本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種平歐雜種榛組織培養(yǎng)的方法。

背景技術(shù)：

在生產(chǎn)中，榛子苗木主要以壓條法繁殖，壓條技術(shù)現(xiàn)已基本成熟。但是榛樹每年根部新萌出的枝條有限，使得壓條繁殖的系數(shù)比較低，育苗速度較慢，遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)中對榛苗的大量需求。嫁接繁育時，苗木產(chǎn)生大量的根蘗，從而給生產(chǎn)和管理帶來許多不便，所以很少采用。近些年，我國科研工作者雖然在棒子的扦插和組織培養(yǎng)方而取得了一定進(jìn)展，但在生產(chǎn)上應(yīng)用的效果并不穩(wěn)定，故而也較少采用。截止目前，還沒有找到一種比壓條更為簡單而高效的快速繁殖榛苗的方法。

目前，國內(nèi)的榛子組培雖然取得了一些進(jìn)展，但離生產(chǎn)還有一定距離，目前我國還未建立起適用范圍廣的榛子組培基本培養(yǎng)基，選用的外植體仍局限于芽、嫩梢、莖段等幼嫩組織，用成苗的器官、組織誘導(dǎo)脫分化的報道極少。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛組織培養(yǎng)的方法，解決了用于平歐雜種榛組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基、激素配比，及用于組織培養(yǎng)的單莖段消毒不合理，進(jìn)而導(dǎo)致平歐雜種榛組織成活率低，培養(yǎng)不易成功的問題。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供了一種平歐雜種榛組織培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：

(1)5月中旬取平歐雜種榛的嫩枝，剪成3～4cm的莖段，作為組織培養(yǎng)的外植體；

(2)將上述外植體用濃度為70～75體積％的酒精消毒10～30s，再用濃度為0.08～0.12體積％的hgcl2消毒6～10min，沖洗后備用；

(3)將上述外植體切成1～2cm長的帶芽單莖段，接種到含有7.5g/lpvp的初代培養(yǎng)基中進(jìn)行初代培養(yǎng)，得到初代培養(yǎng)的單莖段；

(4)將經(jīng)過初代培養(yǎng)后的單莖段接種到增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，所述增殖培養(yǎng)基為nrm培養(yǎng)基，所述增殖培養(yǎng)基中還含有1.5mg/l的6-ba和0.01mg/l的iba，得到增殖培養(yǎng)的單莖段；

(5)將增殖培養(yǎng)后的單莖段蘸取1g/l的naa10s后扦插到基質(zhì)中。

優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基為nrm培養(yǎng)基。

優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基或增殖培養(yǎng)基中還含有葡萄糖，所述葡萄糖的濃度為30g/l。

優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基或增殖培養(yǎng)基中還含有n-n′-乙基雙-[2-鄰羥基苯]-甘氨酸與鐵的螯合物，其濃度為75～150mg/l。

優(yōu)選的，所述基質(zhì)為草碳和河沙以2∶1的重量比混合的混合物。

優(yōu)選的，所述步驟(3)～(5)培養(yǎng)的條件為：溫度控制為21℃～25℃，光照時間12～16h，光照強(qiáng)度2000～3000lx。

現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

1)以嫩梢、嫩枝和半木質(zhì)化枝條為試材篩選最佳外植體的試驗顯示，榛子組培最佳外植體是春天剛萌發(fā)的嫩枝，帶菌較少，消毒較易，且成活率較高。

2)naclo消毒處理的外植體其褐化率顯著高于hgcl2處理，不適合于本試驗品種的消毒。在防褐化方面，pvp和vc都能明顯的降低其褐化率，但二者之間的差異并不顯著，由于vc極易被氧化，本發(fā)明最終采用每升培養(yǎng)基中附加7.5gpvp。

