本發(fā)明屬于食用菌及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種玉米芯塊食用菌固定化菌種生產(chǎn)和栽培方法。

背景技術(shù)：

食用菌是一類可產(chǎn)生具有極高營養(yǎng)和藥用價(jià)值子實(shí)體的大型真菌，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，常見種類有香菇、雙孢蘑菇、平菇、杏鮑菇、銀耳等。研究表明食用菌營養(yǎng)成分豐富，如含有蛋白質(zhì)、不飽和脂酸酸、氨基酸、膳食纖維、維生素、微量元素等，其蛋白質(zhì)含量顯著高于蔬菜。食用菌還含有一些特殊風(fēng)味物質(zhì)，使其味道鮮美，因此，食用菌是一種良好的食物資源。此外，食用菌還含有多種生物活性成分，以多糖最為著名，具有抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理活性，因此，食用菌不僅是一種良好食物，也已成為新藥開發(fā)的重要來源，其潛力越來越受到人們的重視。

近年來，種類繁多的不同食用菌從自然界中成功分離并馴化。隨食用菌相關(guān)研究的不斷深入，可栽培食用菌種類不斷擴(kuò)大。目前人工代料栽培已成為食用菌生產(chǎn)的主要方式，主要利用林業(yè)、農(nóng)業(yè)、食品工業(yè)等所產(chǎn)生的各種廢棄物如木屑、棉籽殼、甘蔗渣、玉米芯、稻草、麥桿、豆桿、花生殼、蓮子殼、野草、酒渣等作為主料，提供食用菌生長的碳源，麩皮、玉米粉、米糠等作為氮源，添加適量即可，此外還常添加石灰、石膏等，防止食用菌生長過程培養(yǎng)料過度酸化，影響食用菌菌絲生長和出菇產(chǎn)量。由于這些原料大都為可再生材料，來源廣泛，價(jià)格低，易于大量獲得，因此食用菌屬于可持續(xù)發(fā)展產(chǎn)業(yè)，具有極大的發(fā)展空間。此外食用菌栽培還可減輕廢棄物對生態(tài)環(huán)境的極大破壞作用，具有重要的生態(tài)意義。

我國是食用菌生產(chǎn)大國，是世界上最重要的食用菌生產(chǎn)國家，食用菌栽培分布全國各地，產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量70%以上，已成為我國農(nóng)業(yè)的重要組成部分。食用菌栽培中需要使用大量菌種，目前栽培中主要使用木屑種、枝條種、谷粒種以及液體菌種等4種，其中木屑種應(yīng)用最為普遍。木屑種以木屑為主要原料，少量添加麩皮，采用固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)，但其生產(chǎn)周期過長，通常超過30天以上，同時(shí)木屑來源受限，此外栽培過程中木屑種的使用還具有接種不方便，接種效率低，接種量不易準(zhǔn)確控制等明顯缺點(diǎn)，因此開發(fā)一種生產(chǎn)周期短、易于接種操作、非木屑作為培養(yǎng)料的低成本新型食用菌菌種十分必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種以玉米芯塊作為載體，利用自然吸附技術(shù)生產(chǎn)食用菌固定化菌種及其栽培應(yīng)用的方法。

具體技術(shù)方案如下：

固定化菌種具體生產(chǎn)方法為：將干燥、去籽玉米芯軸向垂直橫切，控制其厚度為1-1.5cm；柱狀切片進(jìn)一步對稱切割為4片均一性玉米芯塊，作為固定化載體；每20玉米芯塊放置于250ml搖瓶，移入100ml發(fā)酵培養(yǎng)基，配方（每升）為葡萄糖35g、蛋白胨5g、酵母粉4g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g；膠塞封口、121℃滅菌30min；接入10ml經(jīng)均質(zhì)處理（研磨、均質(zhì)機(jī)或超聲波破碎）的食用菌液體菌種，150rev/min、30℃培養(yǎng)5-7d，搖床培養(yǎng)過程食用菌菌絲吸附至玉米芯塊表面并大量生長；用無菌紗布過濾收集表面吸附大量食用菌菌絲體的玉米芯塊，即為玉米芯粒食用菌固定化菌種，用于食用菌栽培接種菌種或4℃和常溫保存后再使用。

