本發(fā)明屬于農(nóng)藥應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種農(nóng)藥組合物，具體的說是一種含異噻菌胺和dichlobentiazox的組合物，應(yīng)用于防治植物病蟲害。
背景技術(shù)：
在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中，植物病蟲害發(fā)生嚴(yán)重，危害植物根、莖、葉等部位，以及果實(shí)、種子、塊莖等繁殖器官，使作物產(chǎn)量銳減，品質(zhì)下降嚴(yán)重。病蟲害發(fā)生嚴(yán)重時(shí)，導(dǎo)致作物絕收。因此，植物病蟲害在生產(chǎn)實(shí)際上具有重要的防治意義，殺菌劑或殺蟲劑是防治植物病蟲害最為經(jīng)濟(jì)、快捷而有效的方法。
并且，在實(shí)際生產(chǎn)中，植物病蟲害往往同時(shí)發(fā)生，如種傳、土傳病害和地下害蟲，葉面病害和葉部害蟲等常常同時(shí)發(fā)生，單一使用殺菌劑或殺蟲劑，并不能很好地解決生產(chǎn)實(shí)際中的植物病蟲害危害問題。將殺菌劑和殺蟲劑混配，可彌補(bǔ)這種不足，兩者優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，可擴(kuò)大防治譜，綜合有效控制病蟲害危害，在生產(chǎn)實(shí)踐中成為深受歡迎的應(yīng)用形式。尤其是具有協(xié)同作用的殺菌劑和殺蟲劑，各有效組分間相互作用，使組合效果優(yōu)于單獨(dú)使用效果的理論總和，因而在實(shí)際使用時(shí)可起到事半功倍的效果，更受使用者青睞。
異噻菌胺(isotianil)屬誘導(dǎo)植物抗病性藥劑，通過誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性反應(yīng)，抵御病原菌侵染。主要用于防治水稻稻瘟病和水稻白葉枯病，也可防治小麥白粉病、黃瓜炭疽病、黃瓜細(xì)菌性角斑病等病害。結(jié)構(gòu)式如下：
精甲霜靈(metalaxyl-m)、咯菌腈(fludioxonil)、咪鮮胺(prochloraz)、噁霉靈(hymexazol)、硅噻菌胺(silthiofam)、稻瘟酰胺(fenoxanil)、稻瘟酯(pefurazoate)、井岡霉素(validamycin)、春雷霉素(kasugamycin及kasugamycinhydrochloride)、活化酯(acibenzolar及acibenzolar-s-methyl)、己唑醇(hexaconazole)、烯丙苯噻唑(probenazole)、氟嘧菌酯(fluoxastrobin)、吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)、嘧菌酯(azoxystrobin)、肟菌酯(trifloxystrobin)、苯氧菌胺(metominostrobin)、肟醚菌胺(orysastrobin)、噻呋酰胺(thifluzamide)、苯醚甲環(huán)唑(difenoconazole)、三唑醇(triadimenol)、氟菌唑(triflumizole)、葉菌唑(metconazole)、滅菌唑(triticonazole)、種菌唑(ipconazole)、丙硫菌唑(prothioconazole)、咪唑菌酮(fenamidone)、異菌脲(iprodione)是多種廣譜性殺菌劑，呋蟲胺(dinotefuran)、吡蟲啉(imidacloprid)、啶蟲脒(acetamiprid)、噻蟲胺(clothianidin)、噻蟲嗪(thiamethoxam)、烯啶蟲胺(nitenpyram)、氟啶蟲胺腈(sulfoxaflor)、螺蟲乙酯(spirotetramat)、毒死蜱(chlorpyrifos)、丁硫克百威(carbosulfan)、乙蟲腈(ethiprole)、三氟苯嘧啶(triflumezopyrim)是多種廣譜性殺蟲劑。上述藥劑對(duì)多種病害或蟲害表現(xiàn)出優(yōu)良防效。