3)在以dkw、wpm、nrm和ms為基本培養(yǎng)基時發(fā)現(xiàn)，促進(jìn)株高伸長方面，培養(yǎng)基的作用效力是：dkw＞wpm＞nrm＞ms，且dkw培養(yǎng)基上的苗健壯，不易形成叢生芽或腋芽萌發(fā)；在促進(jìn)芽分化方面，培養(yǎng)基的作用效力表現(xiàn)為nrm＞dkw＞wpm＞ms，nrm培養(yǎng)基上的芽苗極易產(chǎn)生叢生芽。故在以增殖為目的是易選擇nrm作為基本培養(yǎng)基，而在以壯苗為目的時，易選擇dkw作為基本培養(yǎng)基。

4)對比蔗糖、葡萄糖、果糖和乳糖四種糖作為碳源的試驗顯示，四種糖都能促進(jìn)榛子的生長，但以葡萄糖和果糖的效果較佳，可能是由于其分子量小，易于吸收造成的，本發(fā)明最終選用每升培養(yǎng)基中附加30g葡萄糖。

5)鐵鹽不僅對榛子芽苗的芽數(shù)和芽長有促進(jìn)作用，而且對榛子葉色影響很大，缺鐵導(dǎo)致葉片黃化。相比feedta，fe138(有機(jī)螯合鐵)更有利于榛子的增殖，且當(dāng)添加100mg/l的fe138時，榛子芽苗的葉色表現(xiàn)出正常率。

6)增殖培養(yǎng)時，以nrm為基本培養(yǎng)基同時附加6-ba1.5mg/l+iba0.01mg/l，增殖系數(shù)可達(dá)6.7。當(dāng)6-ba和iba濃度都較高或較低時，平均株高和增殖倍數(shù)較低，雖然不利于芽苗的增殖，但是莖段較粗并且葉色較綠。

7)促進(jìn)生根的激素中，naa處理的生根效果要比iba的好。生根方式方面，瓶外生根將莖基部浸蘸于1.0g/l的naa溶液中10s，之后扦插于草炭河沙(2∶1)基質(zhì)中，生根率可達(dá)到70.3％，而且苗長勢較健壯，省去了煉苗移栽的步驟，成活率較高，值得推廣。

附圖說明

圖1不同類型外植體的初代生長情況；a：嫩枝的生長情況(達(dá)維)，b：嫩梢的生長情況(達(dá)維)，c：半木質(zhì)化綠枝的生長情況(遼榛3號)。

圖2生長于不同基本培養(yǎng)基上的芽苗；a：dkw培養(yǎng)基上的苗(84-69)，b：nrm培養(yǎng)基上的苗(84-69)。

圖3不同鐵鹽種類及濃度的芽苗生長情況；a：添加feedta1倍，b：添加fe138100mg/l。

圖4生長于不同激素組合的芽苗；a：生長于6-ba1.5mg/l，iba0.01mg/l的芽苗(84-69)，b：生長于6-ba2.0mg/l，iba0.02mg/l的芽苗(84-69)，c：生長于6-ba1.0mg/l，iba0.005mg/l的芽苗(84-69)。

圖5不同生根處理的生根情況；a：瓶外生根(84-69)，b：瓶外生根苗的長勢(84-69)，c：瓶內(nèi)生根(84-69)。

具體實施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚明白，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明，但是不能把它們理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。

實施例1

1材料與方法

1.1試驗材料

對沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)榛資源圃的品種(系)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，平歐雜種榛達(dá)維、玉墜、遼榛3號和84-69這些品種(系)不僅抗性強(qiáng)、豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)，而且其榛果品質(zhì)良好，適于在沈陽及周邊地區(qū)推廣。本試驗選取以上品種(系)為試材，分別于4月下旬取其剛萌發(fā)的嫩梢、5月中旬取其旺盛生長的嫩枝、6月上旬取其半木質(zhì)化的綠枝為樣本。嫩梢去掉葉片和托葉、新生的嫩枝和半木質(zhì)化的綠枝剪成3～4cm的莖段，作為組織培養(yǎng)的外植體。

