本發(fā)明涉及一種生物制劑，具體的說是一種防治番茄病毒病制劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

番茄別名西紅柿、洋柿子，古名六月柿、喜報三元。在秘魯和墨西哥，最初稱之為“狼桃”。果實營養(yǎng)豐富，具特殊風(fēng)味。可以生食、煮食、加工制成番茄醬、汁或整果罐藏。番茄是全世界栽培最為普遍的果菜之一。 美國、蘇聯(lián)、意大利和中國為主要生產(chǎn)國。在歐、美洲的國家、中國和日本有大面積溫室、塑料大棚及其他保護地設(shè)施栽培。中國各地普遍種植。栽培面積仍在繼續(xù)擴大。

番茄病毒病在我國番茄種植區(qū)均有發(fā)生，一般年份可減產(chǎn)20％—30％，流行年份高達50%—70%，局部地區(qū)甚至絕產(chǎn)。番茄病毒病的主要癥狀有花葉、條斑、蕨葉、叢枝（黃頂）、卷葉等多種，其中以花葉型、條斑型和蕨葉型最常見，近年來又出現(xiàn)黃化曲葉型癥狀。花葉型病毒病的典型癥狀是葉片上出現(xiàn)黃綠相間，或深淺相間的斑駁，葉脈透明，葉略有皺縮，病株較健株略矮，嚴重者新葉變小，細長，葉脈發(fā)紫，坐果的果小質(zhì)劣，多呈花臉狀，對產(chǎn)量影響較大。條斑型可在莖、葉及果實呈現(xiàn)不同形狀的壞死斑：葉片上出現(xiàn)黑褐色不規(guī)則油漬狀壞死斑，葉脈壞死，可導(dǎo)致葉片卷縮，然后順葉柄蔓延至莖稈，莖蔓呈黑褐色長條斑，稍有凹陷；果實上產(chǎn)生大小不一不規(guī)則褐色凹陷油漬狀壞死斑，多數(shù)較小，果面凹凸不平，嚴重時植株干枯死亡。蕨葉型的植株出現(xiàn)不同程度的叢生，矮化，葉片由上而下出現(xiàn)全部或部分的線狀蕨葉，尤以上部新葉變形嚴重，下部葉片有的卷成筒狀，花瓣加厚伸長，成為巨花，病果畸形，剖開果心呈褐色；黃化曲葉型病毒病主要是葉片邊緣及葉脈間黃化，邊緣上卷，葉片變小變厚，葉質(zhì)脆硬，整個植株萎縮，或有叢生，以植株上部葉片癥狀典型，下部老葉癥狀不明顯；染病早的，多不能開花結(jié)果，發(fā)病輕的植株果實較小，座果數(shù)少。

引起番茄病毒病的病毒有多種，主要有煙草花葉病毒(TMV）、稱黃瓜花葉病毒(CMV）、煙草曲葉病毒(TLCV）、苜?；ㄈ~病毒(AMV）、番茄黃化曲葉病毒(TYLV）、馬鈴薯Y病毒Y(PVY)和番茄煙粉虱雙生病毒(WTG）等。煙草花葉病毒可引起花葉型和條斑型，黃瓜花葉病毒主要引起蕨葉型癥狀。

病毒主要附著在番茄病殘體、溫室生長番茄及一些野生茄科植物或雜草內(nèi)越冬，種子也可潛伏病毒，引起次年番茄發(fā)病。田間病毒主要通過蚜蟲和接觸摩擦傳播。病株的汁液含有大量病毒，在分苗、定植、綁架、整枝、打杈等農(nóng)事操作過程中，人手或工具粘帶病毒汁液，再與周圍健康番茄接觸時，其中的病毒可以通過健株上細小的傷口侵入體內(nèi)而引起發(fā)病。

每年的5月底和6月上旬為病毒病易感期。一般春季大棚番茄生長前期發(fā)病較輕，進入5月以后，蕨葉和花葉癥狀開始加重。秋延后番茄病毒病比春大棚嚴重，主要為蕨葉和條斑病毒。棚室晝夜溫差小，播期早，定植苗齡大，均可加重病毒病的為害。高溫、干旱，蚜蟲為害重，植株生長勢弱，重茬等，均易引起病毒病的發(fā)生。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是為解決上述技術(shù)問題的不足，提供一種防治番茄病毒病制劑及其制備方法，所制備的制劑對番茄病毒病具有較好的防治效果。

