本發(fā)明涉及生物技術領域，具體來說，涉及一種構樹組培培養(yǎng)液。

背景技術：

構樹屬?？?，系多年生闊葉喬木。主要分布于我國黃河、長江及珠江流域,在貴州安順有分布，多為野生，有少量栽培，屬當?shù)剜l(xiāng)土樹種。具有速生、適應性強、分布廣、熱量高、輪伐期短的特點。其樹皮、木材、枝椏、葉、花、果實、種子、根、乳汁等皆可綜合利用，經(jīng)濟效益潛力很大。構樹全身都能利用：樹皮纖維潔白、細長，是高檔的造紙和紡織原料，價值高，市場需求量大；木桿是生產(chǎn)紙張、纖維板的好原料；樹葉含有豐富的粗蛋白、氨基酸、微量元素，是動物的優(yōu)質(zhì)飼料原料。采用高密度栽培技術種植構樹，畝產(chǎn)韌皮纖維200公斤，木桿1500公斤，優(yōu)質(zhì)飼料樹葉1500公斤。由于構樹具有綠化和其他經(jīng)濟價值，市場對于構樹種苗的需求非常大，每年將達到2000萬株。

目前構樹的種苗制備主要靠扦插和組培苗供應。扦插存在著季節(jié)性、場地占用面積大、效率低等問題。常規(guī)組培方法存在著人工成本高、勞動量大、成本高等問題。在組培過程中易引起組培苗污染、材料死亡、玻璃化、黃化、褐化、變異、增值率低下或過盛、組培苗不生根或生根異常、組培苗瘦弱或徒長、瓶苗出瓶死亡率高等。

技術實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的是提供一種構樹組培培養(yǎng)液，以解決現(xiàn)有構樹組培方法易引起組培苗污染、材料死亡、玻璃化、黃化、褐化、變異、增值率低下或過盛、組培苗不生根或生根異常、組培苗瘦弱或徒長、瓶苗出瓶死亡率高等問題。

本發(fā)明通過以下技術方案解決上述技術問題：

一種構樹組培培養(yǎng)液，每升培養(yǎng)液中含母液a80～120g、母液b0.8～1.2g、母液c0.8～1.2g、母液d8～12g、母液e3～7g、植物生長調(diào)節(jié)劑0.8～1.2g、蔗糖25～35g、瓊脂粉5～6g、氧化銀微粉3～5g、活性炭微粉3～5g；

所述母液a中cacl2·2h2o濃度為4～5g/l、kno3濃度為18～20g/l、mgso4·7h2o濃度為3～4g/l、nh4no3濃度為16～17g/l、kh2po4濃度為1～2g/l；

所述母液b中mgso4·4h2o濃度為24～25g/l、znso4·7h2o濃度為8～9g/l、h3bo3濃度為6.0～6.5g/l、ki濃度為0.8～0.9g/l、nemoo4·2h2o濃度為0.2～0.3g/l、cuso4·5h2o濃度為0.02～0.03g/l、cocl·6h2o濃度為0.02～0.03g/l；

所述母液c中硫胺素濃度為0.4～0.6g/l、吡多醇濃度為0.3～0.5g/l、煙酸濃度為0.4～0.6g/l、甘氨酸濃度為1～3g/l；

所述母液d是質(zhì)量濃度為8～12g/l的肌醇溶液；

所述母液e中feso4·7h2o濃度為5～6g/l、na2-edta濃度為7～8g/l。

所述培養(yǎng)液中含母液a100g、母液b1g、母液c1g、母液d10g、母液e5g、植物生長調(diào)節(jié)劑1g、蔗糖30g、瓊脂粉5.5g、氧化銀微粉4g、活性炭微粉4g。