如無特別說明，本試驗每升培養(yǎng)基中瓊脂7g，據(jù)試驗需求添加其他激素，調(diào)節(jié)ph5.8，分裝后121℃高壓滅菌20min。接種后放到培養(yǎng)室中培養(yǎng)，溫度控制在23℃左右，光照時間12～16h，光照強(qiáng)度2000～3000lx。

1.2試驗方法

1.2.1外植體褐化抑制和消毒方法的篩選

針對榛屬植物消毒后，褐化比較嚴(yán)重的現(xiàn)象。將經(jīng)過0.1％hgcl2消毒7min后的外植體接種到空白和含有聚乙烯吡咯烷酮(pvp)(5g/l，7.5g/l，10g/l)或維生素c(vc)(1g/l，2g/l，3g/l)的培養(yǎng)基中，一周后統(tǒng)計其褐化率。

將取回來的外植體先用流水沖洗1個小時，再用洗衣粉水浸泡20min，用清水洗凈后，轉(zhuǎn)移到無菌操作臺上進(jìn)行“75％酒精浸泡30s→無菌水沖洗4～5次→naclo(15min、20min、25min)或hgcl2(6min、8min、10min)消毒→無菌水沖洗5～6次”，最后將莖段剪成1～2cm，接種到含有上步所篩選出防褐化劑的培養(yǎng)基中。3天后開始觀察記錄、持續(xù)一個月，統(tǒng)計各處理的污染率(污染的外植體數(shù)/接種總外植體數(shù))、褐化率(褐化外植體數(shù)/接種總外植體數(shù))和成活率(成活外植體數(shù)/接種總外植體數(shù))。

1.2.2基本培養(yǎng)基的篩選

將上步存活下來的無菌莖段接種于含有3.0mg/l6-ba和0.01mg/liba的dkw(driverandkuniyuki)、wpm(woodyplantmedium)、nrm(nasandread)和ms培養(yǎng)基中，30天后統(tǒng)計芽苗株高(每瓶苗的平均株高)和單株芽數(shù)(單個外植體萌生嫩枝的數(shù)量)等生長指標(biāo)。

1.2.3糖類的篩選

將無菌莖段接種于含有3.0mg/l6-ba和0.01mg/liba的上步所篩選培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中分別附加30g(蔗糖、葡萄糖、果糖或者乳糖)，30天后，統(tǒng)計芽苗的株高和單株芽數(shù)。

1.2.4鐵鹽的篩選

將無菌芽苗接種于含有3.0mg/l6-ba和0.01mg/liba的以上所篩選的培養(yǎng)基中，同時在培養(yǎng)基中附加不同濃度的feedta(1倍，1.5倍，2倍)或者fe138(100mg/l，150mg/l，200mg/l)，一個月后統(tǒng)計芽苗株高、單株芽數(shù)和植株生長情況。

1.2.5增殖培養(yǎng)基的篩選

將培養(yǎng)好的無菌芽苗剪成1～2cm長的莖段，轉(zhuǎn)接于含有iba(0.005mg/l，0.01mg/l，0.02mg/l)和6-ba(1.0mg/l，1.5mg/l，2.0mg/l)的nrm培養(yǎng)基中，45天后統(tǒng)計芽苗株高，增殖系數(shù)(增殖后的芽苗數(shù)/接種總芽苗數(shù))等生長情況。

1.2.6生根方法的篩選

將增殖的芽苗轉(zhuǎn)接到如表1所示的處理中，20天后統(tǒng)計其生根情況。

表1不同生根方法的試驗處理

1.2.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

對所得數(shù)據(jù)采用spss17.0軟件進(jìn)行duncan式多重比較及差異性統(tǒng)計分析。

2結(jié)果與分析

2.1最佳的褐化抑制和消毒方法

榛子消毒后易于褐化，但本試驗結(jié)果表明pvp和vc都能夠明顯的降低其褐化率，當(dāng)pvp為7.5g/l時，褐化率達(dá)到最低，由對照的53.7％降到27.8％，vc為2.0g/l時，褐化率也降到了較低的28.2％。綜上，pvp和vc防褐化效果明顯，但二者之間的差異并不明顯。本試驗最終采用每升培養(yǎng)基中附加7.5g的pvp。

