本發(fā)明涉及一種用于培育鐵皮石斛的培養(yǎng)基及其制作方法，特別是一種組培苗生長好的鐵皮石斛培養(yǎng)基及其制作方法。
背景技術(shù)：
：鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草-藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內(nèi)障等方面均有良好療效。鐵皮石斛大多生長在炎熱潮濕的熱帶、亞熱帶的巖石縫隙中，繁殖率很低，自然野生狀態(tài)下繁殖率只有10％-17％；果實為蒴果，種子小而多，種內(nèi)胚發(fā)育不全或不成熟，胚胎少胚乳,自然結(jié)實率低于5％，在自然條件下須與蘭菌共生才能萌發(fā)，因此無法在大田或苗床上播種，很難生產(chǎn)足夠的實生苗用于栽培。鐵皮石斛對生長環(huán)境要求苛刻，成苗困難，采用傳統(tǒng)的分株、扦插等人工繁殖方法進行繁殖，增殖速度非常低，目前組織培養(yǎng)是鐵皮石斛增殖擴繁的主要方法。關(guān)于鐵皮石斛的組織培養(yǎng)已有相關(guān)報道，但還存在組培苗質(zhì)量難以保證等問題，極大地制約了鐵皮石斛生產(chǎn)規(guī)模的擴大。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的，是提供一種鐵皮石斛培養(yǎng)基及其制作方法，用本發(fā)明培養(yǎng)基培養(yǎng)鐵皮石斛時，組培苗生長好，組培苗質(zhì)量易保證，且生長值和增殖率高,且培養(yǎng)基中不含激素。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的。一種鐵皮石斛培養(yǎng)基，按重量份計算，主要由檸檬酸1-10份、蛋白胨10-20份、馬鈴薯50-60份、香蕉50-60份、瓊脂20-30份、椿皮5-15份、琥珀10-20份、黃芩1-10份、杜仲1-10份和肉蓯蓉1-8份制成。前述的用于培育鐵皮石斛的培養(yǎng)基，按重量份計算，主要由檸檬酸3-7份、蛋白胨13-17份、馬鈴薯53-57份、香蕉53-57份、瓊脂23-27份、椿皮8-12份、琥珀13-17份、黃芩3-7份、杜仲3-7份和肉蓯蓉3-5份制成。前述的鐵皮石斛培養(yǎng)基，按重量份計算，主要由檸檬酸5份、蛋白胨15份、馬鈴薯55份、香蕉55份、瓊脂25份、椿皮10份、琥珀15份、黃芩5份、杜仲5份和肉蓯蓉4份制成。前述的鐵皮石斛培養(yǎng)基的制作方法，包括下述步驟：(1)取椿皮、琥珀、黃芩、杜仲和肉蓯蓉，粉碎成細顆粒后，加8-12倍量水煎煮2-3h，收集煎煮液，得A品；(2)將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；(3)將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；(4)B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；(5)香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；(6)瓊脂在室溫下加3-5倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；(7)F品加入E品中，混勻，得G品；(8)G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌20-30分鐘，冷卻凝固后即得。前述的鐵皮石斛培養(yǎng)基的制作方法，步驟(1)為：取椿皮、琥珀、黃芩、杜仲和肉蓯蓉，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品。前述的鐵皮石斛培養(yǎng)基的制作方法，步驟(6)為：瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品。前述的鐵皮石斛培養(yǎng)基的制作方法，步驟(8)為：G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌20-30分鐘，冷卻凝固后即得。申請人對本發(fā)明進行了大量的實驗研究，部分實驗如下：實驗例1生長和增殖考察.1材料與方法1.1材料1.1.1鐵皮石斛T4品種(原種采自于云南廣南縣)組培苗。1.1.2本發(fā)明培養(yǎng)基：按實施例1進行制作；1.1.3對比培養(yǎng)基：培養(yǎng)基原料中不含椿皮、琥珀、黃芩、杜仲和肉蓯蓉，其余制作方法同實施例1。1.2方法1.2.1培養(yǎng)試驗取輕度黃花扭曲的組培苗，去掉根兜后，每個培養(yǎng)基接種6瓶，每瓶接種15株，50d后觀察，統(tǒng)計組培苗的生長情況。1.2.2培養(yǎng)條件各試驗的培養(yǎng)物在白天溫度(22士1)℃、夜間溫度(18±1)℃、光照1800Lx、光照時間14h/d及通風良好的組培培養(yǎng)室中培養(yǎng)。1.2.3統(tǒng)計方法生長值(cm)＝統(tǒng)計時平均株高-繼代時平均株高；增殖率(％)＝(統(tǒng)計時苗總數(shù)一繼代時苗總數(shù))/初始苗總數(shù)×100％。3結(jié)果3.1對鐵皮石斛組培苗生長的影響經(jīng)50d培養(yǎng)后的生長情況見表1。表1對組培苗生長的影響培養(yǎng)基生長值/cm增殖率/％對比培養(yǎng)基1.40225.6本發(fā)明培養(yǎng)基1.75295.5由表可知，本發(fā)明培養(yǎng)基組生長值和增值率均高于對比培養(yǎng)基組。實施例2.壯苗生根及移栽成活率考察1材料與方法1.1材料1.1.1鐵皮石斛T4品種(原種采自于云南廣南縣)組培苗。