本發(fā)明經(jīng)過大量的配方篩選試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)異噻菌胺和dichlobentiazox的組合物與精甲霜靈、咯菌腈、咪鮮胺、噁霉靈、硅噻菌胺、稻瘟酰胺、稻瘟酯、井岡霉素、春雷霉素、活化酯、己唑醇、烯丙苯噻唑、氟嘧菌酯、吡唑醚菌酯、嘧菌酯、肟菌酯、苯氧菌胺、肟醚菌胺、噻呋酰胺、苯醚甲環(huán)唑、三唑醇、氟菌唑、葉菌唑、滅菌唑、種菌唑、丙硫菌唑、咪唑菌酮、異菌脲、呋蟲胺、吡蟲啉、啶蟲脒、噻蟲胺、噻蟲嗪、烯啶蟲胺、氟啶蟲胺腈、螺蟲乙酯、毒死蜱、丁硫克百威、乙蟲腈、三氟苯嘧啶中的一種或一種以上藥劑任意組合時(shí)，顯示出令人驚訝的殺蟲殺菌效果，即表現(xiàn)出良好的協(xié)同作用，實(shí)際效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用的理論總和，在生產(chǎn)上具有非常廣泛的應(yīng)用前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明涉及協(xié)同組合物，包括活性成分a和b，所述的活性成分a為異噻菌胺和dichlobentiazox，所述的活性成分b為精甲霜靈、咯菌腈、咪鮮胺、噁霉靈、硅噻菌胺、稻瘟酰胺、稻瘟酯、井岡霉素、春雷霉素、活化酯、己唑醇、烯丙苯噻唑、氟嘧菌酯、吡唑醚菌酯、嘧菌酯、肟菌酯、苯氧菌胺、肟醚菌胺、噻呋酰胺、苯醚甲環(huán)唑、三唑醇、氟菌唑、葉菌唑、滅菌唑、種菌唑、丙硫菌唑、咪唑菌酮、異菌脲、呋蟲胺、吡蟲啉、啶蟲脒、噻蟲胺、噻蟲嗪、烯啶蟲胺、氟啶蟲胺腈、螺蟲乙酯、毒死蜱、丁硫克百威、乙蟲腈、三氟苯嘧啶中的一種或一種以上組合。此外，還包括農(nóng)藥制劑加工中可以使用的助劑。
所述組合物可以特別良好的效果用于防治各種有用作物中的植物病蟲害，所述有用作物包括但不限于常規(guī)育種作物、轉(zhuǎn)基因作物、無性繁殖作物及無性繁殖材料、馴化栽培的野生植物等，特別適用于防治水稻、小麥、草莓、白菜、馬鈴薯、玉米、大麥、棉花、花生、蔬菜、果樹等作物上的多種病蟲害，如種傳、土傳病害、地下害蟲、葉部病害及害蟲等。
可提及的具體實(shí)例為一些可用本發(fā)明的組合物防治的代表性植物病蟲害，所述實(shí)例并不限于特定屬種。需要說明的是本發(fā)明并不局限于以下具體實(shí)例，還可以以相同方式延伸到其它植物病蟲害，括號(hào)注明其病原拉丁文學(xué)名：
水稻稻瘟病(magnaporthegrisea)、水稻白葉枯病(xanthomonasoryzae)、水稻胡麻葉斑病(bipolarisoryzae)、水稻細(xì)菌性谷枯病(burkholderigluma)、水稻細(xì)菌性立枯病(pseudomonasplantarii)、小麥白粉病(blumeriagraminis)、黃瓜炭疽病(colletotrichumorbiculare)、黃瓜細(xì)菌性角斑病(pseudomonassyringaepv.lachlymans)、葫蘆科蔬菜(黃瓜、西葫蘆、南瓜)白粉病(sphaerothecafuliginea)、草莓白粉病(sphaerothecaaphanis)、草莓炭疽病(glomerellacingulata)、白菜黑斑病(alternariabrassicae)、馬鈴薯黑痣病、草坪褐斑病、水稻紋枯病(rhizoctoniasolani)、玉米絲黑穗病(sphacelothecareiliana)、玉米黑粉病(ustilagomaydis)、小麥散黑穗病(ustilagotritici)、小麥腥黑穗病(tilletiacaries)、小麥桿黑粉病(urocystisocculta)、小麥雪霉葉枯病(monographellanivalis)、小麥紋枯病(rhizoctoniacerealis)、小麥葉銹病(pucciniarecondita)、小麥條銹病(p.striiformis)、小麥桿銹病(p.graminis)、大麥黑穗病(ustilagohordei)、大麥條紋病(pyrenophoragraminea)、燕麥散黑穗病(ustilagoavenae)、洋蔥黑粉病(urocystiscolchici)、豆類、紫花苜蓿、鱗莖類、棉花、油料作物、高粱、甜菜、向日葵、玉米等作物猝倒病和立枯病(rhizoctoniasolani)、水稻惡苗病(fusariummoniliforme)、水稻稻曲病(ustilaginoideaoryzae)、水稻粒