本發(fā)明涉及生物，具體涉及一種表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠的構(gòu)建方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、傳統(tǒng)的抗體分子由兩個相同的重鏈和兩個相同的輕鏈組成，重鏈抗體(heavychain?only?antibody,hcab)也稱為單鏈抗體，是一種特殊類型的抗體分子，只包含兩條相同的重鏈，天然缺失輕鏈。重鏈抗體存在于駱駝、鯊魚和患有某些疾病的人類的免疫系統(tǒng)中。重鏈抗體的可變區(qū)可以單獨表達(dá)形成一種單域抗體，體積大小在納米級別，又稱為納米抗體(nanobody,nb)。與傳統(tǒng)抗體相比，納米抗體具有分子量小、穩(wěn)定性強、親和力高等優(yōu)勢，在生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。

2、目前大多數(shù)的納米抗體是從駝科動物中獲得的，但駝科動物的飼養(yǎng)成本高，不同個體對抗原的免疫反應(yīng)差異較大，這些問題在很大程度上限制和阻礙了納米抗體的研發(fā)和應(yīng)用。相比于駝科動物，實驗室模式動物小鼠和大鼠有成本低、飼養(yǎng)方便、繁殖快等優(yōu)勢?，F(xiàn)有研究表明，通過敲除小鼠和大鼠內(nèi)源性γ2a和γ1基因的ch1外顯子，能夠在小動物中產(chǎn)生igg2a或igg1重鏈抗體。然而，這些重鏈抗體的表達(dá)量都較低，這些小動物在用不同抗原免疫時的免疫反應(yīng)較弱，篩選出的納米抗體的抗原親和力也很弱。因此，需要構(gòu)建一種能夠有效表達(dá)重鏈抗體的小動物模型，提高重鏈抗體的表達(dá)，從而提高重鏈抗體的免疫應(yīng)答能力。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明提供了一種表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠的構(gòu)建方法及其應(yīng)用，本發(fā)明所構(gòu)建的表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠能產(chǎn)生igg1型重鏈抗體且表達(dá)量較高，抗原親和力強，為進一步修飾和改造表達(dá)更多樣重鏈抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠提供了新的思路和方法，有效解決了現(xiàn)有小鼠的重鏈抗體表達(dá)量低，抗原親和力弱以及免疫反應(yīng)弱的問題。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：提供一種表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠的構(gòu)建方法，包括以下步驟：將hg1小鼠和輕鏈敲除小鼠交配獲得中間代小鼠，使中間代小鼠相互交配，獲得表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠。即hg1δl小鼠。

3、進一步，hg1小鼠不含有γ1-ch1外顯子。

4、進一步，輕鏈敲除小鼠不含有內(nèi)源免疫球蛋白輕鏈基因。

5、進一步，使中間代小鼠相互交配直至獲得純合子。

6、采用上述表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠的構(gòu)建方法構(gòu)建出的表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠。

7、進一步，表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠不含有免疫球蛋白輕鏈基因和γ1-ch1外顯子。

8、上述表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠在生產(chǎn)納米抗體中的應(yīng)用。

9、進一步，利用噬菌體展示技術(shù)從免疫后的小鼠中篩選與特定抗原有高度親和力的納米抗體。

10、本發(fā)明具有以下有益效果：

11、1、本發(fā)明所提供的hg1δl小鼠敲除輕鏈基因和γ1基因的ch1外顯子后可以產(chǎn)生表達(dá)量較高的igg1型重鏈抗體，其他免疫球蛋白亞型的表達(dá)量顯著降低，為進一步修飾和改造表達(dá)更多樣重鏈抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠提供了新的思路和方法。

12、2、hg1δl小鼠能對特定抗原產(chǎn)生較高的免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生抗原特異性的igg1型重鏈抗體，該小鼠模型能夠有效進行納米抗體篩選，降低了納米抗體篩選的經(jīng)濟成本，通過篩選獲得抗原特異性和親和力較強的納米抗體，且納米抗體的穩(wěn)定性和中和活性較高，為納米抗體的開發(fā)和應(yīng)用提供了有力支持，拓寬了納米抗體制備動物的來源。

技術(shù)特征：

1.表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：將hg1小鼠和輕鏈敲除小鼠交配獲得中間代小鼠，使中間代小鼠相互交配，獲得表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠。

2.如權(quán)利要求1所述的表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠的構(gòu)建方法，其特征在于，所述hg1小鼠不含有γ1-ch1外顯子。

3.如權(quán)利要求1所述的表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠的構(gòu)建方法，其特征在于，所述輕鏈敲除小鼠不含有內(nèi)源免疫球蛋白輕鏈基因。

4.如權(quán)利要求1所述的表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠的構(gòu)建方法，其特征在于，使中間代小鼠相互交配直至獲得純合子。

5.權(quán)利要求1-4任一項所述的表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠的構(gòu)建方法構(gòu)建出的表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠。

6.如權(quán)利要求5所述的表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠，其特征在于，所述小鼠不含有免疫球蛋白輕鏈基因和γ1-ch1外顯子。

7.權(quán)利要求5所述的表達(dá)重鏈抗體igg1的小鼠在生產(chǎn)納米抗體中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種表達(dá)重鏈抗體IgG1的小鼠的構(gòu)建方法及其應(yīng)用，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。通過本發(fā)明提供的方法構(gòu)建出能表達(dá)重鏈抗體IgG1的小鼠，該小鼠不含有免疫球蛋白輕鏈基因和γ1?CH1外顯子，能產(chǎn)生IgG1型重鏈抗體且表達(dá)量較高，抗原親和力強。本發(fā)明還提供了表達(dá)重鏈抗體IgG1的小鼠在生產(chǎn)納米抗體中的應(yīng)用。為進一步修飾和改造表達(dá)更多樣重鏈抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠提供了新的思路和方法，有效解決了現(xiàn)有小鼠的重鏈抗體表達(dá)量低，抗原親和力弱以及免疫反應(yīng)弱的問題。

技術(shù)研發(fā)人員：趙要風(fēng),韓海棠,張晶,張?zhí)煲?程學(xué)謙,于迪
受保護的技術(shù)使用者：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30