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一種防治線蟲的復(fù)合微生物可濕性粉劑及其制備方法與流程

文檔序號:11563734閱讀:300來源:國知局
本發(fā)明涉及一種微生物制劑及其制備方法,具體涉及一種具防治線蟲的復(fù)合微生物可濕性粉劑及其制備方法,屬于農(nóng)業(yè)微生物
技術(shù)領(lǐng)域
。
背景技術(shù)
:近年來,由于連作面積的不斷擴(kuò)大,以及不科學(xué)用藥,致使線蟲發(fā)展蔓延速度較快,抗性增強(qiáng),作物死苗率不斷增加,從而造成了作物嚴(yán)重減產(chǎn),甚至絕產(chǎn),品質(zhì)降低,已經(jīng)嚴(yán)重影響了農(nóng)作物生產(chǎn)。市場上存在多種防治線蟲的菌劑,但是由于菌種單一、助劑不親和等原因,造成了運(yùn)輸、儲存困難,存在貨架期短等弊端。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足,本發(fā)明的目的在于提供一種防治線蟲的復(fù)合微生物可濕性粉劑及其制備方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo),本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案:一種防治線蟲的復(fù)合微生物可濕性粉劑,由有效成分和助劑組成,其特征在于,前述有效成分為:由保藏編號為cgmccno.13761的淡紫擬青霉發(fā)酵得到的淡紫擬青霉粉劑和由保藏編號為cgmccno.13763的草酸青霉發(fā)酵得到的草酸青霉粉劑;前述助劑為:高嶺土、擴(kuò)散劑nno和木質(zhì)素磺酸鈉。前述的防治線蟲的復(fù)合微生物可濕性粉劑,其特征在于,前述淡紫擬青霉粉劑的孢子含量≥120億/克,前述草酸青霉粉劑的孢子含量≥120億/克。前述的防治線蟲的復(fù)合微生物可濕性粉劑,其特征在于,以質(zhì)量百分比計,各組分的含量如下:前述的防治線蟲的復(fù)合微生物可濕性粉劑,其特征在于,制備方法如下:step1:將保藏編號為cgmccno.13761的淡紫擬青霉和保藏編號為cgmccno.13763的草酸青霉分別接種在pda平板培養(yǎng)基上,27℃暗培養(yǎng)7d,將培養(yǎng)好的平板作為原種;step2:將step1培養(yǎng)好的原種分別接種在pda液體培養(yǎng)基上,27℃、121rpm暗培養(yǎng)4d,將發(fā)酵好的液體作為種子液;step3:將麥麩加水控制濕度在20%,121℃滅菌30min,作為發(fā)酵培養(yǎng)基;step4:將step2培養(yǎng)好的種子液分別加入到step3制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中,27℃靜置暗培養(yǎng)14d;step5:將step4制得的發(fā)酵液分別烘干,粉碎,過100目篩子,得到孢子含量≥120億/克的淡紫擬青霉粉劑和孢子含量≥120億/克的草酸青霉粉劑;step6:將step5制得的淡紫擬青霉粉劑、草酸青霉粉劑與高嶺土、擴(kuò)散劑nno和木質(zhì)素磺酸鈉混合均勻,即得。本發(fā)明的有益之處在于:(1)本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑,同時含有淡紫擬青霉和草酸青霉,兩種菌劑作用互補(bǔ),能夠有效防治線蟲;選用高嶺土、擴(kuò)散劑nno和木質(zhì)素磺酸鈉作為助劑,親和性好,保證了孢子的存活性和穩(wěn)定性,延長了保存時間,進(jìn)而減少了運(yùn)輸和儲藏成本;(2)本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑,淡紫擬青霉可以寄生線蟲卵,分泌次生代謝產(chǎn)物抑制線蟲生長,草酸青霉在防治線蟲的同時還可以防治土傳病害;(3)本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑,草酸青霉具有解磷解鉀的作用,可以促進(jìn)植物生長。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作具體的介紹。第一部分:制備淡紫擬青霉粉劑1、篩選分離菌株將山東壽光大棚采集的土壤稀釋10-5,均勻涂布在含有氨芐抗生素的pda培養(yǎng)基上分離培養(yǎng),挑選真菌單菌落。2、鑒定菌株利用its序列進(jìn)行分子鑒定,選擇淡紫擬青霉菌株。3、菌株保藏我們將篩選分離得到的淡紫擬青霉于2017年03月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號),保藏編號為cgmccno.13761。4、培養(yǎng)原種將保藏編號為cgmccno.13761的淡紫擬青霉接種在pda平板培養(yǎng)基上,27℃暗培養(yǎng)7d,將培養(yǎng)好的平板作為原種。5、培養(yǎng)種子液將前面培養(yǎng)好的原種接種在pda液體培養(yǎng)基上,27℃、121rpm暗培養(yǎng)4d,將發(fā)酵好的液體作為種子液。6、制作發(fā)酵培養(yǎng)基將麥麩加水控制濕度在20%,121℃滅菌30min,作為發(fā)酵培養(yǎng)基,待用。7、發(fā)酵將前面培養(yǎng)好的種子液加入到前面制得的麥麩發(fā)酵培養(yǎng)基中,27℃靜置暗培養(yǎng)14d。8、制成粉劑將前面制得的發(fā)酵液烘干,粉碎,過100目篩子,即得到淡紫擬青霉粉劑。經(jīng)檢測,淡紫擬青霉粉劑中孢子的含量為300億/克。