黑粉病(tilletiabarclayana)、小麥赤霉病(fusariumgraminearum)、西瓜枯萎病、大豆和花生根腐病(fusariumoxysporum)、果樹、蔬菜等作物灰霉病(botrytiscinerea)、黃瓜霜霉病(pseudoperonosporacubensis)、葡萄霜霉病(plasmoparaviticola)、馬鈴薯、番茄晚疫病(phytophthorainfestans)、辣椒疫病(phytophthoracapsic)、觀賞植物根腐病(pythiumsplendens)、草坪腐霉枯萎病(pythiumaphanidermatum)、小麥全蝕病(gaeumannomycesgraminis)、蘋果白粉病(podosphaeraleucotricha)、蘋果樹腐爛病(valsamali)、玉米大斑病(exserohilumturcicum)、香蕉葉斑病(mycosphaerellafijiensis)、番茄、辣椒和馬鈴薯早疫病(alternariasolani)、蘋果樹斑點(diǎn)落葉病(alternariamali)、葡萄黑痘病(sphacelomaampelinum)、花生白絹病(sclerotiumrolfsii)、玉米莖基腐病(fusariumgraminearum)、蘋果樹黑星病(venturiainaequalis)、梨黑星病(venturianashicola)、柑橘炭疽病(colletotrichumglecosporioides)、葡萄炭疽病(glomerellacingulata)、香蕉炭疽病(colletotrichummusae)、大豆及油菜菌核病(sclerotiniasclerotiorum)、大豆銹病(phakopsorapachyrhizi)、草坪褐斑病(rhizoctoniasolani)、水稻稻飛虱(nilaparvatalugens)、小麥蚜蟲(sitobionavenae)、小麥吸漿蟲(sitodiplosismosellana)、玉米和小麥蠐螬(anomalacorpulenta)、玉米地老虎(agrotisypsilon)、玉米金針蟲(agriotesfuscicollis)、馬鈴薯和花生蠐螬(holotrichiaparallela)、韭菜遲眼蕈蚊(bradysiaodoriphaga)、食用菌菌蛆(lycoriellapleuroti)、茶樹茶小綠葉蟬(empoascaflavescens)、甘藍(lán)黃條跳甲(phyllotratastriolata)、番茄、辣椒、茄子和黃瓜煙粉虱(bemisiatabaci)、番茄和馬鈴薯木虱(bactericeracockerelli)、柑橘樹木虱(diaphorinacitri)、柑橘樹介殼蟲(如矢尖蚧unaspisyanonensis、紅蠟蚧ceroplastesrubens等)、蘋果樹棉蚜(eriosomalanigerum)、螨類(如全爪螨panonychuscitri，山楂葉螨tetranychusviennensis、二斑葉螨tetranychusurticae)、小食心蟲(grapholithainopinata)、蕓苔屬蔬菜(如甘藍(lán))小菜蛾(plutellaxylostella)、斜紋夜蛾(prodenialitura)、水稻三化螟(tryporyzaincertulas)、二化螟(chilosuppressalis)、稻縱卷葉螟(cnaphalocrocismedinalis)、稻薊馬(stenchaetothripsbiformis)、稻象甲(lissorhoptrusoryzophilus)等。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
本發(fā)明組合物組分a和b可以任意比例混配，通常一種活性成分含量高于其余活性成分，優(yōu)選混合比是100：1至1：100或50：1至1：50。
本發(fā)明組合物可通過將活性成分與農(nóng)藥制劑加工中可以使用的助劑混合，用已知方法制備為常規(guī)的制劑，如乳油、可濕性粉劑、種子處理懸浮劑、水分散粒劑、懸浮劑、水乳劑、微乳劑、懸浮種衣劑、種子處理干粉劑、種子處理可分散粉劑、顆粒劑等。制劑中一般含有0.1～95％重量的活性成分，優(yōu)選0.5～90％重量的活性成分。
