本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治技術領域,尤其涉及一種羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑;本發(fā)明還涉及一種上述羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑的制備方法。
背景技術:
羅非魚原分布于溫帶、亞熱帶和熱帶地區(qū)。羅非魚現(xiàn)在已經(jīng)成為世界水產(chǎn)業(yè)的重點科研培養(yǎng)的淡水養(yǎng)殖魚類,且被譽為未來動物性蛋白質(zhì)的主要來源之一。羅非魚原產(chǎn)于非洲,屬于慈鯛科之熱帶魚類,和鱸魚相似,通常生活于淡水中,也能生活于不同鹽份含量的咸水中,可以存活于在湖、河、池塘的淺水中,有著很強的適應能力,且對溶氧較少之水有極強之適應性。絕大部分羅非魚是雜食性,常吃水中植物和碎物。羅非魚在面積狹小之水域中亦能繁殖。甚至在水稻田里能夠生長。
廣東、廣西、海南三省2009年曾普遍暴發(fā)嚴重的羅非魚鏈球菌病,尤其是茂名、高要、化州、高州等地,給養(yǎng)殖戶造成嚴重的經(jīng)濟損失。網(wǎng)箱和池塘養(yǎng)殖的羅非魚均有此病的發(fā)生,主要危害親魚和100克以上的幼魚和成魚;流行高發(fā)期為5~9月份;流行水溫為25℃~37℃,在水溫32℃以上易發(fā);傳染性強,發(fā)病率達20%~30%,發(fā)病魚的死亡率可達80%以上?;疾〉牧_非魚一般在池塘邊離群獨游、身體彎曲打轉(zhuǎn),或者在水面上慢游,反應遲鈍,體色發(fā)黑,魚體運動失衡,角膜濁白、眼球外突、肛門紅腫等。病魚眼球突出或混濁發(fā)白,同時伴隨著眼部出血,魚體下頰部出現(xiàn)鱗片脫落、出血、肌肉壞死等現(xiàn)象,其他部位如腹鰭、胸鰭、尾鰭的基部有出血并伴有肌肉壞死現(xiàn)象;膽囊、肝臟、脾臟腫大,嚴重時糜爛;腸道發(fā)炎,腸胃較空,內(nèi)有積水或黃色粘液;部分患病魚內(nèi)臟如腸道、肝、脾、腎有出血現(xiàn)象。目前常用的治療方法是內(nèi)服10%氟本尼考(1克/公斤飼料)。然而現(xiàn)有的治療方法不僅污染環(huán)境,而且會導致細菌耐藥性增強及羅非魚體內(nèi)藥物殘留等問題,嚴重制約著羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。
技術實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的是提供一種羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑及其制備方法,本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑天然環(huán)保,對羅非魚養(yǎng)殖池塘的病原菌鏈球菌具有顯著的抑制作用。
為了解決上述技術問題,本發(fā)明采用以下技術方案,一種羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑的制備方法,包括以下步驟:
(1)按照5-9:8-10:3-5:1-3的重量比稱取金銀花、桑葉、艾葉、玉米須,將稱量好的金銀花、桑葉、艾葉、玉米須分別洗凈、晾干、切細或研細,并混合,加入重量為混合物總重量的25倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮20-30分鐘,過濾,取煎煮液;
(2)向白茶中加入與白茶等重量的白醋,蓋上蓋,燜20-30分鐘后,再加入重量為白茶重量的30倍的清水,混勻,加熱至沸騰后文火煎煮20-25分鐘,燜50-60分鐘;
(3)將步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物按照5:1的重量比混合,4℃避光保存24小時后取出,放入離心管中,離心5分鐘,取上清液;
(4)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:向日葵莖15-20份、荷葉9-12份、甘草2-3份、山楂葉1-2份、紫蘇葉1-3份、冬瓜皮6-9份、石榴皮4-5份、干酵母粉1份,將稱量好的各組分分別研磨粉碎并混合,加入與混合物等質(zhì)量的清水,密封,避光發(fā)酵48-72小時,得發(fā)酵產(chǎn)物;
(5)將去皮后的銀杏果研磨粉碎;
(6)將采摘的新鮮菊花用清水洗凈,晾干,切細,加入重量為菊花重量的25-30倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮30-40分鐘,得粘稠的菊花煎煮液;
