本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)，更具體地說，本發(fā)明涉及一種柳葉斑鳩菊增殖培養(yǎng)基及其組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術(shù)：

1、菊科(compositae)植物柳葉斑鳩菊〔vernonia?saligna(wall.)dc〕生長于我國廣東、廣西、貴州、云南南部等地的山坡及潮濕的草地和沼澤，該屬植物廣泛分布于世界各地的熱帶、亞熱帶地區(qū)，目前，已知菊科斑鳩菊屬植物約1000多種，我國已發(fā)現(xiàn)該屬植物30余種，主要分布于西南至東南、臺灣、新疆等地區(qū)，在我國有22個(gè)種，其中西雙版納就有14個(gè)種。柳葉斑鳩菊是多年生草本植物，葉治高燒，根可催產(chǎn)，全草民間用于治療瘧疾，彝族人用它治療咽喉腫痛、肺結(jié)核、咳嗽咯血、子宮脫垂等，除此之外，該屬植物含有除草和抗感染的活性物質(zhì)。近年來隨著市場需求量的不斷增加，對野生資源的采集量逐漸增大，而野生柳葉斑鳩菊的野外自繁殖時(shí)間較長，導(dǎo)致野生柳葉斑鳩菊資源瀕臨枯竭，因此引種栽培、人工繁殖等將成為有效利用柳葉斑鳩菊資源的新途徑。目前關(guān)于柳葉斑鳩菊繁殖方面的研究報(bào)道較少，如公告號cn111418364a的中國專利公開了一種柳葉斑鳩菊的扦插繁殖方法，但屬于扦插繁殖，而組織培養(yǎng)技術(shù)相關(guān)的研究還未見報(bào)道。

2、本發(fā)明利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)建立柳葉斑鳩菊組培苗規(guī)模化生產(chǎn)體系，能夠有效地解決優(yōu)良種源性狀穩(wěn)定和快速繁殖的難題，是規(guī)?；a(chǎn)優(yōu)質(zhì)、無毒柳葉斑鳩菊種苗的有效途徑，為實(shí)現(xiàn)柳葉斑鳩菊栽培種植規(guī)范化生產(chǎn)提供必要技術(shù)基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的第一目的是提供一種柳葉斑鳩菊增殖培養(yǎng)基，改善柳葉斑鳩菊敏感易玻璃化，出現(xiàn)芽蜷曲等病態(tài)的現(xiàn)象，尤其是解決繼代增殖過程中極易玻璃化，增殖系數(shù)低的技術(shù)問題。

2、本發(fā)明的第二目的是提供一種柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，解決柳葉斑鳩菊優(yōu)良種源性狀穩(wěn)定和快速繁殖的難題，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)優(yōu)質(zhì)、無毒柳葉斑鳩菊種苗。

3、為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的這些目的，本發(fā)明提供的一種柳葉斑鳩菊增殖培養(yǎng)基，用于柳葉斑鳩菊繼代增殖培養(yǎng)，包括：

4、ms+0.07mg/l?6-ba+1g/l活性炭+2g/l瓊脂。

5、本發(fā)明在試驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)柳葉斑鳩菊對激素特別敏感，添加激素后極易玻璃化，并且出現(xiàn)芽蜷曲等病態(tài)的現(xiàn)象，加入活性炭也易發(fā)生玻璃化。而繼代增殖培養(yǎng)基在激素6-ba與活性炭配比合適時(shí)無玻璃化，且組培苗長勢較好，葉色濃綠，發(fā)芽多。在一個(gè)實(shí)施例中，進(jìn)行以下培養(yǎng)基的對比：

