本發(fā)明涉及一種白鶴芋的誘導(dǎo)方法，尤其是指一種白鶴芋四倍體的誘導(dǎo)方法。

背景技術(shù)：

白鶴芋（Spathiphyllum floribundum）又名白掌，原產(chǎn)于美洲和亞洲的熱帶地區(qū)，為天南星科(Araceae) 白鶴芋屬(Spathiphyllum) 多年生草本植物。其植株葉色翠綠，花姿似鶴翹首，色澤潔白無(wú)暇，被視為"清白之花"，是重要的觀花觀葉盆栽植物，極具觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益。

當(dāng)前，白鶴芋新品種選育依靠傳統(tǒng)雜交育種存在種源單一匱乏、自然變異率低、自然結(jié)授粉率低、雌雄花期不一致等局限。現(xiàn)代發(fā)展的多倍體育種是利用人工誘變或自然變異等，通過(guò)細(xì)胞染色體組加倍獲得多倍體育種材料，用以選育符合人們需要的優(yōu)良品種，該技術(shù)打破了物種間的生殖隔離，提高了遠(yuǎn)緣物種的可交配性，利用優(yōu)良基因性狀，用于雜交育種，尤其在觀賞花卉上運(yùn)用選育的多倍體植株表現(xiàn)出巨大性，其葉片增大、葉色加深、花朵變大、花色艷麗等，可大大提高了其觀賞價(jià)值。

化學(xué)誘變劑誘變產(chǎn)生多倍體是目前常用的誘導(dǎo)方法，具操作簡(jiǎn)易、突變率高、專一性強(qiáng)和適用性廣等特點(diǎn)。其中秋水仙素是目前主要采用的誘變劑，誘導(dǎo)材料通常選取種子、頂芽、側(cè)芽以及組織培養(yǎng)中的愈傷組織、圓球莖、不定芽等分裂旺盛的器官或組織，用秋水仙素處理誘導(dǎo)效果與作用時(shí)間和使用的濃度及溫度、處理的植物種類和器官等因素有關(guān)。然而，當(dāng)前并未有完整的、高效的誘導(dǎo)白鶴芋多倍體研究報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種白鶴芋四倍體的誘導(dǎo)方法，其主要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中不具備完整的、高效的誘導(dǎo)白鶴芋多倍體方法的缺陷。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種白鶴芋四倍體的誘導(dǎo)方法，包括以下步驟：

1)選取二倍體生長(zhǎng)旺盛，葉色翠綠，株高1.5～3cm，不徒長(zhǎng)，不拔節(jié)的健壯組培苗植株；

2)切取健壯組培苗植株的莖尖芽體，接種于pH值為5.6～5.8的固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)30～45天，獲得組培苗帶芽體的愈傷組織；

其中，固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，2,4-D 0.1～0.5mg/L，白糖25～35g/L，瓊脂4～6g/L；

3)將愈傷組織接種于pH值為5.6～5.8的固體分化培養(yǎng)基中，預(yù)培養(yǎng)4～7天后，再接種于pH值為5.6～5.8的液體分化培養(yǎng)基中浸漬6～10天，并且在液體分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的期間每間隔2天搖勻一次；

其中，固體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，瓊脂4～6g/L；

液體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，濃度0.06～0.1% 的秋水仙素；

4)將經(jīng)過(guò)步驟3）培養(yǎng)后的愈傷組織取出，經(jīng)無(wú)菌水清洗1～2遍，并用無(wú)菌濾紙吸干后，再次接入固體分化培養(yǎng)基中進(jìn)行分化培養(yǎng)，30～40天后，篩查出芽粗壯、葉片肥厚的植株；

其中，本步驟中的固體分化培養(yǎng)基與步驟３）中的固體分化培養(yǎng)基配方一致；

5)將指甲油涂抹于步驟4）中篩查出的植株葉片背部，2min后，通過(guò)鑷子輕輕撕取其表面組織，并將該表面組織置于載玻片上，蓋上蓋玻片，進(jìn)行鏡檢；

6)將鏡檢得出的氣孔大小大于正常氣孔10～50%的表面組織篩選出來(lái)，并將與該表面組織相對(duì)應(yīng)的植株接種于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待該植株的根長(zhǎng)生長(zhǎng)到0.5～2cm時(shí)進(jìn)行根尖染色體篩查；

