本發(fā)明屬于農(nóng)作物栽培技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種毛竹下種植竹蓀的復(fù)合栽培方法。

背景技術(shù)：

毛竹（Phyllostachys heterocycla）為禾本科竹亞科剛竹屬單軸散生型常綠喬木狀竹類植物（散生竹），主要分布于我國長江以南福建、江西、浙江、湖北、湖南、四川等省區(qū)。毛竹經(jīng)濟價值高，應(yīng)用范圍廣，易栽培，周期短，適應(yīng)范圍廣，是亞熱帶經(jīng)濟筍材兩用竹的一部分。竹蓀是一種在枯竹根部寄生的真菌，其漂亮的外觀和豐富的營養(yǎng)價值，自古以來，使竹蓀成為珍貴的寶藏，被稱為“山珍”，“蘑菇皇后”，“花之菌”的美譽，其中“芙蓉竹蓀湯”就從唐朝開始得名延至今天。經(jīng)現(xiàn)代技術(shù)測定,竹蓀含有19種氨基酸,常食用竹蓀有防治腹肌脂肪的積貯、肥胖病、糖尿病、癌癥及降血壓等作用,被營養(yǎng)學(xué)家譽之為食藥兩用的保健食品。

毛竹分布地區(qū)廣泛，其經(jīng)濟價值高、用途廣泛、生長周期短、且適應(yīng)范圍廣，是亞熱帶及部分中亞熱帶地區(qū)的重要經(jīng)濟筍材兩用竹種。近年來，隨著我國農(nóng)村勞動力老齡化及勞動力成本大幅增加，農(nóng)民培育毛竹林的積極性日漸下降，發(fā)展毛竹林下經(jīng)濟是提升竹林綜合經(jīng)濟效益的重要途徑。由于毛竹枝下高較高（3米以上），使其林下具有更好的土地空間來滿足人工種植竹蓀的需求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種毛竹下種植竹蓀的復(fù)合栽培方法。

一種毛竹下種植竹蓀的復(fù)合栽培方法，包括以下方法：

步驟（1）場地選擇

場地選擇選擇背風(fēng)保濕、水源充足、排水良好、土壤腐殖質(zhì)層較厚、平緩的、具有種植空間的毛竹林地，土壤厚度40-100cm，pH值5.5-6.5，竹林密度每公頃2700株左右，毛竹林的林分郁閉度0.6-0.7；

步驟（2）竹蓀菌種培養(yǎng)基選擇、菌種培育、栽培種擴繁

步驟（2a）長裙竹蓀母種的培養(yǎng)

野外栽培前4個月準備長裙竹蓀原種培養(yǎng)基，竹蓀菌種選擇長裙竹蓀母種；竹蓀菌種母種在長裙竹蓀母種培養(yǎng)基培育16d后得到長裙竹蓀原種；

步驟（2b）長裙竹蓀原種的培養(yǎng)

對長裙竹蓀原種進行生產(chǎn)；長裙竹蓀原種在長裙竹蓀原種培養(yǎng)基中培養(yǎng)62-66d后得到長裙竹蓀栽培種；

步驟（2c）長裙竹蓀栽培種的培養(yǎng)

野外栽培前2個月開始長裙竹蓀栽培種的擴繁，對長裙竹蓀栽培種進行大面積生產(chǎn),且長裙竹蓀栽培種在接種后60-80d內(nèi)用于種植；

步驟（3）培養(yǎng)料選擇與處理

每667m²配備一份培養(yǎng)料；每份培養(yǎng)料包括干料2500kg、尿素25kg、過磷酸鈣50kg、改性淀粉25kg、輕質(zhì)碳酸鈣50kg；2500kg干料包括毛竹枝葉1250kg、毛竹屑1250kg，且毛竹枝葉和毛竹屑分開堆放；

堆制干料時，最底層毛竹枝葉30cm或毛竹屑20cm，然后撒上一層尿素、輕質(zhì)碳酸鈣、過磷酸鈣、改性淀粉，并澆少量水，接著再鋪一層毛竹枝葉或一層毛竹屑，厚度50cm，上面再撒上一層尿素、輕質(zhì)碳酸鈣、過磷酸鈣、石膏并澆少量水至堆層表面濕潤即可，以此類推，堆3～4層，堆高1.5～1.8m，培養(yǎng)料堆好后按每100kg干料澆60kg水，保持料堆含水量為60%，堆料后表面覆蓋一層黑塑料薄膜增溫保濕，每隔15天用挖掘機翻堆一次，共翻3次堆，翻堆時要求做到上下、內(nèi)外的基質(zhì)料互相調(diào)換位置，使基質(zhì)料上下、里外發(fā)酵均勻一致。堆制60天制得毛竹枝葉發(fā)酵原料或毛竹屑發(fā)酵原料；要求發(fā)酵后的堆料松軟、變褐、有香味；