不同消毒劑及消毒時間對榛子的消毒效果有較大的影響(表2)。無論是naclo還是hgcl2處理，都出現(xiàn)了隨著處理時間的延長，污染率逐漸下降，但褐化率與之負(fù)相關(guān)，呈上升趨勢；這可能是由于隨著消毒時間的延長對芽苗的傷害加劇造成的。另外naclo處理極顯著的增高了外植體的褐化率，這可能是由于naclo的強(qiáng)氧化性造成的。hgcl2消毒處理8min時，成活率達(dá)到33.3％，顯著高于其他處理，此時的褐化率達(dá)到了最低的26.7％，污染率也達(dá)到了較低的40.0％。綜合考慮本試驗最適合的消毒處理方式是0.1％hgcl2處理8min。

表2不同消毒方式對4種榛子嫩梢的污染率、褐化率、成活率的影響

注：同列不同字母表示在p＝0.05水平上差異顯著。下同。

2.2最佳外植體類型

榛子組織培養(yǎng)中由于材料的狀態(tài)不同，常導(dǎo)致不同的培養(yǎng)結(jié)果。從表3可以看出不同外植體類型的成活率顯著不同；嫩枝的成活率顯著高于嫩梢和半木質(zhì)化綠枝的成活率，其污染率和褐化率也都達(dá)到最低，分別為18.9％和26.7％，是最佳的取材狀態(tài)(見圖1，a)。剛萌發(fā)的嫩梢雖然成活率也較高，但其芽苗生長不但緩慢，而且新生和長大葉片會出現(xiàn)畸形的現(xiàn)象(見圖1，b)。半木質(zhì)化綠枝的污染率和褐化率都最高；可能是由于外界環(huán)境變暖、雜菌快速繁殖、榛子體內(nèi)多酚物質(zhì)含量增加及多酚氧化酶活性增強(qiáng)造成的；半木質(zhì)化綠枝所長的芽苗還有一個顯著特點是后期葉片容易變黃脫落(見圖1，c)。表3不同外植體類型對4種榛子污染率、褐化率、成活率及生長情況的影響

2.3基本培養(yǎng)基的選擇

表4nrm、dkw、wpm和ms培養(yǎng)基的各成分含量比較

不同的基本培養(yǎng)基對榛子的生長情況有較大影響，由表5可知，四種培養(yǎng)基中ms處理，不論是株高還是單株芽數(shù)都顯著低于其他三個處理，所以，ms培養(yǎng)基不適合于榛子組培；dkw處理，株高顯著高于其他處理，達(dá)到2.6cm且植株向上生長明顯(見圖2，a)，而nrm處理的單株芽數(shù)顯著高于其他處理，達(dá)到4.6個，植株易產(chǎn)生叢生芽(見圖2，b)。綜合以上各因素認(rèn)為，dkw培養(yǎng)基適合于壯苗培養(yǎng)，nrm培養(yǎng)基適合于增殖培養(yǎng)。

表5不同基本培養(yǎng)基對4種榛子芽苗生長指標(biāo)的影響

2.4糖類的確定

表6不同的糖種類對4種榛子芽苗生長的影響

糖在榛子的組織培養(yǎng)基中不僅為芽苗提供能源，同時也在調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透勢。在本試驗中，采用了蔗糖、葡萄糖、果糖和乳糖這四種糖做碳源進(jìn)行了對榛子芽苗生長和增殖的研究。由表6可知，四種糖都能促進(jìn)榛子增殖，不同的糖對榛子組培苗的株高和單株芽數(shù)有顯著的影響，蔗糖對芽苗增殖的效果明顯低于其它三種糖的處理，其株高和單株芽數(shù)都是最低的。葡萄糖與果糖的增殖效果比較好，其中以葡萄糖的效果最佳，其株高能達(dá)到3.7cm，單株芽數(shù)也最高為4.6個。本試驗最后采用每升培養(yǎng)基中附加30g葡萄糖作為碳源。

