本發(fā)明涉及一種藥劑復(fù)配方法防治由灰葡萄孢(Botrytiscinerea)引起的百合灰霉病，確定四種對防治該病發(fā)生有顯著效果復(fù)配組合。
背景技術(shù)：
：百合是百合科(Liliaceae)百合屬(Lilium)多年生草本球根植物。由于其花形優(yōu)美，色彩艷麗，成為目前世界最受歡迎的鮮切花之一，且兼具有很高的觀賞、食用及藥用價(jià)值。但由于百合較易感病，為害百合較為嚴(yán)重的病害主要是百合灰霉病和百合枯萎病，隨著百合栽植面積的擴(kuò)大，加之常年連作，病害發(fā)生日趨嚴(yán)重，成為遏制百合生產(chǎn)中的重要因素之一(朱麗梅，2009)。百合灰霉病是百合植株生長過程中對植株和種球生長發(fā)育和品質(zhì)影響最嚴(yán)重的病害之一，而在百合中灰霉菌防治的研究較少，因此研究百合灰霉菌的有效防治方法刻不容緩。灰霉菌是在世界范圍內(nèi)都是一種威脅性病原菌，會(huì)快速對藥劑產(chǎn)生耐受性和抗藥性(Hans-JuergenRosslenbroich，2000)，而復(fù)配藥劑有助于降低病原菌的抗藥性的產(chǎn)生?；颐咕且鸢俸匣颐共〉牟≡饕牟≡腔移咸焰?Botrytiscinerea)，灰霉菌主要危害的是百合葉片，在葉片上形成許多大小、形狀不一的圓形或者橢圓形病斑，病斑呈褐色。其上有顏色深淺不一的同心輪紋。有些病斑從葉片邊緣開始發(fā)病，再沿葉緣逐漸向整個(gè)葉片擴(kuò)展，最后葉片一半枯死，另一半相繼枯死，使葉片畸形，向一邊彎曲，形成“一邊倒”。當(dāng)空氣干燥時(shí)，病征不容易看到；潮濕時(shí)，病斑有灰色霉層，甚至整個(gè)葉片干枯、壞死。莖部染病時(shí)出現(xiàn)黃褐色或者紅褐色條形病斑，有時(shí)莖基部縊縮、倒折，葉片沿莖基部逐漸向上枯萎脫落，鱗莖染病引起腐爛(徐瓊，2006)。朱麗梅(朱麗梅，2011)等人通過實(shí)驗(yàn)認(rèn)為異菌脲與腈菌唑復(fù)配具有增效作用，混劑與兩種單藥劑相比，具有殺菌譜廣，應(yīng)用范圍擴(kuò)大，增效明顯，降低了藥劑使用量，同時(shí)也克服了單一用藥易產(chǎn)生抗藥性的問題，延長農(nóng)藥的使用壽命等優(yōu)點(diǎn)。彭建波等(2015)表示50％異菌脲WP1500g/hm2、50％腐霉利WP3000g/hm2分別噴霧3次，對百合灰霉病防效在80％以上，且此兩種藥劑在試驗(yàn)劑量下對百合植株安全，綜合效益顯著。魏繼剛(2014)通過研究50％啶酰菌胺水分散粒劑對灰霉菌的防治效果，結(jié)果表明，啶酰菌胺的防治灰霉病的效果比嘧霉胺和腐霉利效果較好，而且由于作用的機(jī)理不同，可交替用藥。而現(xiàn)有的報(bào)道試驗(yàn)研究所選用的藥劑是否對灰霉病的致病菌有效，適宜劑量以及在百合上防治灰霉病的防治效果和是否能夠復(fù)配組合均不清楚。因此，篩選出能有效防治百合灰霉病的藥劑及復(fù)配組合均有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。主要參考文獻(xiàn)：1)朱麗梅，侯建文，羅鳳霞，蔣倩倩.百合灰霉病的診斷及其病原物的分離純化[J].金陵科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，25(3)：59-63.2)Hans-JuergenRosslenbroich，DietrichStuebler.Botrytiscinerea-historyofchemicalcontrolandnovelfungicidesforitsmanagement[J].CropProtection，2000，19：557-561.3)徐瓊，徐秉良，王芳.觀賞百合葉枯病癥狀類型與病原菌鑒定[J].植物保護(hù)，2006，32(5)：61-64.4)朱麗梅，張長青，陳浩，陸慧.百合灰霉病高效殺菌劑的篩選和聯(lián)合作用研究[J].金陵科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，27(1)：51-54.5)彭建波，李澤森，鐘艷紅.不同化學(xué)藥劑對百合疫病、灰霉病防效研究[J].現(xiàn)代園藝，2015，(5)：12-14.6)魏繼剛，馬峰，侯偉.50％啶酰菌胺水分散粒劑對番茄灰霉病的防治效果研究[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，60(5)：37-39.