步驟（4）整地及播種

提前翻曬、消毒場地、平地整畦，3月底開始根據(jù)毛竹林空隙分布建洼床，深25cm，寬50cm，長度根據(jù)毛竹空間分布具體安排，開溝如遇到毛竹竹鞭或地下莖要切斷挖除，四周按照順坡方向開好排水溝，便于排水。每667 m²毛林下竹蓀用地約200-300m²；長裙竹蓀栽培種的用量為0.5-1kg/m²，栽培基質(zhì)料鋪放前要吸足水，加水量以手抓緊基質(zhì)料略有水滲出為準，含水量60-70％，鋪上一層8-10cm的發(fā)酵原料，鋪上一層長裙竹蓀栽培種，繼續(xù)鋪一層8-10cm的發(fā)酵原料，再鋪一層竹蓀栽培種，再鋪一層8-10cm的發(fā)酵原料后略壓實，總厚度30cm左右，堆成龜背狀，播種后竹屑基質(zhì)料表面覆蓋碎土，土層厚3-5cm。覆土應(yīng)為疏松的種植地表土，土壤含水量20-25%左右，再蓋一層薄膜以保溫保濕； 且發(fā)酵原料的鋪設(shè)方式為下層鋪設(shè)毛竹枝葉發(fā)酵料，上層鋪設(shè)毛竹屑發(fā)酵料；毛竹枝葉發(fā)酵料的用量為6.67kg/m², 毛竹屑發(fā)酵料的用量為8.33 kg/m²；

播種后正常溫度下每天揭膜通風(fēng)30分鐘，培育30d左右，菌絲爬上培養(yǎng)料，可把洼床上薄膜揭開去掉；

（5）發(fā)菌及出菇管理

播種后正常溫度下每天注意噴霧保濕，培育25-35d，菌絲爬上培養(yǎng)料，出菇期培養(yǎng)料含水量以60%為宜，覆蓋土含水量>40%，空氣相對濕度>85%；出菇期晴天早晚各噴霧1次，雨天應(yīng)及時排水；

（6）采收

竹蓀破蕾到撒裙在上午7-10時, 開傘的竹蓀要及時采摘, 采收時用手輕托竹蓀底部，切斷菌索，不能把菌索連帶抽出, 以免影響生長, 降低產(chǎn)量，要注意剝離菌托和菌蓋, 以免其粘液污染菌柄和菌裙, 剝離的菌蓋、菌托不能丟在竹蓀畦土里，采收的竹蓀要按順序整齊放在籮筐中, 保持潔凈, 不要折斷、破裙、污泥, 并迅速放烘箱烘干。

步驟（2a）中，長裙竹蓀母種培養(yǎng)基采用改性凹凸土蛋白胨培養(yǎng)基，按照重量分數(shù)包括：改性凹凸土200份，蛋白胨2份，蔗糖20份，KH₂PO₄ 1份，MgSO₄ 1份，瓊脂20份，水1000份，PH值5-6；改性凹凸土的制備方法如下：凹凸土在415℃下焙燒2h，然后加入1mol/L的H₂SO₄后放入水浴鍋中加熱沸騰2h，其中，按照重量比，凹凸土：H₂SO₄＝1：10；然后水洗至中性后放入烘培箱內(nèi)106℃恒溫烘干7d，最后密封保存。

步驟（2b）中，長裙竹蓀原種培養(yǎng)基，按質(zhì)量百分比，鋸木屑74％，麥麩20％，黃豆粉3％，改性淀粉1.5％，白糖1.5％ ，含水量65％。

步驟（3）中，所述改性淀粉，具有三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，網(wǎng)絡(luò)的骨架是淀粉；改性淀粉的制備方法如下，往燒瓶中加入稱取丙烯酸60g，然后加入氮氣并不斷攪拌，直到趕走燒瓶中的空氣，然后往燒瓶中加入26%氫氧化鈉溶液進行中和反應(yīng)，攪拌冷卻到常溫后加入12g的淀粉、1g的沸石粉、1g的貝殼粉，攪拌均勻，然后加入0.67g引發(fā)劑過硫酸鉀、0.17g交聯(lián)劑MBA，恒溫反應(yīng)2h，然后攪拌至半透明粘稠液，加入25%的氨水進行中和直到pH為7，然后放出氮氣；在80℃~100℃下烘干至恒重，然后破碎和粉末后，得到改性淀粉。

本發(fā)明的有益效果是：

1. 提高了竹蓀營養(yǎng)品質(zhì)：毛竹林下仿野生態(tài)竹蓀包含除人體需要的8種必需氨基酸外（甲硫氨酸Met、色氨酸Trp未檢測出），還含有精氨酸Arg、組氨酸His等嬰兒必需氨基酸和一些風(fēng)味氨基酸。其氨基酸含量普遍高于大田種植的竹蓀。毛竹林下仿野生竹蓀的蛋白質(zhì)含量為29.73%，明顯高于大田竹蓀的20.03%；真菌多糖是一種具有多種生理功能和開發(fā)價值的活性多糖，對人體具有顯著的保健功效，毛竹林下仿野生竹蓀的可溶性糖含量為11.48%，而大田竹蓀只有9.11%。。通過對比可知雖然不同模式下竹蓀在產(chǎn)量上能得到保證，但是竹蓀品質(zhì)還是有差異的，在市場銷售中占有一定的優(yōu)勢；

