾種。

上述方法適用于封閉水體和淺海網(wǎng)箱的刺激隱核蟲病的生物防治

有益效果：利用濾食性動(dòng)物對刺激隱核蟲病生物防治的方法可操作性強(qiáng)，且不會(huì)對環(huán)境產(chǎn)生任何負(fù)面影響，實(shí)施例結(jié)果顯示，該方法對刺激隱核蟲病不僅有治療作用，還具有預(yù)防作用，被治愈的魚類在數(shù)月內(nèi)不會(huì)再患刺激隱核蟲病。本發(fā)明的關(guān)鍵是濾食性動(dòng)物的選擇和投放量的確定，選擇恰當(dāng)?shù)臑V食性動(dòng)物和適宜的投放量可以加強(qiáng)該方法的防治效果。

附圖說明：

圖1為文蛤?qū)w毛幼蟲數(shù)量的影響。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

采用文蛤?qū)Υ碳る[核蟲進(jìn)行生物防治

1文蛤選擇的依據(jù)

在5個(gè)20L的水槽中各放5個(gè)文蛤，其濕重分別為32.5g、36.2g、41.1g、33.6g和35.6g。另外5個(gè)20L水槽不放文蛤。將孵化2h內(nèi)的纖毛幼蟲計(jì)數(shù)后，按照100個(gè)/mL的密度，放到10個(gè)水槽中。在放入纖毛幼蟲3h、6h、12h和24h，分別在每個(gè)水槽4角和中央的中間水層用移液管各取2mL水樣于50mL小燒杯中并用終濃度為10％的甲醛固定10min使其沉淀于小燒杯底部。然后，小心地將上層海水吸掉，將剩余約5mL的海水連帶纖毛幼蟲全部轉(zhuǎn)移到觀察皿中。輕輕搖動(dòng)，使纖毛幼蟲集中于觀察皿中央，在顯微鏡下計(jì)數(shù)。重復(fù)取樣計(jì)數(shù)3次，取平均值作為水槽中纖毛幼蟲的密度。結(jié)果如圖1所示。文蛤自3h后能夠顯著性降低纖毛幼蟲密度(p<0.05)。在6h時(shí)，文蛤組纖毛幼蟲的密度為28個(gè)/mL，低于30個(gè)/mL。達(dá)到了作為防治刺激隱核蟲病的要求。

2文蛤使用量的確定

表1部分雙殼類的清濾率

注：貝類鮮重(貝殼完整的活體體重)約為軟體部干重25倍。

實(shí)施例2

根據(jù)表1，軟體部干重1.38g文蛤的清濾率為3.0L/(g﹒h)。貝類軟體部干重約為帶殼濕重的25倍，因此1.38g文蛤的濕重約為35g。因此，以鮮重計(jì)算的文蛤清濾率為0.12L/(g﹒h)。

根據(jù)Q_t＝2V_s/1000CR可計(jì)算出40m³室內(nèi)水泥池治療時(shí)文蛤的投放量＝2×40×10³÷0.12L/(g﹒h)÷1000＝666kg。每20kg均勻裝在一個(gè)吊籠內(nèi)，共33個(gè)吊籠均勻吊掛在水泥內(nèi)。

40m³室內(nèi)水泥池養(yǎng)殖1000尾100g左右斜帶石斑魚。發(fā)現(xiàn)魚進(jìn)食不踴躍，活動(dòng)力下降。隨機(jī)取10尾石斑魚。從每尾魚體表刮取粘液，在400倍顯微鏡視野下發(fā)現(xiàn)具有1-2個(gè)刺激隱核蟲。確認(rèn)感染刺激隱核蟲。按上述方法在水泥池中均勻吊掛文蛤。此后，每天隨機(jī)取10尾石斑魚檢查其粘液中刺激隱核蟲數(shù)量。第3天每次刮取粘液中，刺激隱核蟲的數(shù)量明顯減少為0-1個(gè)。第4天后幾乎檢測不到刺激隱核蟲。第10天收回文蛤，治療結(jié)束。在整個(gè)治療過程只死亡2尾魚。

