本發(fā)明涉及的是動物繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種豬精液常溫液態(tài)負(fù)壓保存裝置及方法。
背景技術(shù)：
近年，隨著養(yǎng)豬業(yè)的不斷發(fā)展，豬的人工授精技術(shù)也得到了迅猛的發(fā)展，但由于人工授精所需的精液目前還是主要以常溫液態(tài)保存為主，豬精液液態(tài)保存的質(zhì)量及時效成為制約豬人工授精技術(shù)的關(guān)鍵問題。目前，豬常溫液態(tài)保存的精液存在保存時間短(一般保存3-7天)、保存后精子活力低、畸形率高等問題。有研究人員試圖對豬精液稀釋液成分配方進(jìn)行改良以期延長豬精液保存的時間和提高精液質(zhì)量，但效果不理想。所以現(xiàn)在急需一種延長豬精液液態(tài)保存的時間和提高精液質(zhì)量的裝置和方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中，豬精液常溫液態(tài)保存時間短，精子活力低質(zhì)量差的問題，進(jìn)而提供一種豬精液常溫液態(tài)負(fù)壓保存裝置及方法。
本發(fā)明的一種豬精液常溫液態(tài)保存裝置，包括密閉容器1、橡膠塞2、連接管4、真空泵5和精液保存管6，密閉容器1上部設(shè)有橡膠塞2，連接管4的一端穿過橡膠塞2伸入密閉容器1內(nèi)部，另一端連接真空泵5，精液保存管6置于密閉容器1內(nèi)底部。
進(jìn)一步地，連接管4上設(shè)有閥門3。
本發(fā)明還涉及一種利用上述裝置保存豬精液的方法，包括如下步驟：
步驟一、將新鮮豬精液經(jīng)離心機(jī)去除上層精漿，然后用稀釋液對其進(jìn)行稀釋，將濃度調(diào)配成每毫升1×108～5×108個，再檢測其中的精子活力，達(dá)標(biāo)后置于精液保存管6中；
步驟二、將精液保存管6放入密閉容器1中，蓋上帶閥門的橡膠塞2，并將連接管4與帶真空泵5連接，啟動真空泵5將密閉容器1中的空氣抽出，使氣壓降為-0.04MPa～-0.08MPa，真空泵5的開關(guān)，將連接管4與密閉容器1分離；
步驟三、將密閉容器1放入16～18℃保溫箱中進(jìn)行保存。
本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明利用本裝置提供負(fù)壓的環(huán)境進(jìn)行豬精液常溫液態(tài)保存，可以將保存時間延長到9-13天，精子和精液質(zhì)量均得到顯著提高，而且本發(fā)明操作簡單、效率高，使用方便，適合豬精液常溫液體保存得推廣應(yīng)用。
附圖說明
圖1是本發(fā)明豬精液常溫液態(tài)保存裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體說明如下：
密閉容器1、橡膠塞2、閥門3、連接管4、真空泵5、精液保存管6。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明涉及一種豬精液常溫液態(tài)保存裝置，該裝置包括密閉容器1、橡膠塞2、連接管4和真空泵5，密閉容器1上部設(shè)有橡膠塞2，連接管4的一端穿過橡膠塞2伸入密閉容器1內(nèi)部，另一端連接真空泵5。精液保存管6置于密閉容器1底部，連接管4上設(shè)有閥門3。
上述裝置主要用于豬精液的保存，具體的保存方法包括如下步驟：
步驟一、將新鮮豬精液經(jīng)離心機(jī)去除上層精漿，然后用稀釋液對其進(jìn)行稀釋，將濃度調(diào)配成每毫升1×108～5×108個，再檢測其中的精子活力，達(dá)標(biāo)后置于精液保存管6中；所述精液保存管6加蓋，但不密封。
步驟二、將精液保存管6放入密閉容器1中，蓋上帶閥門的橡膠塞2，并將連接管4與帶真空泵5連接，啟動真空泵5將密閉容器1中的空氣抽出，使氣壓降為-0.04MPa～-0.08MPa，真空泵5的開關(guān)，將連接管4與密閉容器1分離；
步驟三、將密閉容器1放入16～18℃保溫箱中進(jìn)行保存。