2. 利用林下空閑的土地面積，而不占用農(nóng)田面積：近年來，隨著我國農(nóng)村勞動力老齡化及勞動力成本大幅增加，農(nóng)民培育毛竹林的積極性日漸下降，毛竹林下空間利用率較低，因此，本技術(shù)方案通過利用林下空閑土地資源，選接近自然生境的竹林做畦床，用發(fā)酵的竹渣做培養(yǎng)料，進行穴播或條播。由于毛竹林土壤內(nèi)布滿砍伐后留下的竹樁及老竹鞭，通過菌絲的感染，可以加快竹樁及老竹鞭的分解，改善竹林土壤的理化性質(zhì)；

3. 充分做到了竹林廢棄物循環(huán)利用，節(jié)省了竹蓀種植成本：毛竹筍-竹蓀復(fù)合經(jīng)營模式主要以竹屑為原料，利用毛竹林下天然的遮陽效果來套種竹蓀，不僅在原料成本上充分利用了山區(qū)現(xiàn)有竹林資源和竹木加工廠無用的下腳料，降低了農(nóng)民的種植成本，變相提高了竹林林地經(jīng)濟效益，而且去除了傳統(tǒng)的須搭建遮陽棚生產(chǎn)方式，大大減少了竹蓀生產(chǎn)工序，降低竹蓀生產(chǎn)成本；此外，竹蓀生長結(jié)束后的殘余基質(zhì)是竹林最佳的天然有機肥料，充分利用資源，從而形成一個良性循環(huán)的生態(tài)種植模式；

4. 竹蓀菌能降解林下枯枝落葉，促進竹林生態(tài)平衡，有利于竹林生長，特別是竹筍的生長，并且隨著大量剩余基質(zhì)殘留林地，可提高林地地力：毛竹林下種植竹蓀后，有效磷無論是在0-15cm還是在15-30cm都是逐年增加的；土壤中有機質(zhì)含量比種植竹蓀前也明顯增加；土壤中水解性氮含量在0-15c土層中隨種植時間持續(xù)上升，而在15-30c土層中則以種植后的第1年增加達到頂峰，隨后開始。速效鉀無論是在0-15cm還是在15-30cm都是種植后的第1年增加達到頂峰，隨后快速下降，并且低于竹蓀種植前的含量。土壤中鈣、鎂元素的含量也明顯增加，鈉元素的含量則明顯減少。通過竹筍經(jīng)營以及竹蓀菌種植，使毛竹林下土壤肥力得到了極大的提高，土壤質(zhì)量明顯改善，竹林葉子茂密，葉色濃密，竹林生長也明顯好于對照。

附圖說明

圖1為酸性磷酸酶和粗多糖隨時間變化圖；

圖2為不同時期毛竹林下竹蓀萌發(fā)動態(tài)及其與林內(nèi)氣溫關(guān)系圖。

具體實施方式

本發(fā)明下面結(jié)合實施例予以進一步詳述。

實施例：步驟（1）場地選擇

場地選擇浙江地區(qū)的毛竹林，場地選擇選擇背風(fēng)保濕、水源充足、排水良好、土壤腐殖質(zhì)層較厚、平緩的、具有種植空間的毛竹林地，土壤厚度40-100cm，pH值5.5-6.5，毛竹林密度每公頃2700株左右的林分，郁閉度0.6-0.7左右；

步驟（2）竹蓀菌種培養(yǎng)基選擇、菌種培育、栽培種擴繁

步驟（2a）長裙竹蓀母種的培養(yǎng)

野外栽培前4個月準備長裙竹蓀原種培養(yǎng)基，竹蓀菌種選擇長裙竹蓀母種。長裙竹蓀母種，由福建省永安市西南真菌研究所提供的興農(nóng)A₃號、D₁號、D₈₉號長裙竹蓀母種。長裙竹蓀母種培養(yǎng)基采用改性凹凸土蛋白胨培養(yǎng)基，按照重量分數(shù)包括：改性凹凸土200份，蛋白胨2份，蔗糖20份，KH₂PO₄ 1份，MgSO₄ 1份，瓊脂20份，水1000份，PH值5-6。

改性凹凸土的制備方法如下：凹凸土在415℃下焙燒2h，然后加入1mol/L的H₂SO₄后放入水浴鍋中加熱沸騰2h，其中，按照重量比，凹凸土：H₂SO₄＝1：10；然后水洗至中性后放入烘培箱內(nèi)106℃恒溫烘干7d，最后密封保存。

上述凹凸土，購買自江蘇玖川納米材料科技有限公司。

凹凸土(Attapulgite)，是一種具鏈層狀結(jié)構(gòu)的含水富鎂鋁硅酸鹽粘土礦物。凹凸土形態(tài)呈毛發(fā)狀或纖維狀，通常為毛毯狀或土狀集合體。由于凹凸土獨特的晶體結(jié)構(gòu)，使之具有許多特殊的物化及工藝性能，主要物化性能和工藝性能有：陽離子可交換性、吸水性、吸附脫色性，大的比表面積（9.6～36m2/g）以及膠質(zhì)價和膨脹容。凹凸土，幾乎遍及世界各地，成本低廉，然后天然的凹凸土雜質(zhì)含量較多，限制其工業(yè)應(yīng)用。

本培養(yǎng)基采用凹凸土作為主基，利用了物化性能，大部分的陽離子、水分子和一定大小的有機分子可以吸附在凹凸土的層內(nèi)貫穿通道或者表面的凹凸溝槽。經(jīng)過改性處理之后的凹凸土，呈現(xiàn)出疏松多孔的特點，從而更適用作為蛋白胨和瓊脂等的載體。

