本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種藍莓組培苗的脫毒方法和培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
：藍莓果實皮薄，風味酸甜可口，具有獨特的保健功能。藍莓果實中含有較多的花色素苷、黃酮等生理活性成分，能有效防止腦神經(jīng)衰老，糖尿病等疾病的發(fā)生，增強心臟功能，有極好的抗癌功效，是21世紀具有良好發(fā)展前景的果樹品種之一。因此研究其無毒、高效繁殖有重要的價值和意義。目前，我國種植的藍莓在生產(chǎn)上通常采用組織培養(yǎng)和扦插的繁殖方法。應(yīng)用組織培養(yǎng)方法擴繁速度快，適宜于優(yōu)良品種的快速擴繁。但組培繁殖容易使病毒逐代傳遞積累，危害嚴重。帶毒植株經(jīng)高溫處理后病毒濃度會降低，活性會鈍化。熱處理一般在35～50℃熱空氣中進行，處理時間從幾天到幾十天不等。該方法已在百合、郁金香和風信子等花卉品種成功應(yīng)用。化學(xué)藥劑處理是將一些抗病毒加入到培養(yǎng)基中，抑制植物體內(nèi)或離體組織內(nèi)病毒的合成。常用化學(xué)藥劑有嘌呤和嘧啶類化合物、氨基酸、抗生素和病毒唑等。有報道利用病毒唑?qū)κ裰仓赀M行脫毒處理，脫毒率可達80％。但目前，對于藍莓種苗脫毒技術(shù)尚未有相關(guān)報道，如何大量獲得脫毒藍莓種苗是藍莓推廣與產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種藍莓組培苗的脫毒方法，其包括如下步驟：(1)熱處理：將藍莓組培苗在35～50℃下處理3～3.5天；(2)化學(xué)藥劑處理：切取步驟(1)處理后組培苗的莖尖，并將所述莖尖置于含有病毒唑的培養(yǎng)基中，在21-25℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)45-55天，其中所述病毒唑的濃度為0.2～0.3mg/l。本發(fā)明所述方法，通過兩級脫毒處理，藍莓組培苗脫毒率大大提高，而且基本不會影響組培苗的成活率；而且脫毒后的藍莓苗移栽至大田后，不會發(fā)生變異，而且裸根移栽成活率高。本發(fā)明所述熱處理優(yōu)選為在40～45℃下熱處理3天。本發(fā)明所述方法，所述熱處理為熱空氣處理。本發(fā)明所述所述病毒唑的濃度優(yōu)選為0.3mg/l，以確保更好的消毒效果。本發(fā)明的步驟(2)中所述培養(yǎng)基為wpm+zt0.5～1.0mg/l+iba0.05mg/l培養(yǎng)基。本發(fā)明步驟(1)所述藍莓組培苗經(jīng)如下步驟得到：a、外植體消毒：取藍莓當年生健壯枝條，剪成莖段并洗凈后，將所述莖段置于無菌工作臺上用75％酒精泡28～32s，然后置于5％的次氯酸鈉溶液中消毒10～20min，并用無菌水沖洗干凈；b、啟動培養(yǎng)：將步驟a處理后的莖段接入wpm+zt0.5～1.0mg/l+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，待葉芽萌發(fā)后，取所述葉芽的芽尖繼續(xù)培養(yǎng)，即得。在上述脫毒方法的基礎(chǔ)上，本發(fā)明進一步提供了一種藍莓組培苗的培養(yǎng)方法，其包括上述的脫毒方法。優(yōu)選的，所述藍莓組培苗的培養(yǎng)方法包括如下步驟：a、外植體消毒：取藍莓當年生健壯枝條，剪成莖段并洗凈后，將所述莖段置于無菌工作臺上用75％酒精泡28～32s，然后置于5％的次氯酸鈉溶液中消毒10～20min，并用無菌水沖洗干凈；b、啟動培養(yǎng)：將步驟a處理后的莖段接入wpm+zt0.5～1.0mg/l+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，待葉芽萌發(fā)后，取所述葉芽的芽尖繼續(xù)培養(yǎng)，即得；c、熱處理：將藍莓組培苗在35～50℃下處理3～3.5天；d、化學(xué)藥劑處理：切取步驟c處理后組培苗的莖尖，并將所述莖尖置于含有病毒唑的培養(yǎng)基中，在21-25℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)45-55天，其中所述病毒唑的濃度為0.2～0.3mg/l；e、繼代培養(yǎng)：將經(jīng)步驟d處理后的莖尖，在wpm+zt3mg/l+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，繼代3次后，得到新的藍莓組培苗；f、生根培養(yǎng)：將步驟e所得新藍莓組培苗在wpm+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中接種15～25天后可煉苗移栽。本發(fā)明的上述技術(shù)方案具有以下有益效果：1、脫毒效果好。通過本發(fā)明的脫毒處理，藍莓組培苗的脫毒率可達95％以上，脫毒效率高；而且對藍莓組培苗的成活影響甚微。2、應(yīng)用效果好。將本發(fā)明所述脫毒方法和培養(yǎng)方法得到的藍莓組培苗種植到大田里，生長過程中沒有發(fā)現(xiàn)變異現(xiàn)象；而且根系發(fā)達，植株生長健壯，抗逆性強；裸根移栽成活率高；花序形成花芽多，座果率高，果實產(chǎn)量高。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方式作進一步詳細描述。以下實施例用于說明本發(fā)明，但不能用來限制本發(fā)明的范圍。以下實施例中的藍莓當年生健壯枝條來自于丹東天賜藍莓種植基地；實施例所用的試劑均為市售商品。