6、①ms+6-ba0.5mg/l+naa0.2?mg/l；

7、②ms+6-kt?0.5mg/l+naa0.5?mg/l；

8、③ms+6-ba0.1mg/l+naa0.01?mg/l；

9、④ms+6-ba0.2mg/l+iba0.05?mg/l；

10、⑤ms+6-ba0.1mg/l+naa0.02?mg/l；

11、⑥ms+6-ba0.01mg/l+瓊脂2g/l；

12、⑦ms+6-ba0.01mg/l+活性炭1g/l+瓊脂2g/l；

13、⑧ms+6-ba0.05mg/l+活性炭1g/l+瓊脂2g/l；

14、⑨ms+6-ba0.005mg/l+活性炭1g/l+瓊脂2g/l；

15、⑩ms+6-ba0.07mg/l+活性炭1g/l+瓊脂2g/l。

16、結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的增殖培養(yǎng)基柳葉斑鳩菊組培苗在繼代增殖過程中無玻璃化，且組培苗長勢較好，葉色濃綠，發(fā)芽多。

17、本發(fā)明提供的一種柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，利用上述柳葉斑鳩菊增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)。

18、本發(fā)明提供的一種柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括初代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中：

19、初代培養(yǎng)階段包括：

20、s11、初代誘導(dǎo)培養(yǎng)：將莖段外植體誘導(dǎo)成苗；

21、繼代培養(yǎng)階段包括：

22、s21、增殖培養(yǎng)：選取初代培養(yǎng)得到的組培苗，取腋芽的莖段進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，得到叢生芽；

23、s22、生根培養(yǎng)：叢生芽培養(yǎng)得到帶根組培苗；

24、s23、移栽：帶根組培苗移栽，培養(yǎng)得到柳葉斑鳩菊種苗植株。

25、優(yōu)選地，在初代誘導(dǎo)培養(yǎng)或增殖培養(yǎng)之前，先對莖段進(jìn)行消毒滅菌和外植體褐變抑制培養(yǎng)處理。

26、優(yōu)選地，外植體消毒滅菌處理的的方式為：采用體積分?jǐn)?shù)75.0％酒精消毒20s，然后質(zhì)量濃度0.1％氯化汞滅菌8min。在一個(gè)實(shí)施例中，其污染率為0，存活率達(dá)到66.7％。

27、優(yōu)選地，褐變抑制培養(yǎng)為采用培養(yǎng)基：ms+0.3mg/l?6-ba+0.05mg/l?naa+4℃培養(yǎng)12小時(shí)及以上。在一個(gè)實(shí)施例中，4℃的低溫處理沒有發(fā)生明顯褐變，且芽誘導(dǎo)率達(dá)到80.0％。

28、優(yōu)選地，初代誘導(dǎo)培養(yǎng)中，所使用的培養(yǎng)基為ms+0.02mg/l?6-ba+0.01mg/l?naa+25g/l蔗糖+5.0g/l瓊脂，誘導(dǎo)率為77.1％，不定芽長勢好，成苗快。

29、優(yōu)選地，增殖培養(yǎng)中，柳葉斑鳩菊繼代增殖培養(yǎng)的較適合培養(yǎng)基為ms+0.07mg/l6-ba+1.0g/l活性炭+2g/l瓊脂。在一個(gè)實(shí)施例中，柳葉斑鳩菊組培苗在繼代增殖過程中無玻璃化，且組培苗長勢較好，葉色濃綠，發(fā)芽多。

30、優(yōu)選地，生根培養(yǎng)中，適宜柳葉斑鳩菊生根的培養(yǎng)基為以1/2ms+0.2mg/l?iba+0.1mg/l?naa，生根率達(dá)95％以上，生根數(shù)多，平均生根數(shù)為4條。

31、優(yōu)選地，移栽中，最適宜基質(zhì)為已消毒的泥炭土：蛭石＝3:1的輕基質(zhì)，存活率達(dá)到100％；

32、優(yōu)選地，柳葉斑鳩菊根粗壯、長約1cm，根數(shù)3～4條，或根細(xì)、長約3cm、根數(shù)為1～2條時(shí)移栽成活率高，最高達(dá)100％。