改性凹凸土蛋白胨培養(yǎng)基，呈現(xiàn)微酸性，有利于增加多種養(yǎng)分的有效性。改性凹凸土本身呈現(xiàn)中性，添加后對于基質(zhì)pH值幾乎不產(chǎn)生影響。并且添加改性凹凸土后，基質(zhì)的持水能力顯著上升，且養(yǎng)分的吸附能力也進一步提高。

竹蓀菌種母種培育16d后得到長裙竹蓀原種。

本步驟的對比分析如下，長裙竹蓀母種培養(yǎng)基有：

PDA培養(yǎng)基(S1)：馬鈴薯200g、蔗糖20g、瓊脂20g、水1000ml，pH自然；

改性凹凸土蛋白胨培養(yǎng)基(S2)：改性凹凸土200g，蛋白胨2g，蔗糖20g，KH₂PO₄ 1g，MgSO₄1g，瓊脂20g，水1000ml，PH值5-6；

胡蘿卜黃豆粉培養(yǎng)基(S3)：胡蘿卜200g，黃豆粉20g，蔗糖20g，KH2PO4 1g，MgSO4 1g，瓊脂20g，水1000ml，PH值5-6；

將三種竹蓀菌株（A1：長裙竹蓀A₃號；A2：長裙竹蓀D₁號；A3：長裙竹蓀D₈₉號）的母種分別引入裝有3種不同培養(yǎng)基（S1、S2、S3）的試管中央。采用隨機區(qū)組設(shè)計，每種處理10個試管，5次重復(fù)。在溫度為22～25℃下培養(yǎng)，在接種培養(yǎng)2、4、6、8、10d后，測量菌絲長度，求出菌絲的生長速度．在接種培養(yǎng)14d后取出菌絲體，測定菌絲活性。記錄菌絲開始吃料時間和菌絲開始長滿全袋的天數(shù)。

酸性磷酸酶活性測定：稱取1-2克菌絲，用3ml提取緩沖液在研缽中研磨成漿，再用7ml提取緩沖液沖洗，轉(zhuǎn)移至離心管中 → 在4000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘 →吸出上清液，作為酶制劑。然后放在冰箱中貯存?zhèn)溆?→ 取酶制劑0.1-1ml(視酶含量多少而定)，加水至1ml，然后加入醋酸緩沖液1ml和對硝基酚磷酸鈉溶液0.1ml。空白對照的用1ml提取緩沖液代替酶制劑 → 充分混合后，放在30℃恒溫水浴中保溫10分鐘，時而搖動 → 加入1ml 0.5M NaOH溶液，充分混合，終止反應(yīng)，并使生成的對硝基酚呈黃色，然后在400nm波長下測光密度值。

粗多糖含量：采用蒽酮比色法測定。

數(shù)據(jù)處理與分析

根據(jù)食用菌菌種活力檢測技術(shù)規(guī)范(DB35/T 1233-2011)對母種、原種、栽培種生長狀況進行統(tǒng)計。

用Excel 2003統(tǒng)計軟件進行實驗數(shù)據(jù)分析與整理作圖，應(yīng)用SPSS 19.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行相關(guān)性分析。采用T檢驗方法進行樣本平均數(shù)的比較，用單因素方差分析不同處理培養(yǎng)基之間以及同一處理菌種間的差異，并用LSD法進行多重比較，實驗數(shù)據(jù)均為平均值±標準差。

結(jié)果分析

根據(jù)食用菌菌種活力檢測技術(shù)規(guī)范(DB35/T 1233-2011)和表1結(jié)果可知，3種長裙竹蓀在培養(yǎng)基S1、S2上的個體生長均良好，在接種后16d能長滿試管；菌種A1在3種培養(yǎng)基上的生長速度均明顯低于菌種A2和菌種A3，說明這3種培養(yǎng)基均不適合菌種A1的培養(yǎng)。菌種A2在 S3和S2培養(yǎng)基上的菌絲生長效果明顯優(yōu)于S1培養(yǎng)基，而菌種A3在S2培養(yǎng)基上的菌絲生長效果優(yōu)于S1培養(yǎng)基。而在菌種選擇方面，建議選擇長裙竹蓀D₁和D₈₉。竹蓀菌種母種培育16d后即可用于原種生產(chǎn)。

表1種竹蓀菌株在不同母種培養(yǎng)基上生長速度的比較（mm/d）

注：① A1：長裙竹蓀A₁ A2：長裙竹蓀D₁ A3：長裙竹蓀D₈₉ ②生長勢以—、+、+ + 表示生長弱、強、很強 ③不同大寫字母表示培養(yǎng)基之間差異顯著(P<0.05)，不同小寫字母表示不同菌種之間差異顯著(P<0.05) 。

步驟（2b）長裙竹蓀原種的培養(yǎng)

對長裙竹蓀原種進行生產(chǎn)；長裙竹蓀原種培養(yǎng)基，按質(zhì)量百分比，鋸木屑74％，麥麩20％，黃豆粉3％，改性淀粉1.5％，白糖1.5％ ，含水量65％；