所述植物生長調(diào)節(jié)劑由6-芐氨基嘌呤、萘乙酸和荔枝汁以(4～7)：(1～2)：(1.5～2.5)的重量比配制而成。

所述植物生長調(diào)節(jié)劑由吲哚乙酸、vc、荔枝汁以(100～120)：(1～2)：(180～200)的重量比配制而成。

所述氧化銀微粉為氧化銀的納米微粉。

所述活性炭微粉為活性炭的納米微粉。

所述母液a的配制方法為：取cacl2·2h2o0.4～0.5g溶于300ml蒸餾水中，取kno318～20g、mgso4·7h2o3.5～4g、nh4no316～17g、kh2po41.5～2g混合溶于500ml蒸餾水中，將獲得的兩種溶液混合后，再定溶至1l，即得母液a。

所述母液b的配制方法為：取mgso4·4h2o24～25g、znso4·7h2o8～9g、h3bo36.0～6.5g、ki0.8～0.9g、nemoo4·2h2o0.2～0.3g、cuso4·5h2o0.02～0.03g、cocl·6h2o0.02～0.03g溶于800ml蒸餾水中，再定溶至1000ml，即得母液b。

所述母液c的配制方法為：取硫胺素0.04～0.06g、吡多醇0.03～0.05g、煙酸0.04～0.06g、甘氨酸0.1～0.3g溶于80ml蒸餾水中，再定溶至100ml，即得母液c；

所述母液e的配制方法為：取feso4·7h2o2.5～3g溶于400ml蒸餾水中，再加入na2-edta3.5～4g加熱至80～120℃溶解5～8min，再定溶至500ml，即得母液e。

所述母液a中cacl2·2h2o濃度為4.4g/l、kno3濃度為19g/l、mgso4·7h2o濃度為3.8g/l、nh4no3濃度為16.5g/l、kh2po4濃度為1.8g/l。

所述母液b中mgso4·4h2o濃度為24.3g/l、znso4·7h2o濃度為8.6g/l、h3bo3濃度為6.2g/l、ki濃度為0.82g/l、nemoo4·2h2o濃度為0.25g/l、cuso4·5h2o濃度為0.025g/l、cocl·6h2o濃度為0.025g/l。

所述母液c中硫胺素濃度為0.5g/l、吡多醇濃度為0.4g/l、煙酸濃度為0.5g/l、甘氨酸濃度為2g/l。

所述母液d是質(zhì)量濃度為10g/l的肌醇溶液。

所述母液e中feso4·7h2o濃度為5.4g/l、na2-edta濃度為7.4g/l。

本發(fā)明的有益效果在于：首先，在培養(yǎng)液中添加活性炭微粉，可以降低多酚氧化酶的活性，減輕氧化的發(fā)生率，可以有效的吸收培養(yǎng)液中的酚類以及醌類有害物質(zhì)，添加氧化銀微粉幫助分解培養(yǎng)物中的代謝產(chǎn)物，并且有效抑制外植體內(nèi)生菌類造成的污染，活性炭與氧化銀產(chǎn)生協(xié)同作用，有效避免玻璃化、黃化、褐化、變異、增值率低下等情況的發(fā)生，有利于促進構樹組織培養(yǎng)的生根率和移栽成活率；其次，添加荔枝汁促進構樹不定芽的生長，繁殖系數(shù)高，且在增殖的同時誘導生根，縮短培育周期；再次，采用本發(fā)明的培養(yǎng)液，生根率和移栽成活率達到可達99.5％以上，遺傳穩(wěn)定性好。

具體實施方式

為了方便本領域的技術人員理解，下面將結合實施例對本發(fā)明做進一步的描述。實施例僅僅是對該發(fā)明的舉例說明，不是對本發(fā)明的限定，實施例中未作具體說明的步驟均是已有技術，在此不做詳細描述。