(7)將天胡荽和灰灰菜洗凈,晾干,按照3-5:2的重量比混合,研磨粉碎;
(8)牡丹皮用清水浸泡30-40分鐘,去除浸泡液,將清水浸泡后的牡丹皮搗碎或研磨粉碎,加入酒精,加入的酒精為質(zhì)量濃度為50-60%的酒精,加入的重量為清水浸泡后的牡丹皮重量的1/2-2/3,密封,浸泡3-5小時;
(9)稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:步驟(3)所得的上清液10-13份、步驟(4)所得的發(fā)酵產(chǎn)物5-7份、步驟(5)所得的銀杏果1份、步驟(6)所得的菊花煎煮液3-5份、步驟(7)所得的混合物3-5份、步驟(8)所得的浸泡混合物2-4份、納米級沸石粉1-3份、黃原膠1份;
(10)將步驟(9)中稱量好的各組分混合均勻,然后用磁力攪拌器攪拌80-90分鐘,即得。
本發(fā)明還公開了一種上述制備方法所制得的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑。
用法用量:將本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑稀釋后潑灑到池塘中,遍池潑灑時可根據(jù)歷年鏈球菌發(fā)病情況以及當時的池塘情況每畝池塘使用100-500g本發(fā)明的鏈球菌抑制劑;也可以在疾病流行季節(jié)或羅非魚犯鏈球菌病時將本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑作為飼料添加劑添加到飼料中使用,每1kg魚體重每天的飼料中添加20-30mg本發(fā)明的鏈球菌抑制劑。
本發(fā)明的制備方法簡單易行,而且制備過程不會對環(huán)境帶來污染。
本發(fā)明的各原料組分均為綠色環(huán)保原料,施用到池塘中不會對環(huán)境帶來不良影響,能有效抑制池塘中的有害菌群尤其是鏈球菌,且不會對池塘中的有益微生物產(chǎn)生不良影響,有利于池塘生態(tài)的平衡和池塘生態(tài)健康可持續(xù)發(fā)展,本發(fā)明所制得的鏈球菌抑制劑不含有化學藥品或抗生素,因此食用治愈好的羅非魚后不會影響人們的身體健康。按照本發(fā)明的組分和比例制備的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑對鏈球菌具有很好的殺菌抑菌作用,本發(fā)明充分發(fā)揮了各組分的作用以及各組分之間的協(xié)同作用,極大限度地發(fā)揮了各組分的功能。其中,將金銀花、桑葉、艾葉、玉米須切細或研細后煎煮的目的是有利于充分煎煮出金銀花、桑葉、艾葉、玉米須中的有效成分,并使有效成分充分結合和反應。用白醋浸泡白茶然后再加水煎煮的作用是有利于充分提取出白茶中的有效成分。步驟(3)中,將步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物按照特定比例混合,然后4℃避光保存24小時的作用是使步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物充分結合和反應。步驟(4)中,將向日葵莖、荷葉、甘草、山楂葉、紫蘇葉、冬瓜皮、石榴皮與干酵母粉發(fā)酵處理的作用有利于發(fā)揮對羅非魚池塘鏈球菌的抑制作用。將銀杏研磨粉碎的作用是增大銀杏與本發(fā)明的其他有效成分的接觸面積,有利于各組分之間更好地反應。將菊花切細煎煮的作用是有利于發(fā)揮菊花中的有效成分的作用。將天胡荽和灰灰菜研磨粉碎的作用是增大各反應物之間的反應面積。將牡丹皮用酒精浸泡的作用是有利于提取出牡丹皮中的有效成分。將步驟(3)所得的上清液、步驟(4)所得的發(fā)酵產(chǎn)物、步驟(5)所得的銀杏果、步驟(6)所得的菊花煎煮液、步驟(7)所得的混合物、步驟(8)所得的浸泡混合物、納米級沸石粉、黃原膠按照本發(fā)明的特定比例混合,用磁力攪拌器攪拌的作用是使上述各組分充分混合反應,進而發(fā)揮協(xié)同作用,可有效抑制羅非魚池塘的鏈球菌,并且各組分結合穩(wěn)定,在水中不易沖散,進而有利于長時間維持殺菌作用。
此外,本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑使用方便,可以將本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑稀釋后潑灑到池塘中,也可以對患病的羅非魚隔離藥浴,還可以將本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑作為飼料添加劑添加到飼料中使用。本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑能有效治療羅非魚鏈球菌病。
優(yōu)選地,步驟(1)中,金銀花、桑葉、艾葉、玉米須的重量比為9:9:4:1。