本發(fā)明的有益效果是：與采用固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)木屑種生產(chǎn)周期（通常30d以上）相比，固定化菌種生產(chǎn)周期僅為5-7d，生產(chǎn)周期縮短極為明顯；本發(fā)明采用玉米芯為食用菌細(xì)胞的固定化材料，易于大量獲得，成本極低，可顯著降低菌種生產(chǎn)成本；本發(fā)明生產(chǎn)的固定化菌種應(yīng)用于食用菌栽培，接種操作方便，降低勞動(dòng)成本；本發(fā)明的固定化菌種使用中可降低菌包雜菌污染率；本發(fā)明方法可實(shí)現(xiàn)定量化接種，提高接種精度，因而提高食用菌生長和出菇的同步性，便于科學(xué)管理；與木屑種相比，本發(fā)明的固定化菌種可縮短發(fā)菌周期2-5d，提高生產(chǎn)效率。本發(fā)明具有極大的應(yīng)用和推廣價(jià)值。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種以玉米芯為載體，利用液體培養(yǎng)自然吸附技術(shù)生產(chǎn)食用菌固定化菌種及其栽培方法，下面實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明的使用方法，但這些實(shí)施例僅是規(guī)范性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。此外，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換仍在本發(fā)明保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

平菇玉米芯塊固定化菌種生產(chǎn)制備及栽培應(yīng)用

1、將干燥、去籽玉米芯軸向垂直橫向切割，控制其厚度為1cm；每一短柱狀切片進(jìn)一步對稱切為4個(gè)均一性塊狀物；

2、每20玉米芯塊放置于250ml搖瓶，分裝入100ml發(fā)酵培養(yǎng)基，配方（每升）為葡萄糖35g、蛋白胨5g、酵母粉4g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g；膠塞封口，121℃滅菌30min；

3、培養(yǎng)基冷卻后無菌條件下接入10ml經(jīng)均質(zhì)處理的液體菌種。其制備方法為：將斜面平菇菌種轉(zhuǎn)管至新鮮斜面培養(yǎng)基，25℃培養(yǎng)7d進(jìn)行活化；活化后的菌種用接種耙搗碎，以每支管1/2的菌種量接種至裝有80ml發(fā)酵培養(yǎng)基（其配方同上）的250ml搖瓶，28℃培養(yǎng)5-7d，即為液體菌種，采用研磨、均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)或超聲波破碎均質(zhì)。

4、接種的搖瓶150rev/min、30℃培養(yǎng)5d，培養(yǎng)過程中平菇菌絲體吸附至玉米芯塊表面并大量生長，達(dá)到平菇菌絲的固定化；

5、無菌紗布過濾收集發(fā)酵培養(yǎng)基中表面吸附大量平菇菌絲體的玉米芯塊，即為平菇固定化菌種；

6、將平菇固定化菌種接種于滅菌的菌包培養(yǎng)料表面（每一菌包接種一塊固定化菌種）。菌包對折徑規(guī)格為17cm×33cm，裝料量為750g，配方為60%棉籽殼、20%木屑、18%麩皮、2%石膏，調(diào)含水量為63%。

7、菌包放置菇棚并暗培養(yǎng)，溫度保持在20℃，相對濕度70%，每2天通風(fēng)一次；

8、菌包菌絲吃料完全后(約34d)開袋并提供光照1000lux，溫度控制在15℃，每天早晚噴水，共2次，每天通風(fēng)3次誘導(dǎo)原基形成和子實(shí)體生長；

