本發(fā)明涉及食用菌栽培領(lǐng)域，涉及一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法。
背景技術(shù)：
：蛹蟲草又稱北蟲草，研究表明，蛹蟲草有效化學(xué)成分的種類及含量與冬蟲夏草相同或相似，對人體也具有相同或相似的功能，它們均含有蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖、SO天酶和麥角甾醇等生物活性物質(zhì)，具有提高免疫力、抗腫瘤、抗氧化、抗疲勞、抗輻射、降血糖、降血脂和延緩衰老等作用。2009年，中華人民共和國衛(wèi)生部公告第3號，批準(zhǔn)蛹蟲草為新資源食品，食用量≤2克/天。2013年，中華人民共和國衛(wèi)生部公告第1號，現(xiàn)批準(zhǔn)茶樹花、鹽地堿蓬籽油、美藤果油、鹽膚木果油、廣東蟲草子實(shí)體、阿薩伊果和茶藨子葉狀層菌發(fā)酵菌絲體為新資源食品。生產(chǎn)工藝簡述為廣東蟲草菌種經(jīng)接種、培養(yǎng)，采收子實(shí)體后烘干制成，食用量≤3克/天。同時蛹蟲草已經(jīng)被社會公認(rèn)，其推廣前景巨大。蠶蛹做為蛹蟲草寄住，要求蠶蛹飽滿新鮮，如蠶化蛹后時間長了，外殼變軟、體內(nèi)營養(yǎng)物被消耗，染菌率高。蠶蛹飽滿好注射菌量受限制高，菌種注射量小，發(fā)菌時間長，染菌幾率高，成功率下降。5齡蠶做為蛹蟲草寄住，蠶飽滿度好，菌種注射量受限制，5齡蠶活動量很大，菌種在注射后又流出來一部分。公開號CN102440149的中國專利文獻(xiàn)采用冰塊或在4～6℃環(huán)境中低溫麻醉20～30min，降低5齡蠶活動量，但此方法增加工序，轉(zhuǎn)移環(huán)境，增加污染概率，費(fèi)時費(fèi)力費(fèi)能源。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法，用以解決現(xiàn)有用蠶蛹或蠶培育蛹蟲草效率不高的問題。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開了以下技術(shù)方案：本發(fā)明公開的一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法，所述方法包括：蛹蟲草菌種的制備：將蛹蟲草斜面母鐘接種于斜面培養(yǎng)基上，活化菌種，待菌絲體見光轉(zhuǎn)黃后刮取斜面培養(yǎng)基上的菌絲體，接種到液體培養(yǎng)基中；菌種擴(kuò)培：將上述得到的液體蛹蟲草菌種繼續(xù)避光培養(yǎng)，首先靜止培養(yǎng)48h，以后以140r/min每天搖2次，每次搖5min，繼續(xù)培養(yǎng)4-5天；接種：在擴(kuò)培后得到的液體菌種添加磷酸氫二鉀和硫酸鎂，使菌液中的磷酸氫二鉀和硫酸鎂的濃度變?yōu)樵瓉淼?.5-2倍，再以140r/min搖10分鐘，在無菌室將搖勻后的菌液注入經(jīng)消毒并瀝干后的寄主蠶體內(nèi)，從蠶中后部氣孔進(jìn)針，邊退針邊注射，一直到注射飽滿為止；暗培養(yǎng)管理：將接種后培養(yǎng)的蠶避光培養(yǎng)，11～13天蠶徹底僵化，16～20天2/3的蠶體布滿白色菌絲，發(fā)菌完成；光培養(yǎng)管理：將經(jīng)暗培養(yǎng)發(fā)菌完成的蠶置于培養(yǎng)蛹蟲草的容器中在光照的條件下培養(yǎng)20～25天。本發(fā)明公開的上述一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法中，所述接種中寄主選擇做完繭且沒蛻皮變蛹的變態(tài)前期的蠶。本發(fā)明公開的上述一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法中，所述蠶為柞蠶或桑蠶。本發(fā)明公開的上述一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法中，所述蛹蟲草菌種的制備中的液體培養(yǎng)基包括以下重量百分比的組分：土豆15-25％、葡萄糖1％-2％、蔗糖0.5％-1％、蛋白胨0.5％、磷酸二氫鉀0.15-0.3％、硫酸鎂0.1-0.15％和維生素B10.001-0.01％，其余為蒸餾水。本發(fā)明公開的上述一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法中，所述接種中在擴(kuò)培后得到的液體菌種添加磷酸氫二鉀和硫酸鎂，使菌液中所述磷酸氫二鉀和硫酸鎂的質(zhì)量百分比分別變?yōu)?.25-0.6％和0.15-0.3％。