優(yōu)選地,步驟(4)中,按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:向日葵莖15份、荷葉12份、甘草2份、山楂葉1份、紫蘇葉2份、冬瓜皮8份、石榴皮4份、干酵母粉1份,將稱量好的各組分分別研磨粉碎并混合,加入與混合物等質(zhì)量的清水,密封,避光發(fā)酵64小時,得發(fā)酵產(chǎn)物。
優(yōu)選地,步驟(7)中,天胡荽和灰灰菜的重量比為5:2。
優(yōu)選地,步驟(9)中,稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:步驟(3)所得的上清液12份、步驟(4)所得的發(fā)酵產(chǎn)物6份、步驟(5)所得的銀杏果1份、步驟(6)所得的菊花煎煮液3份、步驟(7)所得的混合物5份、步驟(8)所得的浸泡混合物3份、納米級沸石粉2份、黃原膠1份。
與現(xiàn)有技術相比,本發(fā)明的有益效果是:
(1)本發(fā)明的制備方法簡單易行,而且制備過程不會對環(huán)境帶來污染。
(2)本發(fā)明的各原料組分均為綠色環(huán)保原料,施用到池塘中不會對環(huán)境帶來不良影響,能有效抑制池塘中的有害菌群尤其是鏈球菌,且不會對池塘中的有益微生物產(chǎn)生不良影響,有利于池塘生態(tài)的平衡和池塘生態(tài)健康可持續(xù)發(fā)展,本發(fā)明所制得的鏈球菌抑制劑不含有化學藥品或抗生素,因此食用治愈好的羅非魚后不會影響人們的身體健康。按照本發(fā)明的組分和比例制備的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑對鏈球菌具有很好的殺菌抑菌作用,本發(fā)明充分發(fā)揮了各組分的作用以及各組分之間的協(xié)同作用,極大限度地發(fā)揮了各組分的功能。
(3)本發(fā)明中,將金銀花、桑葉、艾葉、玉米須切細或研細后煎煮的目的是有利于充分煎煮出金銀花、桑葉、艾葉、玉米須中的有效成分,并使有效成分充分結合和反應。用白醋浸泡白茶然后再加水煎煮的作用是有利于充分提取出白茶中的有效成分。步驟(3)中,將步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物按照特定比例混合,然后4℃避光保存24小時的作用是使步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物充分結合和反應。步驟(4)中,將向日葵莖、荷葉、甘草、山楂葉、紫蘇葉、冬瓜皮、石榴皮與干酵母粉發(fā)酵處理的作用有利于發(fā)揮對羅非魚池塘鏈球菌的抑制作用。將銀杏研磨粉碎的作用是增大銀杏與本發(fā)明的其他有效成分的接觸面積,有利于各組分之間更好地反應。將菊花切細煎煮的作用是有利于發(fā)揮菊花中的有效成分的作用。將天胡荽和灰灰菜研磨粉碎的作用是增大各反應物之間的反應面積。將牡丹皮用酒精浸泡的作用是有利于提取出牡丹皮中的有效成分。將步驟(3)所得的上清液、步驟(4)所得的發(fā)酵產(chǎn)物、步驟(5)所得的銀杏果、步驟(6)所得的菊花煎煮液、步驟(7)所得的混合物、步驟(8)所得的浸泡混合物、納米級沸石粉、黃原膠按照本發(fā)明的特定比例混合,用磁力攪拌器攪拌的作用是使上述各組分充分混合反應,進而發(fā)揮協(xié)同作用,可有效抑制羅非魚池塘的鏈球菌,并且各組分結合穩(wěn)定,在水中不易沖散,進而有利于長時間維持殺菌作用。
(4)本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑使用方便,可以將本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑稀釋后潑灑到池塘中,也可以對患病的羅非魚隔離藥浴,還可以將本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑作為飼料添加劑添加到飼料中使用。本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑能有效治療羅非魚鏈球菌病。
具體實施方式
以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明,但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法,如無特殊說明,均為常規(guī)方法。
實施例1
一種羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑的制備方法,包括以下步驟:
