本發(fā)明屬于食用菌栽培技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)：

蛹蟲(chóng)草(cordycepsmilitaris)也稱(chēng)北冬蟲(chóng)夏草、北蟲(chóng)草，屬真菌門(mén)(eumycota)，子囊菌亞門(mén)(ascomycotina)，核菌綱(pyrenomycetes)，麥角菌目(clavicipitales)，麥角菌科(clavicipitaceae)，蟲(chóng)草屬(cordyceps)，與冬蟲(chóng)夏草同屬異種，是蟲(chóng)草屬的模式種。大量研究表明，蛹蟲(chóng)草的藥理作用與冬蟲(chóng)夏草極為相似，其藥用成分蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草多糖、蟲(chóng)草素含量及sod活性等均高于冬蟲(chóng)夏草，具有抗腫瘤、抗疲勞、降血糖、抗菌消炎、提高免疫力等功效。

硒是人體必需的微量元素之一，也是國(guó)際公認(rèn)的“抗癌元素之王”和“人體免疫激活劑”。蛹蟲(chóng)草具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健價(jià)值，而硒元素對(duì)人體健康尤為重要，因此，研究蛹蟲(chóng)草與硒的有機(jī)結(jié)合，可以使硒與蛹蟲(chóng)草中的生理活性物質(zhì)協(xié)同增效，有效提高蛹蟲(chóng)草的營(yíng)養(yǎng)和保健功效。由此可見(jiàn)，開(kāi)展富硒蛹蟲(chóng)草研究具有重要意義。

我國(guó)是世界主要的硒資源國(guó)之一，處于世界第四位。但我國(guó)仍是一個(gè)缺硒大國(guó)，2/3的地區(qū)為缺硒區(qū)和低硒區(qū)。人體長(zhǎng)期缺硒或低硒會(huì)引起40余種疾病，其中就包括威脅人類(lèi)健康的癌癥，糖尿病，心血管病等。若以無(wú)機(jī)硒進(jìn)行補(bǔ)充，人體難以吸收，而且有一定的毒性。但僅僅依靠天然食品中的硒還不能滿足我國(guó)居民的需求。因此，安全、高效的富硒產(chǎn)品開(kāi)發(fā)顯得尤為迫切。

蛹蟲(chóng)草不僅具有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，且具有較強(qiáng)的耐硒和聚硒能力，能夠通過(guò)菌絲細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)代謝的轉(zhuǎn)化，將無(wú)機(jī)硒結(jié)合到大分子活性物質(zhì)(如蛋白質(zhì)和多糖等)上，轉(zhuǎn)化為蛋白硒和多糖硒等有機(jī)形態(tài)的硒。因此，如何提高蛹蟲(chóng)草聚硒能力及富硒率是目前亟待解決的問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，用該方法生產(chǎn)的蛹蟲(chóng)草能大幅度提高蛹蟲(chóng)草子座的硒含量，從而提高蛹蟲(chóng)草的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值。

具體的，本發(fā)明提供的高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程如下：

s1：蛹蟲(chóng)草菌種活化

在pda固體培養(yǎng)基上對(duì)蛹蟲(chóng)草菌種進(jìn)行菌株活化；

s2：液體菌種制備

將經(jīng)pda固體培養(yǎng)基活化的菌種，接種到液體發(fā)酵培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，得到液體菌種；

s3：栽培培養(yǎng)基制備

制作基礎(chǔ)培養(yǎng)液，每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液中含有：葡萄糖8～11.5g，蔗糖5.0～6.2g，蛋白胨2～3g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，檸檬酸鐵銨0.5g，溶劑為水；

向所述基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加亞硒酸鈉和甲硫氨酸，制成富硒栽培培養(yǎng)液，其中，亞硒酸鈉按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液50～1000mg的量添加，所述亞硒酸鈉與甲硫氨酸的質(zhì)量比為1:3～5；

向蛹蟲(chóng)草栽培專(zhuān)用盒中裝入小麥和富硒栽培培養(yǎng)液，高壓滅菌后冷卻，得到栽培培養(yǎng)基，其中，小麥和富硒栽培培養(yǎng)液按照1g：1.5ml的比例混合；

s4：接種培養(yǎng)

