本發(fā)明屬于農藥創(chuàng)制領域，特別涉及吩嗪-1-甲酰胺改造化合物18-3在抑制草莓灰霉病菌(botrytiscinerea)中的應用。

背景技術：

草莓是薔薇科草莓屬植物，營養(yǎng)價值豐富，被譽為是“水果皇后”，含有豐富的維生素c、維生素a、維生素e、維生素pp、維生素b1、維生素b2、胡蘿卜素、鞣酸、天冬氨酸、銅、草莓胺、果膠、纖維素、葉酸、鐵、鈣、鞣花酸與花青素等營養(yǎng)物質，深受消費者喜愛。草莓在生長的過程中常受外界環(huán)境條件的影響，例如：溫度、濕度、光照、地勢、病害等，其中草莓灰霉病是草莓生育期間的重要病害，每年由該病害造成的經濟損失可達30-60％，甚至絕產。

目前，生產上防治草莓灰霉病的方法主要依靠化學農藥，例如：腐霉利、多菌靈、乙霉威、異菌脲等，但長期大量使用化學農藥不僅污染環(huán)境、破壞生態(tài)平衡，而且容易使病菌產生抗藥性。前人的研究結果表明：草莓灰霉病菌已對多種化學農藥產生了抗藥性。因此，探尋防治草莓灰霉病的新農藥刻不容緩。

目前，開發(fā)新農藥的途徑主要有化學合成、已有化合物的結構改造、從植物或微生物體內篩選結構新穎的化合物等，其中已有化合物的結構改造是開發(fā)新農藥的方法，不僅可以節(jié)約研發(fā)成本，而且短期效益顯著。本課題組曾研究具有抑菌作用的吩嗪-1-甲酰胺，但其抑菌效果相對弱，因此，本課題組以吩嗪-1-甲酰胺為母體，通過結構改造并獲得了吩嗪-1-甲酰胺改造物18-3。為明確該改造物的開發(fā)潛力，本發(fā)明評價了其對草莓灰霉病菌的抑制效果，旨在為豐富防治草莓灰霉病的新農藥提供理論依據和實踐基礎。

技術實現要素：

本發(fā)明所要解決的技術問題是，提供一種吩嗪-1-甲酰胺改造化合物18-3在抑制草莓灰霉病菌中的應用，該吩嗪-1-甲酰胺改造化合物18-3是以吩嗪-1-甲酰胺為母體經過結構改造得到，本發(fā)明同時采用生長速率法測定了該改造化合物18-3對草莓灰霉病菌的抑制作用，結果表明該改造化合物18-3對草莓灰霉病菌的抑制效果好，且抑制效果強于其母體吩嗪-1-甲酰胺。

為解決上述技術問題，本發(fā)明所采用的技術方案是：一種吩嗪-1-甲酰胺改造化合物18-3在抑制草霉灰霉病菌中的應用。

本發(fā)明同時提供一種吩嗪-1-甲酰胺改造化合物18-3在制備防控草霉灰霉病農藥中的應用。

上述吩嗪-1-甲酰胺改造化合物18-3的結構式如下：

上述吩嗪-1-甲酰胺改造化合物18-3是以吩嗪-1-甲酰胺為母體，于吩嗪-1-羧酸中加入4-苯基丁胺、三(三氟乙氧基)硼及乙腈進行反應。反應液冷卻后加入dcm和水；再依次加入amberlysta-26(oh)、amberlyst15、amberliteira743樹脂，室溫條件下攪拌反應得到。

與現有技術相比，本發(fā)明具有的優(yōu)點為：本改造化合物18-3對草莓灰霉病菌具有較強的毒力，其ec50為4.25μg/ml，比對照藥劑(母體吩嗪-1-甲酰胺)的ec50低；本改造化合物18-3對草莓灰霉病菌的抑制效果好，且抑制效果強于其母體吩嗪-1-甲酰胺，其不易使病菌產生抗藥性，并豐富了防治草莓灰霉病菌的新農藥。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的改造化合物18-3的質譜圖。

具體實施方式

下面結合具體試驗和實施例對本發(fā)明的技術方案作進一步說明，本發(fā)明試驗和實施例中涉及的百分比均為質量百分比。

實施例1吩嗪-1-甲酰胺改造化合物18-3的制備

改造化合物18-3的合成方法：將吩嗪-1-甲酰胺在酸性條件下水解生成吩嗪-1-羧酸；取6.2mmol吩嗪-1-羧酸(1.4179g)、6.2mmol4-苯基丁胺(1ml)、12.4mmol三(三氟乙氧基)硼(2.675ml)、12.4ml乙腈加入25ml圓底燒瓶中，磁力攪拌，80℃反應24h；反應液冷卻后加入20mldcm和3ml水；再依次加入amberlysta-26(oh)、amberlyst15、amberliteira743樹脂各930mg，室溫條件下攪拌30min；然后加入無水硫酸鎂粉末除水，過濾，使用干燥dcm洗滌固體硫酸鎂3次，旋蒸，得改造物18-3，產率為52.64％。