農(nóng)藥制劑加工中可以使用的助劑包括但不限于：水、溶劑、填料、各種表面活性劑(乳化劑、分散劑、潤濕劑等)、黏結(jié)劑、成膜劑、著色劑、防凍劑、增稠劑、助懸劑、崩解劑、消泡劑、滲透劑、警戒色、增效劑、穩(wěn)定劑、壁囊材料、ph調(diào)節(jié)劑、防腐劑等。并且，適當(dāng)?shù)?，為了提高?duì)特定作物耐受力，可適當(dāng)添加安全劑；或者有時(shí)為了促進(jìn)作物生長(zhǎng)發(fā)育，可在混配組合物中添加常規(guī)農(nóng)業(yè)肥料，制成藥肥混劑。這些助劑都是農(nóng)藥制劑中常用或允許使用的成分，并無特別限定，可選擇一種或一種以上助劑構(gòu)成，具體成分和用量根據(jù)配方要求通過簡(jiǎn)單的試驗(yàn)確定。
所述組合物各種應(yīng)用劑型的生產(chǎn)工藝均屬現(xiàn)有已知技術(shù)，在此不再贅述。
本發(fā)明組合物可以多種方法使用，如兌水以常規(guī)方式噴霧使用，或直接撒施或溝施，或拌毒土撒施，或種子處理等，于植物播種時(shí)、出苗前、出苗后營養(yǎng)生長(zhǎng)期和生殖生長(zhǎng)期均可使用。用藥量可在較寬范圍內(nèi)變化，并且取決于土壤的狀況、使用方法、作物、待防治的植物病蟲害種類及苗齡大小、當(dāng)時(shí)的氣候條件及其他因素。本發(fā)明組合物通常以0.001～1.0kg活性成分混合物/100kg種子的用量施用，或者以0.001～1.0kg活性成分混合物/公頃的用量施用；更為優(yōu)選地，以0.001～0.5kg活性成分混合物/100kg種子的用量施用，或者以0.01～0.5kg活性成分混合物/公頃的用量施用。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下技術(shù)效果：
1、混配組合物具有良好的協(xié)同作用，應(yīng)用效果明顯優(yōu)于單劑理論效果總和，即具有超疊加作用，可更好地控制植物病蟲害發(fā)生危害；
2、混配組合物活性成分之間在植物病蟲害防治譜上具有良好的互補(bǔ)性，可很好擴(kuò)大防治譜，綜合有效控制各種植物病蟲害發(fā)生危害；
3、混配組合物具有良好的協(xié)同作用，可減少藥劑使用量，降低使用成本和環(huán)境污染，提高對(duì)作物的安全性。
具體實(shí)施方式
以下給出本發(fā)明的具體實(shí)施例，需要說明的是本發(fā)明并不局限于以下具體實(shí)施例，凡在本申請(qǐng)技術(shù)方案基礎(chǔ)上做的等同變換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1：32％乳油
配方組成為：活性成分a為10％，活性成分b為22％，乳化劑烷芳基酚聚氧乙烯醚磷酸酯4％，乳化劑脂肪醇聚氧乙烯醚5％，溶劑二甲苯補(bǔ)足至100％。
制備方法為：將所有物料投入配料釜中，攪拌溶解至完全透明，化驗(yàn)合格后，轉(zhuǎn)移至儲(chǔ)罐灌裝。
實(shí)施例2：20％種子處理懸浮劑
配方組成為：活性成分a為15％，活性成分b為5％，潤濕劑磺基琥珀酸辛酯鈉鹽4％，分散劑eo/po嵌段聚氧乙烯醚6％，防凍劑丙三醇5％，增稠劑硅酸鎂鋁0.3％，警戒色玫瑰精0.7％，水補(bǔ)足至100％。
制備方法為：將活性成分和潤濕劑、分散劑、防凍劑、警戒色和水投入攪拌釜中，充分?jǐn)嚢韬?，將物料抽入砂磨機(jī)中進(jìn)行充分研磨，研磨完成后，抽入高速剪切機(jī)中，加入增稠劑后，進(jìn)行高速剪切，剪切完成后即制得種子處理懸浮劑。
實(shí)施例3：47％水分散粒劑
配方組成為：活性成分a為20％，活性成分b為27％，潤濕劑十二烷基硫酸鈉4％，分散劑木質(zhì)素磺酸鹽7％，崩解劑硫酸銨5％，黏結(jié)劑羧甲基纖維素0.2％，填料高嶺土補(bǔ)足至100％。
制備方法為：將所有物料混合均勻后，經(jīng)氣流粉碎機(jī)粉碎，再次混合均勻，然后，加入一定量的水將此混合物捏合，擠壓造粒，經(jīng)干燥篩分，即得到水分散粒劑。
實(shí)施例4：18％水乳劑
配方組成為：活性成分a為9％，活性成分b為9％，溶劑二甲苯10％，乳化劑磺化琥珀酸二辛酯鈉鹽5％，乳化劑烷基芳基聚氧丙烯聚氧乙烯醚3％，防凍劑丙三醇5％，水補(bǔ)足至100％。