其中，生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS基本培養(yǎng)基, 萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，瓊脂4～6g/L，活性炭（AC）0.1～0.3%；

7)在無(wú)菌操作條件下，切取已生根的植株0.4～0.8cm的根尖，并進(jìn)行小苗與根尖編號(hào)；

8)在16～20℃的黑暗條件下，將根尖用0.002M的8-羥基喹啉處理液進(jìn)行預(yù)處理6～8h，期間每隔2h換一次0.002M的8-羥基喹啉處理液；

9)將預(yù)處理后的根尖用清水洗凈，并于3～5℃條件下用新鮮配制的卡諾固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）固定18～24h；

10)將卡諾固定液中的根尖取出，并在50～60℃條件下，將其依次用1MHCl酸解4～6min，蒸餾水水洗3～4次，漂洗1.5～3h，最后切取根尖分生區(qū)，并置于載玻片上將其搗碎，蘸取0.025%甲基紫1～2滴于根尖搗碎區(qū)，染色2～3min，蓋上蓋玻片，用橡皮擦輕壓成霧狀分散形態(tài)；

11)將步驟10）中做好的載玻片根尖在顯微鏡下鏡檢，將染色體數(shù)為52條的植株進(jìn)行編號(hào)和數(shù)量記錄統(tǒng)計(jì)。

進(jìn)一步的，步驟2）中的固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，2,4-D 0.3mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L。

進(jìn)一步的，步驟3）和4）中的固體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L。

進(jìn)一步的，步驟3）中的液體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，濃度0.08% 的秋水仙素。

進(jìn)一步的，步驟6）中的生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS基本培養(yǎng)基, 萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L，活性炭（AC）0.2%。

本發(fā)明中，固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基、固體分化培養(yǎng)基、液體分化培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基內(nèi)使用的 MS 基本培養(yǎng)或 1/2MS 基本培養(yǎng)基為白鶴芋種苗的生長(zhǎng)提供了 N、P、K 等無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)元素，以滿足其生長(zhǎng)的基本需求。

本發(fā)明中使用的6-芐氨基腺嘌呤，英文名稱 6-Benzylaminopurine(簡(jiǎn)稱 6-BA)，屬?gòu)V譜性植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，可促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制葉綠素的降解，提高氨基酸的含量，延緩葉片衰老等。

本發(fā)明中使用的萘乙酸，英文名稱 1-Naphthaleneacetic acid(簡(jiǎn)稱NAA)，是廣譜型植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，能促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根增加座果，防止落果，改變雌、雄花比率等。

本發(fā)明中使用的活性炭，英文名稱 activated carbon(簡(jiǎn)稱 AC)，具有吸附生長(zhǎng)中代謝的有毒物質(zhì)的作用。

和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明產(chǎn)生的有益效果在于:

1、本發(fā)明是以二倍體健壯組培苗的莖尖芽體作為外植體誘導(dǎo)帶芽的愈傷組織，采用二倍體健壯組培苗可穩(wěn)定地獲得大量誘導(dǎo)材料，縮短誘導(dǎo)材料的準(zhǔn)備時(shí)間，并且可以減少污染。

2、本發(fā)明選用二倍體健壯組培苗的莖尖芽體作為外植體誘導(dǎo)的愈傷組織作為處理材料，其具有芽體活性強(qiáng)，易于增生和分化，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

3、本發(fā)明是通過(guò)形態(tài)學(xué)、氣孔和根尖染色體檢測(cè)鑒定四倍體，存在鑒定結(jié)果可靠，操作方法簡(jiǎn)便，時(shí)間較短，易于重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)。

4、本發(fā)明是選用0.025%的甲基紫滴于根尖搗碎區(qū)，而現(xiàn)有主要采用石炭酸品紅染料，相比于現(xiàn)有技術(shù)本發(fā)明采用的0.025%的甲基紫成本更低，更加環(huán)保，并且染色效果更好。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明中氣孔大小大于正常氣孔10～50%的表面組織的顯微鏡下鏡檢示意圖。

