本發(fā)明涉及一種塊菌菌根苗的合成方法。
背景技術(shù)：
塊菌（truffles）為了囊菌類(lèi)、塊菌目（tuberales）、塊菌科（tuberaceae）、塊菌屬（tuber），是一類(lèi)與維管束植物形成共生關(guān)系，具有很高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與經(jīng)濟(jì)開(kāi)發(fā)價(jià)值的地下名貴食用真菌、除具有較高的維生素b1、維生素b2與獨(dú)特的口感及香味外，其內(nèi)所含的雄性酮類(lèi)成份是其它類(lèi)食用菌所無(wú)法與之相比的，特別是歐美等國(guó)家塊菌號(hào)稱(chēng)“黑色鉆石”。
過(guò)去塊菌主要靠自然生長(zhǎng)，隨著需求量的增長(zhǎng)，掠奪式的采挖已導(dǎo)致自然野生產(chǎn)量逐年下降，目前已成為瀕危物種。近年來(lái)，逐步開(kāi)展了人工栽培塊菌的研究，但一是接種塊菌菌種均為子囊果均漿液，菌種純度低，二是宿主植物苗和塊菌菌根幼苗的培育在有菌的環(huán)境下進(jìn)行，受外界雜菌的影響，造成塊菌菌根苗合成的感染率只有60%以下，寄生成功率較低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述存在的問(wèn)題，提供一種感染率高的塊菌菌根苗合成方法。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：包括宿主植物苗的培育、塊菌菌種接種、塊菌菌根苗初期培育、塊菌菌根苗后期培育，其特征是：
1、宿主植物苗的培育：宿主植物選用云南松、華山松、板栗、釣栲的任意一種，宿主植物的種子經(jīng)消毒處理后，在無(wú)菌的環(huán)境下，使用無(wú)菌的基質(zhì)培育80～100天；
2、塊菌菌種接種：在裝有空氣凈化器的無(wú)菌接種間內(nèi)進(jìn)行塊菌菌種接種，作業(yè)前開(kāi)起空氣凈化器30～50分種，將步驟1培養(yǎng)的宿主植物苗剪去根段末端1/3，根部按順序蘸生根液和高純度液體塊菌菌種后，放入裝有1/3基質(zhì)的黑色育苗杯內(nèi)，用接種槍瞄準(zhǔn)宿主植物苗根部射入10～13ml高純度液體塊菌菌種，宿主植物苗扶正后加入基質(zhì)至距杯上口1.0～1.5cm，生根液為吲哚乙酸水溶液濃度為1~2mg/l，基質(zhì)為過(guò)2目砂窗過(guò)篩腐殖土、蛭石、石英砂按體積比2：1:1比例混勻后、調(diào)整水份30~35%，調(diào)整ph值7～8.5，經(jīng)128℃高壓滅菌2小時(shí)；
3、塊菌菌根苗初期培育：將步驟2接種后的宿主植物苗放入到在裝有空氣凈化器的無(wú)菌育苗室培育，1～3天育苗室溫度控制在18～26℃，3天后，育苗室溫度控制在晝26±1℃，夜15±1℃，每天光照時(shí)長(zhǎng)10～12小時(shí)，光照度為1200～1500lx，每天開(kāi)起空氣凈化器30～50分鐘，培育15天后，菌根苗可移入塑料大棚培育；
4、塊菌菌根苗后期培育：將步驟3菌根苗移入塑料大棚，3～5天內(nèi)進(jìn)行遮陽(yáng)，遮光率為55～65%，5天后在大棚自然環(huán)境下培育，5～6個(gè)月后可到大田移栽。
本發(fā)明中一是接種塊菌菌種使用了
本技術(shù)：
人生產(chǎn)的高純度液體塊菌菌種，二是宿主植物苗和塊菌菌根苗初期培育在無(wú)菌的環(huán)境下進(jìn)行，未受外界雜菌的影響，三是宿主植物苗蘸生根液和高純度液體塊菌菌種后，用接種槍瞄準(zhǔn)宿主植物苗根部射入高純度液體塊菌菌種，宿主植物苗根部及周?chē)N密布，為此，塊菌菌根苗合成的感染率高，可以達(dá)到90%以上，比現(xiàn)有技術(shù)高出30%。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作具體說(shuō)明。