1.1.2本發(fā)明培養(yǎng)基：按實施例1進行制作；1.1.3對比培養(yǎng)基：培養(yǎng)基原料中不含椿皮、琥珀、黃芩、杜仲和肉蓯蓉，其余制作方法同實施例1。1.2方法1.2.1以上述培養(yǎng)基設(shè)2個處理，及本發(fā)明培養(yǎng)基組和對比培養(yǎng)基組，每處理接種20瓶，置于培養(yǎng)溫度為(25±2)℃、光照度為1500～2000lx、光照時間12h/d條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)30d后，統(tǒng)計組培苗的生根數(shù)、根長、株高等。1.2.2選取在壯苗生根培養(yǎng)基中生長狀況良好、株高4-5cm、根長4cm、具有5條長根的組培苗移栽。首先將組培苗移至室外通風處煉苗2周左右，煉苗溫度為20-25℃，將組培瓶蓋逐日擰松，移栽前2d揭蓋，使組培苗逐漸適應(yīng)自然環(huán)境。將培養(yǎng)基與小苗一起取出，先用自來水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗幾遍。設(shè)2個處理，及本發(fā)明培養(yǎng)基組和對比培養(yǎng)基組，移栽后7、30d分別統(tǒng)計組培苗的成活率。2結(jié)果2.1組培苗的生根數(shù)、根長、株高結(jié)果見表2。表2對鐵皮石斛組培苗生根的影響培養(yǎng)基株高/cm生根率/％根長/cm根數(shù)/條生長情況對比培養(yǎng)基3.8962.43.5++++本發(fā)明培養(yǎng)基4.91003.96.5+++++注：“++++”表示組培苗生長狀況較好，交瘦弱，新根少但根長，葉片細長，呈淺綠色；“+++++”表示組培苗生長狀況優(yōu)良，交粗壯，根較粗且長，根較多，有部分氣生根長出，葉片厚大，呈深綠色。由表可知，接種30d后，對照組處理下組培苗平均根長為2.4cm，平均根數(shù)為3.5條，平均株高為3.8cm。本發(fā)明組處理下培苗平均根長為3.9m，平均根數(shù)為6.5條，平均株高為4.9cm，叢生芽較少且生根率較高，組培苗葉片增大，呈長橢圓形，葉片變厚，呈深綠色，部分組培苗還長出較長的氣生根。由此可見，兩種培養(yǎng)基中，組培苗在本發(fā)明培養(yǎng)基中生長狀態(tài)最佳，生根率可達100％，根長、根數(shù)、葉片形態(tài)更適于移栽。與現(xiàn)有技術(shù)相比，用本發(fā)明培養(yǎng)基培養(yǎng)鐵皮石斛時，組培苗生長好，組培苗質(zhì)量易保證，且生長值和增殖率高,且培養(yǎng)基中不含激素。具體實施方式實施例1。配方：檸檬酸50kg、蛋白胨150kg、馬鈴薯550kg、香蕉550kg、瓊脂250kg、椿皮100kg、琥珀150kg、黃芩50kg、杜仲50kg和肉蓯蓉40kg。制作工藝：(1)取椿皮、琥珀、黃芩、杜仲和肉蓯蓉，粉碎成細顆粒后，加10倍量水煎煮2.5h，收集煎煮液，得A品；(2)將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；(3)將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；(4)B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；(5)香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；(6)瓊脂在室溫下加4倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；(7)F品加入E品中，混勻，得G品；(8)G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻凝固后即得。實施例2.配方：檸檬酸100kg、蛋白胨200kg、馬鈴薯600kg、香蕉600kg、瓊脂300kg、椿皮150kg、琥珀200kg、黃芩100kg、杜仲100kg和肉蓯蓉80kg。制作工藝：(1)取椿皮、琥珀、黃芩、杜仲和肉蓯蓉，粉碎成細顆粒后，加12倍量水煎煮3h，收集煎煮液，得A品；(2)將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；(3)將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；(4)B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；(5)香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；(6)瓊脂在室溫下加5倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；(7)F品加入E品中，混勻，得G品；(8)G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌30分鐘，冷卻凝固后即得。實施例3.配方：檸檬酸10kg、蛋白胨100kg、馬鈴薯500kg、香蕉500kg、瓊脂200kg、椿皮50kg、琥珀100kg、黃芩10kg、杜仲10kg和肉蓯蓉10kg。制作工藝：(1)取椿皮、琥珀、黃芩、杜仲和肉蓯蓉，粉碎成細顆粒后，加8倍量水煎煮2h，收集煎煮液，得A品；(2)將檸檬酸和蛋白胨在室溫下加入A品中，攪拌至溶解完全，得B品；(3)將馬鈴薯加水煮熟后，絞碎成馬鈴薯泥，得C品；(4)B品中加入C品，攪拌均勻，得D品；(5)香蕉攪碎后加入D品中，攪拌均勻，得E品；(6)瓊脂在室溫下加3倍量水，攪拌至完全溶解后，得F品；(7)F品加入E品中，混勻，得G品；(8)G品裝于組培瓶中，高壓蒸汽滅菌20分鐘，冷卻凝固后即得。當前第1頁1 2 3