【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及植物培育繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術(shù)：

構(gòu)樹別名褚桃等，為落葉喬木，高10-20m；樹皮暗灰色；小枝密生柔毛。樹冠張開，卵形至廣卵形；樹皮平滑，淺灰色或灰褐色，不易裂，全株含乳汁。為強(qiáng)陽性樹種，適應(yīng)性特強(qiáng)，抗逆性強(qiáng)。構(gòu)樹具有速生、適應(yīng)性強(qiáng)、分布廣、易繁殖、熱量高、輪伐期短的特點(diǎn)。其根系淺，側(cè)根分布很廣，生長快，萌芽力和分蘗力強(qiáng)，耐修剪，抗污染性強(qiáng)。在中國的溫帶、熱帶均有分布，不論平原、丘陵或山地都能生長，其葉是很好的豬飼料，其韌皮纖維是造紙的高級(jí)原料，材質(zhì)潔白，其根和種子均可入藥，樹液可治皮膚病，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高。

構(gòu)樹是我國特有的含纖維樹種，屬特種經(jīng)濟(jì)林，其韌皮纖維輸液等利用價(jià)值極高，耐干旱瘠薄，是荒山石漠化處理比較合適的樹種，也是扶貧攻堅(jiān)，農(nóng)民脫貧增收的重要途徑。構(gòu)樹的葉片含蛋白質(zhì)非常高，20-30％左右，遠(yuǎn)高于玉米，小麥，氨基酸，維生素，碳水化合物非常豐富，用于牲畜飼料，樹皮，桿用于造紙。

隨著國家提出構(gòu)樹扶貧產(chǎn)業(yè)優(yōu)先要求，構(gòu)樹良種選育和組培研究，選育出適合在全國石山地區(qū)范圍推廣種植的優(yōu)良品種，保護(hù)生態(tài)平衡，是目前研究的重點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于，提供一種雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，在組織培養(yǎng)期間，采用3個(gè)培養(yǎng)基進(jìn)行分階段培養(yǎng)，能夠在短時(shí)間內(nèi)培育出大量健壯試管苗，在移栽大田后，從施肥到防蟲，均考慮環(huán)保綠色，施肥過程中不添加化肥，而采用天然安全的有機(jī)肥料，防蟲過程則進(jìn)行針對(duì)性的治療，同時(shí)以防御為主，各個(gè)步驟緊密結(jié)合，相互作用，提高了雜交構(gòu)樹的成活率。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：

一種雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括如下步驟：

(一)組織培養(yǎng)階段

1)外植體的消毒：取雜交構(gòu)樹新長出的嫩芽作為外植體后，用生汞0.1％浸泡3-5分鐘，浸泡過程中不斷振蕩，浸泡后用無菌水沖洗3-4次，然后放置無菌接種盤在超凈工作臺(tái)上，將外植體表面的水分吹干，切去在消毒過程中壞死的周邊組織，在超凈工作臺(tái)上將葉片用經(jīng)過滅菌消毒手術(shù)刀切割成0.5-2cm小片待用；

2)培養(yǎng)基的培養(yǎng)：

①外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟1)處理所得外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經(jīng)過暗處理48小時(shí)后，在光照強(qiáng)度1300-1500lx，光照時(shí)間為12-14h/d，溫度為22-25℃，ph值為5.6-5.8的條件下培養(yǎng)28-33天；

所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分為：ms+3.0mg/l6-ba+0.3mg/lnaa；

②繼代增殖培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟①誘導(dǎo)培養(yǎng)的構(gòu)樹苗徑段上的個(gè)腋芽切下，將腋芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，于光照強(qiáng)度為1800-2200lx，光照時(shí)間為12-14h/d，溫度為21-25℃，ph值為5.6-5.8的條件下培養(yǎng)30-35天；

所述增殖培養(yǎng)基的成分為：ms+1.1mg/l6-ba+0.11mg/lnaa；

③生根培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟②繼代增殖培養(yǎng)后的構(gòu)樹組培苗放于生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照強(qiáng)度2000-2500lx，光照時(shí)間10-12小時(shí)/d，溫度25-28℃，培養(yǎng)15-20天后即可出瓶煉苗；