實施例一

一種構樹組培培養(yǎng)液，每升(l)培養(yǎng)液含母液a80g、母液b0.8g、母液c0.8g、母液d8g、母液e3g、植物生長調(diào)節(jié)劑0.8g、蔗糖25g、瓊脂粉5g、氧化銀微粉3g、活性炭微粉3g，培養(yǎng)液的配制方法為：取母液a80g、母液b0.8g、母液c0.8g、母液d8g、母液e3g、植物生長調(diào)節(jié)劑0.8g、蔗糖25g、瓊脂粉5g、氧化銀微粉3g、活性炭微粉3g充分混合后，定溶至1l，即得。

所述母液a中cacl2·2h2o濃度為4g/l、kno3濃度為18g/l、mgso4·7h2o濃度為3g/l、nh4no3濃度為16g/l、kh2po4濃度為1g/l；母液a的配制方法為：取cacl2·2h2o0.4g溶于300ml蒸餾水中，取kno318g、mgso4·7h2o3.5g、nh4no316g、kh2po41.5g混合溶于500ml蒸餾水中，待兩種溶液中看不見固體物質(zhì)時，將獲得的兩種溶液混合后，再定溶至1l，即得母液a。

所述母液b中mgso4·4h2o濃度為24g/l、znso4·7h2o濃度為8g/l、h3bo3濃度為6.0g/l、ki濃度為0.8g/l、nemoo4·2h2o濃度為0.2g/l、cuso4·5h2o濃度為0.02g/l、cocl·6h2o濃度為0.02g/l；所述母液b的配制方法為：取mgso4·4h2o24g、znso4·7h2o8g、h3bo36.0g、ki0.8g、nemoo4·2h2o0.2g、cuso4·5h2o0.02g、cocl·6h2o0.02g溶于800ml蒸餾水中，待上述物質(zhì)完全溶解于蒸餾水中，再定溶至1000ml，即得母液b。

所述母液c中硫胺素濃度為0.4g/l、吡多醇濃度為0.3g/l、煙酸濃度為0.4g/l、甘氨酸濃度為1g/l；所述母液c的配制方法為：取硫胺素0.04g、吡多醇0.03g、煙酸0.04g、甘氨酸0.1g溶于80ml蒸餾水中，待上述物質(zhì)完全溶解于水中后再定溶至100ml，即得母液c。

所述母液d是質(zhì)量濃度為8g/l的肌醇溶液。

所述母液e中feso4·7h2o濃度為5g/l、na2-edta濃度為7g/l。所述母液e的配制方法為：取feso4·7h2o2.5g溶于400ml蒸餾水中，再加入na2-edta3.5g加熱至80℃溶解5min，待上述物質(zhì)完全溶解于水中，再定溶至500ml，即得母液e。

所述植物生長調(diào)節(jié)劑由6-芐氨基嘌呤、萘乙酸和荔枝汁以4：1：1.5的重量比配制而成，該植物生長調(diào)節(jié)劑為繼代試劑，采用該植物生長調(diào)節(jié)劑配制的培養(yǎng)液為繼代培養(yǎng)液。

所述植物生長調(diào)節(jié)劑由吲哚乙酸、vc、荔枝汁以100：1：180的重量比配制而成，該植物生長調(diào)節(jié)劑為生根試劑，采用該植物生長調(diào)節(jié)劑配制的培養(yǎng)液為生根培養(yǎng)液。

所述氧化銀微粉為氧化銀的納米微粉。

所述活性炭微粉為活性炭的納米微粉。

實施例二

一種構樹組培培養(yǎng)液，每升(l)培養(yǎng)液含母液a120g、母液b1.2g、母液c1.2g、母液d12g、母液e7g、植物生長調(diào)節(jié)劑1.2g、蔗糖35g、瓊脂粉6g、氧化銀微粉5g、活性炭微粉5g，培養(yǎng)液的配制方法為：取母液a120g、母液b1.2g、母液c1.2g、母液d12g、母液e7g、植物生長調(diào)節(jié)劑1.2g、蔗糖35g、瓊脂粉6g、氧化銀微粉5g、活性炭微粉5g混合均勻，再定溶至1l，即得。