圖2為本發(fā)明中氣孔為正常的表面組織的顯微鏡下鏡檢示意圖。

圖3為本發(fā)明中最后篩選出來(lái)的成功誘導(dǎo)四倍體的植株染色體加倍圖。

圖4為本發(fā)明中染色體沒(méi)有變化的植株染色體示意圖。

具體實(shí)施方式

下面參照附圖說(shuō)明本發(fā)明的具體實(shí)施方式。

參照?qǐng)D1、圖2、圖3和圖4。一種白鶴芋四倍體的誘導(dǎo)方法，包括以下步驟：

步驟一：

選取二倍體生長(zhǎng)旺盛，葉色翠綠，株高1.5～3cm，不徒長(zhǎng)，不拔節(jié)的健壯組培苗植株。本發(fā)明是以二倍體健壯組培苗的莖尖芽體作為外植體誘導(dǎo)帶芽的愈傷組織，采用二倍體健壯組培苗可穩(wěn)定地獲得大量誘導(dǎo)材料，縮短誘導(dǎo)材料的準(zhǔn)備時(shí)間，并且可以減少污染，并且選用二倍體健壯組培苗的莖尖芽體作為外植體誘導(dǎo)的愈傷組織作為處理材料，具有芽體活性強(qiáng)，易于增生和分化，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

步驟二：

切取健壯組培苗植株的莖尖芽體，接種于pH值為5.6～5.8的固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)30～45天，獲得組培苗帶芽體的愈傷組織；

固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，2,4-D 0.1～0.5mg/L，白糖25～35g/L，瓊脂4～6g/L；

其中，較優(yōu)的固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，2,4-D 0.3mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L。

步驟三：

將愈傷組織接種于pH值為5.6～5.8的固體分化培養(yǎng)基中，預(yù)培養(yǎng)4～7天后，再接種于pH值為5.6～5.8的液體分化培養(yǎng)基中浸漬6～10天，并且在液體分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的期間每間隔2天搖勻一次；

固體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，瓊脂4～6g/L；

其中，較優(yōu)的固體分化培養(yǎng)基配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L。

液體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）0.8～1.2 mg/L，萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，濃度0.06～0.1% 的秋水仙素；

其中，較優(yōu)的液體分化培養(yǎng)基配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，濃度0.08% 的秋水仙素。

步驟四：

將經(jīng)過(guò)步驟三培養(yǎng)后的愈傷組織取出，經(jīng)無(wú)菌水清洗1～2遍，并用無(wú)菌濾紙吸干后，再次接入固體分化培養(yǎng)基中進(jìn)行分化培養(yǎng)，30～40天后，篩查出芽粗壯、葉片肥厚的植株；

其中，本步驟中的固體分化培養(yǎng)基與步驟三中的固體分化培養(yǎng)基配方一致。

步驟五：

將指甲油涂抹于步驟四中篩查出的植株葉片背部，2min后，通過(guò)鑷子輕輕撕取其表面組織，并將該表面組織置于載玻片上，蓋上蓋玻片，進(jìn)行鏡檢。

步驟六：

將鏡檢得出的氣孔大小大于正常氣孔10～50%的表面組織篩選出來(lái)，并將與該表面組織相對(duì)應(yīng)的植株接種于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待該植株的根長(zhǎng)生長(zhǎng)到0.5～2cm時(shí)進(jìn)行根尖染色體篩查，另外，大于正常氣孔10～50%屬于較容易發(fā)現(xiàn)并篩選出來(lái)的，并不排除個(gè)別大于50%的，其也可用于培養(yǎng)。

生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS基本培養(yǎng)基, 萘乙酸（NAA）0.1～0.3mg/L，白糖25～35g/L，瓊脂4～6g/L，活性炭（AC）0.1～0.3%；

其中，較優(yōu)的生根培養(yǎng)基配方為：1/2MS基本培養(yǎng)基, 萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L，活性炭（AC）0.2%。

本發(fā)明是通過(guò)形態(tài)學(xué)、氣孔和根尖染色體檢測(cè)鑒定四倍體，存在鑒定結(jié)果可靠，操作方法簡(jiǎn)便，時(shí)間較短，易于重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)。

步驟七：

在無(wú)菌操作條件下，切取已生根的植株0.4～0.8cm的根尖，并進(jìn)行小苗與根尖編號(hào)。

步驟八：

在16～20℃的黑暗條件下，將根尖用0.002M的8-羥基喹啉處理液進(jìn)行預(yù)處理6～8h，期間每隔2h換一次0.002M的8-羥基喹啉處理液。

步驟九：

將預(yù)處理后的根尖用清水洗凈，并于3～5℃條件下用新鮮配制的卡諾固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）固定18～24h。

