本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
重樓為滇重樓(Paris polyphylla var.yunnanensis)和華重樓(Paris polyphylla var.chinensis)的地下莖，前者主產(chǎn)于云南，后者主產(chǎn)于四川。重樓具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚等功效外，還有止血、抗腫瘤、抗生育、免疫調(diào)節(jié)及心血管等多方面的生理活性，用于痛腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、驚風(fēng)抽搐等癥的治療。
目前制約重樓植物規(guī)?；苑N的主要問題是重樓種苗的短缺。重樓種子由于存在種胚發(fā)育不完全，胚乳堅(jiān)硬，胚軸后熟等明顯“雙重休眠”特性，因此播種后通常需要經(jīng)歷兩冬一夏才能萌發(fā)成苗，是典型的“二年生種子”，而且在自然狀態(tài)下，即使經(jīng)過了長時(shí)間休眠，重樓種子的出苗率也不高，因此目前僅靠重樓種子進(jìn)行有性繁殖已無法滿足華重樓植物大面積栽種的需要。
中國專利CN103548682B公開了一種華重樓植株的快速繁殖方法，包括愈傷組織的誘導(dǎo)、不定芽的分化、生根培養(yǎng)及煉苗和移栽步驟，所采用的不定芽的誘導(dǎo)和快速增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0～4.0mg/L+IAA 0.1～1.0mg/L+KT 0.1～1.0mg/L+頭孢曲松鈉200～500mg/L，生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.1～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+活性碳0.1～1.0％。該發(fā)明培育的組培苗生長速度快、且保留了華重樓的優(yōu)良特性，但其愈傷組織誘導(dǎo)率有待提高。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基具有良好的愈傷組織誘導(dǎo)率，解決了華重樓植物規(guī)?；苑N的問題。
本發(fā)明提供了一種華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：
MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、6-芐氨基嘌呤1-2mg/L、萘乙酸0.1-0.5mg/L、油菜素內(nèi)酯0.03-0.07mg/L、瓊脂4-6g/L和蔗糖15-65g/L。制備方法：稱取相應(yīng)量的6-芐氨基嘌呤，萘乙酸，油菜素內(nèi)酯，瓊脂和蔗糖依次加入到MS培養(yǎng)基中，攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH值，120℃滅菌30min，即得。
本發(fā)明提供的華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基中油菜素內(nèi)酯與其他激素協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞的分裂、植物的生理代謝，從而提高培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率。
進(jìn)一步地，所述的華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為：
MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、6-芐氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.3mg/L、油菜素內(nèi)酯0.05mg/L、瓊脂5g/L和蔗糖40g/L。
進(jìn)一步地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5.8。
進(jìn)一步地，所述的華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基在華重樓快速繁殖中的應(yīng)用。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基具有良好的愈傷組織誘導(dǎo)率，解決了華重樓植物規(guī)?；苑N的問題。
具體實(shí)施方式
下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，這些實(shí)施例僅用于例證的目的，絕不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1一種華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基
所述華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為：
MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、6-芐氨基嘌呤1mg/L、萘乙酸0.1mg/L、油菜素內(nèi)酯0.03mg/L、瓊脂4g/L和蔗糖15g/L。
制備方法：稱取相應(yīng)量的6-芐氨基嘌呤，萘乙酸，油菜素內(nèi)酯，瓊脂和蔗糖依次加入到MS培養(yǎng)基中，攪拌均勻，調(diào)節(jié)pH為5.8，120℃滅菌30min，即得。
實(shí)施例2一種華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基
所述華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為：
MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、6-芐氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.3mg/L、油菜素內(nèi)酯0.05mg/L、瓊脂5g/L和蔗糖40g/L。
制備方法與實(shí)施例1類似。
實(shí)施例3一種華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基
所述華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為：
MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、6-芐氨基嘌呤2mg/L、萘乙酸0.5mg/L、油菜素內(nèi)酯0.07mg/L、瓊脂6g/L和蔗糖65g/L。
制備方法與實(shí)施例1類似。
對(duì)比例1一種華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基
所述華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為：
MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、6-芐氨基嘌呤1.5mg/L、萘乙酸0.3mg/L、2，4-二氯苯氧乙酸0.05mg/L、瓊脂5g/L和蔗糖40g/L。
制備方法與實(shí)施例1類似。
與實(shí)施例2的區(qū)別在于，將油菜素內(nèi)酯替換為2，4-二氯苯氧乙酸。
對(duì)比例2一種華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基
所述華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為：
MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基、6-芐氨基嘌呤1.55mg/L、萘乙酸0.3mg/L、瓊脂5g/L和蔗糖40g/L。
制備方法與實(shí)施例1類似。
與實(shí)施例2的區(qū)別在于，未添加油菜素內(nèi)酯，增加了6-芐氨基嘌呤的用量。
試驗(yàn)例一、愈傷組織誘導(dǎo)率測(cè)試
1.試驗(yàn)材料：實(shí)施例1-3及對(duì)比例1-2制備的華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基。
2.試驗(yàn)內(nèi)容：
選取多年生、健壯，無病蟲、無損傷的華重樓植物根莖，洗凈并晾曬，切除根莖上的不定根，再切取帶芽體的6個(gè)莖節(jié)，用無菌水沖洗6次后切除其上的芽體，最后將該根莖莖節(jié)切成1.5cm3大小后接入所述試驗(yàn)材料的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，先置于10℃的冰箱中低溫處理18天，再轉(zhuǎn)放在培養(yǎng)溫度為25℃、每天光照12h和光照強(qiáng)度為1200lx的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)55天后統(tǒng)計(jì)其愈傷組織誘導(dǎo)率。
3.試驗(yàn)結(jié)果：愈傷組織誘導(dǎo)率測(cè)試結(jié)果見表1。
表1愈傷組織誘導(dǎo)率測(cè)試結(jié)果
由表1可知，本發(fā)明制備的華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基中愈傷組織誘導(dǎo)率較高。而對(duì)比例1-2制備的華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率比實(shí)施例1-3制備的華重樓誘導(dǎo)培養(yǎng)基的差，說明本發(fā)明配伍合理科學(xué)，各組相互作用，協(xié)同起提高其愈傷組織誘導(dǎo)率的作用，克服了其規(guī)模化栽種的問題。