所述生根培養(yǎng)基的成分為：1/3ms+0.1mg/l6-ba+4.8g/l卡拉膠+1g/l瓊脂+30g/l蔗糖；

3)大棚煉苗：將經(jīng)過組織培養(yǎng)的構(gòu)樹苗由培養(yǎng)基中取出，用自來水將小苗根部的培養(yǎng)基洗凈，用稀釋1000倍的多菌靈或百菌清溶液浸泡10-20分鐘，然后種植到混有園土、河沙及少量珍珠巖的培養(yǎng)土苗盤里并噴淋定根水，園土、河沙、珍珠巖的比值是2:4:1，在植株上層套上塑料薄膜保水，保持濕度為75-90％，溫度23-26℃，培養(yǎng)20-30天后即可移栽大田；

(二)移栽大田階段

(1)播種：經(jīng)大棚煉苗后，棄去黃化和發(fā)育不良的種苗，整理出健康種苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗時(shí)使其根自然展開，覆土過根莖，同時(shí)保證枝干與主根的結(jié)合部分露出土外，覆土完成后將土壓實(shí)，并澆灌定根水；

(2)施肥管理：移栽大田2個(gè)月后進(jìn)行初次施肥，初次施肥7-10天后對(duì)葉面噴施營養(yǎng)液進(jìn)行追肥；所用肥料為農(nóng)家肥與生態(tài)肥按照比例為1-3:2-5混合，施肥時(shí)間為每年4-8月份，每年施肥4-6次，施肥結(jié)合中耕除草進(jìn)行；每1-2月用營養(yǎng)液進(jìn)行葉面噴施一次；所述營養(yǎng)液是將20-30重量份的砂土、5-10重量份的草木灰與10-18重量份的蛭石混合后浸泡在60-80重量份的水中，浸泡2天后將其過濾，取液體加入10-15重量份的沼液混合攪拌均勻即可；

所述農(nóng)家肥為家禽糞便；所述生態(tài)肥所述生態(tài)肥通過將20-40的重量份的尿素置于容器中，摻拌5-10的重量份烏龜殼、1-8重量份的白砂糖、5-10的重量份椰樹皮、7-12重量份的榕樹枯枝、7-12重量份的荷花桿、7-12重量份的山野豌豆藤、5-10重量份的野韭菜、7-12重量份的皂莢樹枯枝以及3-8重量份的纖維素酶，再澆入10-30重量份的水，然后進(jìn)行堆漚，待原料全部腐爛變成腐爛質(zhì)土后得到的。

優(yōu)選地，所述組織培養(yǎng)階段還包括外植體的采集步驟，具體為：選擇4-6月份的晴天或陰天進(jìn)行采集，于上午的9-11點(diǎn)之前，采摘生長健壯、發(fā)育正常、無病蟲害、半木質(zhì)化的雜交構(gòu)樹嫩芽，去除雜質(zhì)備用。

優(yōu)選地，所述移栽大田階段還包括整地的步驟，具體為：在種植前1-2個(gè)月經(jīng)深翻耕后添加土壤調(diào)節(jié)劑將土壤ph值調(diào)節(jié)為5.7-6.6，將碎土耙平，施埋基底肥，按行距1.5-2.0m、株距1.5-2.2m挖穴，并在每個(gè)穴內(nèi)施埋基底肥。

優(yōu)選地，所述移栽大田階段還包括病蟲害防治的步驟，具體為：在病穴施用生物農(nóng)藥，或者將病株拔出，每隔1-2周噴施消毒液一次；

所述消毒液由艾葉汁、洋蔥汁、茴香汁、大蒜汁與水按照質(zhì)量比(1-2.5)：(2-3.5)：(1.5-2.5)：(3-4)：(30-55)配制而成；所述消毒液的噴施量為：每次每畝噴灑180-250kg。

優(yōu)選地，所述基底肥是由30-50重量份的廄肥、16-32重量份的骨粉肥、40-50重量份的棉花和21-33重量份的人畜糞便混合均勻后在溫度為30-40℃，濕度為60-70％的條件下發(fā)酵8-12天得到。