(1)按照9:9:4:1的重量比稱取金銀花、桑葉、艾葉、玉米須,將稱量好的金銀花、桑葉、艾葉、玉米須分別洗凈、晾干、切細或研細,并混合,加入重量為混合物總重量的25倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮20-30分鐘,過濾,取煎煮液;
(2)向白茶中加入與白茶等重量的白醋,蓋上蓋,燜20-30分鐘后,再加入重量為白茶重量的30倍的清水,混勻,加熱至沸騰后文火煎煮20-25分鐘,燜50-60分鐘;
(3)將步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物按照5:1的重量比混合,4℃避光保存24小時后取出,放入離心管中,離心5分鐘,取上清液;
(4)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:向日葵莖15份、荷葉12份、甘草2份、山楂葉1份、紫蘇葉2份、冬瓜皮8份、石榴皮4份、干酵母粉1份,將稱量好的各組分分別研磨粉碎并混合,加入與混合物等質(zhì)量的清水,密封,避光發(fā)酵64小時,得發(fā)酵產(chǎn)物;
(5)將去皮后的銀杏果研磨粉碎;
(6)將采摘的新鮮菊花用清水洗凈,晾干,切細,加入重量為菊花重量的25-30倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮30-40分鐘,得粘稠的菊花煎煮液;
(7)將天胡荽和灰灰菜洗凈,晾干,按照5:2的重量比混合,研磨粉碎;
(8)牡丹皮用清水浸泡30-40分鐘,去除浸泡液,將清水浸泡后的牡丹皮搗碎或研磨粉碎,加入酒精,加入的酒精為質(zhì)量濃度為50-60%的酒精,加入的重量為清水浸泡后的牡丹皮重量的2/3,密封,浸泡3-5小時;
(9)稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:步驟(3)所得的上清液12份、步驟(4)所得的發(fā)酵產(chǎn)物6份、步驟(5)所得的銀杏果1份、步驟(6)所得的菊花煎煮液3份、步驟(7)所得的混合物5份、步驟(8)所得的浸泡混合物3份、納米級沸石粉2份、黃原膠1份;
(10)將步驟(9)中稱量好的各組分混合均勻,然后用磁力攪拌器攪拌80-90分鐘,即得。
一種上述制備方法所制得的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑。
實施例2
一種羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑的制備方法,包括以下步驟:
(1)按照5:8:5:2的重量比稱取金銀花、桑葉、艾葉、玉米須,將稱量好的金銀花、桑葉、艾葉、玉米須分別洗凈、晾干、切細或研細,并混合,加入重量為混合物總重量的25倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮20-30分鐘,過濾,取煎煮液;
(2)向白茶中加入與白茶等重量的白醋,蓋上蓋,燜20-30分鐘后,再加入重量為白茶重量的30倍的清水,混勻,加熱至沸騰后文火煎煮20-25分鐘,燜50-60分鐘;
(3)將步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物按照5:1的重量比混合,4℃避光保存24小時后取出,放入離心管中,離心5分鐘,取上清液;
(4)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:向日葵莖16份、荷葉10份、甘草3份、山楂葉1份、紫蘇葉1份、冬瓜皮9份、石榴皮4份、干酵母粉1份,將稱量好的各組分分別研磨粉碎并混合,加入與混合物等質(zhì)量的清水,密封,避光發(fā)酵48小時,得發(fā)酵產(chǎn)物;
(5)將去皮后的銀杏果研磨粉碎;
(6)將采摘的新鮮菊花用清水洗凈,晾干,切細,加入重量為菊花重量的25-30倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮30-40分鐘,得粘稠的菊花煎煮液;
(7)將天胡荽和灰灰菜洗凈,晾干,按照2:1的重量比混合,研磨粉碎;
(8)牡丹皮用清水浸泡30-40分鐘,去除浸泡液,將清水浸泡后的牡丹皮搗碎或研磨粉碎,加入酒精,加入的酒精為質(zhì)量濃度為50-60%的酒精,加入的重量為清水浸泡后的牡丹皮重量的1/2,密封,浸泡3-5小時;
(9)稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:步驟(3)所得的上清液10份、步驟(4)所得的發(fā)酵產(chǎn)物7份、步驟(5)所得的銀杏果1份、步驟(6)所得的菊花煎煮液4份、步驟(7)所得的混合物4份、步驟(8)所得的浸泡混合物2份、納米級沸石粉1份、黃原膠1份;
(10)將步驟(9)中稱量好的各組分混合均勻,然后用磁力攪拌器攪拌80-90分鐘,即得。