將s2制備的液體菌種進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尡壤秊?0倍體積，將稀釋后的液體菌種接種于s3提供的栽培培養(yǎng)基上；

s5：栽培管理

s51：菌絲萌發(fā)階段：溫度控制在18～21℃范圍內(nèi)、空氣相對(duì)濕度55～65％、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.05％，黑暗培養(yǎng)5～7d，至菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基；

s52：菌絲轉(zhuǎn)色階段：溫度控制在20～23℃范圍內(nèi)、空氣相對(duì)濕度65～80％、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.05％，光照強(qiáng)度150～200lx，光質(zhì)為白色，光照時(shí)間24h/d，培養(yǎng)2-3d，至培養(yǎng)基表面菌絲由白色變?yōu)樯铋冱S色；

s53：子座分化階段：溫度控制在20～23℃范圍內(nèi)、空氣相對(duì)濕度65～80％、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.1％，光照強(qiáng)度200～300lx，光質(zhì)為白色，光照時(shí)間12h/d，培養(yǎng)7～10d，直到培養(yǎng)基表面有突起，并形成小米粒狀原基；

s54：子座生長(zhǎng)階段：溫度控制在20～23℃范圍內(nèi)、空氣相對(duì)濕度80～90％、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.1％，光照強(qiáng)度200～300lx，光質(zhì)為白色，光照時(shí)間18h/d，培養(yǎng)30～35d，至子座不再生長(zhǎng)，頂端膨大且出現(xiàn)許多小刺時(shí)，表明蛹蟲(chóng)草已成熟，采收烘干后，即得到優(yōu)質(zhì)富硒蛹蟲(chóng)草干品。

優(yōu)選地，s1中，所述pda固體培養(yǎng)基的配方為：馬鈴薯200g、葡萄糖10g、蔗糖5.0g、蛋白胨5.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g、瓊脂12g、水1000ml。

優(yōu)選地，s2中，所述液體培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖5g，蔗糖3.0g，蛋白胨10.0g，磷酸二氫鉀1.0g，硫酸鎂0.5g，檸檬酸鐵銨1.0g，水1000ml。

優(yōu)選地，所述蛹蟲(chóng)草栽培專(zhuān)用盒的規(guī)格為300mm×200mm×110mm，每盒中裝小麥300g，富硒栽培培養(yǎng)液450ml。

更優(yōu)選地，s2中，每盒所述蛹蟲(chóng)草栽培專(zhuān)用盒中接種液體菌種50ml。

更優(yōu)選地，還包括蛹蟲(chóng)草菌種保藏，將蛹蟲(chóng)草菌種保藏在保藏培養(yǎng)基中，所述保藏培養(yǎng)基配方如下：小麥20份，基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)液30份；所述基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)液和s3中基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)液配方相同。利用該保藏培養(yǎng)基很好的解決了蛹蟲(chóng)草存在的菌種退化問(wèn)題，能夠明顯延緩菌株退化時(shí)間。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

1、本發(fā)明采用亞硒酸鈉作為硒源，成本低廉，富硒蛹蟲(chóng)草的栽培操作非常簡(jiǎn)單，易于大規(guī)模推廣生產(chǎn)。

2、本發(fā)明將亞硒酸鈉與甲硫氨酸以一定的比例混合加入栽培基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，亞硒酸鈉中的硒元素會(huì)替代部分甲硫氨酸中的硫元素，生成硒代甲硫氨酸，從而降低了無(wú)機(jī)硒對(duì)蛹蟲(chóng)草的細(xì)胞毒性，促進(jìn)了蛹蟲(chóng)草生長(zhǎng)發(fā)育，同時(shí)使硒元素容易被菌絲體吸收，提高了蛹蟲(chóng)草聚硒能力及子座富硒率。

3、由于適宜的接種量是提高蛹蟲(chóng)草產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素，當(dāng)接種量較少時(shí)，菌絲生長(zhǎng)緩慢、覆面時(shí)間延長(zhǎng)，相應(yīng)的生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，較長(zhǎng)的生產(chǎn)周期不利于蛹蟲(chóng)草產(chǎn)量的提高。當(dāng)接種量較多時(shí)，菌絲生長(zhǎng)快，但氣生菌絲過(guò)旺，不利于子座的分化和發(fā)育，且易造成污染，最終導(dǎo)致產(chǎn)量下降。因此，本發(fā)明中最佳的菌種接種量為50ml/盒。