優(yōu)選地，所述基底肥的具體施加方式為：在穴底部施加一層3-5cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆蓋一層4-6cm厚的泥土，依次交替2-3次；基底肥的用量為每畝施加400-600kg。

綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：

1、本發(fā)明的一種雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法在種子培養(yǎng)過程中，在傳統(tǒng)的培養(yǎng)基的配方上改進(jìn)，添加一些能夠在雜交構(gòu)樹在生根壯苗期間所需的因子，在含有不同激素配比的ms培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織，以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加生根壯苗的母液配方，通過誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基的培養(yǎng)，各培養(yǎng)基提供外植體在生根壯苗期間所需的因子，能夠提供生根的良好條件，促進(jìn)苗健康茁壯，為構(gòu)樹生長所需能量供給得到滿足，調(diào)節(jié)體內(nèi)養(yǎng)分的平衡，快速促進(jìn)壯苗生根，使得生根率達(dá)到98％以上，且壯苗生根后的植株平均根數(shù)達(dá)到4-5條，在大棚中采用園土、河沙以及珍珠巖的合理配比，增加土壤的氧氣含量，提高土壤透氣性，為種苗的生長提供優(yōu)質(zhì)的條件。

2、本發(fā)明的雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法在移栽大田階段，在種苗定植前先對(duì)種植地進(jìn)行預(yù)處理，通過對(duì)地塊進(jìn)行深松處理，然后開設(shè)種植穴，由于土壤養(yǎng)分含量低，直接播種肥效遲緩，因此在種植穴中加入基底肥，基底肥具有改良土壤肥效的作用，為種子生長提高提出養(yǎng)分，基底肥的施加方式為埋在種植穴內(nèi)，并在其表面覆蓋營養(yǎng)土，能夠使養(yǎng)分更集中，施肥效果更佳；定植后采用農(nóng)家肥與生態(tài)肥進(jìn)行配合施肥，生態(tài)肥包括多種綠色植物，并加入纖維素酶進(jìn)行酶解，使養(yǎng)分更多，植株吸收更充分，同時(shí)向植株葉面噴灑營養(yǎng)液，促進(jìn)生長，另外，病蟲害的防治采用消毒液進(jìn)行定期噴施，預(yù)防蟲害的發(fā)生，消毒液均由綠色安全的原料配制得到，對(duì)構(gòu)樹的成品性狀無影響。

本發(fā)明雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法從種子的培養(yǎng)到移栽大田后的培育，都進(jìn)行嚴(yán)格把關(guān)，在種子培養(yǎng)過程中實(shí)現(xiàn)構(gòu)樹種子的快速萌發(fā)，縮短構(gòu)樹種子的培養(yǎng)時(shí)間，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量健壯試管苗，在移栽大田后，從施肥到防蟲，均考慮環(huán)保綠色，施肥過程中不添加化肥，而采用天然安全的有機(jī)肥料，防蟲過程則進(jìn)行針對(duì)性的治療，同時(shí)以防御為主，各個(gè)步驟緊密結(jié)合，相互作用，提高了雜交構(gòu)樹的成活率，適用于大規(guī)模種植，值得推廣。

【具體實(shí)施方式】

下面的實(shí)施例可以幫助本領(lǐng)域的技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不可以以任何方式限制本發(fā)明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供一種雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括如下步驟：

(一)組織培養(yǎng)階段

1)外植體的采集：選擇4-6月份的晴天或陰天進(jìn)行采集，于上午的9-11點(diǎn)之前，采摘生長健壯、發(fā)育正常、無病蟲害、半木質(zhì)化的雜交構(gòu)樹嫩芽，去除雜質(zhì)備用。

2)外植體的消毒：取雜交構(gòu)樹新長出的嫩芽作為外植體后，用生汞0.1％浸泡3分鐘，浸泡過程中不斷振蕩，浸泡后用無菌水沖洗3次，然后放置無菌接種盤在超凈工作臺(tái)上，將外植體表面的水分吹干，切去在消毒過程中壞死的周邊組織，在超凈工作臺(tái)上將葉片用經(jīng)過滅菌消毒手術(shù)刀切割成0.5cm小片待用；