制備方法為：將活性成分a和b用溶劑充分溶解后，投入乳化劑充分?jǐn)嚢韬笮纬捎拖?；將防凍劑加入水中溶解，形成水相；將水相緩慢加入油相中，使用高速剪切機(jī)剪切，即可得水乳劑。
實(shí)施例5：15％微乳劑
配方組成為：活性成分a為10％，活性成分b為5％，溶劑二甲苯9％，溶劑環(huán)己酮5％，乳化劑聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酮9％，乳化劑烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物5％，防凍劑乙二醇5％，水補(bǔ)足至100％。
制備方法為：將活性成分a和b用溶劑充分溶解后，投入乳化劑和防凍劑混合均勻，最后加入去離子水，進(jìn)行高速剪切，即可得微乳劑。
實(shí)施例6：62％可濕性粉劑
配方組成為：活性成分a為20％，活性成分b為42％，潤濕劑苯乙基酚聚氧乙烯醚6％，分散劑聚羧酸鹽5％，填料膨潤土補(bǔ)足至100％。
制備方法為：將活性成分和各助劑混合均勻，投入機(jī)械粉粹機(jī)中進(jìn)行初粉粹，之后經(jīng)氣流粉碎機(jī)粉碎，再混合均勻，即制得可濕性粉劑。
實(shí)施例7：5％顆粒劑
配方組成為：活性成分a為2％，活性成分b為3％，潤濕劑十二烷基硫酸鈉0.8％，分散劑脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉0.7％，著色劑炭黑0.3％，填料硅藻土補(bǔ)足至100％。
制備方法為：將所有物料混合均勻后，加入一定量的水將此混合物捏合，擠壓造粒，經(jīng)干燥篩分，即得到顆粒劑。
實(shí)施例8：28％懸浮種衣劑
配方組成為：活性成分a為18％，活性成分b為10％，潤濕劑烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物硫酸鹽4％，分散劑萘磺酸鈉甲醛縮合物5％，成膜劑聚乙烯醇-醋酸聚乙烯共聚物0.6％，防凍劑丙二醇4％，增稠劑黃原膠0.2％，警戒色玫瑰精0.9％，水補(bǔ)足至100％。
制備方法為：將活性成分和潤濕劑、分散劑、防凍劑、警戒色、成膜劑和水投入攪拌釜中，充分?jǐn)嚢韬?，抽入高速剪切機(jī)中，進(jìn)行高速剪切，再泵至砂磨機(jī)中進(jìn)行充分砂磨，砂磨合格后加入增稠劑，攪拌均勻即得懸浮種衣劑。
應(yīng)用效果實(shí)例：
1、試驗(yàn)方法
(1)對(duì)草坪褐斑病菌的生物活性
以草坪褐斑病菌(rhizoctoniasolani)為供試病原菌，田間采集，實(shí)驗(yàn)室分離純化，接種在pda培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)至菌落直徑達(dá)6cm左右備用。pda培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，用于菌絲離體培養(yǎng)。后述的pd培養(yǎng)液用于菌絲搖培，沒有瓊脂粉，其余配方與pda培養(yǎng)基相同。兩種培養(yǎng)基為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)培養(yǎng)基，此處略去其配制方法。
以高羊茅為供試作物，每盆播10粒種子，出苗后選定其中5株，長(zhǎng)至3葉～5葉期備用。
將配制好的藥液均勻噴施于高羊茅葉面至全部潤濕。施藥72h后接種病原菌。用打孔器從pda培養(yǎng)基菌落邊緣1/3處打取8塊直徑為5mm的菌餅，置于50mlpd培養(yǎng)液中，在25℃、120r/min搖床中培養(yǎng)5天，然后過濾收集菌絲，將菌絲研磨后加無菌水制成菌絲懸浮液，將其噴霧接種于已施藥的高羊茅葉片上。接種后移至保濕箱中(相對(duì)濕度95％～100％)黑暗保濕培養(yǎng)24h。然后在26℃～28℃、12h光暗交替、相對(duì)濕度為85％～90％的人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)。每處理設(shè)置4次重復(fù)，每重復(fù)6盆，并設(shè)不含藥劑的處理作空白對(duì)照。待空白對(duì)照病葉率達(dá)到50％以上時(shí)，分級(jí)調(diào)查各處理發(fā)病情況。分級(jí)方法參照《ny/t1464.46-2012殺菌劑防治草坪草葉斑病的田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則》進(jìn)行。計(jì)算各處理的病情指數(shù)和防治效果。