第二部分:制備草酸青霉粉劑1、篩選分離菌株將山東壽光大棚采集的土壤稀釋10-5,均勻涂布在含有氨芐抗生素的pda培養(yǎng)基上分離培養(yǎng),挑選真菌單菌落。2、鑒定菌株利用its序列進(jìn)行分子鑒定,選擇草酸青霉菌株。3、菌株保藏我們將篩選分離得到的草酸青霉于2017年03月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號),保藏編號為cgmccno.13763。4、培養(yǎng)原種將保藏編號為cgmccno.13763的草酸青霉接種在pda平板培養(yǎng)基上,27℃暗培養(yǎng)7d,將培養(yǎng)好的平板作為原種。5、培養(yǎng)種子液將前面培養(yǎng)好的原種接種在pda液體培養(yǎng)基上,27℃、121rpm暗培養(yǎng)4d,將發(fā)酵好的液體作為種子液。6、制作發(fā)酵培養(yǎng)基將麥麩加水控制濕度在20%,121℃滅菌30min,作為發(fā)酵培養(yǎng)基,待用。7、發(fā)酵將前面培養(yǎng)好的種子液加入到前面制得的麥麩發(fā)酵培養(yǎng)基中,27℃靜置暗培養(yǎng)14d。8、制成粉劑將前面制得的發(fā)酵液烘干,粉碎,過100目篩子,即得到草酸青霉粉劑。經(jīng)檢測,草酸青霉粉劑中孢子的含量為400億/克。第三部分:制備復(fù)合微生物可濕性粉劑將第一部分制得的淡紫擬青霉粉劑、第二部分制得的草酸青霉粉劑與高嶺土、擴(kuò)散劑nno和木質(zhì)素磺酸鈉混合均勻,即得本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑。以質(zhì)量百分比計,各組分的含量如下:第四部分:復(fù)合微生物可濕性粉劑的性能測評1、線蟲防治效果在山東昌樂某南瓜大棚,選取四畝地,一畝地使用本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑1kg,一畝地使用淡紫擬青霉粉劑1kg,一畝地使用草酸青霉粉劑1kg,這三組作為實(shí)驗(yàn)組,施用方法是對根部土壤進(jìn)行沖施,一畝地不使用任何處理,這一組作為對照組。比較結(jié)果如下:在山東壽光某黃瓜大棚,選取四畝地,一畝地使用本發(fā)明的復(fù)合微生物菌劑1kg,一畝地使用淡紫擬青霉粉劑1kg,一畝地使用草酸青霉粉劑1kg,這三組作為實(shí)驗(yàn)組,施用方法是對根部土壤進(jìn)行拌土施用,一畝地不使用任何處理,這一組作為對照組。比較結(jié)果如下:由此可見:在本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑中,淡紫擬青霉和草酸青霉這兩種菌劑作用互補(bǔ),能夠有效防治線蟲。2、粉劑的親和性將發(fā)酵完成的淡紫擬青霉和草酸青霉按比例混合,得到孢子含量淡紫擬青霉150億/克和草酸青霉160億/克的復(fù)合微生物可濕性粉劑。將得到的復(fù)合微生物可濕性粉劑放于陰涼處,放置時間從2015年12月10日持續(xù)到2016年12月10日。2016年12月10日將放置的菌劑重新稀釋涂板,檢測活菌數(shù),檢測結(jié)果如下:活菌數(shù)淡紫擬青霉130億/克草酸青霉140億/克由此可見:本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑親和性好,保證了孢子的存活性和穩(wěn)定性,延長了保存時間。3、其他功效(1)防治土傳病害試驗(yàn)在溫室條件下(25℃)進(jìn)行,將花盆裝入己滅菌的土壤,待用。該試驗(yàn)設(shè)5個處理:處理1:先播種棉花幼苗,用立枯絲核菌菌懸液澆灌土壤,然后澆灌本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑的水溶劑。處理2:先播種棉花幼苗,澆灌本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑的水溶劑,然后澆灌立枯絲核菌菌懸液。處理3:先播種棉花幼苗,澆灌立枯絲核菌菌懸液。處理4:先播種棉花幼苗,澆灌本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑的水溶劑。處理5:先播種棉花幼苗,用水澆灌,作為對照。每個處理10個花盆,每盆播種一棵幼苗,試驗(yàn)設(shè)四次重復(fù)。檢測發(fā)病率,檢測結(jié)果如下:由此可見:本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑在防治線蟲的同時還可以防治土傳病害。(2)促進(jìn)植物生長用本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑與水混合均勻,對一畝地的辣椒幼苗進(jìn)行沖施,調(diào)查辣椒幼苗的長勢和產(chǎn)量。設(shè)對照組,用清水澆灌一畝地的辣椒幼苗,調(diào)查辣椒幼苗的長勢和產(chǎn)量。經(jīng)調(diào)查,辣椒幼苗的長勢和產(chǎn)量如下:實(shí)驗(yàn)組(平均值)對照組(平均值)株高48cm36cm產(chǎn)量0.80kg/株0.38kg/株由此可見:本發(fā)明的復(fù)合微生物可濕性粉劑在防治線蟲的同時還具有促進(jìn)植物生長的作用。需要說明的是,上述實(shí)施例不以任何形式限制本發(fā)明,凡采用等同替換或等效變換的方式所獲得的技術(shù)方案,均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁12
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