本發(fā)明涉及中華散尾鬼筆殺蟲活性物質的提取方法，尤其是涉及一種利用旋轉蒸發(fā)儀轉接管提取中華散尾鬼筆殺蟲活性物質的方法。
背景技術：
：中華散尾鬼筆(lysurusmokusin)，隸屬于真菌界，擔子菌亞門(basidiomycotina)、腹菌綱(gasteromycetes)、鬼筆目(phallaes)、籠頭菌科(clathraceae)、散尾鬼筆屬(lysurus)真菌，又稱棱柱散尾鬼筆、五棱鬼筆。其中含有殺蟲的活性物質，但目前并沒有用于中華散尾鬼筆殺蟲物質的提取方法和提取工藝。在試驗中用有機溶劑對中華散尾鬼筆殺蟲活性物質提取時，受限于子實體質量較少，每組實驗的反應體系往往在10ml以內。在實驗的過程中，現(xiàn)有的提取方法提取率低，且試驗材料的用量較大不能滿足實驗要求。目前濃縮提取液的常用方法有三種：冷凍干燥法、氮氣吹干法、旋轉蒸發(fā)法。冷凍干燥法又稱升華干燥。此方法利用冰晶升華的原理，在高度真空的環(huán)境下，將已凍結了的物料中的水分直接從冰升華為蒸汽。但此方法不應能用于含有揮發(fā)性有機溶劑的試驗，而在中華散尾鬼筆活性物質提取的過程中，需要應用有機溶劑作為提取溶劑。氮氣吹干法是在氮吹儀中，將氮氣吹入樣品的表面使溶劑蒸發(fā)，進行樣品濃縮的方法。但其蒸發(fā)速度慢、效率低。在對中華散尾鬼筆殺蟲活性物質進行濃縮的過程中，用時大約需要24小時。旋轉蒸發(fā)法其原理為在真空條件下，恒溫加熱，使旋轉瓶恒速旋轉，物料在瓶壁形成大面積薄膜，高效蒸發(fā)。溶媒蒸氣經(jīng)高效玻璃冷凝器冷卻，回收于收集瓶中，大大提高蒸發(fā)效率。特別適用對高溫容易分解變性的生物制品的濃縮提純。但最小的蒸餾燒瓶容積為10ml，加之此方中法樣品要在不同容器中轉移，在對中華散尾鬼筆殺蟲活性物質進行濃縮的過程中，會造成樣品的損失，增大試驗誤差，影響實驗結果。同時，在計算中華散尾鬼筆殺蟲活性物質提取率的時候，由于蒸餾燒瓶的材質為玻璃，自重較大，對提取率計算的結果影響較大。技術實現(xiàn)要素：為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種提取中華散尾鬼筆殺蟲活性物質的方法，在料液比1:80(g/ml)、提取溫度40℃、乙醇濃度60％、超聲時間80min的條件下對五棱散尾殺蟲活性物質進行超聲提取，殺蟲活性物質的提取率可達31.2％；同時，本發(fā)明通過用一種提取中華散尾鬼筆活殺蟲性物質的轉接管，可將離心管作為容器連接到旋轉蒸發(fā)儀上處理樣品，從而滿足對中華散尾鬼筆殺蟲活性物質的提取要求。本發(fā)明的技術方案是：采集中華散尾鬼筆子實體，置于烘箱中45℃烘干至恒重。烘干后將子實體放入研缽中，倒入液氮，研磨成粉末，過80目篩，將過篩后的粉末置于干燥器中放置24h干燥。精確稱取0.1g中華散尾鬼筆干粉裝入10ml離心管內，再向離心管中加入8ml60％乙醇溶液，將離心管插入浮板，再將浮板放入功率為600w的超聲波發(fā)生器中，將超聲波發(fā)生器中的水溫加熱至40℃，超聲提取80min，然后將離心管放入離心機中，5000r/min離心10min，小心地將上清液倒入另一個10ml離心管內(倒入之前對離心管進行稱重)，將所述轉接管的磨砂口(3)上涂抹凡士林，接在旋轉蒸發(fā)儀上，將10ml離心管口套在硅膠塞(1)上稍用力使其固定，打開真空泵使負壓達到0.09mpa，將旋轉蒸發(fā)儀配套的水浴鍋水溫調整到45℃，打開旋轉蒸發(fā)儀將離心管中的液體旋干，得到中華散尾鬼筆提取物。將旋干后的離心管放入干燥器中24h，之后對其稱重，計算中華散尾鬼筆提取物的質量和提取率，實驗重復5次，合并提取物，加入5ml5％吐溫-80溶解提取物備用。提取率計算公式如下：計算后得到中華散尾鬼筆提取物的提取率為31.2％。提取物殺蟲活性的驗證：挑選大小一致的舞毒蛾3齡幼蟲為供試昆蟲，饑餓處理10h。在培養(yǎng)杯中加入適量舞毒蛾飼料。將舞毒蛾幼蟲和飼料放在白紙上，并用常量噴霧器噴灑用5％吐溫-80溶解的提取物，噴灑量以白紙剛好全部陰濕為準。噴完藥后將蟲體和飼料自然晾干，對照組噴灑5％吐溫-80溶液，每個培養(yǎng)杯中放入30頭幼蟲，在溫度25℃、rh75％、光照16l/8d條件下培養(yǎng)7d。每天清理培養(yǎng)杯，記錄舞毒蛾死亡數(shù)量。根據(jù)下列公式計算舞毒蛾幼蟲的校正死亡率。統(tǒng)計對照組、處理組舞毒蛾3齡幼蟲的死亡情況，分別計算出舞毒蛾幼蟲的校正死亡率，處理組的校正死亡率為63.35％。