所述母液a中cacl2·2h2o濃度為5g/l、kno3濃度為20g/l、mgso4·7h2o濃度為4g/l、nh4no3濃度為17g/l、kh2po4濃度為2g/l；母液a的配制方法為：取cacl2·2h2o0.5g溶于300ml蒸餾水中，取kno320g、mgso4·7h2o4g、nh4no317g、kh2po42g混合溶于500ml蒸餾水中，待兩種溶液中看不見固體物質(zhì)時，將獲得的兩種溶液混合后，再定溶至1l，即得母液a。

所述母液b中mgso4·4h2o濃度為25g/l、znso4·7h2o濃度為9g/l、h3bo3濃度為6.5g/l、ki濃度為0.9g/l、nemoo4·2h2o濃度為0.3g/l、cuso4·5h2o濃度為0.03g/l、cocl·6h2o濃度為0.03g/l；所述母液b的配制方法為：取mgso4·4h2o25g、znso4·7h2o9g、h3bo36.5g、ki0.9g、nemoo4·2h2o0.3g、cuso4·5h2o0.03g、cocl·6h2o0.03g溶于800ml蒸餾水中，待上述物質(zhì)完全溶解于蒸餾水中，再定溶至1000ml，即得母液b。

所述母液c中硫胺素濃度為0.6g/l、吡多醇濃度為0.5g/l、煙酸濃度為0.6g/l、甘氨酸濃度為3g/l；所述母液c的配制方法為：取硫胺素0.06g、吡多醇0.05g、煙酸0.06g、甘氨酸0.3g溶于80ml蒸餾水中，待上述物質(zhì)完全溶解于水中后再定溶至100ml，即得母液c。

所述母液d是質(zhì)量濃度為12g/l的肌醇溶液。

所述母液e中feso4·7h2o濃度為6g/l、na2-edta濃度為8g/l。所述母液e的配制方法為：取feso4·7h2o3g溶于400ml蒸餾水中，再加入na2-edta4g加熱至120℃溶解8min，待上述物質(zhì)完全溶解于水中，再定溶至500ml，即得母液e。

所述植物生長調(diào)節(jié)劑由6-芐氨基嘌呤、萘乙酸和荔枝汁以7：2：2.5的重量比配制而成，該植物生長調(diào)節(jié)劑為繼代試劑，添加該植物生長調(diào)節(jié)劑配制的培養(yǎng)液為繼代培養(yǎng)液。

所述植物生長調(diào)節(jié)劑由吲哚乙酸、vc、荔枝汁以120：2：200的重量比配制而成，該植物生長調(diào)節(jié)劑為生根試劑，添加該植物生長調(diào)節(jié)劑配制的培養(yǎng)液為生根培養(yǎng)液。

所述氧化銀微粉為氧化銀的納米微粉。

所述活性炭微粉為活性炭的納米微粉。

實施例三

一種構樹組培培養(yǎng)液，每升(l)培養(yǎng)液含母液a100g、母液b1g、母液c1g、母液d10g、母液e5g、植物生長調(diào)節(jié)劑1g、蔗糖30g、瓊脂粉5.5g、氧化銀微粉4g、活性炭微粉4g，培養(yǎng)液的配制方法為：取母液a100g、母液b1g、母液c1g、母液d10g、母液e5g、植物生長調(diào)節(jié)劑1g、蔗糖30g、瓊脂粉5.5g、氧化銀微粉4g、活性炭微粉4g混合均勻，再定溶至1l，即得。

所述母液a中cacl2·2h2o濃度為4.4g/l、kno3濃度為19g/l、mgso4·7h2o濃度為3.8g/l、nh4no3濃度為16.5g/l、kh2po4濃度為1.8g/l；母液a的配制方法為：取cacl2·2h2o0.44g溶于300ml蒸餾水中，取kno319g、mgso4·7h2o3.8g、nh4no316.5g、kh2po41.8g混合溶于500ml蒸餾水中，待兩種溶液中看不見固體物質(zhì)時，將獲得的兩種溶液混合后，再定溶至1l，即得母液a。