病情指數(shù)按式(1)計(jì)算，防治效果按式(2)計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。
式中：
x—病情指數(shù)；
ni—各級(jí)病葉數(shù)；
i—相對(duì)級(jí)數(shù)值；
n—調(diào)查總?cè)~數(shù)；
9—最高級(jí)數(shù)值。
式中：
p—防治效果，單位為百分?jǐn)?shù)(％)；
ck—空白對(duì)照病情指數(shù)；
pt—藥劑處理病情指數(shù)。
(2)對(duì)黃瓜灰霉病菌的生物活性
參照《ny/t1156.10-2008農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則殺菌劑第10部分：防治灰霉病試驗(yàn)盆栽法》進(jìn)行。
以黃瓜灰霉病菌(botrytiscinerea)為供試病原菌，田間采集病果，實(shí)驗(yàn)室分離純化，接種在胡蘿卜培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待產(chǎn)生大量分生孢子后備用。胡蘿卜培養(yǎng)基配制如下：胡蘿卜200g切小塊放入榨汁機(jī)中攪碎，紗布過濾去掉濾渣，再加入20g瓊脂粉，用去離子水補(bǔ)足至1000ml，加熱至沸騰，高壓蒸汽滅菌(121℃)30min。
以黃瓜感病品種“中農(nóng)5號(hào)”為供試作物，實(shí)驗(yàn)室盆栽，幼苗長(zhǎng)至2片～4片真葉期備用。
將配制好的藥液均勻噴施于“中農(nóng)5號(hào)”葉面至全部潤濕。施藥72h后接種病原菌。用無菌水從胡蘿卜培養(yǎng)基菌落上洗取分生孢子，洗滌液用雙層紗布過濾，制成濃度為1×105個(gè)孢子/ml的孢子懸浮液，將其噴霧接種于已施藥的黃瓜葉片上。接種后移至保濕箱中(相對(duì)濕度95％～100％)黑暗培養(yǎng)24h。然后在20℃～25℃、12h光暗交替、相對(duì)濕度為80％～90％的人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)。每處理設(shè)置4次重復(fù)，每重復(fù)5盆，每盆2株，并設(shè)不含藥劑的處理作空白對(duì)照。當(dāng)空白對(duì)照發(fā)病率達(dá)到50％以上時(shí)，分級(jí)調(diào)查各處理發(fā)病情況。計(jì)算各處理的病情指數(shù)和防治效果。
病情指數(shù)按式(1)計(jì)算，防治效果按式(2)計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。
(3)對(duì)番茄晚疫病菌的生物活性
參照《ny/t1156.12-2008農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則殺菌劑第12部分：防治晚疫病試驗(yàn)盆栽法》進(jìn)行。
以番茄晚疫病菌(phytophthorainfestans)為供試病原菌，從田間采集病葉，實(shí)驗(yàn)室分離純化，接種在燕麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)至菌落直徑達(dá)6cm左右備用。燕麥培養(yǎng)基配制如下：燕麥50g，瓊脂粉18g，去離子水1000ml。高壓蒸汽滅菌(121℃)30min。后述的產(chǎn)孢培養(yǎng)液皮氏培養(yǎng)液配制如下：ca(no3)20.4g，kh2po40.15g，mg(no3)20.15g，cacl20.06g，去離子水1000ml，高壓蒸汽滅菌(121℃)30min。
以番茄感病品種“寶冠1號(hào)”為供試作物，實(shí)驗(yàn)室盆栽，幼苗長(zhǎng)至2片～4片真葉期備用。
