本發(fā)明涉及植物組培繁育領(lǐng)域，具體涉及一種生產(chǎn)郁金香組培苗的方法。

背景技術(shù)：

郁金香為百合科郁金香屬的草本植物。多年生球根花卉，花型多樣、花色豐富、株型挺拔，深受人們喜愛(ài)。郁金香的生長(zhǎng)期適溫為5-20℃，最佳溫度為15-18℃，植株的生育溫度應(yīng)保持在0-25℃，郁金香較喜肥，土壤酸堿度以中性偏堿為好，郁金香自然繁殖速度慢，繁殖系數(shù)低，并且其種球病毒易積累使種球退化或逐漸死亡，為了解決這一問(wèn)題郁金香植物組織培養(yǎng)技術(shù)迅速發(fā)展。但是組培苗鱗莖小、成活率低成為阻礙郁金香組培快繁的一個(gè)難題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)郁金香組培苗的方法，該種生產(chǎn)方法能獲得鱗莖較大、生長(zhǎng)迅速、植株健壯的郁金香組培苗，有效地提高組培苗之后的移栽成活率。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：

一種生產(chǎn)郁金香組培苗的方法，按照以下步驟進(jìn)行：

(1)外植體消毒：選取健康無(wú)病的郁金香花種子作為外植體，將種子經(jīng)流水沖洗2-4min后，在超凈工作臺(tái)上用體積百分?jǐn)?shù)為75％的乙醇溶液表面滅菌1-3min，無(wú)菌水沖洗3次，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.1-0.3％的hgcl2溶液滅菌4-6min，無(wú)菌水沖洗4-6次；

(2)郁金香花提取液的制備：取適量新鮮郁金香花瓣加入到開(kāi)放的提取罐中，加入水加熱到煮沸狀態(tài)煎煮40-60min，葉片與水的料液體積比為1:2-4，之后倒出提取液至液體存儲(chǔ)罐中；再向提取罐中加入水加熱到煮沸狀態(tài)煎煮1-2h，且葉片與水的料液體積比為1:3-5，倒出提取液至所述液體存儲(chǔ)罐中，最后濃縮液體存儲(chǔ)罐中的提取液至原體積的1/5-1/3，得郁金香花提取液；

(3)接種誘導(dǎo)：將步驟(1)消毒后的外植體接種于固體培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)，促使發(fā)芽成苗，其中固體培養(yǎng)基以1/2ms為基本培養(yǎng)基，并添加30-50g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加10-20g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.0-7.5；

(4)增值繼代培養(yǎng)：切取步驟(2)中形成的幼苗莖段2-4cm，轉(zhuǎn)入到繼代固體培養(yǎng)基中，直至莖段增殖，得叢生芽，其中固體培養(yǎng)基以1/2b5為基本培養(yǎng)基，并添加20-30g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加10-20g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.0-7.5；

(5)生根培養(yǎng)：待所述叢生芽的單芽長(zhǎng)至3.0-5.0cm時(shí)，將郁金香組培苗移植至生根培養(yǎng)基中，其培養(yǎng)基以1/2ms為基本培養(yǎng)基，并添加30-40g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加10-20g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.0-7.5。

進(jìn)一步地，所述接種誘導(dǎo)的固體培養(yǎng)基中另外還添加0.4-0.6mg/lnaa、0.2-0.4mg/l6-ba及15-25g/l蔗糖。

進(jìn)一步地，所述接種誘導(dǎo)培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為10±2℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1000-1200lx，光照時(shí)間設(shè)定為12±1h/d。

進(jìn)一步地，所述增值繼代培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基中另外還添加0.4-0.6mg/lnaa、0.6-0.8mg/l6-ba、25-35g/l蔗糖及瓊脂4.0～6.0g/l。

進(jìn)一步地，所述增值繼代培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為15±2℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1000-1500lx，光照時(shí)間設(shè)定為12±1h/d。

進(jìn)一步地，所述生根培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基中還另外添加0.2-0.4mg/liba、0.4-0.6mg/lnaa、20-30g/l甘露醇、30-40g/l蔗糖以及3.0-5.0g/l瓊脂。

進(jìn)一步地，所述生根培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為8-15℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1000-2000lx，光照時(shí)間設(shè)定為8-12h/d。

更進(jìn)一步地，所述生根培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為13±1℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1200-1400lx，光照時(shí)間設(shè)定為10±1h/d。

本發(fā)明具有如下的有益效果：

(1)本發(fā)明大大縮短了郁金香的育苗周期，節(jié)省了育苗材料，克服了傳統(tǒng)郁金香育苗方法中存在的育苗所需材料多、周期長(zhǎng)等問(wèn)題，大大降低了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)效率，解決了目前郁金香種植成活率低、繁殖周期長(zhǎng)、品質(zhì)退化等問(wèn)題；