本發(fā)明公開的上述一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法中，所述菌種擴(kuò)培中避光培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度21～23℃。本發(fā)明公開的上述一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法中，所述暗培養(yǎng)管理中的培養(yǎng)溫度為15～17℃，培養(yǎng)濕度為45％～55％。本發(fā)明公開的上述一種利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法中，所述光培養(yǎng)管理中的光照強(qiáng)度為200～400Lx，培養(yǎng)溫度為20～23℃，培養(yǎng)濕度為85％～95％。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：該方法是以活體變態(tài)前期的蠶為寄主，采用注射的方法接種蛹蟲草菌，因?yàn)樽儜B(tài)前期的蠶軀體大，體液少，不愛動等特點(diǎn)，所以接種成活率大大提高。本發(fā)明在接種前將菌種培養(yǎng)基中無機(jī)鹽濃度增加一倍再注射，為菌在蠶蛹內(nèi)生長提供更適合的無機(jī)鹽環(huán)境，將發(fā)菌時間縮短26.7％，生長時間縮短15.6％。采用本發(fā)明的方法后，變態(tài)前期的蠶的僵化率達(dá)到94％～100％，子實(shí)體長出率達(dá)到90％～100％；本發(fā)明的蛹蟲草培育方法具有操作方便、培育成本低以及實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，適用于大規(guī)模栽培，具有廣闊的應(yīng)用前景。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1用同樣的菌種，同樣的方法分別選擇50只桑蠶和50只桑蠶蛹做寄主，具體的利用變態(tài)前期的蠶培育蛹蟲草的方法步驟如下：(1)寄主的選擇：選擇做完繭且沒蛻皮變蛹的桑蠶為寄主，選剛蛻變化蛹的桑蠶蛹為寄主；(2)蛹蟲草菌種的制備：蛹蟲草菌種的制備：將蛹蟲草斜面母種接種于斜面培養(yǎng)基上，活化菌種，待菌絲體見光轉(zhuǎn)黃后，刮取斜面培養(yǎng)基上的菌絲體，接種到液體培養(yǎng)基中，所述蛹蟲草菌種的制備中的液體培養(yǎng)基包括以下重量百分比的組分：土豆20％、葡萄糖2％、蔗糖0.5％、蛋白胨0.5％、磷酸二氫鉀0.15％、硫酸鎂0.1％和維生素B10.01％，其余為蒸餾水；(3)菌種擴(kuò)培：將步驟(2)得到的液體菌種繼續(xù)避光培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度21～23℃，靜止培養(yǎng)48h，以后以140r/min每天搖2次，每次5min，繼續(xù)培養(yǎng)4-5天；(4)接種：將步驟(3)得到的液體菌種添加磷酸氫二鉀和硫酸鎂，使其濃度變?yōu)榱姿釟涠?.3％，硫酸鎂0.15％，以140r/min搖10min，選變態(tài)前的繭，剪開繭取出桑蠶，消毒、瀝干，在無菌室將搖勻后的菌液注入經(jīng)消毒并瀝干后的寄主蠶體內(nèi)；注射方法：從桑蠶中后部氣孔進(jìn)針，邊退針邊注射，一直到注射飽滿為止；(5)暗培養(yǎng)管理：將經(jīng)步驟(4)培養(yǎng)的桑蠶和桑蠶蛹避光培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為15～17℃，培養(yǎng)濕度為45％～55％，及時檢查，挑出被雜菌感染的蠶，11～13天蠶徹底僵化，16～20天2/3的蠶體布滿白色菌絲，發(fā)菌完成；(6)光培養(yǎng)管理：將經(jīng)步驟(5)培養(yǎng)發(fā)菌完成的桑蠶和桑蠶蛹置于培養(yǎng)蛹蟲草的容器在光照的條件下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為200～400Lx，培養(yǎng)溫度為20～23℃，培養(yǎng)濕度為85％～95％，培養(yǎng)時間為20～25天。表1桑蠶蛹和桑蠶發(fā)菌結(jié)束時間對比表天數(shù)15161718192021桑蠶蛹發(fā)菌結(jié)束個數(shù)002514192桑蠶發(fā)菌結(jié)束個數(shù)05359000上述表1中發(fā)菌結(jié)束以蠶體三分之二出現(xiàn)白毛為準(zhǔn)，從表1可以看出桑蠶蛹的發(fā)菌時間明顯長于桑蠶的發(fā)菌時間。