長裙竹蓀原種在培養(yǎng)基中培養(yǎng)62-66d后得到長裙竹蓀栽培種；

長裙竹蓀母種的對比分析：

長裙竹蓀原種培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比，選用如下四種：

①：竹屑74％，麥麩20％，黃豆粉3％，改性淀粉1.5％，白糖1.5％，含水量65％；

②：鋸木屑74％，麥麩20％，黃豆粉3％，改性淀粉1.5％，白糖1.5％ ，含水量65％；

③：玉米粒89.5％，竹仁5％ ，木屑5％ ，改性淀粉0.5％，總量40kg；

④：棉籽殼麩皮培養(yǎng)料：棉籽殼76%，麩皮20%，過磷酸鈣1%，糖1%，石膏1%，MgSO₄ 1%；

菌種接種后放置培養(yǎng)室在常溫下培養(yǎng)，記錄原種開始吃料的時間，每2d記錄一次原種的菌絲生長速度。記錄菌絲開始長滿全瓶的天數(shù)。

從表2可以看出，長裙竹蓀D₈₉接種在②號培養(yǎng)基上的吃料速度最快，只需要4.1d；在①號培養(yǎng)基上的吃料速度次之，需要5.0d；而接種在③號培養(yǎng)基、④號培養(yǎng)基上的吃料速度較慢，需要9d以上。長裙竹蓀D₁接種在②號培養(yǎng)基上的吃料速度最快，只需5.9d；在①號培養(yǎng)基上的吃料速度次之，需要7.2d；而接種在③號培養(yǎng)基、④號培養(yǎng)基上的吃料速度與長裙竹蓀D₈₉相同，也較慢，需要9d以上。

從原種的生長勢看，以②號培養(yǎng)基為最佳，①號培養(yǎng)基次之，其他2種培養(yǎng)基上的菌絲生長勢較弱。

從原種的生長速度看，以②號培養(yǎng)基為最佳。長裙竹蓀D₈₉在②號培養(yǎng)基上生長62.0d就可長滿全瓶，而長裙竹蓀D₁則需要比長裙竹蓀D₈₉多培養(yǎng)3.1d。D₈₉原種和D₁原種在①號培養(yǎng)基上培養(yǎng)，則需比在②號培養(yǎng)基上多培養(yǎng)16d以上。對其他2種培養(yǎng)基，原種培養(yǎng)則需要更多的時間，不適合工廠化生產(chǎn)的需要。

從原種培養(yǎng)基配方中篩選出的成本低，效應(yīng)好的培養(yǎng)基②配方（以鋸木屑培養(yǎng)料為主）作為栽培種擴繁培育的培養(yǎng)料。

綜上所述，長裙竹蓀D₈₉在菌絲吃料時間、生長速度和生長勢方面，均優(yōu)于長裙竹蓀D₁。在原種擴大繁殖時，應(yīng)優(yōu)先選擇②號培養(yǎng)基(以木屑為主的培養(yǎng)料)，D₈₉培養(yǎng)62.0d和D₁培育65.1d后，即可用于栽培種大面積生產(chǎn)。

注： ①生長勢以-、+、+ +、 表示生長弱、強、很強

②不同大寫字母表示菌種之間差異顯著(P<0.05)，不同小寫字母表示不同培養(yǎng)基之間差異顯著(P<0.05)

步驟（2c）長裙竹蓀栽培種的培養(yǎng)

野外栽培前2個月開始長裙竹蓀栽培種的擴繁，對長裙竹蓀栽培種進行大面積生產(chǎn),且長裙竹蓀栽培種在接種后60-80d內(nèi)用于種植。

鑒于栽培種要用于大規(guī)模生產(chǎn)，栽培種的活性強弱影響到竹蓀子實體的質(zhì)量和數(shù)量。因此，通過測定栽培種的菌絲活性的時間規(guī)律，得出菌種最佳保存時間對生產(chǎn)上應(yīng)用尤為重要。

由于酸性磷酸酶在各種菌絲中都存在，且含量較多。在菌絲生長期間，酶活性隨著生長時間的增加而增加。根據(jù)有關(guān)文獻發(fā)現(xiàn)，在通常情況下，酸性磷酸酶活性與菌種活力呈正相關(guān)。因此，測定酸性磷酸酶活性對于鑒定菌種的活力有一定意義。另外，由于竹蓀菌是一種集營養(yǎng)、保健、理療于一身的純天然食用菌，其藥用成分主要是多糖，具有抑制癌細胞生長和降血糖作用。通過測定竹蓀菌多糖在生長各階段的含量，以期有助于深入、系統(tǒng)地開展竹蓀菌多糖的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、藥理作用和臨床應(yīng)用等研究，為進一步開發(fā)竹蓀菌多糖功能食品、保健品和多糖類藥物打下良好的基礎(chǔ)。因此，本發(fā)明將對竹蓀菌絲的酸性磷酸酶活性和粗多糖含量進行測定，其中，酸性磷酸酶作為衡量菌種活力的重要指標來檢測。每半個月取樣一次，連續(xù)檢測3個月。

