本發(fā)明涉及植物栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體說是一種黑斑觀音蓮原種制作方法。
背景技術(shù)：
黑斑觀音蓮(alocasialaut.'black')屬天南星科海芋屬。引自丹麥，葉羽狀淺裂，葉表面深綠色，背面淺紫紅色彩，葉柄有深紫色斑紋。喜溫暖、潮潤環(huán)境，生長適溫30℃左右，在15～20℃的條件下，生長停頓，進(jìn)入休眠。休眠期間應(yīng)控制水分，停止施肥。生長季節(jié)要求土壤和空氣有較大的濕度，要求非直射光的明亮環(huán)境?？捎梅种?、分球繁殖和組織培養(yǎng)(組培)。分株和分球繁殖春季至夏季為適期。
目前，黑斑觀音蓮的組培工藝通常包括：母本——原種制作——初代培養(yǎng)——初代切割與細(xì)菌檢測——增殖切割——過渡培養(yǎng)——生根培養(yǎng)——出貨。其中，原種制作是組培工藝中非常關(guān)鍵的一步。現(xiàn)有的原種制作方法，芽萌動(dòng)時(shí)間長，真、細(xì)菌污染率及死亡率高，成活率低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種無真、細(xì)菌污染和死亡現(xiàn)象的黑斑觀音蓮原種制作方法。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
一種黑斑觀音蓮原種制作方法，包括：
預(yù)處理：將母株置于干燥、通風(fēng)的環(huán)境中，停止?jié)菜?、施肥，讓其自然干燥至基質(zhì)表面以下20～50mm處的土層干燥；
采種：選取長勢壯的母株，將母株整株取出，去除根系及多余葉片，采用頂芽和莖段作為外植體，剝除外植體外面的包片，露出頂芽的芽點(diǎn)，切除莖段基部的雜質(zhì)；
消毒：用洗潔精對外植體進(jìn)行表面消毒，然后用無菌水清洗干凈，根據(jù)外植體的大小進(jìn)行分瓶；
再消毒：依外植體的大小用升汞水溶液消毒10～25min，消毒后用無菌水清洗干凈，然后切除外植體兩端變色部分以及四周被腐蝕的部分，使外植體露出新鮮組織再接種到培養(yǎng)基上；
培養(yǎng)：控制培養(yǎng)時(shí)的溫度為26±1℃，光照度為300～500lx。
本發(fā)明的有益效果在于：區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明通過對母本進(jìn)行預(yù)處理后再進(jìn)行采種，采用頂芽和莖段作為外植體，對外植體進(jìn)行兩次消毒后再用培養(yǎng)基培養(yǎng)，并優(yōu)化培養(yǎng)工藝，使芽萌動(dòng)時(shí)間大大縮短至8～13天，徹底消除了真、細(xì)菌污染和死亡現(xiàn)象，種苗成活率可達(dá)100％。
具體實(shí)施方式
為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式予以說明。
本發(fā)明最關(guān)鍵的構(gòu)思在于：對母本進(jìn)行預(yù)處理后再進(jìn)行采種，采用頂芽和莖段作為外植體，對外植體進(jìn)行兩次消毒后再用培養(yǎng)基培養(yǎng)，并優(yōu)化培養(yǎng)工藝。
具體的，本發(fā)明提供的黑斑觀音蓮原種制作方法，包括：
預(yù)處理：將母株置于干燥、通風(fēng)的環(huán)境中，停止?jié)菜⑹┓剩屍渥匀桓稍镏粱|(zhì)表面以下20～50mm處的土層干燥；
采種：選取長勢壯的母株，將母株整株取出，去除根系及多余葉片，采用頂芽和莖段作為外植體，剝除外植體外面的包片，露出頂芽的芽點(diǎn)，切除莖段基部的雜質(zhì)；
消毒：用洗潔精對外植體進(jìn)行表面消毒，然后用無菌水清洗干凈，根據(jù)外植體的大小進(jìn)行分瓶；
再消毒：依外植體的大小用升汞水溶液消毒10～25min，消毒后用無菌水清洗干凈，然后切除外植體兩端變色部分以及四周被腐蝕的部分，使外植體露出新鮮組織再接種到培養(yǎng)基上；
