本發(fā)明涉及微生物來源殺菌劑，具體的說是化合物quinolactacide的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
馬鈴薯晚疫病又稱疫病、馬鈴薯瘟，是導(dǎo)致馬鈴薯莖葉死亡和塊莖腐爛的一種毀滅性真菌病害，發(fā)病嚴(yán)重時，植株葉片萎垂、卷縮，最終導(dǎo)致全株黑腐，造成馬鈴薯嚴(yán)重減產(chǎn)甚至絕收。馬鈴薯晚疫病在我國馬鈴薯主要產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，損失嚴(yán)重，一般年份損失30％～50％，大流行年份甚至造成絕收。目前防治手段主要依靠甲基托布津、多菌靈等化學(xué)合成農(nóng)藥，但是長期大量使用已經(jīng)帶來環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留超標(biāo)等問題。與傳統(tǒng)的化學(xué)合成農(nóng)藥相比，微生物來源殺菌劑具有對人畜和非靶標(biāo)生物安全、環(huán)境兼容性好、不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點。因此，微生物來源殺菌劑的開發(fā)與應(yīng)用對人類健康、環(huán)境保護和農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義。
式(一)所示的化合物quinolactacide是由青霉菌penicilliumcitrinumthomf1539經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)、提取分離而獲得(masakiabe,tetsuyaimai,naokiishii,etal.quinolactacide,anewquinoloneinsecticidefrompenicilliumcitrinumthomf1539.biosci.biotechnol.biochem.2005,69(6),1202-1205)。在上述文獻中通過試驗證明：該化合物對桃蚜具有殺蟲活性。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供化合物quinolactacide在制備防治馬鈴薯晚疫病菌的農(nóng)用殺菌劑方面的應(yīng)用。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：化合物quinolactacide的應(yīng)用，所述化合物quinolactacide對馬鈴薯晚疫病菌(phytophthorainfestans)具有較好抑制效果，可用于制備農(nóng)用殺菌劑；所述化合物quinolactacide的結(jié)構(gòu)如式(一)所示。
所述的農(nóng)用殺菌劑為：以式(一)所示的化合物為活性成分，加入農(nóng)業(yè)上常用的助劑制備成可濕性粉劑、顆粒劑或緩釋劑等。
本發(fā)明所具有的優(yōu)點：式(一)所示化合物可由青霉菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)、提取分離而獲得，其對馬鈴薯晚疫病菌具有較好抑制活性，最小抑制濃度(mic)為8μg/ml，表明該quinolactacide化合物對馬鈴薯晚疫病菌具有較好抑制效果，可以作為具有殺菌作用的新農(nóng)藥成分或先導(dǎo)化合物。
本發(fā)明所涉及的quinolactacide化合物可以利用微生物進行規(guī)模發(fā)酵，具有生產(chǎn)工藝簡單，周期短、產(chǎn)品成本低等特點；且只含有碳、氫和氧三種元素，在環(huán)境中易于降解，對人畜毒性較低。
具體實施方式
實施例1：化合物quinolactacide的制備
式(一)所示的化合物quinolactacide的制備參見文獻masakiabe,tetsuyaimai,naokiishii,etal.quinolactacide,anewquinoloneinsecticidefrompenicilliumcitrinumthomf1539.biosci.biotechnol.biochem.2005,69(6),1202-1205。
實施例2：抑菌活性試驗
采用微量稀釋法，測定式(一)所示化合物對馬鈴薯晚疫病菌(phytophthorainfestans)的抑菌活性(《從天然產(chǎn)物到新農(nóng)藥創(chuàng)制-原理方法》，吳文君，2006，化學(xué)工業(yè)出版社)。
1)菌懸液的制備
將供試真菌接種于pda培養(yǎng)基表面于28℃培養(yǎng)72h后，吸取2ml無菌0.85％nacl溶液(含0.25％吐溫-20)洗滌培養(yǎng)物，并用玻璃刮刀將菌落輕輕刮下。吸取適量菌懸液于無菌試管中，調(diào)至0.5麥?zhǔn)媳葷?相當(dāng)于1.5×108cfu/ml)備用；
2)樣品的配制
分別取1mg待測樣品(式(一)化合物)，溶解于100μldmso中，充分混勻后，吸取50μl樣品溶液到另一只離心管中，接著加入50μldmso，得到濃度減半的樣品溶液。按照此方法，得到12組濃度依次減半的樣品溶液。
3)mic測定方法
(1)采用無菌操作，將倍比稀釋后不同濃度的樣品溶液分別加到無菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第12孔各加5μl的樣品溶液，并以不加樣品孔作為空白對照，加5μldmso溶液孔為溶劑對照。
(2)將相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷岫鹊闹甘揪鷳乙?，?jīng)沙氏培養(yǎng)基稀釋1000倍后，取95μl依次加入到96孔板中，使得第1至第12孔的樣品濃度依次為512、256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5和0.25μg/ml。以上所有樣品均重復(fù)三次。輕輕震蕩混勻后，將96孔板密封置于28℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。
(3)在600nm波長下使用酶標(biāo)儀測定每孔的吸光值，以在小孔內(nèi)完全抑制指示菌生長的最低樣品濃度為該化合物的mic。(注意：當(dāng)陰性對照孔內(nèi)指示菌明顯生長實驗才有意義；當(dāng)實驗出現(xiàn)單一的跳孔時，應(yīng)記錄抑制菌株生長的最高藥物濃度；如出現(xiàn)多處跳孔，則不應(yīng)報告結(jié)果，需重復(fù)實驗。)
試驗結(jié)果為：式(一)所示化合物對馬鈴薯晚疫病菌(phytophthorainfestans)的mic值為8μg/ml，具有較好抑菌活性。
上述實驗結(jié)果證明本發(fā)明所涉及的化合物具有較好抑菌活性，可用于制備農(nóng)用殺菌劑。
實施例3：可濕性粉劑
由青霉菌penicilliumcitrinumthomf1539經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)(發(fā)酵培養(yǎng)過程可參見上述文獻)；將發(fā)酵液進行壓濾和沉淀，將上清液濃縮，使式(一)所示化合物的含量為1.5-2.0wt％，以濃縮上清液質(zhì)量為基數(shù)，加入25-35％白炭黑進行吸附，然后添加3-8％十二烷基硫酸鈉，0.8-1.2％cmc和2-4％拉開粉，再加入凹凸棒土制成式(一)所示化合物的含量為0.5wt％的可濕性粉劑。
使用方法：500倍液噴霧在馬鈴薯莖葉上。