2.5鐵鹽種類及濃度的確定

鐵元素的種類和濃度對榛子芽苗的株高，葉片顏色有顯著的影響，榛子在快速生長階段對鐵元素是比較敏感的。從表7中，可以看出，兩種鐵鹽隨著濃度的增加，對芽苗的增殖起到促進(jìn)的作用，對葉片顏色的黃化有所改善。但是這兩種鐵鹽相比，不論是葉片顏色還是芽苗增殖方面都是fe138(n-n′-乙基雙-[2-鄰羥基苯]-甘氨酸)的效果要優(yōu)于feedta的。當(dāng)feedta的濃度為1倍時，芽苗黃化較嚴(yán)重(見圖3，a)，但是隨著濃度的增加，芽苗黃化有所改善，但改善程度不是很大，株高方面增長顯著，單株芽數(shù)也顯著增加。fe138為75mg/l時，芽苗黃綠，隨著fe138濃度的增加，葉片顏色明顯轉(zhuǎn)綠，株高和單株芽數(shù)也顯著升高，150mg/l時，其葉片已經(jīng)轉(zhuǎn)為正常綠色了(見圖3，b)，100mg/l與125mg/l主要區(qū)別在于葉片顏色的濃綠程度。綜合考慮本試驗采用每升培養(yǎng)基中附加100mg/l的fe138。

表7鐵鹽種類及濃度對4種榛子芽苗生長的影響

2.6增殖培養(yǎng)基的確定

在以nrm為基本培養(yǎng)基時，不同濃度的激素組合對榛子的生長有顯著的影響。如表5所示，當(dāng)iba濃度一定，6-ba為1.5mg/l時，普遍比其他濃度的株高高，單株芽數(shù)也最多。相反當(dāng)6-ba濃度一定，iba濃度為0.01mg/l時，普遍比其他濃度的長勢好。綜上所述，當(dāng)6-ba為1.5mg/l，iba濃度0.01mg/l，最有利于芽苗增殖(見圖4，a)，平均株高和增殖系數(shù)都顯著高于其他組合，分別達(dá)到5.6cm，6.7。當(dāng)6-ba和iba濃度都較高或較低時，雖然不利于芽苗的增殖，平均株高和增殖倍數(shù)較低，但是莖段較粗并且葉色較綠(見圖4，b、c)。

表8不同濃度激素組合對3種榛子芽苗增殖的影響

2.7最佳生根處理的確定

以84-69為試材，進(jìn)行了瓶內(nèi)和瓶外兩種生根方式的生根處理。瓶外生根不僅生根率高(如表6)可達(dá)到70.3％，而且苗長勢健壯，根粗且壯(見圖5，a、b)；瓶內(nèi)生根整體生根率較低(見圖5，c)，并且芽苗長勢不如瓶外良好；處理3的芽苗基部膨大且生長了氣生根，可能是蘸取激素的濃度過大造成的，但即便濃度合適，由于操作復(fù)雜，也極易造成污染。綜合考慮，榛子最佳生根處理為瓶外蘸取1g/l的naa10s后扦插到基質(zhì)中。