4、采用全光培養(yǎng)和富氧栽培方式生產(chǎn)的蛹蟲(chóng)草子座生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、產(chǎn)量高、色澤鮮艷，從而提高了蛹蟲(chóng)草的營(yíng)養(yǎng)和保健價(jià)值。

具體實(shí)施方式

為了使本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案能予以實(shí)施，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但所舉實(shí)施例不作為對(duì)本發(fā)明的限定。

需要說(shuō)明的是，下面實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，均按照本領(lǐng)域的常規(guī)方法和條件進(jìn)行，所用試劑如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)試劑。

實(shí)施例1

本實(shí)施例一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程如下：

s1：蛹蟲(chóng)草菌種活化

按照常規(guī)方法制作pda固體培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配方如下：馬鈴薯200g，葡萄糖10g，蔗糖5.0g，蛋白胨5.0g，磷酸二氫鉀1.0g，硫酸鎂0.5g，瓊脂12g，水1000ml。將保藏的蛹蟲(chóng)草菌種接種于上述pda固體培養(yǎng)基上，活化培養(yǎng)7d，待菌絲長(zhǎng)滿試管3/4時(shí)，光照培養(yǎng)12h，完成對(duì)蛹蟲(chóng)草菌種的菌株活化。

s2：液體菌種制備

將經(jīng)上述步驟活化的菌種，選擇轉(zhuǎn)色好的試管菌種，將菌種接種于液體培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為5-7d，得到液體菌種。所用液體培養(yǎng)基配方如下：葡萄糖5.0g，蔗糖3.0g，蛋白胨10.0g，磷酸二氫鉀1.0g，硫酸鎂0.5g，檸檬酸鐵銨1.0g，水1000ml，按照常規(guī)方法制作即可。

s3：栽培培養(yǎng)基制備

制作基礎(chǔ)培養(yǎng)液，每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液中含有：葡萄糖10g，蔗糖5g，蛋白胨3g，磷酸二氫鉀1g，硫酸鎂0.5g，檸檬酸鐵銨0.5g，溶劑為水；向該基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加亞硒酸鈉和甲硫氨酸，制成富硒栽培培養(yǎng)液，其中，亞硒酸鈉按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液100mg的量添加，所述甲硫氨酸按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液300mg的量添加；采用規(guī)格300mm×200mm×110mm的蛹蟲(chóng)草栽培專(zhuān)用盒，向其中裝入300g小麥和450ml富硒栽培培養(yǎng)液，高壓滅菌1h后冷卻，得到固體小麥富硒栽培培養(yǎng)基，其中含有亞硒酸鈉45mg/盒。

s4：接種培養(yǎng)

在超凈工作臺(tái)上，將s2制備的液體菌種進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尡壤秊?:10，然后將稀釋后的液體菌種均勻的接入栽培培養(yǎng)基中，每盒接種50ml；

s5：栽培管理

菌絲萌發(fā)階段：溫度控制在18～21℃范圍內(nèi)、空氣相對(duì)濕度55～65％、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.05％，黑暗培養(yǎng)5d，至菌絲布滿整個(gè)培養(yǎng)基；

菌絲轉(zhuǎn)色階段：溫度控制在20～23℃范圍內(nèi)、空氣相對(duì)濕度65～80％、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.05％，光照強(qiáng)度150lx，光質(zhì)為白色，光照時(shí)間24h/d，培養(yǎng)2d，至培養(yǎng)基表面菌絲由白色變?yōu)樯铋冱S色；

子座分化階段：溫度控制在20～23℃范圍內(nèi)、空氣相對(duì)濕度65～80％、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.1％，光照強(qiáng)度200lx，光質(zhì)為白色，光照時(shí)間12h/d，培養(yǎng)7d，直到培養(yǎng)基表面有突起，并形成小米粒狀原基；