栽培種培養(yǎng)的時間需要60-75d。從圖1可以看出，酸性磷酸酶在栽培種培養(yǎng)二個半月時達到最高峰，而此時，栽培種菌絲已長滿全袋。在這之后，酸性磷酸酶的含量逐漸降低，也表示菌絲的活性也逐漸的降低；而粗多糖在一個半月時達到最大，也是提取多糖的最佳時期。因此在栽培種培育過程中，一般接種后60d就能長滿，之后應(yīng)該在0-20d內(nèi)用于大田或者林下的大規(guī)模種植，這時菌種活性達到最佳，有利于菌絲的存活和快速生長。而提取菌絲多糖，最好在接種后45d提取，這時粗多糖提取率最高。

步驟（3）培養(yǎng)料選擇與處理

試驗地I位于杭州市富陽區(qū)中國林科院亞熱帶林業(yè)研究所的廟山塢部級自然保護區(qū)（30°03′-30°06′N，119°56′-120°02′E）毛竹筍用林基地，屬浙西低山丘陵區(qū)天目山系余脈，海拔290-530 m，平均坡度22℃。氣候為亞熱帶濕潤季風(fēng)氣候，年均氣溫16.1℃，年平均降水量1427.2 mm。試驗林為毛竹純林，花年制經(jīng)營，年齡1-7年生，立竹密度2400-2700株/公頃，毛竹株胸徑分布在7.0-14.1cm之間，平均胸徑9.8cm,平均高度12.2m，郁閉度0.7-0.8。廟山塢的毛竹林地土壤為微酸性紅壤土，土層厚度大于100 cm，枯落物層1-3 cm；試驗地II位于富陽市胥口鎮(zhèn)盛平家庭農(nóng)場，現(xiàn)有毛竹筍竹用林基地面積200多畝，土壤為微酸性紅壤土，土層厚度大于100 cm，枯落物層1～2 cm；試驗林為毛竹純林，花年制經(jīng)營，年齡1～7年生，立竹密度2700株/公頃左右，毛竹株胸徑分布在7.2～12.3cm之間，平均胸徑9.3cm,平均高度11.9m，郁閉度0.8左右；試驗竹林每年進行施肥、采筍、伐除6年以上老竹等常規(guī)經(jīng)營。

2015年供試菌種為福建省永安市西南真菌研究所提供興農(nóng)D₈₉長裙竹蓀，其抗逆力強，菌絲分泌的胞外酶，可以分解吸收生料的養(yǎng)分，出菇快，接種后2個月可采收。

每667m²配備一份培養(yǎng)料。

每份培養(yǎng)料包括干料2500kg、尿素25kg、過磷酸鈣50kg、改性淀粉25kg、輕質(zhì)碳酸鈣50kg。

2500kg干料包括毛竹枝葉1250kg、毛竹屑1250kg，且毛竹枝葉和毛竹屑分開堆放。

所述改性淀粉，具有三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，網(wǎng)絡(luò)的骨架是淀粉。改性淀粉用以增加培養(yǎng)料的透水性和透氣性，在菌種周圍形成一個空氣和水的儲藏室，并減小晝夜溫差，改良土壤結(jié)構(gòu)。

改性淀粉的制備方法如下，往燒瓶中加入稱取丙烯酸60g，然后加入氮氣并不斷攪拌，直到趕走燒瓶中的空氣，然后往燒瓶中加入26%氫氧化鈉溶液進行中和反應(yīng)，攪拌冷卻到常溫后加入12g的淀粉、1g的沸石粉、1g的貝殼粉，攪拌均勻，然后加入0.67g引發(fā)劑過硫酸鉀、0.17g交聯(lián)劑MBA，恒溫反應(yīng)2h，然后攪拌至半透明粘稠液，加入25%的氨水進行中和直到pH為7，然后放出氮氣；在80℃~100℃下烘干至恒重，然后破碎和粉末后，得到改性淀粉。

本改性淀粉可以降解，并將營養(yǎng)物質(zhì)包裹起來，緩慢釋放，從而發(fā)揮減少營養(yǎng)物流失的作用。

堆制干料時，最底層毛竹枝葉30cm或毛竹屑20cm，然后撒上一層尿素、輕質(zhì)碳酸鈣、過磷酸鈣、改性淀粉，并澆少量水，接著再鋪一層毛竹枝葉或一層毛竹屑，厚度50cm，上面再撒上一層尿素、輕質(zhì)碳酸鈣、過磷酸鈣、石膏并澆少量水至堆層表面濕潤即可，以此類推，堆3～4層，堆高1.5～1.8m，培養(yǎng)料堆好后按每100kg干料澆60kg水，保持料堆含水量為60%，堆料后表面覆蓋一層黑塑料薄膜增溫保濕，每隔15天用挖掘機翻堆一次，共翻3次堆，翻堆時要求做到上下、內(nèi)外的基質(zhì)料互相調(diào)換位置，使基質(zhì)料上下、里外發(fā)酵均勻一致。堆制60天制得毛竹枝葉發(fā)酵原料或毛竹屑發(fā)酵原料；