步驟十：

將卡諾固定液中的根尖取出，并在50～60℃條件下，將其依次用1M HCl酸解4～6min，蒸餾水水洗3～4次，漂洗1.5～3h，最后切取根尖分生區(qū)，并置于載玻片上將其搗碎，蘸取0.025%甲基紫1～2滴于根尖搗碎區(qū)，染色2～3min，蓋上蓋玻片，用橡皮擦輕壓成霧狀分散形態(tài)。

本發(fā)明選用0.025%的甲基紫滴于根尖搗碎區(qū)，而現(xiàn)有主要采用石炭酸品紅染料，相比于現(xiàn)有技術(shù)本發(fā)明采用的0.025%的甲基紫成本更低，更加環(huán)保，并且染色效果更好。

步驟十一：

將步驟十中做好的載玻片根尖在顯微鏡下鏡檢，將染色體數(shù)為52條的植株進(jìn)行編號(hào)和數(shù)量記錄統(tǒng)計(jì)。

實(shí)施例一

步驟一：

選取二倍體白鶴芋品種“香水百掌”生長(zhǎng)旺盛，葉色翠綠，株高2～2.5cm，不徒長(zhǎng)，不拔節(jié)的健壯組培苗植株。

步驟二：

切取健壯組培苗植株的莖尖芽體，接種于pH值為5.6～5.8的固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)32天，獲得組培苗帶芽體的愈傷組織；

其中，固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.0 mg/L，2,4-D 0.3mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L。

步驟三：

將愈傷組織接種于pH值為5.6～5.8的固體分化培養(yǎng)基中，預(yù)培養(yǎng)5天后，再接種于pH值為5.6～5.8的液體分化培養(yǎng)基中浸漬8天，并且在液體分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的期間每間隔2天搖勻一次；

其中，固體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L；

液體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.0mg/L，萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，濃度0.08% 的秋水仙素。

步驟四：

將經(jīng)過(guò)步驟四培養(yǎng)后的愈傷組織取出，經(jīng)無(wú)菌水清洗2遍，并用無(wú)菌濾紙吸干后，再次接入固體分化培養(yǎng)基中進(jìn)行分化培養(yǎng)，35天后，篩查出芽粗壯、葉片肥厚的植株；

其中，本步驟中的固體分化培養(yǎng)基與步驟四中的固體分化培養(yǎng)基配方一致。

步驟五：

將指甲油涂抹于步驟四中篩查出的植株葉片背部，2min后，通過(guò)鑷子輕輕撕取其表面組織，并將該表面組織置于載玻片上，蓋上蓋玻片，進(jìn)行鏡檢。

步驟六：

將鏡檢得出的氣孔大小大于正常氣孔20～40%的表面組織篩選出來(lái)，并將與該表面組織相對(duì)應(yīng)的植株接種于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待該植株的根長(zhǎng)生長(zhǎng)到1.2cm時(shí)進(jìn)行根尖染色體篩查；

其中，生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS基本培養(yǎng)基, 萘乙酸（NAA）0.2mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L，活性炭（AC）0.2%。

步驟七：

在無(wú)菌操作條件下，切取已生根的植株0.6cm的根尖，并進(jìn)行小苗與根尖編號(hào)。

步驟八：

在18℃的黑暗條件下，將根尖用0.002M的8-羥基喹啉處理液進(jìn)行預(yù)處理7h，期間每隔2h換一次0.002M的8-羥基喹啉處理液。

步驟九：

將預(yù)處理后的根尖用清水洗凈，并于4℃條件下用新鮮配制的卡諾固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）固定20h。

步驟十：

將卡諾固定液中的根尖取出，并在55℃條件下，將其依次用1MHCl酸解56min，蒸餾水水洗3次，漂洗2h，最后切取根尖分生區(qū)，并置于載玻片上將其搗碎，蘸取0.025%甲基紫1滴于根尖搗碎區(qū)，染色2min，蓋上蓋玻片，用橡皮擦輕壓成霧狀分散形態(tài)。

步驟十一：

將步驟十中做好的載玻片根尖在顯微鏡下鏡檢，將染色體數(shù)為52條的植株進(jìn)行編號(hào)和數(shù)量記錄統(tǒng)計(jì)。

實(shí)施例二

步驟一：

選取二倍體白鶴芋品種“美酒”生長(zhǎng)旺盛，葉色翠綠，株高1.8～2.2cm，不徒長(zhǎng)，不拔節(jié)的健壯組培苗植株。

步驟二：

切取健壯組培苗植株的莖尖芽體，接種于pH值為5.6～5.8的固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)36天，獲得組培苗帶芽體的愈傷組織；