一種防治番茄病毒病制劑的制備方法，包括以下制備步驟：

步驟一、魚腥草提取物的制備：取魚腥草280g，除去雜質(zhì)，洗凈，干燥后，加入1L水，加熱至沸騰后，文火熬制30分鐘?；?，過濾后，所得上清液即為魚腥草提取物，將其冷卻至室溫備用；

步驟二、蒲公英提取物的制備：取蒲公英全株120g，進行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小時進行萃取，布氏漏斗抽濾，收集濾液；55～65℃減壓蒸餾回收石油醚，濾渣中加入回收的石油醚浸泡進行萃取，重復(fù)萃取4～5次并回收濾液；將多次提取后抽濾得到的濾液減壓蒸餾濃縮，得到混合物，即為蒲公英提取物，備用；

步驟三、艾葉提取物的制備：取艾葉150g，除去雜質(zhì)，洗凈，加入1L水，加熱至沸騰后5分鐘，加入5g新鮮的姜片，再調(diào)制文火熬制30分鐘停火，過濾后，所得上清液即為艾葉提取物，將其冷卻至室溫，備用；

步驟四、辣椒葉提取液的制備：取新鮮辣椒葉500克搗爛，加入1L水浸泡6小時后，過濾，所得上清液即為辣椒葉提取液，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟五、黃連提取物的制備：選取新鮮的黃連根莖，洗凈、晾干后稱取300g，放于體積濃度75％的乙醇中進行表面消毒5 min，用無菌水沖洗3次后置于組織勻漿機中，加入100 mL無菌水，以5000r/min的轉(zhuǎn)速勻漿5 min將其制成糊狀，然后在離心機中溫度4℃、轉(zhuǎn)速10000r/min的條件下離心10min，所得上清液即得到黃連提取物，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟六、按照魚腥草提取物的質(zhì)量百分比為23-37%，蒲公英提取物的質(zhì)量百分比為18-28%，艾葉提取物的質(zhì)量百分比為7-15%，辣椒葉提取液的質(zhì)量百分比為10-20%，黃連提取物的質(zhì)量百分比為10-20%，硫磺粉的質(zhì)量百分比為17-28%，取上述步驟所制備的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物、辣椒葉提取液、黃連提取物和另外準備的硫磺粉，備用；

步驟七、將所取的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物和黃連提取物混合后加熱至50-70℃保溫10-16小時，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉攪拌均勻，最后加入所取辣椒葉提取液混合均勻后即制備出防治番茄病毒病制劑。

所取魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物、辣椒葉提取液、黃連提取物和硫磺粉的質(zhì)量百分比優(yōu)選為：魚腥草提取物30%，蒲公英提取物20%，艾葉提取物10%，辣椒葉提取液7%，黃連提取物13%，硫磺粉20%。

所取的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物和黃連提取物混合后加熱溫度和時間優(yōu)選為65℃、15小時。

有益效果是：

1、本發(fā)明防治番茄病毒病制劑，其組成成分魚腥草、黃連和硫磺粉本身具有殺菌，抗病毒作用，結(jié)合辣椒葉提取液和蒲公英提取物的驅(qū)菌抗病毒及其殺菌效果，達到較好的抗病毒、殺菌及其防治效果；在組成中的蒲公英提取物、黃精提取物輔助作用下，使防治效果達到最優(yōu)；艾葉提取物中添加有生姜，艾葉和生姜結(jié)合制備的艾葉提取物作為滲透劑，可使藥液快速滲透到番茄植株中；本發(fā)明防治番茄病毒病制劑的各組份完美結(jié)合，對番茄植株的番茄病毒病有較好的防治效果。