本發(fā)明提供了一種藍莓外植體的培養(yǎng)方法，其包括如下步驟：a、外植體消毒：取藍莓當年生健壯枝條，剪成2～3cm長莖段，用洗潔精沖洗干凈后，與無菌工作臺上用75％酒精浸泡30s，然后用5％的次氯酸鈉溶液消毒10～20min，用無菌水沖洗干凈；b、啟動培養(yǎng)：將消毒莖段接入wpm+zt0.5～1.0mg/l+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中，葉芽萌發(fā)后，解剖鏡下取所述葉芽芽尖繼續(xù)培養(yǎng)，即得藍莓組培苗。實施例1本實施例提供了一種藍莓組培苗的培養(yǎng)方法，其包括如下步驟：(1)熱處理：將藍莓組培苗在40℃下熱處理3天；(2)化學(xué)藥劑處理：切取步驟(1)處理后組培苗的莖尖，并將所述莖尖置于含有病毒唑的培養(yǎng)基中，在22℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)50天，其中所述病毒唑的濃度為0.3mg/l；(3)繼代培養(yǎng)：將經(jīng)步驟(2)處理后的莖尖在wpm+zt3mg/l+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中，繼代3次后，得到新的藍莓組培苗；(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)所得新藍莓組培苗在wpm+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中接種15天后可煉苗移栽。實施例2本實施例提供了一種藍莓組培苗的培養(yǎng)方法，其包括如下步驟：(1)熱處理：將藍莓組培苗在45℃下熱處理3天；(2)化學(xué)藥劑處理：切取步驟(1)處理后組培苗的莖尖，并將所述莖尖置于含有病毒唑的培養(yǎng)基中，在25℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)45天，其中所述病毒唑的濃度為0.25mg/l；(3)繼代培養(yǎng)：將經(jīng)步驟(2)處理后的莖尖在wpm+zt3mg/l+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中，繼代3次后，得到新的藍莓組培苗；(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)所得新藍莓組培苗在wpm+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中接種20天后可煉苗移栽。實施例3本實施例提供了一種藍莓組培苗的培養(yǎng)方法，其包括如下步驟：(1)熱處理：將藍莓組培苗在35℃下熱處理3.5天；(2)化學(xué)藥劑處理：切取步驟(1)處理后組培苗的莖尖，并將所述莖尖置于含有病毒唑的培養(yǎng)基中，在21℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)53天，其中所述病毒唑的濃度為0.25mg/l；(3)繼代培養(yǎng)：將經(jīng)步驟(2)處理后的莖尖在wpm+zt3mg/l+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中，繼代3次后，得到新的藍莓組培苗；(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)所得新藍莓組培苗在wpm+iba0.05mg/l培養(yǎng)基中接種25天后可煉苗移栽。對比例1本對比例提供了一種藍莓組培苗的培養(yǎng)方法，其與實施例1基本相同，相同之處不再贅述，不同之處在于：所述熱處理的時間為4.5天。對比例2本對比例提供了一種藍莓組培苗的培養(yǎng)方法，其與實施例1基本相同，相同之處不再贅述，不同之處在于：所述熱處理的時間為2天。對比例3本對比例提供了一種藍莓組培苗的培養(yǎng)方法，其與實施例1基本相同，相同之處不再贅述，不同之處在于：所述病毒唑的濃度為0.4mg/l。對比例4本對比例提供了一種藍莓組培苗的培養(yǎng)方法，其與實施例1基本相同，相同之處不再贅述，不同之處在于：所述病毒唑的濃度為0.1mg/l。對實施例1～3以及對比例1～4所述培養(yǎng)方法得到的藍莓組培苗，按常規(guī)病毒檢測方法——血清學(xué)方法進行脫毒效果檢測，脫毒效果以脫毒率和組培苗成活率表示，脫毒率和成活率越高代表脫毒效果越好。各藍莓組培苗的脫毒效果如表1所示。對實施例1～3所述培養(yǎng)方法得到的藍莓組培苗分別移栽至大田內(nèi)，并記錄如下生長情況：①在第一周、第三周、第五周等三個時間節(jié)點，藍莓植株的變異情況，以平均變異率來表示；②第30天時藍莓平均株高；③第75天時藍莓植株裸根移栽的成活率；④盛花期的成花率和坐果期的坐果率；結(jié)果如表2所示。表1：藍莓組培苗的脫毒效果脫毒率(％)成活率(％)實施例19790實施例295.592實施例39690對比例18060對比例26789對比例36590對比例46088表2：藍莓組培苗在大田內(nèi)的生長情況本發(fā)明的實施例是為了示例和描述起見而給出的，而并不是無遺漏的或者將本發(fā)明限于所公開的形式。很多修改和變化對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是顯而易見的。選擇和描述實施例是為了更好說明本發(fā)明的原理和實際應(yīng)用，并且使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠理解本發(fā)明從而設(shè)計適于特定用途的帶有各種修改的各種實施例。當前第1頁12