3)培養(yǎng)基的培養(yǎng)：

①外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟1)處理所得外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經(jīng)過暗處理48小時(shí)后，在光照強(qiáng)度1300lx，光照時(shí)間為12h/d，溫度為22℃，ph值為5.6的條件下培養(yǎng)28天；其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分為：ms+3.0mg/l6-ba+0.3mg/lnaa；

②繼代增殖培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟①誘導(dǎo)培養(yǎng)的構(gòu)樹苗徑段上的個(gè)腋芽切下，將腋芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，于光照強(qiáng)度為1800lx，光照時(shí)間為12h/d，溫度為21℃，ph值為5.6的條件下培養(yǎng)30天；

所述增殖培養(yǎng)基的成分為：ms+1.1mg/l6-ba+0.11mg/lnaa；

③生根培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟②繼代增殖培養(yǎng)后的構(gòu)樹組培苗放于生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照強(qiáng)度2000lx，光照時(shí)間10小時(shí)/d，溫度25℃，培養(yǎng)15天后即可出瓶煉苗；其中，生根培養(yǎng)基的成分為：1/3ms+0.1mg/l6-ba+4.8g/l卡拉膠+1g/l瓊脂+30g/l蔗糖；

4)大棚煉苗：將經(jīng)過組織培養(yǎng)的構(gòu)樹苗由培養(yǎng)基中取出，用自來水將小苗根部的培養(yǎng)基洗凈，用稀釋1000倍的多菌靈或百菌清溶液浸泡10分鐘，然后種植到混有園土、河沙及少量珍珠巖的培養(yǎng)土苗盤里并噴淋定根水，園土、河沙、珍珠巖的比值是2:4:1，在植株上層套上塑料薄膜保水，保持濕度為75％，溫度23℃，培養(yǎng)20天后即可移栽大田；

(二)移栽大田階段

(1)整地：在種植前1個(gè)月經(jīng)深翻耕后添加土壤調(diào)節(jié)劑將土壤ph值調(diào)節(jié)為5.7，將碎土耙平，施埋基底肥，按行距1.5m、株距1.5m挖穴，并在每個(gè)穴內(nèi)施埋基底肥，其中，基底肥是由30重量份的廄肥、16重量份的骨粉肥、40重量份的棉花和21重量份的人畜糞便混合均勻后在溫度為30℃，濕度為60％的條件下發(fā)酵8天得到，基底肥的具體施加方式為：在穴底部施加一層3cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆蓋一層4cm厚的泥土，依次交替2次；基底肥的用量為每畝施加400kg；

(2)播種：經(jīng)大棚煉苗后，棄去黃化和發(fā)育不良的種苗，整理出健康種苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗時(shí)使其根自然展開，覆土過根莖，同時(shí)保證枝干與主根的結(jié)合部分露出土外，覆土完成后將土壓實(shí)，并澆灌定根水；

(3)施肥管理：移栽大田2個(gè)月后進(jìn)行初次施肥，初次施肥7天后對(duì)葉面噴施營養(yǎng)液進(jìn)行追肥；所用肥料為農(nóng)家肥與生態(tài)肥按照比例為1:2混合，施肥時(shí)間為每年4-8月份，每年施肥4次，施肥結(jié)合中耕除草進(jìn)行；每月用營養(yǎng)液進(jìn)行葉面噴施一次；所述營養(yǎng)液是將20重量份的砂土、5重量份的草木灰與10重量份的蛭石混合后浸泡在60重量份的水中，浸泡2天后將其過濾，取液體加入10重量份的沼液混合攪拌均勻即可；其中，農(nóng)家肥為家禽糞便；所述生態(tài)肥所述生態(tài)肥通過將20的重量份的尿素置于容器中，摻拌5的重量份烏龜殼、1重量份的白砂糖、5的重量份椰樹皮、7重量份的榕樹枯枝、7重量份的荷花桿、7重量份的山野豌豆藤、5重量份的野韭菜、7重量份的皂莢樹枯枝以及3重量份的纖維素酶，再澆入10重量份的水，然后進(jìn)行堆漚，待原料全部腐爛變成腐爛質(zhì)土后得到的；