實(shí)施例3

根據(jù)表1，軟體部干重0.98g的憎帽牡蠣的清濾率為74.8mL/(g﹒min)。軟體部干重0.98g相當(dāng)于25g鮮重。因此，以濕重計(jì)算的清濾率為2.9mL/(g﹒min)，即0.17L/(g﹒h)。

根據(jù)Q_t＝2V_s/1000CR可計(jì)算出4×4×3的淺海養(yǎng)殖網(wǎng)箱治療時(shí)憎帽牡蠣的投放量＝2×4×4×3×10³÷0.17L/(g﹒h)÷1000＝565kg。每20kg均勻裝在一個(gè)吊籠內(nèi)，共28個(gè)吊籠均勻吊掛在網(wǎng)箱內(nèi)。

4×4×3的淺海養(yǎng)殖網(wǎng)箱養(yǎng)殖500尾200g左右的斜帶石斑。魚進(jìn)食和活動(dòng)正常。夜間巡視時(shí)，手電筒照射魚體表明時(shí)偶爾會(huì)發(fā)現(xiàn)有些魚體帶有白點(diǎn)。取10尾魚刮取粘液顯微檢測。每條魚的粘液中在400倍視野中都存在5-10個(gè)刺激隱核蟲。表明魚已經(jīng)感染刺激隱核蟲。按上述方法將牡蠣吊掛在網(wǎng)箱內(nèi)。此后每天顯微鏡檢查魚體粘液刺激隱核蟲數(shù)量。第3天數(shù)量顯著降低，每個(gè)視野中有3個(gè)左右。第4天數(shù)量將為1個(gè)左右。第5天幾乎檢測不到。第6天到第10天沒有發(fā)現(xiàn)魚體表明存在刺激隱核蟲。第10天時(shí)收回牡蠣，治療結(jié)束。整個(gè)過程無魚死亡。

實(shí)施例4

根據(jù)Q_p＝Q_t/10可計(jì)算出40m³室內(nèi)水泥池預(yù)防時(shí)文蛤的投放量＝666kg÷10＝66.6kg。每6kg均勻裝在一個(gè)吊籠內(nèi)，共11個(gè)吊籠均勻吊掛在水泥內(nèi)。

40m³室內(nèi)水泥池養(yǎng)殖1000尾100g左右斜帶石斑魚。按照上述計(jì)算放置11個(gè)文蛤吊籠，每10天檢查文蛤死亡狀況，并及時(shí)補(bǔ)充。其它養(yǎng)殖管理同正常石斑魚養(yǎng)殖。刺激隱核蟲高發(fā)病率時(shí)期(5月1日至7月30日)沒有發(fā)生一次刺激隱核蟲感染。同一養(yǎng)殖場，養(yǎng)殖條件相同的兩個(gè)養(yǎng)殖池，分別發(fā)生了1次和3次刺激隱核蟲感染。

實(shí)施例5

根據(jù)Q_p＝Q_t/10可計(jì)算出4×4×3的淺海養(yǎng)殖網(wǎng)箱治療時(shí)憎帽牡蠣的投放量＝565kg/10＝56.5Kg。每5kg均勻裝在一個(gè)吊籠內(nèi)，共11個(gè)吊籠均勻吊掛在網(wǎng)箱內(nèi)。

4×4×3的淺海養(yǎng)殖網(wǎng)箱養(yǎng)殖500尾200g左右的斜帶石斑。按照上述計(jì)算放置11個(gè)憎帽牡蠣吊籠，每10天檢查憎帽牡蠣死亡狀況，并及時(shí)補(bǔ)充。其它養(yǎng)殖管理同正常石斑魚養(yǎng)殖。刺激隱核蟲高發(fā)病率時(shí)期(5月1日至7月30日)沒有發(fā)生一次刺激隱核蟲感染。而且與之緊鄰的3個(gè)養(yǎng)殖網(wǎng)箱也沒有發(fā)生刺激隱核蟲感染。100米外養(yǎng)殖條件相同的其它養(yǎng)殖網(wǎng)箱發(fā)生了1次刺激隱核蟲感染。