將配制好的藥液均勻噴施于“寶冠1號(hào)”葉面至全部潤濕。施藥72h后接種病原菌。用打孔器從燕麥培養(yǎng)基菌落邊緣1/3處打取8塊直徑為5mm的菌餅，置于直徑為9cm的培養(yǎng)皿中，加入20ml皮氏培養(yǎng)液，使液面剛好沒過菌餅。置于18℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)3天，產(chǎn)生大量孢子囊后，傾去培養(yǎng)皿中的皮氏液，加入適量滅菌蒸餾水，置于4℃冰箱中，30min后取出，18℃恒溫培養(yǎng)箱中放置1h，待游動(dòng)孢子釋放后，用雙層紗布過濾，制得濃度為1×105游動(dòng)孢子/ml的游動(dòng)孢子懸浮液，將其噴霧接種于已施藥的番茄葉片上。接種后移至保濕箱中(相對(duì)濕度95％～100％)黑暗培養(yǎng)24h。然后在18℃～20℃、12h光暗交替、相對(duì)濕度為90％～100％的人工氣候箱內(nèi)培養(yǎng)。每處理設(shè)置4次重復(fù)，每重復(fù)5盆，每盆2株，并設(shè)不含藥劑的處理作空白對(duì)照。當(dāng)空白對(duì)照發(fā)病率達(dá)到50％以上時(shí)，分級(jí)調(diào)查各處理發(fā)病情況。計(jì)算各處理的病情指數(shù)和防治效果。
病情指數(shù)按式(1)計(jì)算，防治效果按式(2)計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。
(4)水稻白葉枯病菌的生物活性
參見文獻(xiàn)報(bào)道，用剪葉法進(jìn)行。具體方法如下：
以水稻白葉枯病菌(xanthomonasoryzae)為供試病菌，在nb培養(yǎng)液中，28℃，180rpm振蕩培養(yǎng)12h，至菌液濃度為107cfu/ml時(shí)備用。nb培養(yǎng)液制備如下：聚蛋白胨5g，酵母粉1g，牛肉浸膏3g，蔗糖15g，去離子水1000ml，用10mol/l的naoh調(diào)至ph7.0。高壓蒸汽滅菌(121℃)30min。
以“秈優(yōu)63”水稻為供試作物，每盆播20粒種子，出苗后選定其中10株，長(zhǎng)至4葉～6葉期備用。
將配制好的藥液均勻噴施于“秈優(yōu)63”葉面至全部潤濕。施藥后72h接種病原菌。選取一盆中長(zhǎng)勢(shì)相同的葉片10片，用滅菌的剪刀分別蘸取水稻白葉枯病菌菌液剪切其頂端3cm-4cm處(細(xì)菌一般從傷口侵入，剪切水稻葉片是為了制造傷口，便于白葉枯病菌侵入)。接種后移至保濕箱中(相對(duì)濕度95％～100％)黑暗培養(yǎng)24h。然后在26～30℃、12h光暗交替條件下，相對(duì)濕度為90％以上的條件下培養(yǎng)。每處理設(shè)置4次重復(fù)，每重復(fù)3盆，并設(shè)不含藥劑的處理作空白對(duì)照。15d后用游標(biāo)卡尺以十字交叉法測(cè)量病斑長(zhǎng)度，取平均值。
根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)，按公式(3)計(jì)算防治效果，結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。
式中：
p—防治效果，單位為百分?jǐn)?shù)(％)；
l0—空白對(duì)照病斑長(zhǎng)度，單位為毫米(mm)；
l1—藥劑處理病斑長(zhǎng)度，單位為毫米(mm)。
(5)對(duì)馬鈴薯蠐螬的生物活性
參照《nyt1154.15-2009農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則殺蟲劑第15部分：地下害蟲浸蟲法》進(jìn)行。
以馬鈴薯蠐螬(holotrichiaparallela)為供試對(duì)象，選取室內(nèi)飼養(yǎng)，生理狀態(tài)一致的2齡幼蟲進(jìn)行試驗(yàn)。
將幼蟲浸入藥液中10s取出，用濾紙吸去多余藥液，將試蟲轉(zhuǎn)移至裝有新鮮馬鈴薯塊的玻璃試管中，管口以潮濕的黑布遮蓋，置于25℃±1℃，相對(duì)濕度60％～80％的恒溫養(yǎng)蟲室內(nèi)飼養(yǎng)。每處理4次重復(fù)，每重復(fù)30頭，并設(shè)不含藥劑的處理作為空白對(duì)照。處理后48h調(diào)查結(jié)果(死亡標(biāo)準(zhǔn)：用毛筆輕觸蟲體，蟲體不能活動(dòng))，分別記錄總蟲數(shù)和死亡數(shù)。