(4)病蟲害防治：在病穴施用生物農(nóng)藥，或者將病株拔出，每隔1周噴施消毒液一次；其中，消毒液由艾葉汁、洋蔥汁、茴香汁、大蒜汁與水按照質(zhì)量比1：2：1.5：3：30配制而成；所述消毒液的噴施量為：每次每畝噴灑180-250kg。

實(shí)施例2

本實(shí)施例提供一種雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括如下步驟：

(一)組織培養(yǎng)階段

1)外植體的采集：選擇4-6月份的晴天或陰天進(jìn)行采集，于上午的9-11點(diǎn)之前，采摘生長健壯、發(fā)育正常、無病蟲害、半木質(zhì)化的雜交構(gòu)樹嫩芽，去除雜質(zhì)備用。

2)外植體的消毒：取雜交構(gòu)樹新長出的嫩芽作為外植體后，用生汞0.1％浸泡4分鐘，浸泡過程中不斷振蕩，浸泡后用無菌水沖洗3次，然后放置無菌接種盤在超凈工作臺(tái)上，將外植體表面的水分吹干，切去在消毒過程中壞死的周邊組織，在超凈工作臺(tái)上將葉片用經(jīng)過滅菌消毒手術(shù)刀切割成1.2cm小片待用；

3)培養(yǎng)基的培養(yǎng)：

①外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟1)處理所得外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經(jīng)過暗處理48小時(shí)后，在光照強(qiáng)度1400lx，光照時(shí)間為13h/d，溫度為23℃，ph值為5.7的條件下培養(yǎng)30天；其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分為：ms+3.0mg/l6-ba+0.3mg/lnaa；

②繼代增殖培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟①誘導(dǎo)培養(yǎng)的構(gòu)樹苗徑段上的個(gè)腋芽切下，將腋芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，于光照強(qiáng)度為2000lx，光照時(shí)間為13h/d，溫度為22℃，ph值為5.7的條件下培養(yǎng)33天；其中，增殖培養(yǎng)基的成分為：ms+1.1mg/l6-ba+0.11mg/lnaa；

③生根培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟②繼代增殖培養(yǎng)后的構(gòu)樹組培苗放于生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照強(qiáng)度2250lx，光照時(shí)間11小時(shí)/d，溫度26℃，培養(yǎng)17天后即可出瓶煉苗；其中，生根培養(yǎng)基的成分為：1/3ms+0.1mg/l6-ba+4.8g/l卡拉膠+1g/l瓊脂+30g/l蔗糖；

4)大棚煉苗：將經(jīng)過組織培養(yǎng)的構(gòu)樹苗由培養(yǎng)基中取出，用自來水將小苗根部的培養(yǎng)基洗凈，用稀釋1000倍的多菌靈或百菌清溶液浸泡15分鐘，然后種植到混有園土、河沙及少量珍珠巖的培養(yǎng)土苗盤里并噴淋定根水，園土、河沙、珍珠巖的比值是2:4:1，在植株上層套上塑料薄膜保水，保持濕度為82％，溫度24℃，培養(yǎng)25天后即可移栽大田；

(二)移栽大田階段

(1)整地：在種植前2個(gè)月經(jīng)深翻耕后添加土壤調(diào)節(jié)劑將土壤ph值調(diào)節(jié)為6.0，將碎土耙平，施埋基底肥，按行距1.7m、株距1.8m挖穴，并在每個(gè)穴內(nèi)施埋基底肥，其中，基底肥是由40重量份的廄肥、25重量份的骨粉肥、45重量份的棉花和28重量份的人畜糞便混合均勻后在溫度為35℃，濕度為65％的條件下發(fā)酵10天得到，基底肥的具體施加方式為：在穴底部施加一層4cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆蓋一層5m厚的泥土，依次交替2次；基底肥的用量為每畝施加500kg；

(2)播種：經(jīng)大棚煉苗后，棄去黃化和發(fā)育不良的種苗，整理出健康種苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗時(shí)使其根自然展開，覆土過根莖，同時(shí)保證枝干與主根的結(jié)合部分露出土外，覆土完成后將土壓實(shí)，并澆灌定根水；

