本發(fā)明涉及一種精液保存方法，具體涉及種牛精液低溫保存方法。
背景技術(shù)：
精液的冷凍保存在現(xiàn)代畜牧業(yè)中起著十分重要的作用，使用冷凍精液可以不受時(shí)間、地域和種畜壽命的限制，減少公畜飼養(yǎng)數(shù)量，降低生產(chǎn)成本，提高優(yōu)良畜種的利用率，為畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)效益。同時(shí)，精液的冷凍和冷凍精液的使用在畜種引進(jìn)、血緣更新、疾病控制、瀕危品種以及遺傳多樣性保護(hù)上都有極其重要的意義。
牛精液怕熱不怕冷，目前，為了降低牛精液的粘度，會(huì)采用稀釋液對(duì)牛精液進(jìn)行稀釋，一般會(huì)在30℃以上的溫度下對(duì)精液進(jìn)行一次完全稀釋，精液在30℃以上的溫度下存活時(shí)間短，但是，為了保證稀釋液與牛精液完全混合并達(dá)到目標(biāo)濃度，需要較長(zhǎng)的稀釋時(shí)間，那么精液在30攝氏度以上的溫度下滯留時(shí)間長(zhǎng)，精液的存活率低。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是牛精液在低溫保存下，如何保證較高的精子存活率，目的在于提供種牛精液低溫保存方法，解決牛精液在低溫保存下的存活率的問(wèn)題。
本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
種牛精液低溫保存方法，包括以下步驟：
s1、精液的采集：采集成熟度好的牛精液，存放于2-4℃無(wú)菌的環(huán)境下備用；
s2、精液的檢測(cè)：對(duì)步驟s1中的精液進(jìn)行品質(zhì)檢測(cè)；
s3、稀釋液的配制：制備出具有冷凍精液功能的稀釋液；
s4、精液稀釋：步驟s3中的稀釋液預(yù)熱后對(duì)步驟s2中品質(zhì)檢測(cè)達(dá)標(biāo)的精液進(jìn)行稀釋，所述稀釋步驟包括以下子步驟：
a、步驟s3中的稀釋液預(yù)熱到30-37℃后，按稀釋液∶精液的體積比為1∶0.5對(duì)精液進(jìn)行第一次稀釋，精液第一次稀釋后降溫至15-20℃并平衡1小時(shí)；
b、步驟s3中的稀釋液預(yù)熱到30-37℃后，按稀釋液∶精液的體積比為1∶1對(duì)步驟a中第一次稀釋后的精液進(jìn)行第二次稀釋，精液第二次稀釋后降溫至5-10℃并平衡1小時(shí)，所述第二次稀釋的稀釋液量基于第一次稀釋前的精液量；
c、步驟s3中的稀釋液預(yù)熱到30-37℃后，按稀釋液∶精液的體積比為1∶1對(duì)步驟b中第二次稀釋后的精液進(jìn)行第三次稀釋，精液第二次稀釋后降溫至2-4℃并平衡1小時(shí)，所述第三次稀釋的稀釋液量基于第一次稀釋前的精液量；
s5、冷凍保存：將步驟s4中經(jīng)三次稀釋后的精液用程序化冷凍儀進(jìn)行冷凍，冷凍結(jié)束后抽檢并移入液氮罐中進(jìn)行保存和使用。
本發(fā)明分三次進(jìn)行精液的稀釋從而達(dá)到目標(biāo)粘度，每進(jìn)行一次稀釋后均會(huì)降低稀釋后的牛精液的溫度，牛精液在低溫下的存活率高，緩慢降低精液的保存溫度，有利于提高精子活率，為精子提供了足夠的溫度適應(yīng)時(shí)間；低溫保存主要利用低溫來(lái)抑制精子活動(dòng)，降低代謝和能量消耗，抑制微生物生長(zhǎng)，同時(shí)加入必要營(yíng)養(yǎng)和其他成分，并隔絕空氣，以達(dá)到延長(zhǎng)精子存活時(shí)間的目的；本發(fā)明首先優(yōu)選出了品質(zhì)較好的精液，保證了進(jìn)行保存的精液具有較強(qiáng)的存活力，從而有利于在精液稀釋時(shí)，提高精液中精子的存活率。
步驟s2中品質(zhì)檢測(cè)包括以下檢測(cè)項(xiàng)：精液密度、精子活率、精液酸堿性、精子存活時(shí)間。
所述步驟s3中稀釋液包括以下組分：超純水、甘油、大豆卵磷脂、海藻糖、乳糖、維生素e、卵黃、檸檬酸三鈉、三羥甲基氨基甲烷、青霉素。稀釋液中須添加如卵黃等抗冷休克物質(zhì)，提高精子抗冷能力，還需要為精液提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
所述步驟a、b、c中稀釋液預(yù)熱到35℃。35℃下既能夠保證精液得到快速地稀釋，又能夠減緩精液迅速死去。
步驟s2檢測(cè)出的精子活率最低標(biāo)準(zhǔn)值為80％?，F(xiàn)有的精液活率一般為70％，本發(fā)明在有限的檢測(cè)手段下選擇活率更高的精液，有利于維持低溫保存下的精液中精子存活率。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：