其中，固體誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.1mg/L，2,4-D 0.4mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L。

步驟三：

將愈傷組織接種于pH值為5.6～5.8的固體分化培養(yǎng)基中，預(yù)培養(yǎng)6天后，再接種于pH值為5.6～5.8的液體分化培養(yǎng)基中浸漬9天，并且在液體分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的期間每間隔2天搖勻一次；

其中，固體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.1 mg/L，萘乙酸（NAA）0.25mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L；

液體分化培養(yǎng)基的配方為：MS基本培養(yǎng)基, 6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）1.1 mg/L，萘乙酸（NAA）0.25mg/L，白糖30g/L，濃度0.09%的秋水仙素。

步驟四：

將經(jīng)過(guò)步驟四培養(yǎng)后的愈傷組織取出，經(jīng)無(wú)菌水清洗2遍，并用無(wú)菌濾紙吸干后，再次接入固體分化培養(yǎng)基中進(jìn)行分化培養(yǎng)，38天后，篩查出芽粗壯、葉片肥厚的植株；

其中，本步驟中的固體分化培養(yǎng)基與步驟四中的固體分化培養(yǎng)基配方一致。

步驟五：

將指甲油涂抹于步驟四中篩查出的植株葉片背部，2min后，通過(guò)鑷子輕輕撕取其表面組織，并將該表面組織置于載玻片上，蓋上蓋玻片，進(jìn)行鏡檢。

步驟六：

將鏡檢得出的氣孔大小大于正常氣孔30～50%的表面組織篩選出來(lái)，并將與該表面組織相對(duì)應(yīng)的植株接種于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，待該植株的根長(zhǎng)生長(zhǎng)到1.5cm時(shí)進(jìn)行根尖染色體篩查；

其中，生根培養(yǎng)基的配方為：1/2MS基本培養(yǎng)基, 萘乙酸（NAA）0.25mg/L，白糖30g/L，瓊脂5g/L，活性炭（AC）0.25%。

步驟七：

在無(wú)菌操作條件下，切取已生根的植株0.7cm的根尖，并進(jìn)行小苗與根尖編號(hào)。

步驟八：

在19℃的黑暗條件下，將根尖用0.002M的8-羥基喹啉處理液進(jìn)行預(yù)處理8h，期間每隔2h換一次0.002M的8-羥基喹啉處理液。

步驟九：

將預(yù)處理后的根尖用清水洗凈，并于5℃條件下用新鮮配制的卡諾固定液（95%乙醇：冰醋酸=3:1）固定22h。

步驟十：

將卡諾固定液中的根尖取出，并在58℃條件下，將其依次用1MHCl酸解6min，蒸餾水水洗4次，漂洗2.5h，最后切取根尖分生區(qū)，并置于載玻片上將其搗碎，蘸取0.025%甲基紫2滴于根尖搗碎區(qū)，染色3min，蓋上蓋玻片，用橡皮擦輕壓成霧狀分散形態(tài)。

步驟十一：

將步驟十中做好的載玻片根尖在顯微鏡下鏡檢，將染色體數(shù)為52條的植株進(jìn)行編號(hào)和數(shù)量記錄統(tǒng)計(jì)。

分別對(duì)實(shí)施例一與實(shí)施例二進(jìn)行十組試驗(yàn)，得出的四倍體誘導(dǎo)率數(shù)據(jù)如下表：

由圖可知，經(jīng)過(guò)記錄統(tǒng)計(jì)，實(shí)施例一中白鶴芋品種“香水百掌”的四倍體誘導(dǎo)率為11.4%～38%；實(shí)施例二中白鶴芋品種“美酒” 的四倍體誘導(dǎo)率為20%～38%，相比于現(xiàn)有的誘導(dǎo)方法，成功率更高，也更加穩(wěn)定。

上述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的設(shè)計(jì)構(gòu)思并不局限于此，凡利用此構(gòu)思對(duì)本發(fā)明進(jìn)行非實(shí)質(zhì)性的改動(dòng)，均應(yīng)屬于侵犯本發(fā)明保護(hù)范圍的行為。