一種上述制備方法所制得的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑。
實施例3
一種羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑的制備方法,包括以下步驟:
(1)按照7:9:3:2的重量比稱取金銀花、桑葉、艾葉、玉米須,將稱量好的金銀花、桑葉、艾葉、玉米須分別洗凈、晾干、切細或研細,并混合,加入重量為混合物總重量的25倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮20-30分鐘,過濾,取煎煮液;
(2)向白茶中加入與白茶等重量的白醋,蓋上蓋,燜20-30分鐘后,再加入重量為白茶重量的30倍的清水,混勻,加熱至沸騰后文火煎煮20-25分鐘,燜50-60分鐘;
(3)將步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物按照5:1的重量比混合,4℃避光保存24小時后取出,放入離心管中,離心5分鐘,取上清液;
(4)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:向日葵莖20份、荷葉10份、甘草2份、山楂葉1份、紫蘇葉3份、冬瓜皮6份、石榴皮5份、干酵母粉1份,將稱量好的各組分分別研磨粉碎并混合,加入與混合物等質(zhì)量的清水,密封,避光發(fā)酵72小時,得發(fā)酵產(chǎn)物;
(5)將去皮后的銀杏果研磨粉碎;
(6)將采摘的新鮮菊花用清水洗凈,晾干,切細,加入重量為菊花重量的25-30倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮30-40分鐘,得粘稠的菊花煎煮液;
(7)將天胡荽和灰灰菜洗凈,晾干,按照5:2的重量比混合,研磨粉碎;
(8)牡丹皮用清水浸泡30-40分鐘,去除浸泡液,將清水浸泡后的牡丹皮搗碎或研磨粉碎,加入酒精,加入的酒精為質(zhì)量濃度為50-60%的酒精,加入的重量為清水浸泡后的牡丹皮重量的1/2,密封,浸泡3-5小時;
(9)稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:步驟(3)所得的上清液10份、步驟(4)所得的發(fā)酵產(chǎn)物6份、步驟(5)所得的銀杏果1份、步驟(6)所得的菊花煎煮液5份、步驟(7)所得的混合物4份、步驟(8)所得的浸泡混合物4份、納米級沸石粉3份、黃原膠1份;
(10)將步驟(9)中稱量好的各組分混合均勻,然后用磁力攪拌器攪拌80-90分鐘,即得。
一種上述制備方法所制得的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑。
實施例4
一種羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑的制備方法,包括以下步驟:
(1)按照8:10:4:3的重量比稱取金銀花、桑葉、艾葉、玉米須,將稱量好的金銀花、桑葉、艾葉、玉米須分別洗凈、晾干、切細或研細,并混合,加入重量為混合物總重量的25倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮20-30分鐘,過濾,取煎煮液;
(2)向白茶中加入與白茶等重量的白醋,蓋上蓋,燜20-30分鐘后,再加入重量為白茶重量的30倍的清水,混勻,加熱至沸騰后文火煎煮20-25分鐘,燜50-60分鐘;
(3)將步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物按照5:1的重量比混合,4℃避光保存24小時后取出,放入離心管中,離心5分鐘,取上清液;
(4)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:向日葵莖18份、荷葉9份、甘草2份、山楂葉2份、紫蘇葉1份、冬瓜皮7份、石榴皮5份、干酵母粉1份,將稱量好的各組分分別研磨粉碎并混合,加入與混合物等質(zhì)量的清水,密封,避光發(fā)酵64小時,得發(fā)酵產(chǎn)物;
(5)將去皮后的銀杏果研磨粉碎;
(6)將采摘的新鮮菊花用清水洗凈,晾干,切細,加入重量為菊花重量的25-30倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮30-40分鐘,得粘稠的菊花煎煮液;
(7)將天胡荽和灰灰菜洗凈,晾干,按照3:2的重量比混合,研磨粉碎;
(8)牡丹皮用清水浸泡30-40分鐘,去除浸泡液,將清水浸泡后的牡丹皮搗碎或研磨粉碎,加入酒精,加入的酒精為質(zhì)量濃度為50-60%的酒精,加入的重量為清水浸泡后的牡丹皮重量的2/3,密封,浸泡3-5小時;