結果證明，通過本發(fā)明提供的提取方法得到的中華散尾鬼筆活性物質，對舞毒蛾幼蟲具有殺蟲活性。本發(fā)明具有的優(yōu)點和積極效果是：1.本發(fā)明提供了對中華散尾鬼筆活性物質的提取方法，提取率為31.2％。2.本發(fā)明提供的提取方法得到的中華散尾鬼筆活性物質，對舞毒蛾幼蟲具有殺蟲活性，通過提取物處理后的舞毒蛾幼蟲校正死亡率為63.35％。3.本發(fā)明所述轉接管的尾端為玻璃磨砂口(3)，可以與旋轉蒸發(fā)儀相連實現(xiàn)密封；中段為玻璃管壁(2),所述管壁直徑20mm，所述管壁尖端逐漸變細，直徑為8mm；所述管壁尖端外側為中空的圓臺形硅膠塞(1)，所述硅膠塞上底面直徑為10mm，下底面直徑為32mm，離心管可以直接套在所述硅膠塞上。4.本發(fā)明通過連接1.5ml-50ml不同規(guī)格的離心管，可以處理0.1ml-30ml的樣品。5.應用本發(fā)明可以減少樣品在容器間的轉移次數(shù)，從而減少樣品損失量和實驗的誤差，提高實驗結果的精確性。6.在計算提取率的實驗中，首先要稱量蒸餾燒瓶的質量，然后再稱量裝有提取物蒸餾燒瓶的質量，本發(fā)明利用離心管旋干試驗樣品，離心管的質量遠小于蒸餾燒瓶的質量，因此在稱量提取物質量時誤差更小，使得實驗結果更加精確。附圖說明圖1為一種用于中華散尾鬼筆殺蟲活性物質提取的旋轉蒸發(fā)儀轉接管的剖面圖，圖中1、硅膠塞；2、玻璃管壁；3、磨砂口。圖2為一種用于中華散尾鬼筆殺蟲活性物質提取的旋轉蒸發(fā)儀轉接管的外觀示意圖。具體實施方式1.殺蟲活性物質提取率的計算中華散尾鬼筆殺蟲活性物質的提取。采集中華散尾鬼筆子實體，置于烘箱中45℃烘干至恒重。烘干后將子實體放入研缽中，倒入液氮，研磨成粉末，過80目篩，將過篩后的粉末置于干燥器中放置24h干燥。精確稱取0.1g中華散尾鬼筆干粉裝入10ml離心管內，再向離心管中加入8ml60％乙醇溶液，將離心管插入浮板，再將浮板放入功率為600w的超聲波發(fā)生器中，將超聲波發(fā)生器中的水溫加熱至40℃，超聲提取80min，然后將離心管放入離心機中，5000r/min離心10min，小心地將上清液倒入另一個10ml離心管內(倒入之前對離心管進行稱重)，將所述轉接管的磨砂口(3)上涂抹凡士林，接在旋轉蒸發(fā)儀上，將10ml離心管口套在硅膠塞(1)上稍用力使其固定，打開真空泵使負壓達到0.09mpa，將旋轉蒸發(fā)儀配套的水浴鍋水溫調整到45℃，打開旋轉蒸發(fā)儀將離心管中的液體旋干，得到中華散尾鬼筆提取物。將旋干后的離心管放入干燥器中24h，之后對其稱重，計算中華散尾鬼筆提取物的質量和提取率，實驗重復5次，合并提取物，加入5ml5％吐溫-80溶解提取物備用。提取率計算公式如下：提取率計算公式如下：計算后得到中華散尾鬼筆提取物的提取率為31.2％，見表1。表1中華散尾鬼筆提取率結果處理提取質量(g)提取率(％)10.031531.520.031431.430.030930.940.031031.050.031231.2平均0.031231.22.不同處理方式誤差的計算對10ml離心管和50ml蒸餾燒瓶進行稱重，得空容器質量。精確稱取中華散尾鬼筆干粉0.1g若干份，分別放入10ml離心管和50ml蒸餾燒瓶中，再次進行稱重，得裝樣后質量，設置3組重復，根據(jù)下列公式計算容器對結果的相對誤差，結果見表2。表2不同容器對中華散尾鬼筆干粉稱量結果的相對誤差結果顯示，用離心管作為容器的相對誤差為1.667％；用蒸餾燒瓶作為容器的相對誤差為3.333％，后者的誤差是前者的兩倍。3.提取物殺蟲活性的驗證挑選大小一致的舞毒蛾3齡幼蟲為供試昆蟲，饑餓處理10h。在培養(yǎng)杯中加入適量舞毒蛾飼料。將舞毒蛾幼蟲和飼料放在白紙上，并用常量噴霧器噴灑用5％吐溫-80溶解的提取物，噴灑量以白紙剛好全部陰濕為準。噴完藥后將蟲體和飼料自然晾干，對照組噴灑5％吐溫-80溶液，每個培養(yǎng)杯中放入30頭幼蟲，在溫度25℃、rh75％、光照16l/8d條件下培養(yǎng)7d。每天清理培養(yǎng)杯，記錄舞毒蛾死亡數(shù)量。根據(jù)下列公式計算舞毒蛾幼蟲的校正死亡率。統(tǒng)計對照組、處理組舞毒蛾3齡幼蟲的死亡情況見表3，分別計算出舞毒蛾幼蟲的校正死亡率，處理組的校正死亡率為63.35％。結果證明，通過本發(fā)明提供的提取方法得到的中華散尾鬼筆殺蟲活性物質，對舞毒蛾幼蟲具有殺蟲活性。表3中華散尾鬼筆粗提物對舞毒蛾幼蟲的殺蟲活性當前第1頁12