9、子實(shí)體菇蓋長至近平展時(shí)采收，采收一潮菇，稱重,計(jì)算生物轉(zhuǎn)化率。

與利用木屑種栽培相比，本發(fā)明固定化菌種菌種制備時(shí)間縮短25d(本發(fā)明的固定化菌種生產(chǎn)時(shí)間僅為5d，木屑種通常需30d)；固定化菌種走菌時(shí)間縮短3d（本發(fā)明固定化菌種走菌時(shí)間為34d，木屑種為37d）；固定化菌種生物轉(zhuǎn)化率為66%,木屑種為62%；栽培中固定化菌種接種方便，降低勞動(dòng)成本；相同菌種體積下固定化菌種接種菌包數(shù)為木屑種的3-5倍。本發(fā)明利用玉米芯生產(chǎn)固定化菌種，不需要使用木屑，可避免對森林的破壞。

實(shí)施例2

玉米芯塊為載體的杏鮑菇固定化菌種生產(chǎn)及其栽培應(yīng)用

1、將干燥、去籽玉米芯軸向垂直橫向切割，控制其厚度為1cm；每一短柱狀切片進(jìn)一步對稱切為4個(gè)均一性塊狀物；

2、每20玉米芯塊放置于250ml搖瓶，分裝入100ml發(fā)酵培養(yǎng)基，配方（每升）為葡萄糖35g、蛋白胨5g、玉米粉4g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g；

膠塞封口，121℃滅菌30min；

3、培養(yǎng)基冷卻后無菌條件下接入5ml經(jīng)均質(zhì)處理（研磨、均質(zhì)機(jī)或超聲波破碎）的液體菌種。其制備方法為：將斜面杏鮑菇菌種轉(zhuǎn)管至新鮮斜面，25℃培養(yǎng)7d進(jìn)行活化；活化后的菌種接種耙搗碎，以每支管1/2的菌種量接種至裝有80ml發(fā)酵培養(yǎng)基（其配方同上）的250ml搖瓶，30℃培養(yǎng)7d，即為液體菌種，采用研磨、均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)或超聲波破碎均質(zhì)。

4、搖瓶150rev/min、30℃培養(yǎng)5d，培養(yǎng)過程均質(zhì)化的杏鮑菇菌絲吸附至玉米芯塊表面并大量生長，達(dá)到杏鮑菇菌絲固定化；

5、無菌紗布過濾收集發(fā)酵培養(yǎng)基中表面吸附大量杏鮑菇菌絲體的玉米芯塊，即為杏鮑菇固定化菌種；

6、將杏鮑菇固定化菌種接種于滅菌的菌包培養(yǎng)料表面（每一菌包接種一塊固定化菌種）。菌包對折徑規(guī)格為17cm×33cm，裝料量為750g，配方為60%棉籽殼、15%木屑、18%麩皮、5%玉米粉、2%石膏，調(diào)含水量為63%。

7、菌包放置菇房并暗培養(yǎng)，溫度保持在25℃，相對濕度70%，并適當(dāng)通風(fēng)；

8、菌包菌絲吃料完全后(約28d)開袋并提供光照800lux，溫度控制在15℃，濕度90%，co2濃度低于0.1%,誘導(dǎo)原基形成和子實(shí)體生長；

9、子實(shí)體菇蓋長至近平展時(shí)采收，采收一潮菇，稱重,計(jì)算生物轉(zhuǎn)化率。

與利用木屑種栽培相比，本發(fā)明的固定化菌種菌種制備時(shí)間縮短25d(本發(fā)明的固定化菌種生產(chǎn)時(shí)間僅為5d，木屑種通常需30d)；固定化菌種走菌時(shí)間縮短2d（本發(fā)明固定化菌種走菌時(shí)間為28d，木屑種為30d）；固定化菌種生物轉(zhuǎn)化率為46%,木屑種為44%；栽培中過程固定化菌種接種方便，人工接種效率提高3倍以上；相同菌種體積下，本發(fā)明的固定化菌種接種菌包數(shù)為木屑種的3-5倍。