1、宿主植物苗的培育：
（1）宿主植物種子的篩選和保存
宿主植物選用云南松、華山松、板栗、釣栲（大葉櫧）任意一種，云南松、華山松種子用水洗去除空殼后晾干，裝在玻璃罐或紗布袋中儲(chǔ)藏備用；板粟、釣栲種子水洗去除霉?fàn)€變質(zhì)與不飽滿的種子、晾干表面水份，種子與濕度為25～35%的潔凈河砂按體積比1：2的比例混合裝入紙箱中并置于4～6℃的冷藏柜中保存?zhèn)溆茫?/p>
（2）種子處理：
使用云南松、華山松種子時(shí)；用0.1%高錳酸鉀溶液浸泡30分種，用清水沖洗2～3遍，再用30%h2o2溶液浸泡4小時(shí)，并用戴有防護(hù)橡膠手套的手搓洗，使種子表面堅(jiān)硬的臘層盡量去除，以利種子吸收水份和播種后萌發(fā)，用無(wú)菌水沖洗3～4遍后，再用無(wú)菌水浸泡96小時(shí)，浸泡時(shí)至少每24小時(shí)更換一次無(wú)菌水，接著瀝干水份后備用；使用板粟、釣栲（大葉櫧）樹(shù)種子時(shí)，用0.1%高錳酸鉀溶液浸泡30分鐘，用清水沖洗2～3遍后再用30%h2o2溶液浸泡2小時(shí)，浸泡時(shí)應(yīng)隨時(shí)搓洗，除去表面臘層，用無(wú)菌水沖洗3～4遍后，再用無(wú)菌水浸泡48小時(shí)，浸泡時(shí)至少每24小時(shí)更換一次無(wú)菌水，接著瀝干水份后備用；
（3）育苗基質(zhì)制備：過(guò)2目砂窗過(guò)篩腐殖土、蛭石、石英砂按體積比1:1:1比例混勻，加水調(diào)至含水量30～35%后，在128℃高壓滅菌2小時(shí)備用；
（4）播種：基質(zhì)裝入專(zhuān)用塑料培養(yǎng)筐內(nèi)，并將處理后的種子播入基質(zhì)中培育，植入深度為2cm左右。
（5）育苗：播種后用無(wú)菌水澆灌、濕度控制在50～60%，播種后15天左右開(kāi)始出芽，30天后苗基本上出齊，苗齡在90天后可開(kāi)始接塊菌種。
2、塊菌菌種接種：在裝有空氣凈化器的無(wú)菌接種間內(nèi)進(jìn)行塊菌菌種接種，作業(yè)前開(kāi)起空氣凈化器30～50分種，將步驟1培養(yǎng)的宿主植物苗剪去根段末端1/3，根部按順序蘸生根液和高純度液體塊菌菌種后，放入裝有1/3基質(zhì)的黑色育苗杯內(nèi)，用接種槍瞄準(zhǔn)宿主植物苗根部射入10～13ml高純度液體塊菌菌種，宿主植物苗扶正后加入基質(zhì)至距杯上口1.0～1.5cm，生根液為吲哚乙酸水溶液濃度為1~2mg/l，基質(zhì)為過(guò)2目砂窗過(guò)篩腐殖土、蛭石、石英砂按體積比2：1:1比例混勻后、調(diào)整水份30~35%，用石灰粉調(diào)整調(diào)整ph值7～8.5，經(jīng)128℃高壓滅菌2小時(shí)；
3、塊菌菌根苗初期培育：接種后的1-3天是菌種能否成活的關(guān)鍵時(shí)期，而接種后的7-15天又是菌種與植株共生能否成功的關(guān)鍵期，為此，將步驟2接種后的宿主植物苗放入在裝有空氣凈化器的無(wú)菌育苗室培育，1～3天育苗室溫度控制在18～26℃，3天后育苗室溫度控制在晝26±1℃，夜15±1℃，每天光照時(shí)長(zhǎng)10～12小時(shí)，光照度為1200～1500lx，每天開(kāi)起空氣凈化器30～50分鐘，培育15天后，菌根苗可移入塑料大棚培育；
4、塊菌菌根苗后期培育：將步驟3菌根苗移入塑料大棚，3～5天內(nèi)進(jìn)行遮陽(yáng)，遮光率為55～65%，5天后在大棚自然環(huán)境下培育，5～6個(gè)月后可到大田移栽。