本發(fā)明屬于香蕉組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種糠氨基嘌呤香蕉增殖培養(yǎng)基篩選方法。
背景技術(shù)：
香蕉（學(xué)名：musananalour.）芭蕉科芭蕉屬植物，又指其果實(shí)。熱帶地區(qū)廣泛栽培食用。香蕉味香、富含營(yíng)養(yǎng)，終年可收獲，在溫帶地區(qū)也很受重視。植株為大型草本，從根狀莖發(fā)出，由葉鞘下部形成高3～6公尺(10～20尺)的假桿；葉長(zhǎng)圓形至橢圓形，有的長(zhǎng)達(dá)3～3.5公尺(10～11.5尺)，寬65公分(26寸)，10～20枚簇生莖頂。穗狀花序下垂[1]，由假桿頂端抽出，花多數(shù)，淡黃色；果序彎垂，結(jié)果10～20串，約50～150個(gè)。植株結(jié)果后枯死，由根狀莖長(zhǎng)出的吸根繼續(xù)繁殖，每一根株可活多年。原產(chǎn)亞洲東南部：中國(guó)臺(tái)灣、海南、廣東、廣西等地區(qū)均有栽培。目前香蕉是一種廣受歡迎的水果，也是部分地區(qū)的主要糧食，擁有極大市場(chǎng)需求量，對(duì)香蕉進(jìn)行快速繁殖的研究具有一定的必要性，不僅能解決龐大的市場(chǎng)需求量，也能在一定程度上保存優(yōu)良的香蕉品種，組織培養(yǎng)是香蕉快速繁殖的方法之一，選擇合適的培養(yǎng)基是提高組織培養(yǎng)效率途徑之一，然而目前的培養(yǎng)基篩選方法都是以科研為目的的篩選方法，不能商業(yè)工廠化生產(chǎn)的需求。
稀土元素是17種特殊的元素的統(tǒng)稱，它的得名是因?yàn)槿鸬淇茖W(xué)家在提取稀土元素時(shí)應(yīng)用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是歷史遺留下來的名稱，稀土是從18世紀(jì)末開始陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)人們常把不溶于水的固體氧化物稱為土，例如，將氧化鋁稱為“陶土”，氧化鈣稱為”堿土“等。稀土一般是以氧化物狀態(tài)分離出來的，當(dāng)時(shí)比較稀少，因而得名為稀土（rareearth，簡(jiǎn)稱re或r），然而經(jīng)過大量的科學(xué)研究，在組織培養(yǎng)當(dāng)中添加了稀土元素會(huì)大大地提高組織培養(yǎng)的質(zhì)量。
鈰是周期系第ιιι族副族鑭系元素，一種稀土元素。原子序數(shù)58。穩(wěn)定同位素：136、138、140、142。灰色金屬，有展性。密度：正方晶體6.9，立方晶體6.7。熔點(diǎn)799℃，沸點(diǎn)3426℃。鈰是一種銀灰色的活潑金屬，粉末在空氣中易自燃，易溶于酸。鈰的名稱來源于小行星谷神星的英文名。鈰在地殼中的含量約0.0046%，是稀土元素中豐度最高的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
基于現(xiàn)有技術(shù)中香蕉的組培增殖培養(yǎng)基的篩選方法中偏向于科研，不適合商業(yè)工廠化生產(chǎn)的問題，本發(fā)明提供一種糠氨基嘌呤香蕉增殖培養(yǎng)基篩選方法，其通過單一變量法對(duì)香蕉花藥進(jìn)行增殖培養(yǎng)，分析統(tǒng)計(jì)褐化率和實(shí)際增殖系數(shù)，在評(píng)價(jià)當(dāng)中結(jié)合實(shí)際增殖系數(shù)和褐化率，計(jì)算出作為評(píng)價(jià)標(biāo)注更加符合商業(yè)工廠化的生產(chǎn)。
一種糠氨基嘌呤香蕉增殖培養(yǎng)基篩選方法，其包括以下步驟：
步驟s10確定初步篩選范圍，檢索查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，對(duì)比其他植物物種組培誘導(dǎo)過程中添加稀土元素和糠氨基嘌呤的量并確定稀土元素和糠氨基嘌呤初步篩選范圍；
步驟s20選擇外植體，選擇健康、生長(zhǎng)環(huán)境一致并且生長(zhǎng)狀態(tài)相似的香蕉愈傷組織，將愈傷組織切割成0.5cm3大小的組織塊；
步驟s30對(duì)照培養(yǎng)，使用單一變量法配制不同濃度稀土元素和糠氨基嘌呤添加量的培養(yǎng)基，分別接種相同量的香蕉愈傷組織，并進(jìn)行常規(guī)增殖組織培養(yǎng)；
步驟s40記錄檢測(cè)參數(shù)，培養(yǎng)20天后統(tǒng)計(jì)每個(gè)稀土元素和糠氨基嘌呤濃度梯度中褐化的數(shù)量，并計(jì)算褐化率；
步驟s50生長(zhǎng)量計(jì)算，分別將相同濃度梯度的每個(gè)平行實(shí)驗(yàn)組中的愈傷組織取出，用清水沖洗干凈，擦干表面水分并對(duì)愈傷組織進(jìn)行稱重，記錄重量；
步驟s60計(jì)算評(píng)估因數(shù)，將愈傷組織培養(yǎng)有的重量除以培養(yǎng)前的重量，再減去褐化的重量，計(jì)算出實(shí)際增殖系數(shù)，將實(shí)際增殖系數(shù)減去褐化率得出評(píng)估因數(shù)，對(duì)比不同濃度梯度的評(píng)估因數(shù)，挑選出數(shù)值最大的評(píng)估因數(shù)對(duì)應(yīng)的稀土元素和糠氨基嘌呤濃度梯度；
步驟s70縮小篩選范圍，使用步驟s60中挑選出的濃度梯度范圍重復(fù)進(jìn)行步驟s10-s60縮小篩選范圍或者確定最適濃度；