2、本發(fā)明防治番茄病毒病制劑其制備方法簡單，成本低廉，各組成成分均為無害物質(zhì)，除硫磺粉外，其他組分均從植物中提取，所制備出的防治番茄病毒病制劑，綠色無污染，對人畜無毒無害作用，對番茄病毒病具有較高的防治率，達到92%以上，且藥效較長，長達30~36天。

具體實施方式

一種防治番茄病毒病制劑的制備方法，包括以下制備步驟：

步驟一、魚腥草提取物的制備：取魚腥草280g，除去雜質(zhì)，洗凈，干燥后，加入1L水，加熱至沸騰后，文火熬制30分鐘停火，過濾后，所得上清液即為魚腥草提取物，將其冷卻至室溫備用；

步驟二、蒲公英提取物的制備：取蒲公英全株120g，進行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小時進行萃取，布氏漏斗抽濾，收集濾液；55～65℃減壓蒸餾回收石油醚，濾渣中加入回收的石油醚浸泡進行萃取，重復(fù)萃取4～5次并回收濾液；將多次提取后抽濾得到的濾液減壓蒸餾濃縮，得到混合物，即為蒲公英提取物，備用；

步驟三、艾葉提取物的制備：取艾葉150g，除去雜質(zhì)，洗凈，加入1L水，加熱至沸騰后5分鐘，加入5g新鮮的姜片，再調(diào)制文火熬制30分鐘?；穑^濾后，所得上清液即為艾葉提取物，將其冷卻至室溫，備用；

步驟四、辣椒葉提取液的制備：取新鮮辣椒葉500克搗爛，加入1L水浸泡6小時后，過濾，所得上清液即為辣椒葉提取液，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟五、黃連提取物的制備：選取新鮮的黃連根莖，洗凈、晾干后稱取300g，放于體積濃度75％的乙醇中進行表面消毒5 min，用無菌水沖洗3次后置于組織勻漿機中，加入100 mL無菌水，以5000r/min的轉(zhuǎn)速勻漿5 min將其制成糊狀，然后在離心機中溫度4℃、轉(zhuǎn)速10000r/min的條件下離心10min，所得上清液即得到黃連提取物，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟六、按照魚腥草提取物的質(zhì)量百分比為23-37%，蒲公英提取物的質(zhì)量百分比為18-28%，艾葉提取物的質(zhì)量百分比為7-15%，辣椒葉提取液的質(zhì)量百分比為10-20%，黃連提取物的質(zhì)量百分比為10-20%，硫磺粉的質(zhì)量百分比為17-28%， 取上述步驟所制備的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物、辣椒葉提取液、黃連提取物和另外準備的硫磺粉，備用；

步驟七、將所取的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物和黃連提取物混合后加熱至50-70℃保溫10-16小時，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉攪拌均勻，最后加入所取辣椒葉提取液混合均勻后即制備出防治番茄病毒病制劑。

步驟八、毎50株番茄植株，使用本發(fā)明防治番茄病毒病制劑為100ml，加水50~60L，充分搖勻，對番茄植株進行全株噴細霧至滴珠。

所取魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物、辣椒葉提取液、黃連提取物和硫磺粉的質(zhì)量百分比優(yōu)選為：魚腥草提取物30%，蒲公英提取物20%，艾葉提取物10%，辣椒葉提取液7%，黃連提取物13%，硫磺粉20%。

所取的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物和黃連提取物混合后加熱溫度和時間優(yōu)選為65℃、15小時。

實施例1

一種防治番茄病毒病制劑的制備方法，包括以下制備步驟：

步驟一、魚腥草提取物的制備：取魚腥草280g，除去雜質(zhì)，洗凈，干燥后，加入1L水，加熱至沸騰后，文火熬制30分鐘?；穑^濾后，所得上清液即為魚腥草提取物，將其冷卻至室溫備用；

步驟二、蒲公英提取物的制備：取蒲公英全株120g，進行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小時進行萃取，布氏漏斗抽濾，收集濾液；55～65℃減壓蒸餾回收石油醚，濾渣中加入回收的石油醚浸泡進行萃取，重復(fù)萃取4～5次并回收濾液；將多次提取后抽濾得到的濾液減壓蒸餾濃縮，得到混合物，即為蒲公英提取物，備用；