優(yōu)選地，步驟一中，離心機(jī)離心工作時的轉(zhuǎn)速為1800r/分鐘，離心時間為5分鐘，精液保存管6的容積為15～80ml。稀釋液為Modena稀釋液，其中含4mg/ml的牛血清白蛋白。
實(shí)施例1(實(shí)驗(yàn)組)
本實(shí)施例中保存豬精液的方法，包括如下步驟：
步驟一、將新鮮豬精液經(jīng)離心機(jī)去除上層精漿，離心機(jī)離心工作時的轉(zhuǎn)速為1800r/分鐘，離心時間為5分鐘。然后用Modena稀釋液對其進(jìn)行稀釋，將濃度調(diào)配成每毫升1×108～5×108個，再檢測其中的精子活力，達(dá)標(biāo)后取50毫升置于精液保存管6中；
步驟二、將精液保存管6放入密閉容器1中，蓋上帶閥門的橡膠塞2，并將連接管4與帶真空表的真空泵5連接；啟動真空泵5，將密閉容器1中的空氣抽出，使氣壓降為-0.04MPa，關(guān)閉閥門3和真空泵5的開關(guān)，將連接管4與密閉容器1分離；
步驟三、將密閉容器1放入17℃豬精液保溫箱中進(jìn)行保存即得到所需豬精液。
實(shí)施例2(對照組)
本實(shí)施例中保存豬精液的方法，包括如下步驟：
步驟一、將新鮮豬精液經(jīng)離心機(jī)去除上層精漿，離心機(jī)離心工作時的轉(zhuǎn)速為1800r/分鐘，離心時間為5分鐘。然后用Modena稀釋液對其進(jìn)行稀釋，將濃度調(diào)配成每毫升1×108個，再檢測其中的精子活力，達(dá)標(biāo)后取50毫升置于精液保存管6中；
步驟二、將精液保存管6放入17℃豬精液保溫箱中進(jìn)行保存即得到所需豬精液。
對比試驗(yàn)
針對實(shí)施例1和實(shí)施例2中對豬精液的不同保存方法，分別進(jìn)行試驗(yàn)操作。在不同的保存天數(shù)下，分別測定了豬精液的精子活力、畸形率、pH值、活性氧和總抗氧化能力的數(shù)值，數(shù)據(jù)如下表1至5所示(表1至5中，同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)字母不同差異顯著，P<0.05)：
表1.不同保存方式對保存不同時間的豬精子活力的影響
表2.不同保存方式對保存不同時間的豬精子畸形率影響
表3.不同保存方式對保存不同時間的豬精液pH的影響
表4.不同保存方式對保存不同時間的豬精液活性氧(ROS)的影響
表5.不同保存方式對保存不同時間的豬精子總抗氧化能力(T-AOC)(μmol/107sperm)的影響
分析：
從以上數(shù)據(jù)可以看出，隨時間推移常溫負(fù)壓下保存的豬精液，其精子活力逐漸優(yōu)于常溫常壓下保存的豬精液，而畸形率較后者明顯降低。pH值和總抗氧化數(shù)值優(yōu)于常溫常壓條件下的數(shù)值，活性氧數(shù)值低于后者。主要原因是負(fù)壓減少了氧氣含量，使精子處于休眠的狀態(tài)，其代謝減慢后，延長了保存時間。精子呼吸產(chǎn)生CO2，使得精液的pH值，隨著保存時間的延長逐漸下降。弱酸性環(huán)境可以抑制精子活動和代謝，負(fù)壓能夠減緩PH的下降。從精子的抗氧化能力方面來說，負(fù)壓保存要比正常壓強(qiáng)下的精子的抗氧化性強(qiáng)，可以看出從3天后有顯著差異。
通過對上述數(shù)據(jù)的分析和原理闡釋，可以看出本發(fā)明利用真空泵提供負(fù)壓的環(huán)境，再利用負(fù)壓自吸的原理，將豬精液常溫液態(tài)負(fù)壓保存，可以將保存時間延長(9-13天)，精子和精液質(zhì)量均得到顯著提高。
上述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非用于限制本發(fā)明的實(shí)施方案，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的主要構(gòu)思和精神，可以十分方便地進(jìn)行相應(yīng)的變通或修改，故本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)以權(quán)利要求書所要求的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。