表2桑蠶蛹和桑蠶采收結(jié)束時間對比表天數(shù)1920212223242526桑蠶蛹采收結(jié)束個數(shù)0001414136桑蠶采收結(jié)束個數(shù)0821171000上述表2中采收結(jié)束以子實(shí)體長孢子為準(zhǔn)，從表2可以看出桑蠶蛹的采收時間明顯長于桑蠶的采收時間。表3桑蠶蛹和桑蠶培育蛹蟲草結(jié)果分析對比表項(xiàng)目發(fā)菌時間(天)僵化率(％)采收時間(天)出草率(％)桑蠶蛹19.38424.590桑蠶17.19821.296上述表3中，采收時間從光培養(yǎng)管理之后計，僵化率為僵化個數(shù)與總數(shù)的比值；出草率為出草的個數(shù)與總數(shù)的比值。從表3可以看出從發(fā)菌時間、采收時間上可以得出桑蠶蛹明顯長于桑蠶，但僵化率和出草率桑蠶明顯高于桑蠶蛹，桑蠶的發(fā)菌時間節(jié)省14.9％，采收時間減少15.6％，所以桑蠶比桑蠶蛹適合做寄主。實(shí)施例2用同樣的菌種，同樣的方法分別選擇50只柞蠶和50只柞蠶蛹做寄主，具體的利用變態(tài)前期的柞蠶培育蛹蟲草的方法步驟如下：(1)寄主的選擇：選擇做完繭且沒蛻皮變蛹的柞蠶為寄主，選剛蛻變化蛹的柞蠶蛹為寄主；(2)蛹蟲草菌種的制備：蛹蟲草菌種的制備：將蛹蟲草斜面母種接種于斜面培養(yǎng)基上，活化菌種，待菌絲體見光轉(zhuǎn)黃后，刮取斜面培養(yǎng)基上的菌絲體，接種到液體培養(yǎng)基中，所述蛹蟲草菌種的制備中的液體培養(yǎng)基包括以下重量百分比的組分：土豆19％、葡萄糖1％、蔗糖1％、蛋白胨0.5％、磷酸二氫鉀0.2％、硫酸鎂0.12％和維生素B10.005％，其余為蒸餾水。(3)菌種擴(kuò)培：將步驟(2)得到的液體菌種繼續(xù)避光培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度21～23℃，靜止培養(yǎng)48h，以后以140r/min每天搖2次，每次5min，繼續(xù)培養(yǎng)4-5天；(4)接種：將步驟(3)得到的液體菌種添加磷酸氫二鉀和硫酸鎂，使其濃度變?yōu)榱姿釟涠?.4％，硫酸鎂0.24％，以140r/min搖10min，選變態(tài)前的繭，剪開繭取出柞蠶，消毒、瀝干，在無菌室將搖勻后的菌液注入經(jīng)消毒并瀝干后的寄主蠶體內(nèi)；注射方法：從柞蠶中后部氣孔進(jìn)針，邊退針邊注射，一直到注射飽滿為止；(5)暗培養(yǎng)管理：將經(jīng)步驟(4)培養(yǎng)的桑蠶和桑蠶蛹避光培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為15～17℃，培養(yǎng)濕度為45％～55％，及時檢查，挑出被雜菌感染的蠶，11～13天蠶徹底僵化，16～20天2/3的蠶體布滿白色菌絲，發(fā)菌完成；(6)光培養(yǎng)管理：將經(jīng)步驟(5)培養(yǎng)發(fā)菌完成的柞蠶和柞蠶蛹置于培養(yǎng)蛹蟲草的容器在光照的條件下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度為200～400Lx，培養(yǎng)溫度為20～23℃，培養(yǎng)濕度為85％～95％，培養(yǎng)時間為20～25天。表4柞蠶蛹和柞蠶發(fā)菌結(jié)束時間對比表天數(shù)16171819202122柞蠶蛹發(fā)菌結(jié)束個數(shù)619154柞蠶發(fā)菌結(jié)束個數(shù)334101上述表4中發(fā)菌結(jié)束以蠶體三分之二出現(xiàn)白毛為準(zhǔn)，從表4可以看出柞蠶蛹的發(fā)菌時間明顯長于柞蠶的發(fā)菌時間。表5柞蠶蛹和柞蠶采收結(jié)束時間對比表天數(shù)1920212223242526柞蠶蛹采收結(jié)束個數(shù)2313184柞蠶采收結(jié)束個數(shù)318188上述表5中采收結(jié)束以子實(shí)體長孢子為準(zhǔn)，從表5可以看出柞蠶蛹的采收時間明顯長于柞蠶的采收時間。表6柞蠶蛹和柞蠶培育蛹蟲草結(jié)果分析對比表項(xiàng)目發(fā)菌時間(天)僵化率(％)采收時間(天)出草率(％)柞蠶蛹20.48824.590柞蠶17.29621.798上述表6中，采收時間從光培養(yǎng)管理之后計，僵化率為僵化個數(shù)與總數(shù)的比值；出草率為出草的個數(shù)與總數(shù)的比值。從表6可以看出從發(fā)菌時間、采收時間上可以得出柞蠶蛹明顯長于柞蠶，但僵化率和出草率柞蠶明顯高于柞蠶蛹，柞蠶的發(fā)菌時間節(jié)省18％，采收時間減少12.9％，所以柞蠶比柞蠶蛹適合做寄主。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施例對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3