所述母液b中mgso4·4h2o濃度為24.3g/l、znso4·7h2o濃度為8.6g/l、h3bo3濃度為6.2g/l、ki濃度為0.82g/l、nemoo4·2h2o濃度為0.25g/l、cuso4·5h2o濃度為0.025g/l、cocl·6h2o濃度為0.025g/l；所述母液b的配制方法為：取mgso4·4h2o24.3g、znso4·7h2o8.6g、h3bo36.2g、ki0.82g、nemoo4·2h2o0.25g、cuso4·5h2o0.025g、cocl·6h2o0.025g溶于800ml蒸餾水中，待上述物質(zhì)完全溶解于蒸餾水中，再定溶至1000ml，即得母液b。

所述母液c中硫胺素濃度為0.5g/l、吡多醇濃度為0.4g/l、煙酸濃度為0.5g/l、甘氨酸濃度為2g/l；所述母液c的配制方法為：取硫胺素0.5g、吡多醇0.4g、煙酸0.5g、甘氨酸2g溶于800ml蒸餾水中，待上述物質(zhì)完全溶解于水中后再定溶至1000ml，即得母液c。

所述母液d是質(zhì)量濃度為10g/l的肌醇溶液。

所述母液e中feso4·7h2o濃度為5.4g/l、na2-edta濃度為7.4g/l。所述母液e的配制方法為：取feso4·7h2o2.7g溶于400ml蒸餾水中，再加入na2-edta3.7g加熱至100℃溶解6min，待上述物質(zhì)完全溶解于水中，再定溶至500ml，即得母液e。

所述植物生長調(diào)節(jié)劑由6-芐氨基嘌呤、萘乙酸和荔枝汁以5：1.5：2的重量比配制而成，該植物生長調(diào)節(jié)劑為繼代試劑，添加該植物生長調(diào)節(jié)劑配制的培養(yǎng)液為繼代培養(yǎng)液。

所述植物生長調(diào)節(jié)劑由吲哚乙酸、vc、荔枝汁以110：1.5：190的重量比配制而成，該植物生長調(diào)節(jié)劑為生根試劑，添加該植物生長調(diào)節(jié)劑配制的培養(yǎng)液為生根培養(yǎng)液。

所述氧化銀微粉為氧化銀的納米微粉。

所述活性炭微粉為活性炭的納米微粉。

對比例一

培養(yǎng)液中不含氧化銀微粉以及活性炭微粉，其他組分與實施例三一樣。

對比例二

培養(yǎng)液中不含活性炭微粉，其他組分與實施例三一樣。

對比例三

培養(yǎng)液中不含氧化銀微粉，其他組分與實施例三一樣。

對比例四

培養(yǎng)液中不含荔枝汁，其他組分與實施例三一樣。

將上述配制的培養(yǎng)液用來對構樹進行組織培養(yǎng)，采用常規(guī)培養(yǎng)方法，即采集構樹組織培養(yǎng)的外植體，采集帶腋芽的嫩枝；對室外采集的外植體進行清洗及消毒；經(jīng)消毒處理后的外植體愈傷組織誘導；愈傷組織的再分化及繼代培養(yǎng)；脫毒苗生根培養(yǎng)；煉苗；大田種植。結果見表1：

表1

從表1可以看出，在培養(yǎng)液中添加氧化銀微粉和活性炭微粉，可以有效的吸收培養(yǎng)液中的酚類以及醌類有害物質(zhì)，避免玻璃化、黃化、褐化、變異、增值率低下等情況的發(fā)生，而且還能幫助分解培養(yǎng)物中的代謝產(chǎn)物，并且有效抑制外植體內(nèi)生菌類造成的污染；添加荔枝汁促進構樹不定芽的生長，繁殖系數(shù)高，且在增殖的同時誘導生根。