培養(yǎng)：控制培養(yǎng)時(shí)的溫度為26±1℃，光照度為300～500lx。
其中，所述升汞水溶液的濃度為0.1wt％。
其中，用升汞水溶液消毒10～25min后，用無菌水清洗3次，每次3～5min。
其中，所述培養(yǎng)基中包含有6ba和iaa，6ba的含量為2.0mg/l，iaa的含量為0.3mg/l。
其中，所述培養(yǎng)基中還包含有ams、蔗糖和卡拉膠。
其中，所述培養(yǎng)基的ph值為6.0。
從上述描述可知，本發(fā)明的有益效果在于：區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明通過對母本進(jìn)行預(yù)處理后再進(jìn)行采種，采用頂芽和莖段作為外植體，對外植體進(jìn)行兩次消毒后再用培養(yǎng)基培養(yǎng)，并優(yōu)化培養(yǎng)工藝，使芽萌動(dòng)時(shí)間大大縮短至8～13天，徹底消除了真、細(xì)菌污染和死亡現(xiàn)象，種苗成活率可達(dá)100％。
實(shí)施例1
1、材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
采用引自丹麥的黑斑觀音蓮作為母本，數(shù)量為1盆；經(jīng)預(yù)處理后，選取母株上具有母本特性的輕度萎焉的頂芽和莖段作為外植體。其中，莖段4個(gè)，頂芽2個(gè)，外植體總數(shù)量為6個(gè)。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1試驗(yàn)步驟
制種前20～30天，將母本搬至母本預(yù)處理區(qū)，停止?jié)菜?、施肥，放置于干凈、干燥、通風(fēng)的環(huán)境(苗床上)，讓其自然干燥。待其基質(zhì)表面以下20～50mm處的土層干燥、均勻一致(用手捏成散沙狀，不粘手)，植株葉片呈現(xiàn)輕度萎蔫時(shí)便可進(jìn)行采種。選取長勢壯的母株，把母株從盆中整株取出，去除根系及多余葉片再帶回處理，剝除外植體外面的包片，使頂芽露出芽點(diǎn)，芽點(diǎn)四周平滑，切除莖段基部的雜質(zhì)，讓基部光滑，不出現(xiàn)凹凸不平的現(xiàn)象，外植體呈方形狀。用洗潔精對外植體進(jìn)行表面消毒，后用無菌水清洗干凈，根據(jù)植物的大小進(jìn)行分瓶，在杯蓋上注明植物代碼及消毒時(shí)間；依外植體的大小用濃度為0.1wt％的升汞水溶液消毒10-25min，消毒后用無菌水洗3次(每次3～5min)，然后用刀切除外植體兩端變色部分以及四周被腐蝕的部分，使其露出新鮮組織再接種到培養(yǎng)基上(1個(gè)/瓶)。
1.2.2培養(yǎng)基
ph6.0
1.2.3培養(yǎng)條件
26±1℃300～500lx4～5w
1.2.4調(diào)查指標(biāo)
頂芽和莖段側(cè)芽萌動(dòng)時(shí)間；真、細(xì)菌污染率及死亡率；成活率
2、結(jié)果與分析
2.1結(jié)果
該品種原種制作采用頂芽和莖段，一共6個(gè)外植體，消毒時(shí)間為18min的全部為莖段一共4個(gè)，成活4個(gè)；消毒時(shí)間為12min的為頂芽一共2個(gè)，成活2個(gè)；(其它見下表1)。
表1黑斑觀音蓮原種制作試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)表
從表1的記載可知，采用本發(fā)明的黑斑觀音蓮原種制作方法，芽萌動(dòng)時(shí)間僅需8～13天，總成活率為100％，無真、細(xì)菌污染和死亡現(xiàn)象。
以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等同變換，或直接或間接運(yùn)用在相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。