步驟三、艾葉提取物的制備：取艾葉150g，除去雜質(zhì)，洗凈，加入1L水，加熱至沸騰后5分鐘，加入5g新鮮的姜片，再調(diào)制文火熬制30分鐘?；?，過濾后，所得上清液即為艾葉提取物，將其冷卻至室溫，備用；

步驟四、辣椒葉提取液的制備：取新鮮辣椒葉500克搗爛，加入1L水浸泡6小時后，過濾，所得上清液即為辣椒葉提取液，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟五、黃連提取物的制備：選取新鮮的黃連根莖，洗凈、晾干后稱取300g，放于體積濃度75％的乙醇中進行表面消毒5 min，用無菌水沖洗3次后置于組織勻漿機中，加入100 mL無菌水，以5000r/min的轉(zhuǎn)速勻漿5 min將其制成糊狀，然后在離心機中溫度4℃、轉(zhuǎn)速10000r/min的條件下離心10min，所得上清液即得到黃連提取物，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟六、按照魚腥草的質(zhì)量百分比為提取物30%，蒲公英提取物的質(zhì)量百分比為20%，艾葉提取物的質(zhì)量百分比為10%，辣椒葉提取液的質(zhì)量百分比為7%，黃連提取物的的質(zhì)量百分比為質(zhì)量百分比為13%，硫磺粉的質(zhì)量百分比為20%,取上述步驟所制備的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物、辣椒葉提取液、黃連提取物和另外準備的硫磺粉，備用；

步驟七、將所取的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物和黃連提取物混合后加熱至65℃保溫15小時，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉攪拌均勻，最后加入所取辣椒葉提取液混合均勻后即制備出防治番茄病毒病制劑。

步驟八、毎50株番茄植株，使用本發(fā)明防治番茄病毒病制劑為100mL，加水25L，充分搖勻，對番茄植株進行全株噴細 霧至滴珠。

結(jié)果顯示：本發(fā)明防治番茄病毒病制劑對番茄植株進行噴灑后其對番茄病毒病的防治率達到96%，藥效長達36天。

實施例2

一種防治番茄病毒病制劑的制備方法，包括以下制備步驟：

步驟一、魚腥草提取物的制備：取魚腥草280g，除去雜質(zhì)，洗凈，干燥后，加入1L水，加熱至沸騰后，文火熬制30分鐘?；?，過濾后，所得上清液即為魚腥草提取物，將其冷卻至室溫備用；

步驟二、蒲公英提取物的制備：取蒲公英全株120g，進行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小時進行萃取，布氏漏斗抽濾，收集濾液；55～65℃減壓蒸餾回收石油醚，濾渣中加入回收的石油醚浸泡進行萃取，重復(fù)萃取4～5次并回收濾液；將多次提取后抽濾得到的濾液減壓蒸餾濃縮，得到混合物，即為蒲公英提取物，備用；

步驟三、艾葉提取物的制備：取艾葉150g，除去雜質(zhì)，洗凈，加入1L水，加熱至沸騰后5分鐘，加入5g新鮮的姜片，再調(diào)制文火熬制30分鐘?；?，過濾后，所得上清液即為艾葉提取物，將其冷卻至室溫，備用；

步驟四、辣椒葉提取液的制備：取新鮮辣椒葉500克搗爛，加入1L水浸泡6小時后，過濾，所得上清液即為辣椒葉提取液，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟五、黃連提取物的制備：選取新鮮的黃連根莖，洗凈、晾干后稱取300g，放于體積濃度75％的乙醇中進行表面消毒5 min，用無菌水沖洗3次后置于組織勻漿機中，加入100 mL無菌水，以5000r/min的轉(zhuǎn)速勻漿5 min將其制成糊狀，然后在離心機中溫度4℃、轉(zhuǎn)速10000r/min的條件下離心10min，所得上清液即得到黃連提取物，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟六、按照魚腥草提取物的質(zhì)量百分比為23%，蒲公英提取物的質(zhì)量百分比為18%，艾葉提取物的質(zhì)量百分比為7%，辣椒葉提取液的質(zhì)量百分比為12%，黃連提取物的質(zhì)量百分比為12%，硫磺粉的質(zhì)量百分比為28%， 取上述步驟所制備的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物、辣椒葉提取液、黃連提取物和另外準備的硫磺粉，備用；