子座生長(zhǎng)階段：溫度控制在20～23℃范圍內(nèi)、空氣相對(duì)濕度80～90％、二氧化碳體積分?jǐn)?shù)小于0.1％，光照強(qiáng)度200lx，光質(zhì)為白色，光照時(shí)間18h/d，培養(yǎng)30d，至子座不再生長(zhǎng)，頂端膨大且出現(xiàn)許多小刺時(shí)，表明蛹蟲(chóng)草已成熟，采收后，50℃烘干，即可得到優(yōu)質(zhì)富硒蛹蟲(chóng)草干品。

實(shí)施例2

本實(shí)施例一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程和實(shí)施例1相同，不同之處僅在于，s3中，亞硒酸鈉按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液150mg的量添加，甲硫氨酸按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液450mg的量添加。

實(shí)施例3

本實(shí)施例一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程和實(shí)施例1相同，不同之處僅在于，s3中，亞硒酸鈉按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液200mg的量添加，甲硫氨酸按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液800mg的量添加。

實(shí)施例4

本實(shí)施例一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程和實(shí)施例1相同，不同之處僅在于，s3中，亞硒酸鈉按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液250mg的量添加，甲硫氨酸按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液800mg的量添加。

實(shí)施例5

本實(shí)施例一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程和實(shí)施例1相同，不同之處僅在于，s3中，亞硒酸鈉按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液300mg的量添加，甲硫氨酸按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液1500mg的量添加。

實(shí)施例6

本實(shí)施例一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程和實(shí)施例1相同，不同之處僅在于，s3中，亞硒酸鈉按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液500mg的量添加，甲硫氨酸按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液1500mg的量添加。

實(shí)施例7

本實(shí)施例一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程和實(shí)施例1相同，不同之處僅在于，s3中，亞硒酸鈉按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液1000mg的量添加，甲硫氨酸按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液3000mg的量添加。

實(shí)施例8

本實(shí)施例一種高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程和實(shí)施例1相同，不同之處僅在于，s3中，亞硒酸鈉按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液50mg的量添加，甲硫氨酸按照每升基礎(chǔ)培養(yǎng)液250mg的量添加。

對(duì)比例1

本實(shí)施例一種蛹蟲(chóng)草的生產(chǎn)方法，具體過(guò)程和實(shí)施例1相同，不同之處僅在于，s3中，不添加亞硒酸鈉和甲硫氨酸。

我們對(duì)實(shí)施例1-實(shí)施例8，以及對(duì)比例1提供的方法栽培蛹蟲(chóng)草所獲得的蛹蟲(chóng)草子座中的硒含量進(jìn)行測(cè)定，具體結(jié)果如表1所示。

表1不同濃度亞硒酸鈉對(duì)蛹蟲(chóng)草產(chǎn)量及硒含量的影響

注：不同大寫(xiě)字母表示1％顯著水平，不同小寫(xiě)字母表示5％顯著水平

由表1可以看出，實(shí)施例1-實(shí)施例8提供的與普通富硒蛹蟲(chóng)草栽培相比，利用該方法生產(chǎn)的富硒蛹蟲(chóng)草產(chǎn)量高、子座硒轉(zhuǎn)化率高，且在一定范圍內(nèi)易達(dá)到目標(biāo)硒含量。

此外，由表1還可以看出，當(dāng)亞硒酸鈉濃度為100mg/l時(shí)，蛹蟲(chóng)草產(chǎn)量最高，為309.33g/盒，硒含量為169.058μg/g，硒轉(zhuǎn)化率為23.24％；當(dāng)亞硒酸鈉濃度為50μg/g時(shí)，蛹蟲(chóng)草硒轉(zhuǎn)化率最高，為31.64％；當(dāng)亞硒酸鈉濃度為1000μg/g時(shí)，蛹蟲(chóng)草子座硒含量為509μg/g，硒轉(zhuǎn)化率為3.24％。因此，可人為控制生產(chǎn)的蛹蟲(chóng)草子座硒含量，從而根據(jù)本發(fā)明篩選所需的硒含量進(jìn)行高產(chǎn)、高硒蛹蟲(chóng)草生產(chǎn)。

以上所述實(shí)施例僅是為充分說(shuō)明本發(fā)明而所舉的較佳的實(shí)施例，其保護(hù)范圍不限于此。本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明基礎(chǔ)上所作的等同替代或變換，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)，本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求書(shū)為準(zhǔn)。