(2)本發(fā)明以郁金香花提取液作為營(yíng)養(yǎng)添加劑，科學(xué)合理地選擇培養(yǎng)基和培養(yǎng)液，使其具有種苗繁殖快、移栽成活率高、能獲得鱗莖較大的優(yōu)點(diǎn)，且種苗繁殖不受季節(jié)的影響，一年四季都可培育花卉，同時(shí)解決了科學(xué)研究選育的良種應(yīng)用的問(wèn)題，以往良種生產(chǎn)單純依賴(lài)建設(shè)種子園的方法，采用該方法節(jié)約了土地、經(jīng)費(fèi)以及解決了種子園投產(chǎn)周期長(zhǎng)的問(wèn)題，推廣應(yīng)用前景好；

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步描述，以下實(shí)施例僅用于更加清楚地說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而不能以此來(lái)限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

一種生產(chǎn)郁金香組培苗的方法，按照以下步驟進(jìn)行：

(1)外植體消毒：先選取健康無(wú)病的郁金香花種子作為外植體，將種子經(jīng)流水沖洗2min后，在超凈工作臺(tái)上用體積百分?jǐn)?shù)為75％的乙醇溶液表面滅菌1min，無(wú)菌水沖洗3次，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.1％的hgcl2溶液滅菌4min，無(wú)菌水沖洗4次；

(2)郁金香花提取液的制備：取約200g新鮮郁金香花瓣加入到開(kāi)放的提取罐中，加入水加熱到煮沸狀態(tài)煎煮40min，葉片與水的料液體積比為1:2，之后倒出提取液至液體存儲(chǔ)罐中；再向提取罐中加入水加熱到煮沸狀態(tài)煎煮1h，且葉片與水的料液體積比為1:3，倒出提取液至所述液體存儲(chǔ)罐中，最后濃縮液體存儲(chǔ)罐中的提取液至原體積的1/5，得郁金香花提取液約27g；

(3)接種誘導(dǎo)：將步驟(1)消毒后的外植體接種于固體培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)，促使發(fā)芽成苗，其中固體培養(yǎng)基以1/2ms為基本培養(yǎng)基，并添加30g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加10g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.0；

該固體培養(yǎng)基中另外還添加0.4mg/lnaa、0.2mg/l6-ba及15g/l蔗糖；且接種誘導(dǎo)培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為8℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1000lx，光照時(shí)間設(shè)定為11h/d；

(4)增值繼代培養(yǎng)：切取步驟(2)中形成的幼苗莖段2cm，轉(zhuǎn)入到繼代固體培養(yǎng)基中，直至莖段增殖，得叢生芽，其中固體培養(yǎng)基以1/2b5為基本培養(yǎng)基，并添加20g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加10g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.0；

該固體培養(yǎng)基中另外還添加0.4mg/lnaa、0.6mg/l6-ba、25g/l蔗糖及瓊脂4.0g/l；且增值繼代培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為13℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1000lx，光照時(shí)間設(shè)定為11h/d；

(5)生根培養(yǎng)：待所述叢生芽的單芽長(zhǎng)至3.0cm時(shí)，將郁金香組培苗移植至生根培養(yǎng)基中，其培養(yǎng)基以1/2ms為基本培養(yǎng)基，并添加30g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加10g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.0；

該固體培養(yǎng)基中還另外添加0.2mg/liba、0.4mg/lnaa、20g/l甘露醇、30g/l蔗糖以及3.0g/l瓊脂；且生根培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為8℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1000lx，光照時(shí)間設(shè)定為8h/d。

實(shí)施例2

一種生產(chǎn)郁金香組培苗的方法，按照以下步驟進(jìn)行：

(1)外植體消毒：先選取健康無(wú)病的郁金香花種子作為外植體，將種子經(jīng)流水沖洗3min后，在超凈工作臺(tái)上用體積百分?jǐn)?shù)為75％的乙醇溶液表面滅菌2min，無(wú)菌水沖洗3次，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.2％的hgcl2溶液滅菌5min，無(wú)菌水沖洗5次；

(2)郁金香花提取液的制備：取300g新鮮郁金香花瓣加入到開(kāi)放的提取罐中，加入水加熱到煮沸狀態(tài)煎煮50min，葉片與水的料液體積比為1:3，之后倒出提取液至液體存儲(chǔ)罐中；再向提取罐中加入水加熱到煮沸狀態(tài)煎煮1.5h，且葉片與水的料液體積比為1:4，倒出提取液至所述液體存儲(chǔ)罐中，最后濃縮液體存儲(chǔ)罐中的提取液至原體積的1/4，得郁金香花提取液43g；