步驟七、將所取的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物和黃連提取物混合后加熱至50-70℃保溫10-16小時，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉攪拌均勻，最后加入所取辣椒葉提取液混合均勻后即制備出防治番茄病毒病制劑。

步驟八、毎50株番茄植株，使用本發(fā)明防治番茄病毒病制劑為100ml，加水20L，充分搖勻，對番茄植株進行全株噴細霧至滴珠。

結(jié)果顯示：本發(fā)明防治番茄病毒病制劑對番茄植株進行噴灑后其對番茄病毒病的防治率達到90%，藥效長達32天。

實施例3

一種防治番茄病毒病制劑的制備方法，包括以下制備步驟：

步驟一、魚腥草提取物的制備：取魚腥草280g，除去雜質(zhì)，洗凈，干燥后，加入1L水，加熱至沸騰后，文火熬制30分鐘?；?，過濾后，所得上清液即為魚腥草提取物，將其冷卻至室溫備用；

步驟二、蒲公英提取物的制備：取蒲公英全株120g，進行清洗、晾干，粉碎，然后加入1L的石油醚浸泡48小時進行萃取，布氏漏斗抽濾，收集濾液；55～65℃減壓蒸餾回收石油醚，濾渣中加入回收的石油醚浸泡進行萃取，重復(fù)萃取4～5次并回收濾液；將多次提取后抽濾得到的濾液減壓蒸餾濃縮，得到混合物，即為蒲公英提取物，備用；

步驟三、艾葉提取物的制備：取艾葉150g，除去雜質(zhì)，洗凈，加入1L水，加熱至沸騰后5分鐘，加入5g新鮮的姜片，再調(diào)制文火熬制30分鐘?；穑^濾后，所得上清液即為艾葉提取物，將其冷卻至室溫，備用；

步驟四、辣椒葉提取液的制備：取新鮮辣椒葉500克搗爛，加入1L水浸泡6小時后，過濾，所得上清液即為辣椒葉提取液，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟五、黃連提取物的制備：選取新鮮的黃連根莖，洗凈、晾干后稱取300g，放于體積濃度75％的乙醇中進行表面消毒5 min，用無菌水沖洗3次后置于組織勻漿機中，加入100 mL無菌水，以5000r/min的轉(zhuǎn)速勻漿5 min將其制成糊狀，然后在離心機中溫度4℃、轉(zhuǎn)速10000r/min的條件下離心10min，所得上清液即得到黃連提取物，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?/p>

步驟六、按照魚腥草提取物的質(zhì)量百分比為37%，蒲公英提取物的質(zhì)量百分比為18%，艾葉提取物的質(zhì)量百分比為7%，辣椒葉提取液的質(zhì)量百分比為10%，黃連提取物的質(zhì)量百分比為10%，硫磺粉的質(zhì)量百分比為18%， 取上述步驟所制備的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物、辣椒葉提取液、黃連提取物和另外準備的硫磺粉，備用；

步驟七、將所取的魚腥草提取物、蒲公英提取物、艾葉提取物和黃連提取物混合后加熱至50-70℃保溫10-16小時，得到混合物Ⅰ；然后在混合物Ⅰ中加入所取的硫磺粉攪拌均勻，最后加入所取辣椒葉提取液混合均勻后即制備出防治番茄病毒病制劑。

步驟八、毎50株番茄植株，使用本發(fā)明防治番茄病毒病制劑為100ml，加水30L，充分搖勻，對番茄植株進行全株噴細霧至滴珠。

結(jié)果顯示：本發(fā)明防治番茄病毒病制劑對番茄植株進行噴灑后其對番茄病毒病的防治率達到92%，藥效長達30天。

用藥注意事項：宜選擇暖濕天氣的傍晚或陰天施藥，并嚴禁與殺菌劑、堿性農(nóng)藥同期或復(fù)配使用。本發(fā)明防治番茄病毒病制劑不宜久置擱放、應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，以免降低藥效。