1、本發(fā)明種牛精液低溫保存方法分三次進(jìn)行精液的稀釋從而達(dá)到目標(biāo)粘度，每進(jìn)行一次稀釋后均會(huì)降低稀釋后的牛精液的溫度，牛精液在低溫下的存活率高，緩慢降低精液的保存溫度，有利于提高精子活率，為精子提供了足夠的溫度適應(yīng)時(shí)間；
2、本發(fā)明種牛精液低溫保存方法首先優(yōu)選出了品質(zhì)較好的精液，保證了進(jìn)行保存的精液具有較強(qiáng)的存活力，從而有利于在精液稀釋時(shí)，提高精液中精子的存活率；
3、本發(fā)明種牛精液低溫保存方法步驟簡(jiǎn)單，實(shí)用性高。
具體實(shí)施方式
為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，本發(fā)明的示意性實(shí)施方式及其說(shuō)明僅用于解釋本發(fā)明，并不作為對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)施例1
本發(fā)明種牛精液低溫保存方法，包括以下步驟：
s1、精液的采集：采集成熟度好的牛精液，存放于2-4℃無(wú)菌的環(huán)境下備用；
s2、精液的檢測(cè)：對(duì)步驟s1中的精液進(jìn)行品質(zhì)檢測(cè)；
s3、稀釋液的配制：制備出具有冷凍精液功能的稀釋液；
s4、精液稀釋：步驟s3中的稀釋液預(yù)熱后對(duì)步驟s2中品質(zhì)檢測(cè)達(dá)標(biāo)的精液進(jìn)行稀釋，所述稀釋步驟包括以下子步驟：
a、步驟s3中的稀釋液預(yù)熱到30-37℃后，按稀釋液∶精液的體積比為1∶0.5對(duì)精液進(jìn)行第一次稀釋，精液第一次稀釋后降溫至15-20℃并平衡1小時(shí)；
b、步驟s3中的稀釋液預(yù)熱到30-37℃后，按稀釋液∶精液的體積比為1∶1對(duì)步驟a中第一次稀釋后的精液進(jìn)行第二次稀釋，精液第二次稀釋后降溫至5-10℃并平衡1小時(shí)，所述第二次稀釋的稀釋液量基于第一次稀釋前的精液量；
c、步驟s3中的稀釋液預(yù)熱到30-37℃后，按稀釋液∶精液的體積比為1∶1對(duì)步驟b中第二次稀釋后的精液進(jìn)行第三次稀釋，精液第二次稀釋后降溫至2-4℃并平衡1小時(shí)，所述第三次稀釋的稀釋液量基于第一次稀釋前的精液量；
s5、冷凍保存：將步驟s4中經(jīng)三次稀釋后的精液用程序化冷凍儀進(jìn)行冷凍，冷凍結(jié)束后抽檢并移入液氮罐中進(jìn)行保存和使用。
所述步驟a、b、c中稀釋液預(yù)熱到35℃。35℃下既能夠保證精液得到快速地稀釋，又能夠減緩精液迅速死去。
步驟s2檢測(cè)出的精子活率最低標(biāo)準(zhǔn)值為80％?，F(xiàn)有的精液活率一般為70％，本發(fā)明在有限的檢測(cè)手段下選擇活率更高的精液，有利于維持低溫保存下的精液中精子存活率。
本發(fā)明分三次進(jìn)行精液的稀釋從而達(dá)到目標(biāo)粘度，每進(jìn)行一次稀釋后均會(huì)降低稀釋后的牛精液的溫度，牛精液在低溫下的存活率高，緩慢降低精液的保存溫度，有利于提高精子活率，為精子提供了足夠的溫度適應(yīng)時(shí)間；低溫保存主要利用低溫來(lái)抑制精子活動(dòng)，降低代謝和能量消耗，抑制微生物生長(zhǎng)，同時(shí)加入必要營(yíng)養(yǎng)和其他成分，并隔絕空氣，以達(dá)到延長(zhǎng)精子存活時(shí)間的目的；本發(fā)明首先優(yōu)選出了品質(zhì)較好的精液，保證了進(jìn)行保存的精液具有較強(qiáng)的存活力，從而有利于在精液稀釋時(shí)，提高精液中精子的存活率。
步驟s2中品質(zhì)檢測(cè)包括以下檢測(cè)項(xiàng)：精液密度、精子活率、精液酸堿性、精子存活時(shí)間。
實(shí)施例2
基于實(shí)施例1，所述步驟s3中稀釋液包括以下組分：超純水、甘油、大豆卵磷脂、海藻糖、乳糖、維生素e、卵黃、檸檬酸三鈉、三羥甲基氨基甲烷、青霉素。稀釋液中須添加如卵黃等抗冷休克物質(zhì)，提高精子抗冷能力，還需要為精液提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
以上所述的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果進(jìn)行了進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，所應(yīng)理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式而已，并不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。