技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供多種有效防治百合灰霉病的復(fù)配藥劑。通過單藥劑篩選復(fù)配藥劑組分，確定單藥劑異菌脲、福美雙、嘧霉胺、咯菌腈及幾種藥劑復(fù)配能夠有效阻止灰葡萄孢菌絲生長，防治該病的發(fā)生發(fā)展，并降低了殺菌劑使用量，提升了病菌防治效果，具有重要實(shí)用價(jià)值和應(yīng)用生產(chǎn)價(jià)值。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施：1)采用組織分離法從百合葉片病健交界處分離、純化病原菌，經(jīng)75％酒精處理1min，升汞處理15min，無菌水沖洗5次，每次30s。2)用無菌挑針挑取真菌菌絲置于顯微鏡下觀察其形態(tài)，并顯微拍照。3)制作含藥平板：各殺菌劑分別設(shè)定5個(gè)濃度梯度，配制成500、1000、2000、4000、8000稀釋倍數(shù)的含藥PDA平板，混合均勻。封口后在紫外燈下照射1h，防止細(xì)菌污染。4)供試菌株在PDA培養(yǎng)基上生長5d后，無菌條件下，從菌落邊緣生長旺盛區(qū)用打孔器(d＝8mm)打取同齡菌餅，用消毒接菌針將菌餅放入預(yù)先制備好的上述含藥PDA平板上，封口膜封口。置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，倒置。5天后，用十字交叉法測量菌落直徑。附圖說明圖1病原菌感染百合葉片的癥狀；圖2病原菌在PDA培養(yǎng)基上生長情況；圖3顯微鏡下病原菌分生孢子、分生孢子梗形態(tài)特征；圖4岷江百合葉片接種后癥狀；圖5單藥劑對灰葡萄孢菌絲生長的抑制效果(圖5-1為異菌脲，圖5-2為腐霉利，圖5-3為福美雙，圖5-4為百菌清，圖5-5為啶酰菌胺，圖5-6為咯菌腈)；對照：CK；處理：單藥劑稀釋倍250，500，1000，2000，4000圖6復(fù)配藥劑對灰葡萄孢菌絲生長的抑制效果(圖6-1為啶?！じＣ离p，圖6-2異菌·福美雙，圖6-3腐霉·福美雙，圖6-4咯菌·福美雙，圖6-5異菌·咯菌腈，圖6-6異菌·腐霉利，圖6-7腐霉·咯菌腈，圖6-8啶?！た┚妫瑘D6-9異菌·啶酰菌胺，圖6-10啶酰·腐霉利)。對照：CK；處理：復(fù)配藥劑稀釋倍數(shù)500，1000，2000，4000，8000具體實(shí)施方式有效防治百合灰霉病的方法，其步驟是：1病原菌的分離、純化采用感病葉片，常規(guī)組織分離法，取病健交界處組織進(jìn)行分離。在超凈工作臺(tái)上將感病的百合葉片用75％酒精浸泡震蕩1min，升汞處理15min，用無菌水沖洗5次，每次30s，于病健交界處切成5×5mm小方塊，置于PDA培養(yǎng)基上，25℃，黑暗培養(yǎng)。5天后，用接種環(huán)將真菌菌落邊緣菌絲挑取PDA培養(yǎng)基，25℃，黑暗培養(yǎng)。重復(fù)上一步驟，直至PDA培養(yǎng)基上生長出單一種形態(tài)菌落。2病原菌形態(tài)學(xué)鑒定(1)供試菌株菌落形態(tài)觀察將分離純化后的各菌株接種于PDA平板上，25℃黑暗條件下培養(yǎng)，5d后觀察各菌株菌落形態(tài)、顏色、菌絲生長狀況等性狀，作好拍照記錄。(2)試菌株微觀顯微特征觀察真菌進(jìn)行液體培養(yǎng)，用無菌挑針挑取置于顯微鏡下觀察其形態(tài)，并顯微拍照。3致病力測定根據(jù)柯赫氏法則需要對得到的病原真菌進(jìn)行回接，進(jìn)行致病力測定。葉片用75％酒精表面消毒后，無菌水沖洗5遍。用打孔器(8mm)制菌餅，置于健康的岷江百合葉片上，設(shè)對照每個(gè)處理重復(fù)三次，置于25℃，黑暗保濕培養(yǎng)。每天記錄發(fā)病情況，拍照。對接種發(fā)病的葉片進(jìn)行病原菌分離和鑒定。4藥劑篩選采用菌絲生長速率法測定供試藥劑的抑菌效果。殺菌劑成分及廠家一覽表農(nóng)藥名稱生產(chǎn)廠家50％異菌脲可濕性粉劑(WP)東莞市瑞德豐生物科技有限公司50％腐霉利可濕性粉劑(WP)日本住友化學(xué)株式會(huì)社50％福美雙可濕性粉劑(WP)山東科大創(chuàng)業(yè)生物有限公司75％百菌清可濕性粉劑(WP)江陰蘇利化學(xué)有限公司50％啶酰菌胺水分散粒劑(WDG)德國巴斯夫50％咯菌腈可濕性粉劑(卉友)(WP)先正達(dá)作物保護(hù)有限公司當(dāng)前第1頁1 2 3