(3)接種誘導(dǎo)：將步驟(1)消毒后的外植體接種于固體培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)，促使發(fā)芽成苗，其中固體培養(yǎng)基以1/2ms為基本培養(yǎng)基，并添加40g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加15g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.2；

該固體培養(yǎng)基中另外還添加0.5mg/lnaa、0.3mg/l6-ba及20g/l蔗糖；且接種誘導(dǎo)培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為10℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1100lx，光照時(shí)間設(shè)定為12h/d；

(4)增值繼代培養(yǎng)：切取步驟(2)中形成的幼苗莖段3cm，轉(zhuǎn)入到繼代固體培養(yǎng)基中，直至莖段增殖，得叢生芽，其中固體培養(yǎng)基以1/2b5為基本培養(yǎng)基，并添加25g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加15g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.2；

該固體培養(yǎng)基中另外還添加0.5mg/lnaa、0.7mg/l6-ba、30g/l蔗糖及瓊脂5.0g/l；且增值繼代培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為15℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1200lx，光照時(shí)間設(shè)定為12h/d；

(5)生根培養(yǎng)：待所述叢生芽的單芽長(zhǎng)至4.0cm時(shí)，將郁金香組培苗移植至生根培養(yǎng)基中，其培養(yǎng)基以1/2ms為基本培養(yǎng)基，并添加35g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加15g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.2；

該固體培養(yǎng)基中還另外添加0.3mg/liba、0.5mg/lnaa、25g/l甘露醇、35g/l蔗糖以及4.0g/l瓊脂；且生根培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為12℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1500lx，光照時(shí)間設(shè)定為10h/d。

實(shí)施例3

一種生產(chǎn)郁金香組培苗的方法，按照以下步驟進(jìn)行：

(1)外植體消毒：先選取健康無(wú)病的郁金香花種子作為外植體，將種子經(jīng)流水沖洗4min后，在超凈工作臺(tái)上用體積百分?jǐn)?shù)為75％的乙醇溶液表面滅菌3min，無(wú)菌水沖洗3次，用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.3％的hgcl2溶液滅菌6min，無(wú)菌水沖洗6次；

(2)郁金香花提取液的制備：取400g新鮮郁金香花瓣加入到開(kāi)放的提取罐中，加入水加熱到煮沸狀態(tài)煎煮60min，葉片與水的料液體積比為1:4，之后倒出提取液至液體存儲(chǔ)罐中；再向提取罐中加入水加熱到煮沸狀態(tài)煎煮2h，且葉片與水的料液體積比為1:5，倒出提取液至所述液體存儲(chǔ)罐中，最后濃縮液體存儲(chǔ)罐中的提取液至原體積的1/3，得郁金香花提取液64g；

(3)接種誘導(dǎo)：將步驟(1)消毒后的外植體接種于固體培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)，促使發(fā)芽成苗，其中固體培養(yǎng)基以1/2ms為基本培養(yǎng)基，并添加50g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加20g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.5；

該固體培養(yǎng)基中另外還添加0.6mg/lnaa、0.4mg/l6-ba及25g/l蔗糖；且接種誘導(dǎo)培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為12℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1200lx，光照時(shí)間設(shè)定為13h/d；

(4)增值繼代培養(yǎng)：切取步驟(2)中形成的幼苗莖段4cm，轉(zhuǎn)入到繼代固體培養(yǎng)基中，直至莖段增殖，得叢生芽，其中固體培養(yǎng)基以1/2b5為基本培養(yǎng)基，并添加30g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加20g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.5；

該固體培養(yǎng)基中另外還添加0.6mg/lnaa、0.8mg/l6-ba、35g/l蔗糖及瓊脂6.0g/l；且增值繼代培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為17℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為1500lx，光照時(shí)間設(shè)定為13h/d；

(5)生根培養(yǎng)：待所述叢生芽的單芽長(zhǎng)至5.0cm時(shí)，將郁金香組培苗移植至生根培養(yǎng)基中，其培養(yǎng)基以1/2ms為基本培養(yǎng)基，并添加40g/l郁金香花提取液，另外再在固體培養(yǎng)基中添加20g/l的nh4hco3調(diào)節(jié)ph值至7.5；

該固體培養(yǎng)基中還另外添加0.4mg/liba、0.6mg/lnaa、30g/l甘露醇、40g/l蔗糖以及5.0g/l瓊脂；且生根培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為15℃，室內(nèi)光照強(qiáng)度為2000lx，光照時(shí)間設(shè)定為12h/d。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。