實施例2吩嗪-1-甲酰胺改造化合物18-3的結構鑒定

經氫譜(1hnmr(500mhz,cdcl3)δ11.04(s,54h),9.05–8.86(m,56h),8.52–7.66(m,363h),7.29(s,10h),7.33–7.14(m,15h),4.03–3.44(m,255h),3.41(d,j＝3.3hz,163h),3.35(t,j＝4.6hz,13h),2.67(s,4h),2.33(d,j＝13.9hz,4h),2.18–2.01(m,122h),1.83(dd,j＝12.6,6.1hz,4h),1.48–1.14(m,107h),1.74–0.78(m,275h),1.53–0.78(m,253h),1.00(ddd,j＝18.6,14.5,7.3hz,26h),0.93–0.50(m,119h),-0.00(s,14h).)、碳譜(13cnmr(126mhz,cdcl3)δ164.77(s),143.41(s),142.91(s),141.33(s),140.84(s),135.35(s),133.52(s),131.60(s),131.00(s),130.09(s),129.69(s),129.21(s),129.02(s),77.32(s),77.07(s),76.81(s),70.94(s),58.80(s),37.46(s),29.52(s).)和質譜(分子量：295.20，圖1)檢測實施例1合成的化合物與預期目標吻合，其分子式為c23h21n3o，結構式如下：

實施例3

⑴儀器及相關材料

yj-vs-2型超凈工作臺(無錫一凈凈化設備有限公司)，ldzx-30e滅菌鍋(上海申安醫(yī)療器械廠)，mpj-250型培養(yǎng)箱(上海森信實驗儀器有限公司)，qhx-400b-iii型光照培養(yǎng)箱(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司)，電爐(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)等以及量筒、玻璃棒、燒杯、三角瓶、直尺、鉛筆、標簽紙、封口膜、挑針、容量瓶、接種針、ph-101噴壺、打孔器、培養(yǎng)皿、菜刀、紗布。

⑵藥劑

實施例1制備的93％吩嗪-1-甲酰胺改造物18-3原藥(以下簡稱改造物18-3)；瓊脂、葡萄糖、丙酮和吐溫80等藥劑均從國藥集團購買。

⑶菌株

試驗用野生敏感型的草莓灰霉病菌(botrytiscinerea)由湖南農業(yè)大學植物病理實驗室分離、鑒定和保存。

⑷改造物18-3對草莓灰霉病菌的活性測定

采用生長速率法測定改造物18-3對草莓灰霉病菌(botrytiscinerea)的抑制作用。取適量丙酮將改造物18-3原藥溶解，然后配制成質量濃度為1000μg/ml的母液，按藥液與培養(yǎng)基1：9的體積比配制成最終含藥量為2.5、5、10、20、40μg/ml的含藥平板，以少量丙酮和清水的混合物作對照，用直徑5mm的打孔器在預培養(yǎng)2d的草莓灰霉病菌菌落邊緣打取菌餅正面朝下接種到含藥平板上，每處理重復3次，并以無藥平板作對照，置于26-28℃培養(yǎng)箱中，待對照菌落直徑長至整個培養(yǎng)的2/3時，采用十字交叉法測量各處理的菌落直徑。同時，采用同樣的方法測試吩嗪-1-甲酰胺(最終含藥量為0.625、1.25、2.5、5、10μg/ml)對草莓灰霉病的抑制作用。計算抑制率，ec50值，相關系數及回歸方程。

⑸結果與分析

由表1可知，當改造物18-3濃度為40μg/ml時，抑菌效果最好，其抑制率為79.08％；其次，改造物18-3濃度為20μg/ml時，抑菌效果次之；其他處理的抑制率低于70％。該藥劑對油菜菌核病菌具有較強毒力效果(ec50為12.18μg/ml，回歸方程為y＝1.8804x+2.9585，相關系數為0.9726)，其毒力強于對照藥劑吩嗪-1-甲酰胺(ec50為21.62μg/ml，回歸方程為y＝1.0821x+3.5556，相關系數為0.9714)，該藥劑對油菜菌核病菌的抑制效果強于吩嗪-1-甲酰胺(表2)，表明該改造物18-3能作為防控油菜菌核病新農藥的先導化合物。

表1吩嗪-1-甲酰胺改造物18-3對草莓灰霉病菌的抑制作用

表2吩嗪-1-甲酰胺對草莓灰霉病菌的抑制作用