33、本發(fā)明至少包括以下有益效果：

34、1、本發(fā)明的用于柳葉斑鳩菊繼代增殖培養(yǎng)的增殖培養(yǎng)基，在柳葉斑鳩菊組培苗在繼代增殖過程中無玻璃化，且組培苗長勢較好，葉色濃綠，發(fā)芽多。

35、2、本發(fā)明的柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，從消毒滅菌、外植體褐變抑制、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽等方面進(jìn)行優(yōu)化，建立了柳葉斑鳩菊快速繁殖體系，解決柳葉斑鳩菊優(yōu)良種源性狀穩(wěn)定和快速繁殖的難題，其存活率高，苗長勢好，成苗快，增殖過程中無玻璃化，且組培苗長勢較好，葉色濃綠，發(fā)芽多，生根率高，移栽成活率高，能夠?qū)崿F(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)優(yōu)質(zhì)、無毒柳葉斑鳩菊種苗。

36、本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。

技術(shù)特征：

1.一種柳葉斑鳩菊增殖培養(yǎng)基，其特征在于，包括：

2.如權(quán)利要求1所述的柳葉斑鳩菊增殖培養(yǎng)基，其特征在于，用于柳葉斑鳩菊繼代增殖培養(yǎng)。

3.一種柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，利用權(quán)利要求1所述柳葉斑鳩菊增殖培養(yǎng)基進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)。

4.如權(quán)利要求3所述的柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，具體包括初代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中：

5.如權(quán)利要求4所述的柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，在初代誘導(dǎo)培養(yǎng)或增殖培養(yǎng)之前，先對莖段進(jìn)行消毒滅菌；

6.如權(quán)利要求5所述的柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，消毒滅菌處理后，再進(jìn)行褐變抑制培養(yǎng)處理；

7.如權(quán)利要求6所述的柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，初代誘導(dǎo)培養(yǎng)中，所使用的培養(yǎng)基為：ms+0.02mg/l?6-ba+0.01mg/l?naa+25g/l蔗糖+5.0g/l瓊脂。

8.如權(quán)利要求7所述的柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，增殖培養(yǎng)中，所使用的培養(yǎng)基為：ms+0.07mg/l?6-ba+1.0g/l活性炭+2g/l瓊脂。

9.如權(quán)利要求8所述的柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，生根培養(yǎng)中，所使用的培養(yǎng)基為：1/2ms+0.2mg/l?iba+0.1mg/l?naa。

10.如權(quán)利要求9所述的柳葉斑鳩菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于，移栽中，使用根粗壯、長1cm，根數(shù)3～4條的組培苗；或根細(xì)、長3cm、根數(shù)為1～2條的組培苗；所用基質(zhì)為泥炭土：蛭石＝3:1的輕基質(zhì)。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種柳葉斑鳩菊增殖培養(yǎng)基及其組織培養(yǎng)快速繁殖方法，屬于組培技術(shù)領(lǐng)域，該培養(yǎng)基包括：MS+0.07mg/L?6?BA+1g/L活性炭+2g/L瓊脂。該方法包括：初代誘導(dǎo)培養(yǎng)：將莖段外植體誘導(dǎo)成苗；增殖培養(yǎng)：選取初代培養(yǎng)得到的組培苗，取腋芽的莖段進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)得到叢生芽；生根培養(yǎng)：叢生芽培養(yǎng)得到帶根組培苗；移栽：帶根組培苗移栽得到種苗。本發(fā)明能夠解決繼代增殖過程中極易玻璃化，增殖系數(shù)低的技術(shù)問題，能夠解決柳葉斑鳩菊優(yōu)良種源性狀穩(wěn)定和快速繁殖的難題，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)優(yōu)質(zhì)、無毒柳葉斑鳩菊種苗。

技術(shù)研發(fā)人員：潘麗梅,李林軒,韋樹根,霍娟,覃雅,韋瑩,萬凌云,宋利沙
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6