步驟（4）整地及播種

2015年3月前，提前翻曬、消毒場地、平地整畦，根據(jù)毛竹林空隙分布建洼床，深25cm，寬50cm，長度根據(jù)毛竹空間分布靈活安排，開溝遇到毛竹竹鞭切斷挖除，四周按照順坡方向開好排水溝，便于排水。每667 m²毛林下竹蓀用地約200-300m²；長裙竹蓀栽培種的用量為0.5kg/m²，栽培基質(zhì)料鋪放前要吸足水，加水量以手抓緊基質(zhì)料略有水滲出為準（含水量60-70％），鋪上一層8-10cm的發(fā)酵原料，鋪上一層長裙竹蓀栽培種，繼續(xù)鋪一層8-10cm的發(fā)酵原料，再鋪一層竹蓀栽培種，再鋪一層8-10cm的發(fā)酵原料后略壓實，總厚度30cm左右，堆成龜背狀，播種后竹屑基質(zhì)料表面覆蓋碎土，土層厚3-5cm。覆土應(yīng)為疏松的種植地表土，土壤含水量20-25%左右，再蓋一層薄膜以保溫保濕； 且發(fā)酵原料的鋪設(shè)方式為下層鋪設(shè)毛竹枝葉發(fā)酵料，上層鋪設(shè)毛竹屑發(fā)酵料；毛竹枝葉發(fā)酵料的用量為6.67kg/m²,竹屑發(fā)酵料的用量為8.33 kg/m²；

實驗方案I：在廟山塢部級自然保護區(qū)的毛竹筍用林基地進行。本次試驗共在毛竹林下設(shè)樣地24塊，每塊樣地面積3m×0.4m。選擇種植時間、挖溝深度、基質(zhì)用量和菌種用量等因子，采用L₈(2⁷)的正交試驗設(shè)計安排試驗（見表3和表4）。每組8塊樣地隨機安排，重復(fù)3次。

實驗方案II：在富陽市胥口鎮(zhèn)盛平家庭農(nóng)場的毛竹筍用林基地進行。于2015年4月10日安排本次試驗，共在毛竹林下設(shè)樣地32塊，每塊樣地面積5m×0.6m。選擇林分郁閉度、挖溝深度、基質(zhì)用量、菌種用量和菌種層數(shù)等因子，采用L₈(2⁷)的正交試驗設(shè)計安排試驗（見表5和表6）。每組8塊樣地隨機安排，重復(fù)4次。

播完后用小鏟把料與菌種輕輕壓實以利菌種萌發(fā)，最后表明覆蓋一層3-5cm厚的表土，土壤含水量40%，再蓋一層薄膜以保濕保溫。

（5）發(fā)菌及出菇管理

播種后正常溫度下每天注意噴霧保濕，培育25-35d，菌絲爬上培養(yǎng)料，出菇期培養(yǎng)料含水量以60%為宜，覆蓋土含水量>40%，空氣相對濕度>85%；出菇期晴天早晚各噴霧1次，濕度人為控制恒定，雨天應(yīng)及時排水；

（6）采收

竹蓀破蕾到撒裙在上午7-10時, 開傘的竹蓀要及時采摘, 采收時用手輕托竹蓀底部，切斷菌索，不能把菌索連帶抽出, 以免影響生長, 降低產(chǎn)量，要注意剝離菌托和菌蓋, 以免其粘液污染菌柄和菌裙, 剝離的菌蓋、菌托不能丟在竹蓀畦土里，采收的竹蓀要按順序整齊放在籮筐中, 保持潔凈, 不要折斷、破裙、污泥；從6月中旬開始記錄菌蛋開始萌發(fā)的時間，記錄每天萌發(fā)的竹蓀數(shù)量，并在竹蓀萌發(fā)初期、盛期和后期分別測定竹蓀個體的長度、鮮重和干質(zhì)量。

毛竹林下栽培竹蓀出菇情況

無論是廟山塢自然保護區(qū)，還是胥口盛平家庭農(nóng)場，無論是3月底種植，還是4月中旬種植，竹蓀發(fā)菇時間均在7月15日左右（見圖2），這與其它地區(qū)的發(fā)菇規(guī)律有明顯的差異，這可能與2015年夏季梅雨時間長且延續(xù)到7月中旬，導(dǎo)致氣候較常年偏低有明顯關(guān)系。從氣溫與竹蓀萌發(fā)數(shù)量的關(guān)系圖可以看出，7月15日前的最高氣溫一直低于25oC，不適合竹蓀菇蕾開傘，因此，2015年的竹蓀菇蕾開傘時間較遲，而且導(dǎo)致較早播種竹蓀的林地發(fā)菇時間也明顯推遲。

從圖2可以看出，廟山塢自然保護區(qū)的毛竹林下竹蓀菇蕾自2015年7月15日開始開傘，至9月29日基本結(jié)束，采收時間為2個半月，發(fā)菇高峰期為單峰曲線在8月19日-24日，其中4月15日種植的竹蓀高峰期略退后數(shù)天。而胥口盛平家庭農(nóng)場發(fā)菇時間較短，至9月10日基本結(jié)束，采收時間只有55d，其發(fā)菇高峰期為四峰曲線：分別在7月19日、8月8日，8月23日和8月30日，其中以8月23日左右的發(fā)菇高峰為最大。

以3月底種植的竹蓀的發(fā)菇速度為最快，到到發(fā)菇50d時，竹蓀產(chǎn)量已達到總產(chǎn)量的90%以上，可以停止采收，以減少勞動力的支出，提高純收入。