(9)稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:步驟(3)所得的上清液12份、步驟(4)所得的發(fā)酵產(chǎn)物5份、步驟(5)所得的銀杏果1份、步驟(6)所得的菊花煎煮液4份、步驟(7)所得的混合物3份、步驟(8)所得的浸泡混合物3份、納米級沸石粉2份、黃原膠1份;
(10)將步驟(9)中稱量好的各組分混合均勻,然后用磁力攪拌器攪拌80-90分鐘,即得。
一種上述制備方法所制得的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑。
實施例5
一種羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑的制備方法,包括以下步驟:
(1)按照6:10:5:2的重量比稱取金銀花、桑葉、艾葉、玉米須,將稱量好的金銀花、桑葉、艾葉、玉米須分別洗凈、晾干、切細或研細,并混合,加入重量為混合物總重量的25倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮20-30分鐘,過濾,取煎煮液;
(2)向白茶中加入與白茶等重量的白醋,蓋上蓋,燜20-30分鐘后,再加入重量為白茶重量的30倍的清水,混勻,加熱至沸騰后文火煎煮20-25分鐘,燜50-60分鐘;
(3)將步驟(1)所制得的煎煮液和步驟(2)所得的混合物按照5:1的重量比混合,4℃避光保存24小時后取出,放入離心管中,離心5分鐘,取上清液;
(4)按照配比稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:向日葵莖18份、荷葉9份、甘草2份、山楂葉2份、紫蘇葉3份、冬瓜皮7份、石榴皮4份、干酵母粉1份,將稱量好的各組分分別研磨粉碎并混合,加入與混合物等質(zhì)量的清水,密封,避光發(fā)酵72小時,得發(fā)酵產(chǎn)物;
(5)將去皮后的銀杏果研磨粉碎;
(6)將采摘的新鮮菊花用清水洗凈,晾干,切細,加入重量為菊花重量的25-30倍的清水,加熱至沸騰后文火煎煮30-40分鐘,得粘稠的菊花煎煮液;
(7)將天胡荽和灰灰菜洗凈,晾干,按照5:2的重量比混合,研磨粉碎;
(8)牡丹皮用清水浸泡30-40分鐘,去除浸泡液,將清水浸泡后的牡丹皮搗碎或研磨粉碎,加入酒精,加入的酒精為質(zhì)量濃度為50-60%的酒精,加入的重量為清水浸泡后的牡丹皮重量的1/2,密封,浸泡3-5小時;
(9)稱取以下質(zhì)量份數(shù)的各組分:步驟(3)所得的上清液13份、步驟(4)所得的發(fā)酵產(chǎn)物5份、步驟(5)所得的銀杏果1份、步驟(6)所得的菊花煎煮液4份、步驟(7)所得的混合物3份、步驟(8)所得的浸泡混合物4份、納米級沸石粉3份、黃原膠1份;
(10)將步驟(9)中稱量好的各組分混合均勻,然后用磁力攪拌器攪拌80-90分鐘,即得。
一種上述制備方法所制得的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑。
實驗結果
抑菌實驗
用滅菌去離子水分別將本發(fā)明實施例1-實施例5所制得的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑稀釋至質(zhì)量百分比為2%,采用瓊脂擴散法測實施例1-實施例5所制得的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑的稀釋液的抑菌效果(對照組采用的是等體積的滅菌去離子水),實驗結果見表1:
表1對鏈球菌的抑菌效果
實體實驗
試驗場地選在青島某漁場,挑選體長12-15cm的健康的羅非魚魚苗,在水族缸中暫養(yǎng)7天后將羅非魚魚苗分成實驗組和對照組,每組3個重復,對實驗組和對照組的羅非魚魚苗腹腔注射3*105cfu/ml的羅非魚無乳鏈球菌菌懸液,三天后在實驗組羅非魚池塘投喂的飼料中添加本發(fā)明實施例1所制得的抑制劑(將本發(fā)明的抑制劑稀釋后添加到飼料中,每1kg魚體重每次添加15mg本發(fā)明實施例1的飼料添加劑,1天投喂2次),對照組的飼料中不添加任何藥劑,注射羅非魚無乳鏈球菌菌懸液后每天統(tǒng)計并記錄羅非魚魚苗的死亡情況。實驗結果見表2:
表2本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑治療效果
實驗結果表明:本發(fā)明的羅非魚養(yǎng)殖池塘鏈球菌抑制劑能有效抑制羅非魚鏈球菌病。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式,應當指出:對于本技術領域的普通技術人員來說,在不脫離本發(fā)明原理的前提下,還可以做出若干改進,這些改進應視為本發(fā)明的保護范圍。