本發(fā)明屬于植物組培領(lǐng)域，具體涉及一種紅豆草再生方法。

背景技術(shù)：

1、紅豆草（ onobrychis?viciifolia?scop.）作為豆科驢食豆屬的一種植物，以其高產(chǎn)、適口且易于栽培的特點而備受青睞。被譽為牧草皇后，這一美譽進一步突顯了其在畜牧業(yè)中的重要性。近年來，隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，紅豆草在組織培養(yǎng)和遺傳轉(zhuǎn)化方面的研究也取得了一些進展。然而，盡管已經(jīng)有了相關(guān)研究，但紅豆草再生體系的建立仍然面臨一些挑戰(zhàn)，其中出再生體系構(gòu)建的周期太長是一個明顯的問題。

2、紅豆草的再生體系對于后續(xù)的遺傳改良至關(guān)重要。為了加速這一過程，需要進一步深入研究和開發(fā)高效的再生體系。通過改進現(xiàn)有的技術(shù)，可以縮短紅豆草再生體系構(gòu)建的時長，從而為其遺傳改良提供更為可靠的基礎(chǔ)。只有克服目前紅豆草再生體系研究所面臨的挑戰(zhàn)才能推動紅豆草的遺傳改良，進而提高其在畜牧業(yè)中的經(jīng)濟效益和生態(tài)效益。通過集中精力解決再生體系的關(guān)鍵問題，我們可以更好地利用紅豆草這一重要資源，為畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展做出積極貢獻。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對以上問題，本發(fā)明提供一種紅豆草再生方法。

2、本發(fā)明提供了一種紅豆草再生方法，其包括如下步驟：以紅豆草無菌實生苗的下胚軸作為外植體，接種至再生和繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，先暗培養(yǎng)獲得不定芽，再繼代培養(yǎng)獲得無根苗，將無根苗接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，獲得紅豆草再生植株；

3、所述再生和繼代培養(yǎng)基為以ms固體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，向該基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入6-ba和naa，得到的6-ba的濃度為1.0?mg/l、naa的濃度為0.5?mg/l、ph值為5.8的固體培養(yǎng)基。

4、上述方法中，所述再生和繼代培養(yǎng)基為向ms液體培養(yǎng)基加入中蔗糖、凝固劑和植物生長調(diào)節(jié)劑（6-ba和naa）得到的固體培養(yǎng)基。

5、上述方法中，所述再生和繼代培養(yǎng)基中凝固劑為瓊脂。

6、上述方法中，所述再生和繼代培養(yǎng)基中蔗糖的含量為30?g/l，瓊脂的含量為7.8g/l。

7、上述方法中，所述紅豆草無菌實生苗為將清除種莢后的紅豆草消毒種子置于潤濕的濾紙上黑暗萌發(fā)，培養(yǎng)發(fā)芽種子4-6天后獲得。

8、上方方法中，所述消毒，為以質(zhì)量百分含量0.3%的hgcl2溶液浸泡30min后以無菌水沖洗。

9、上述方法中，所述培養(yǎng)發(fā)芽種子的條件為晝/夜溫度為25℃／18℃，光照時間每天12h，光照強度1800ｌx。

10、上述方法中，所述生根培養(yǎng)基為1/2ms固體培養(yǎng)基，ph值為5.8。

11、上述方法中，所述生根培養(yǎng)基為向1/2ms液體培養(yǎng)基加入中蔗糖、凝固劑得到的固體培養(yǎng)基。

12、上述方法中，所述生根培養(yǎng)基中凝固劑為瓊脂。

13、上述方法中，所述生根培養(yǎng)基中蔗糖的含量為30?g/l，瓊脂的含量為7.8?g/l。

14、上述方法中，所述暗培養(yǎng)時的溫度為25℃，培養(yǎng)5-7天。

15、上述方法中，所述繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)條件如下：晝/夜溫度為25℃／18℃，光照時間每天12h，光照強度1800ｌx。

16、所述紅豆草再生方法，還包括煉苗和移栽的步驟。

17、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是極大地縮短了構(gòu)建紅豆草再生體系所使用的時間，提升效率，且移栽的成活率高，這對紅豆草的種質(zhì)資源保護、擴繁以及后續(xù)的遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)特征：

1.紅豆草再生方法，其特征在于：包括如下步驟：以紅豆草無菌實生苗的下胚軸作為外植體，接種至再生和繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，先暗培養(yǎng)獲得不定芽，再繼代培養(yǎng)獲得無根苗，將無根苗接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，獲得紅豆草再生植株；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述紅豆草無菌實生苗為將清除種莢后的紅豆草消毒種子置于潤濕的濾紙上黑暗萌發(fā)，培養(yǎng)發(fā)芽種子5-7天后獲得。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述消毒，為以質(zhì)量百分含量0.3%的hgcl2溶液浸泡30min后以無菌水沖洗。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述培養(yǎng)發(fā)芽種子的條件為晝/夜溫度為25℃／18℃，光照時間每天12h，光照強度1800ｌx。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述生根培養(yǎng)基為以1/2ms固體培養(yǎng)基，ph值為5.8。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述暗培養(yǎng)時的溫度為25℃，培養(yǎng)5-7天。

7.根據(jù)權(quán)利要求6任一所述的方法，其特征在于：所述繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)條件如下：晝/夜溫度為25℃／18℃，光照時間每天12h，光照強度1800ｌx。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述的方法，其特征在于：所述方法還包括煉苗和移栽的步驟。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于植物組培領(lǐng)域，具體涉及一種紅豆草再生方法，包括如下步驟：以紅豆草無菌實生苗的下胚軸作為外植體，接種至再生和繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，先暗培養(yǎng)獲得不定芽，再繼代培養(yǎng)獲得無根苗，將無根苗接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，獲得紅豆草再生植株。本發(fā)明極大地縮短了構(gòu)建紅豆草再生體系所使用的時間，提升效率，且移栽的成活率高，這對紅豆草的種質(zhì)資源保護、擴繁以及后續(xù)的遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)研發(fā)人員：李殷睿智,朱燦,朱巖超,孫曉陽,傅金民,苑峰
受保護的技術(shù)使用者：青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9