毛竹林下生長的竹蓀個體平均長度為19.0cm；個體鮮質(zhì)量在其萌發(fā)峰值出現(xiàn)前變幅比較小，而在萌發(fā)峰值后明顯降低；竹蓀個體干質(zhì)量在萌發(fā)10 d時達到峰值，之后降低，變幅在2.50-3.02之間。竹蓀個體的含水率變幅在89.03%-90.8%之間。

毛竹林下竹蓀培育的最佳措施為：3月底前在郁閉度為0.6的毛林林下種植竹蓀，采用挖溝25cm以上，基質(zhì)用量18kg/m²，菌種用量1kg/m²，并采用放置1層菌種的播種方式。采用這種栽培方式，毛竹林下種植的干竹蓀產(chǎn)量可達到81.72 kg/畝以上。

毛竹林下仿野生竹蓀栽培模式與其他模式的產(chǎn)量對比

本研究模式的竹蓀年產(chǎn)量為81.72 kg/畝(干質(zhì)量)以上，略低于福建等地大棚栽培和重慶麻竹林下等報道的竹蓀產(chǎn)量，但明顯高于板栗林、葡萄園、玉米地等套種竹蓀的產(chǎn)量(見表7)。毛竹林下仿野生竹蓀栽培模式以竹屑以及竹枝葉為原料，利用毛竹筍用林天然的遮陽效果來套種竹蓀，不僅在原料成本上充分利用了竹產(chǎn)區(qū)現(xiàn)有竹林資源和竹加工剩余物，減少了對農(nóng)田的占用，降低了農(nóng)民的原料、土地等生產(chǎn)成本，而且去除了傳統(tǒng)的須搭建遮陽棚生產(chǎn)方式，大大減少了竹蓀生產(chǎn)工序，降低竹蓀生產(chǎn)成本；此外，竹蓀生長結(jié)束后的殘余基質(zhì)是竹林良好的天然有機肥料，充分利用資源，從而形成一個良性循環(huán)的生態(tài)種植模式。

用FOSS定氮儀等儀器檢測兩種模式下的竹蓀常規(guī)營養(yǎng)成分（見表8）。蛋白質(zhì)是組成人體一切細胞、組織的重要成分，毛竹林下仿野生竹蓀的蛋白質(zhì)含量為29.73%，明顯高于大田竹蓀的20.03%；灰分是標示食品中無機成分總量的一項指標，進行灰分分析，可知其子實體內(nèi)含有無機營養(yǎng)元素量，毛竹林下仿野生竹蓀的灰分含量為6.24%，高于大田竹蓀的4.55%；真菌多糖是一種具有多種生理功能和開發(fā)價值的活性多糖，對人體具有顯著的保健功效，毛竹林下仿野生竹蓀的可溶性糖含量為11.48%，而大田竹蓀只有9.11%。因此，毛竹林下仿野生竹蓀的營養(yǎng)品質(zhì)要明顯優(yōu)于大田竹蓀產(chǎn)品。

2015年毛竹林下竹蓀仿野生狀栽培的經(jīng)濟效益：以胥口盛平家庭農(nóng)場為例，每畝毛竹林實際種植面積為200m²，實際產(chǎn)干竹蓀61.48kg/畝，產(chǎn)值為27051.2元/畝 (按竹蓀的干質(zhì)量價格440元/kg計算)；種植成本為13489元/畝，包括菌種1000元/畝，基質(zhì)材料等800元/畝，灌溉設(shè)施2000元/畝，烘烤成本3689元/畝(按60元/kg計算)，勞動力投入6000元/畝（40工/667m²，150元/工）；凈收入為13562.2元/畝。

毛竹林下種植竹蓀，通過一系列的調(diào)控優(yōu)化措施，竹蓀產(chǎn)量和質(zhì)量得到了保障。毛竹林地栽培竹蓀可加快竹兜、枝葉腐性，可促進竹林生態(tài)系統(tǒng)的良性循環(huán)，對提高竹筍產(chǎn)量，促進新竹生長應(yīng)具有明顯作用。下面通過調(diào)查來驗證結(jié)論。

采用正交試驗設(shè)計表安排試驗(見表9)。竹蓀種植采用同一竹蓀菌種(D89)，同一郁閉度(0.65)條件下安排，每667m²毛竹林栽培竹蓀280m²，種植小區(qū)面積為3m²，每小區(qū)用料量45kg和用種量1.5kg；

從表10可知，在毛竹筍用林下種植竹蓀，竹筍產(chǎn)量得到明顯提高；試驗結(jié)果表明處理4即種植竹蓀，竹林密度保持160-180株/畝，施肥總量75kg/畝，施肥分3次(3月、5月和9月)，翻土深度20cm，竹筍產(chǎn)量每畝達到最高3475斤。

通過在毛竹林下種植竹蓀，不僅竹蓀有較好的經(jīng)濟效益，對毛竹地下鞭生長也起到極大地促進作用。竹蓀不僅能促進分解毛竹林下廢棄物如竹葉、竹枝等，而且能改善林下土壤狀況，給竹鞭生長提供了良好的生長環(huán)境，進一步促進的竹筍的生長。對毛竹筍用林林分密度和經(jīng)營方式調(diào)節(jié)也是尤為重要的，合理的竹林密度以及經(jīng)營措施保證了單個竹子生長的營養(yǎng)需求和竹筍質(zhì)量。