表9不同生根處理對84-69芽苗生長指標(biāo)的影響

3討論

榛子表面絨毛密集，消毒很難徹底，同時，榛屬植物組織中酚類物質(zhì)含量較高，易出現(xiàn)外植體或培養(yǎng)物的褐化、枯死現(xiàn)象，這種褐化現(xiàn)象又稱為酚污染，會對外植體的脫分化和營養(yǎng)物質(zhì)的再分化產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，甚至對其初代培養(yǎng)能否成功起到?jīng)Q定性的作用。因此榛屬植物組織培養(yǎng)體系的建立比較困難。本發(fā)明試驗中發(fā)現(xiàn)naclo處理的外植體，褐化率顯著增高，達(dá)85.3％以上，故認(rèn)為naclo不適合于榛屬滅菌；最佳的消毒處理是0.1％hgcl2滅菌8min，成活率達(dá)到33.3％。試材最佳狀態(tài)是嫩枝。

基本培養(yǎng)基中包含了許多植物生長發(fā)育所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，因此，基本培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，也是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的重要因素之一。但是，培養(yǎng)基選取的時候，既需要考慮培養(yǎng)基基本成分的作用，又要考慮不同培養(yǎng)階段的需求和目的，涉及到了方方面面，因此是一件很復(fù)雜的工作。本發(fā)明試驗對榛子在dkw、wpm、nrm和ms培養(yǎng)基中的生長情況進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)dkw培養(yǎng)基可有效促進(jìn)莖段的伸長生長，植株長勢健壯，其表現(xiàn)要優(yōu)于ms和wpm培養(yǎng)基。nrm培養(yǎng)基可有效的促進(jìn)腋芽萌發(fā)，促進(jìn)形態(tài)的建成，芽苗分化較多。wpm培養(yǎng)基是適宜木本植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基。nrm培養(yǎng)基是針對美國野生榛與歐榛雜種榛提出來的，試驗表明在促進(jìn)芽苗分化方面也適用平歐雜種榛。dkw和nrm培養(yǎng)基都比較適合榛子的組織培養(yǎng)，分析各培養(yǎng)基的組份可以發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)dkw培養(yǎng)基中含氮化合物的量明顯高于nrm和wpm培養(yǎng)基中的，影響了外植體對氮的吸收，另外，dkw培養(yǎng)基中含有較多的ca²⁺、cu²⁺、fe²⁺、k⁺，利于莖段的伸長和有機(jī)物的合成。nrm培養(yǎng)基中，mg²⁺、微量元素和生育酚的含量是比較高的，有利于叢生芽的產(chǎn)生。充分說明了，在植物組織培養(yǎng)過程中，基本培養(yǎng)基對組培成功與否是至關(guān)重要的。本試驗首次發(fā)現(xiàn)在促進(jìn)株高伸長方面，培養(yǎng)基的作用效力是：dkw＞wpm＞nrm＞ms，且dkw培養(yǎng)基上的苗健壯，但不易形成叢生芽或腋芽萌發(fā)；在促進(jìn)芽分化方面，培養(yǎng)基的作用效力表現(xiàn)為nrm＞dkw＞wpm＞ms，nrm培養(yǎng)基上的芽苗極易產(chǎn)生叢生芽。所以，以增殖為目的時，適宜選擇nrm作為基本培養(yǎng)基；而以壯苗為目的時，適宜選擇dkw作為基本培養(yǎng)基。

糖類不僅為組培苗提供碳源，而且對維持培養(yǎng)基的滲透勢具有重要的影響。不同的糖類對榛子芽苗的生長具有顯著的差異，糖的種類和濃度不僅影響到榛子的生長速度、生長量，還會影響植株細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生，是組培成功與否的一個關(guān)鍵影響因素。本發(fā)明試驗的結(jié)果顯示，四種糖類都能促進(jìn)榛子的生長，其中以葡萄糖和果糖的效果較為理想，蔗糖和乳糖效果較差。之所以會出現(xiàn)這種情況，可能是由于葡糖糖分子較小，榛子對較小分子糖類的利用率較高造成的。