(3)施肥管理：移栽大田2個(gè)月后進(jìn)行初次施肥，初次施肥8天后對(duì)葉面噴施營養(yǎng)液進(jìn)行追肥；所用肥料為農(nóng)家肥與生態(tài)肥按照比例為2:3混合，施肥時(shí)間為每年4-8月份，每年施肥5次，施肥結(jié)合中耕除草進(jìn)行；每月用營養(yǎng)液進(jìn)行葉面噴施一次；所述營養(yǎng)液是將25重量份的砂土、7重量份的草木灰與14重量份的蛭石混合后浸泡在70重量份的水中，浸泡2天后將其過濾，取液體加入12重量份的沼液混合攪拌均勻即可；其中，農(nóng)家肥為家禽糞便；所述生態(tài)肥所述生態(tài)肥通過將30的重量份的尿素置于容器中，摻拌7的重量份烏龜殼、5重量份的白砂糖、7的重量份椰樹皮、10重量份的榕樹枯枝、10重量份的荷花桿、10重量份的山野豌豆藤、7重量份的野韭菜、10重量份的皂莢樹枯枝以及6重量份的纖維素酶，再澆入20重量份的水，然后進(jìn)行堆漚，待原料全部腐爛變成腐爛質(zhì)土后得到的；

(4)病蟲害防治：在病穴施用生物農(nóng)藥，或者將病株拔出，每隔1周噴施消毒液一次；其中，消毒液由艾葉汁、洋蔥汁、茴香汁、大蒜汁與水按照質(zhì)量比1.8：2.8：2.0：3.5：38配制而成；所述消毒液的噴施量為：每次每畝噴灑220kg。

實(shí)施例3

本實(shí)施例提供一種雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括如下步驟：

(一)組織培養(yǎng)階段

1)外植體的采集：選擇4-6月份的晴天或陰天進(jìn)行采集，于上午的9-11點(diǎn)之前，采摘生長健壯、發(fā)育正常、無病蟲害、半木質(zhì)化的雜交構(gòu)樹嫩芽，去除雜質(zhì)備用。

2)外植體的消毒：取雜交構(gòu)樹新長出的嫩芽作為外植體后，用生汞0.1％浸泡5分鐘，浸泡過程中不斷振蕩，浸泡后用無菌水沖洗4次，然后放置無菌接種盤在超凈工作臺(tái)上，將外植體表面的水分吹干，切去在消毒過程中壞死的周邊組織，在超凈工作臺(tái)上將葉片用經(jīng)過滅菌消毒手術(shù)刀切割成2cm小片待用；

3)培養(yǎng)基的培養(yǎng)：

①外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟1)處理所得外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經(jīng)過暗處理48小時(shí)后，在光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間為14h/d，溫度為25℃，ph值為5.8的條件下培養(yǎng)33天；其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分為：ms+3.0mg/l6-ba+0.3mg/lnaa；

②繼代增殖培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟①誘導(dǎo)培養(yǎng)的構(gòu)樹苗徑段上的個(gè)腋芽切下，將腋芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，于光照強(qiáng)度為2200lx，光照時(shí)間為14h/d，溫度為21-25℃，ph值為5.8的條件下培養(yǎng)35天；其中，增殖培養(yǎng)基的成分為：ms+1.1mg/l6-ba+0.11mg/lnaa；

③生根培養(yǎng)：將經(jīng)過步驟②繼代增殖培養(yǎng)后的構(gòu)樹組培苗放于生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：光照強(qiáng)度2500lx，光照時(shí)間12小時(shí)/d，溫度28℃，培養(yǎng)20天后即可出瓶煉苗；其中，生根培養(yǎng)基的成分為：1/3ms+0.1mg/l6-ba+4.8g/l卡拉膠+1g/l瓊脂+30g/l蔗糖；

4)大棚煉苗：將經(jīng)過組織培養(yǎng)的構(gòu)樹苗由培養(yǎng)基中取出，用自來水將小苗根部的培養(yǎng)基洗凈，用稀釋1000倍的多菌靈或百菌清溶液浸泡20分鐘，然后種植到混有園土、河沙及少量珍珠巖的培養(yǎng)土苗盤里并噴淋定根水，園土、河沙、珍珠巖的比值是2:4:1，在植株上層套上塑料薄膜保水，保持濕度為90％，溫度26℃，培養(yǎng)30天后即可移栽大田；