死亡率按式(4)計(jì)算，單位為百分率(％)，計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位：
式中：
p1—死亡率，單位為百分?jǐn)?shù)(％)；
k—表示死亡蟲數(shù)，單位為頭；
n—表示處理總蟲數(shù)，單位為頭。
(6)對(duì)水稻稻飛虱的生物活性
參照《ny/t1154.11-2008農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則殺蟲劑第11部分：稻莖浸漬法》進(jìn)行。
以水稻稻飛虱(nilaparvatalugens)為供試對(duì)象，選取室內(nèi)飼養(yǎng)，生理狀態(tài)一致的3齡若蟲進(jìn)行試驗(yàn)。
取實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的健壯一致的分蘗期水稻苗，連根挖取，洗凈，剪成10cm長(zhǎng)的連根稻莖，于陰涼處晾至表面無水痕。將準(zhǔn)備好的稻莖分別置于不同濃度的藥液中浸泡30s，取出后稍晾干，以用清水浸濕的脫脂棉球包住根部保濕，外包保鮮膜，置于試管中，每試管3株。用吸蟲器將試蟲放入試管中，管口用濕紗布封口，每管15頭，每重復(fù)2管，每個(gè)濃度4次重復(fù)。設(shè)不含藥劑的處理作空白對(duì)照。接蟲后的試管放置于(25±1)℃，相對(duì)濕度60％～80％，光周期l:d＝16h:8h的人工氣候箱中飼養(yǎng)。處理后72h調(diào)查結(jié)果(死亡標(biāo)準(zhǔn)：用毛筆輕觸蟲體，蟲體不能活動(dòng))，分別記錄總蟲數(shù)和死亡數(shù)。按(4)式計(jì)算死亡率。
(7)組合物預(yù)期活性判定
組合物預(yù)期活性借鑒拜耳、先正達(dá)、陶氏等跨國農(nóng)藥企業(yè)制劑專利中判定組合物預(yù)期活性的方法(colby法)：colby，s.r.：“calculatingsynergisticandantagonisticresponsesofherbicidecombinations”，weeds15，p.20～22，1967進(jìn)行。
組合物預(yù)期活性按(5)式計(jì)算：
式中：
x—藥劑1用量為p時(shí)的防效或死亡率；
y—藥劑2用量為q時(shí)的防效或死亡率；
z—藥劑3用量為r時(shí)的防效或死亡率；
e0—藥劑1用量為p+藥劑2用量為q+藥劑3用量為r時(shí)的理論防效或死亡率，即組合物的預(yù)期活性；
e—藥劑1、2和3按不同配比混配時(shí)的實(shí)際防效或死亡率，即組合物的實(shí)際活性；
當(dāng)e＞e0時(shí)，即如果混配藥劑的實(shí)際活性超過所計(jì)算的預(yù)期活性，則該組合物就具有超疊加作用，即協(xié)同作用。
2、試驗(yàn)結(jié)果
試驗(yàn)結(jié)果詳見表1～6，可見，活性成分a(異噻菌胺和dichlobentiazox)與選自活性成分b(咯菌腈、異菌脲、嘧菌酯、己唑醇、呋蟲胺等)的藥劑混配后，實(shí)際活性均大于預(yù)期活性，說明活性成分a與活性成分b中的藥劑混配具有協(xié)同作用。
表1異噻菌胺、dichlobentiazox與咯菌腈混配對(duì)草坪褐斑病菌的聯(lián)合作用效應(yīng)
表2異噻菌胺、dichlobentiazox與異菌脲混配對(duì)黃瓜灰霉病菌的聯(lián)合作用效應(yīng)
表3異噻菌胺、dichlobentiazox與嘧菌酯混配對(duì)番茄晚疫病菌的聯(lián)合作用效應(yīng)
表4異噻菌胺、dichlobentiazox與己唑醇混配對(duì)水稻白葉枯病菌的聯(lián)合作用效應(yīng)
表5異噻菌胺、dichlobentiazox與呋蟲胺混配對(duì)馬鈴薯蠐螬的聯(lián)合作用效應(yīng)
表6異噻菌胺、dichlobentiazox與氟啶蟲胺腈混配對(duì)水稻稻飛虱的聯(lián)合作用效應(yīng)