鐵元素雖然不是葉綠素的組成成分，但是缺鐵會影響到葉綠素的形成和葉綠體的結(jié)構(gòu)組分，進(jìn)而導(dǎo)致葉片黃化，光合速率降低。本發(fā)明試驗使用fe138和feedta做對比，發(fā)現(xiàn)feedta的處理葉片黃化比fe138處理的要嚴(yán)重些，即便加大feedta的濃度，芽苗的增殖效果與葉片的顏色也不如使用fe138的處理，而且添加feedta的處理隨著繼代時間的延長，葉片黃化程度變得比較嚴(yán)重。添加fe138的處理，葉片顏色得到明顯改善，株高也顯著增大，植株比較健壯，添加fe138100mg/l時葉片顏色已經(jīng)轉(zhuǎn)為正常率，再繼續(xù)加大用量，對芽苗增殖并無顯著的影響。所以本發(fā)明試驗最終選用fe138100mg/l。之所以兩種鐵鹽對芽苗的生長效果不同，可能是因為榛子對不同的鐵離子的吸收利用效率不同造成的，fe138中的鐵離子易于被榛子吸收利用。

在基本培養(yǎng)基篩選時，我們發(fā)現(xiàn)，榛子既可以通過單芽增殖，又可以通過叢生芽增殖，這兩種增殖途徑的調(diào)節(jié)主要是由基本培養(yǎng)基的類型和激素影響的。一般，當(dāng)生長素/細(xì)胞分裂素的比值高時，促進(jìn)長根，比值低時促進(jìn)長芽，中間比值較利于愈傷組織的誘導(dǎo)和分化。榛子組織培養(yǎng)時激素對芽苗的增殖和分化有重要的作用，增殖培養(yǎng)時要特別重視生長素與細(xì)胞分裂素的配合使用，細(xì)胞分裂素的濃度要始終高于生長素，以便不定芽的誘導(dǎo)。本發(fā)明試驗中發(fā)現(xiàn)不同的激素濃度組合對芽苗的增殖有顯著的影響，所篩選的1.5mg/l6-ba和0.01mg/liba組合，使試驗所用的榛子試材的增殖倍數(shù)都得到了顯著的提高，適宜榛子組培的增殖，對建立其他平歐雜交榛品種組培快繁體系有一定的借鑒之處。

植物組織培養(yǎng)過程中，木本植物的生根要比草本植物困難很多。一般植物的離體生根都來自于不定根，分兩個階段，第一個階段是誘導(dǎo)根原基，第二個階段是根的伸長及生長。生長素于第一階段即誘導(dǎo)根源基階段大量合成，在第二個階段時就處于較低的水平了。一般低濃度的生長素會促進(jìn)生根，高濃度時會抑制生根。相同濃度的iba和naa對芽苗進(jìn)行處理，含naa的處理生根效果要高于iba，所以生根處理易選擇naa，在相同naa濃度的溶液中浸蘸芽苗基部，接種于瓶內(nèi)培養(yǎng)基的處理，其生根效果要顯著低于接種于瓶外基質(zhì)中的處理。另外，浸蘸處理后再接種于培養(yǎng)基中，由于操作繁瑣，極易造成污染，不利于其大規(guī)模的生根處理。短時間的浸蘸處理，可能刺激了芽苗基部表層細(xì)胞的分化，從而促進(jìn)長根。所以，最佳的生根方式是把芽苗基部在1.0mg/l的naa溶液中浸蘸10s，接種于瓶外的基質(zhì)中，這種生根方式把芽苗的生根與馴化有機(jī)的結(jié)合起來，能實現(xiàn)縮短育苗周期，節(jié)約生產(chǎn)成本的目標(biāo)，對大規(guī)模生產(chǎn)有實際經(jīng)濟(jì)效益。但是瓶外生根的芽苗，對外界的環(huán)境要求比較嚴(yán)格，需要適宜且穩(wěn)定的濕度、溫度和光照，煉苗期間，需要用心看護(hù)與觀察。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。