(二)移栽大田階段

(1)整地：在種植前2個(gè)月經(jīng)深翻耕后添加土壤調(diào)節(jié)劑將土壤ph值調(diào)節(jié)為6.6，將碎土耙平，施埋基底肥，按行距2.0m、株距2.2m挖穴，并在每個(gè)穴內(nèi)施埋基底肥，其中，基底肥是由50重量份的廄肥、32重量份的骨粉肥、50重量份的棉花和33重量份的人畜糞便混合均勻后在溫度為40℃，濕度為70％的條件下發(fā)酵12天得到，基底肥的具體施加方式為：在穴底部施加一層5cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆蓋一層6cm厚的泥土，依次交替3次；基底肥的用量為每畝施加600kg；

(2)播種：經(jīng)大棚煉苗后，棄去黃化和發(fā)育不良的種苗，整理出健康種苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗時(shí)使其根自然展開，覆土過根莖，同時(shí)保證枝干與主根的結(jié)合部分露出土外，覆土完成后將土壓實(shí)，并澆灌定根水；

(3)施肥管理：移栽大田2個(gè)月后進(jìn)行初次施肥，初次施肥10天后對(duì)葉面噴施營養(yǎng)液進(jìn)行追肥；所用肥料為農(nóng)家肥與生態(tài)肥按照比例為3:5混合，施肥時(shí)間為每年4-8月份，每年施肥6次，施肥結(jié)合中耕除草進(jìn)行；每2月用營養(yǎng)液進(jìn)行葉面噴施一次；所述營養(yǎng)液是將30重量份的砂土、10重量份的草木灰與18重量份的蛭石混合后浸泡在80重量份的水中，浸泡2天后將其過濾，取液體加入15重量份的沼液混合攪拌均勻即可；其中，農(nóng)家肥為家禽糞便；所述生態(tài)肥所述生態(tài)肥通過將40的重量份的尿素置于容器中，摻拌10的重量份烏龜殼、8重量份的白砂糖、10的重量份椰樹皮、12重量份的榕樹枯枝、12重量份的荷花桿、12重量份的山野豌豆藤、10重量份的野韭菜、12重量份的皂莢樹枯枝以及8重量份的纖維素酶，再澆入30重量份的水，然后進(jìn)行堆漚，待原料全部腐爛變成腐爛質(zhì)土后得到的；

(4)病蟲害防治：在病穴施用生物農(nóng)藥，或者將病株拔出，每隔2周噴施消毒液一次；其中，消毒液由艾葉汁、洋蔥汁、茴香汁、大蒜汁與水按照質(zhì)量比2.5：3.5：2.5：4：55配制而成；所述消毒液的噴施量為：每次每畝噴灑250kg。

效果驗(yàn)證

為了進(jìn)一步說明本發(fā)明雜交構(gòu)樹組織培養(yǎng)快速繁殖方法的應(yīng)用價(jià)值，實(shí)施人選擇無病害，無殘缺，大小相近的構(gòu)樹蒴果，分為以下四組做對(duì)比試驗(yàn)：

第一組：實(shí)施例1所述的培養(yǎng)繁殖方法；

第二組：實(shí)施例2所述的培養(yǎng)繁殖方法；

第三組：實(shí)施例3所述的培養(yǎng)繁殖方法；

第四組：常規(guī)培養(yǎng)繁殖方法。

s1：觀察上述四組在種子培養(yǎng)階段的組培苗情況，記錄各組的生根率、生根數(shù)、及出甁綜合狀態(tài)，結(jié)果見表1；

表1四組構(gòu)樹組培苗情況表

s2：進(jìn)行移栽大田階段的觀察，在移栽大田兩個(gè)月后統(tǒng)計(jì)移栽成活率，并將結(jié)果記錄如表2所示：

表2四組構(gòu)樹移栽苗生長情況表

由上述兩表得知：采用本發(fā)明的培育法培育得到的構(gòu)樹，不僅在組織培養(yǎng)階段得到高品質(zhì)的種苗，且在移栽大田階段具有良好的長勢(shì)，各個(gè)步驟緊密結(jié)合，相互作用，提高了雜交構(gòu)樹的成活率，適用于大規(guī)模種植，值得推廣。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。