步驟s80反向篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基，使用步驟s70確定的最適濃度搭配不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基，重復(fù)步驟s40和步驟s50，并使用步驟s60的計(jì)算方法計(jì)算評(píng)估因數(shù)，確定最適基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
優(yōu)選地，所述的步驟s30中配制不同濃度是設(shè)置5-15個(gè)濃度梯度。
優(yōu)選地，所述的步驟s30中接種的培養(yǎng)基的數(shù)量為每個(gè)濃度梯度的培養(yǎng)基設(shè)置10-20組平行實(shí)驗(yàn)組。
優(yōu)選地，所述的稀土元素是鈰元素。
優(yōu)選地，所述的步驟s70中重復(fù)的次數(shù)是2-3次。
優(yōu)選地，所述的步驟s80中不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括ms培養(yǎng)基、n6培養(yǎng)基、b5培養(yǎng)基、nitsh培養(yǎng)基、white培養(yǎng)基和miller培養(yǎng)基。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
步驟s10確定初步篩選范圍，檢索查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料，對(duì)比其他植物物種組培誘導(dǎo)過程中添加稀土元素和糠氨基嘌呤的量并確定稀土元素和糠氨基嘌呤初步篩選范圍；
步驟s20選擇外植體，選擇健康、生長(zhǎng)環(huán)境一致并且生長(zhǎng)狀態(tài)相似的香蕉愈傷組織，將愈傷組織切割成0.5cm3大小的組織塊；
步驟s30對(duì)照培養(yǎng)，使用單一變量法配制不同濃度稀土元素和糠氨基嘌呤添加量的培養(yǎng)基，分別接種相同量的香蕉愈傷組織，并進(jìn)行常規(guī)增殖組織培養(yǎng)；
步驟s40記錄檢測(cè)參數(shù)，培養(yǎng)20天后統(tǒng)計(jì)每個(gè)稀土元素和糠氨基嘌呤濃度梯度中褐化的數(shù)量，并計(jì)算褐化率；
步驟s50生長(zhǎng)量計(jì)算，分別將相同濃度梯度的每個(gè)平行實(shí)驗(yàn)組中的愈傷組織取出，用清水沖洗干凈，擦干表面水分并對(duì)愈傷組織進(jìn)行稱重，記錄重量；
步驟s60計(jì)算評(píng)估因數(shù)，將愈傷組織培養(yǎng)有的重量除以培養(yǎng)前的重量，再減去褐化的重量，計(jì)算出實(shí)際增殖系數(shù)，將實(shí)際增殖系數(shù)減去褐化率得出評(píng)估因數(shù)，對(duì)比不同濃度梯度的評(píng)估因數(shù)，挑選出數(shù)值最大的評(píng)估因數(shù)對(duì)應(yīng)的稀土元素和糠氨基嘌呤濃度梯度；
步驟s70縮小篩選范圍，使用步驟s60中挑選出的濃度梯度范圍重復(fù)進(jìn)行步驟s10-s60縮小篩選范圍或者確定最適濃度；
步驟s80反向篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基，使用步驟s70確定的最適濃度搭配不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基，重復(fù)步驟s40和步驟s50，并使用步驟s60的計(jì)算方法計(jì)算評(píng)估因數(shù)，確定最適基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟s30中配制不同濃度是設(shè)置10個(gè)濃度梯度。
作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟s30中接種的培養(yǎng)基的數(shù)量為每個(gè)濃度梯度的培養(yǎng)基設(shè)置10組平行實(shí)驗(yàn)組。
作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟s70中重復(fù)的次數(shù)是2次。
作為優(yōu)選實(shí)施例，所述的步驟s80中不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括ms培養(yǎng)基、n6培養(yǎng)基、b5培養(yǎng)基、nitsh培養(yǎng)基、white培養(yǎng)基和miller培養(yǎng)基。
經(jīng)過篩選出以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，糠氨基嘌呤的濃度為0.5mg/l、naa（萘乙酸）的濃度為2.5mg/l、活性炭的濃度為0.15mg/l、硝酸鈰的濃度為3g/l，維生素的濃度為0.3mg/l，瓊脂粉的濃度為10g/l、白砂糖的濃度為7g/l，最適合香蕉花藥工廠化增殖培養(yǎng)生產(chǎn)。
以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的一種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。